mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。结果（1） A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍（P＜0.05）;A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的 7.40 ± 1.05 倍（P＜0.05）;而A549/DDP 细胞let-7b 的表达水平是A549 细胞的（26.54 ± 2.90）%（P＜0.05）;（2）A549 转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor 后对顺铂的敏感性下降（P＜0.05）;A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor, mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加（P＜0.05）;（3）A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor 后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组（P＜0.05）;而A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor 以及 let-7b mimic 后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组（P＜0.05）;（4）A549 转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组（P＜0.05）;而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后, 细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖, 抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。     

miR-181a调控血管紧张素Ⅱ诱导骨桥蛋白在血管平滑肌细胞的表达研究

目的明确miRNA-181a在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)中的骨桥蛋白(OPN)的作用及相关机制。方法分离培养出的VSMCs,使用100 nM AngⅡ处理后,检测不同时间点OPN蛋白表达水平的变化,同时利用q PCR检测miR-181a的变化后,将VSMCs分为空白对照组(不做任何处理)、AngⅡ刺激组(加入100 nM AngⅡ诱导)、阴性miRNA+AngⅡ刺激组(转入阴性miRNA并加入100 nM AngⅡ)以及miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组(转入miR-181a模拟剂并加入100 nM AngⅡ)。48 h后Western blotting检测OPN在蛋白水平的变化,并使用Annexin V/PI方式检测凋亡变化、transwell检测迁移的变化;随后VSMCs被分为CON与miR181a inhibitor组,48 h后使用Western blotting检测p53、Bax、p21变化。结果使用100 nM AngⅡ处理后,VSMCs的OPN蛋白表达水平不断上升;使用100 nM AngⅡ处理24 h后,miRNA-181a相对表达量100 n M组显著低于0 nM组; VSMCs在转入miR-181a模拟剂48 h后,miR-181a模拟剂显著高CON组;在空白对照组、AngⅡ刺激组、阴性miRNA+AngⅡ刺激组以及miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组中,相对于阴性对照组,AngⅡ刺激组OPN表达显著上升,而miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组OPN表达显著低于AngⅡ刺激组,略高于阴性对照组;在细胞凋亡中,与AngⅡ刺激组阴性组和miRNA+AngⅡ刺激组相比,miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组Annexin V阳性细胞比率明显减少,说明能够明显抑制细胞凋亡。在细胞迁移中,miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组能够明显抑制细胞迁移。VSMCs在转入miR-181a inhibitor后,相对于CON组,p53、Bax、p21表达均有明显的上升。结论 miR181-a抑制了AngⅡ诱导VSMCs的OPN,同时抑制了AngⅡ诱导的凋亡与增殖,而miR181-a的抑制所诱导的凋亡与p53通路相关。     

子宫中间型滋养细胞肿瘤的临床病理特征

中间型滋养细胞（intermediate trophoblast,IT）因超微结构介于细胞滋养细胞与合体滋养细胞之间而得名,又称绒毛外细胞滋养细胞,包括细胞滋养细胞柱及细胞滋养细胞壳。IT根据解剖部位不同分成绒毛性IT、种植部位IT、绒毛膜型IT。绒毛性IT可衍化出绒毛膜癌,种植部位IT可发生超常胎盘部位反应和胎盘部位滋养细胞肿瘤,绒毛膜型IT可发展成胎盘部位结节和上皮样滋养细胞肿瘤（epithelioid trophoblastic tumor,ETT）,2003年WHO将胎盘部位滋养细胞肿瘤和ETT统称为中间型滋养细胞肿瘤。本文就中间型滋养细胞肿瘤的诊断、鉴别诊断及其预后作一综述。     

妊娠滋养细胞肿瘤保留生育功能治疗策略

滋养细胞肿瘤是国内较常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率高于欧美国家。该类疾病绝大多数继发于妊娠,称为妊娠滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic neoplasms,GTN),多见于生育年龄妇女,仅少数滋养细胞肿瘤来源于卵巢或睾丸生殖细胞,成为非妊娠性绒癌。GTN的分类根据其组织病理类型分为侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤及上皮样滋养细胞肿瘤。GTN多数发生于生育年龄妇女,对生育功能保护和保留提出了现实的需求,如何通过制定合理有效的治疗方案保护女性生殖生理健康显得尤为重要。     

晚期氧化蛋白产物对妊娠滋养细胞生物学功能的影响

目的观察晚期氧化蛋白产物（AOPP）对妊娠滋养细胞（HTR8/SVneo）功能的影响。 方法体外培养HTR8/SVneo细胞株,用次氯酸（HClO）氧化鼠白蛋白（MSA）体外制备AOPP-MSA,将HTR8/SVneo滋养细胞与不同浓度（50 μg/ml组、100 μg/ml组或200 μg/ml组）的AOPP-MSA共同培养。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测滋养细胞的增殖能力,以平均吸光度（A）值表示;侵袭小室检测滋养细胞侵袭能力,以穿膜细胞数表示;检测上清液中滋养细胞分泌的β-HCG水平评价滋养细胞分化能力;Hoechest33258染色检测滋养细胞凋亡。采用单因素方差分析比较不同浓度AOPP下,滋养细胞的增殖能力、侵袭能力、细胞分泌β-HCG、细胞凋亡数的差异。 结果与对照组比较,AOPP浓度为50 μg/ml时,对HTR8SVneo滋养细胞增殖、侵袭、分化能力及凋亡影响不明显（P>0.05）;AOPP浓度为100 μg/ml和200 μg/ml时,AOPP明显抑制滋养细胞增殖、侵袭和分化能力,并促进滋养细胞凋亡（P<0.05）。 结论AOPP可以抑制滋养细胞的增殖、侵袭、分化能力及诱导滋养细胞凋亡。降低血浆中AOPP水平可能有利于改善滋养细胞生物学功能。     

超声对妊娠滋养细胞肿瘤早期诊断的评价

对65例妊娠滋养细胞肿瘤患者进行B超观察及绒毛促性腺激素(β-HCG)测定,并以20例妊娠中期妇女引产后子宫B超检查为对照。结果,妊娠滋养细胞肿瘤患者不同类型B超声像图与β-HCG水平呈正相关关系。妊娠滋养细胞肿瘤患者在治疗期间,β-HCG恢复正常的时间同时或先于B超声像图恢复正常的时间。提示B超检查对于妊娠滋养细胞肿瘤的早期诊断和指导临床治疗,具有重要意义。     

胎盘部位滋养细胞肿瘤的研究进展

胎盘滋养细胞肿瘤是一种罕见的妊娠滋养细胞肿瘤。胎盘滋养细胞肿瘤来源于中间滋养细胞,瘤细胞在肌壁间广泛浸润穿插于肌纤维间,肿瘤组织中广泛纤维素物质沉积和肿瘤细胞浸润血管壁是其特征性表现。本文就其组织学发生、临床病理特点、诊断和鉴别诊断、治疗及预后作一综述。     

中间型滋养细胞肿瘤保留生育功能的治疗

  目的  探讨中间型滋养细胞肿瘤(intermediate trophoblastic tumors, ITTs)保留生育功能治疗的方法并分析其结局。  方法  对1999年1月至2010年3月在本院行保留生育功能治疗的6例ITTs进行回顾性分析。  结果  诊刮有效2例、化疗敏感2例、开腹子宫病灶切除术有效3例。3例病理大体类型为结节息肉型ITTs, 行诊刮+联合化疗有效; 3例肿块型ITTs, 行开腹子宫病灶切除术+联合化疗±诊刮有效。平均随诊35个月, 均获得完全缓解(completeremis-sion, CR), 月经均恢复正常, 随访至今无复发。3例有足月生产史者未再妊娠, 3例未生产者至今尚未妊娠。  结论  ITTs患者年龄 < 35岁(强烈要求保留生育功能), 病变局限于子宫, 且除外子宫多发病灶(病理弥漫浸润型)行保留生育功能的治疗是安全可行的。     

整体护理对妊娠滋养细胞肿瘤患者化疗不良反应的影响

目的:探讨整体护理干预对培养细胞肿瘤患者化疗不良反应的影响。方法:选取妊娠滋养细胞肿瘤患者86例随机分为对照组40例和干预组46例,化疗方案均为联合应用长春新碱、氟尿嘧啶、放线菌素D和环磷酰胺,对照组采用传统护理模式,干预组采用专人负责的整体护理,在健康教育知识的掌握、化疗不良反应、护理满意度方面对两组患者进行比较。结果:干预组患者发生化疗不良反应明显低于对照组(P<0.05)。结论:对妊娠滋养细胞肿瘤患者实施整体护理,可以降低患者的负性心理状态,增加治愈疾病的信心,提高生活质量。     

彩色多普勒超声对恶性滋养细胞肿瘤的诊断价值

目的探讨二维及彩色多普勒血流显像对恶性滋养细胞肿瘤的诊断价值。方法对30例经临床及病理证实的患者进行二维及彩色多普勒检测，并对病变区血流分布、血流速度及阻力指数进行分析。结果恶性滋养细胞肿瘤子宫肌壁病灶区可见局限性五彩缤纷的丰富血流频谱为低阻血流，阻力指数〈0．5。结论彩色多普勒超声对恶性滋养细胞肿瘤的早期诊断、化疗效果的观察及临床转归的追踪均有十分重要的价值。     

MicroRNA-128a-induced apoptosis in HTR-8/SVneo trophoblast cells contributes to pre-eclampsia

IntroductionPre-eclampsia (PE) can endanger the survival of the mother and fetus. Currently, the pathogenesis of PE is not completely understood and no fundamental therapeutics are available. The present study was performed to determine the function of miR-128a in HTR-8/SVneo trophoblast cells and to ascertain its underlying role in the pathogenesis of PE.MethodsWe investigated the function of miR-128a in HTR-8/SVneo cells by overexpressing. We analyzed the apoptosis of HTR-8/SVneo cells by performing apoptosis assays and measured the loss of mitochondrial membrane potential (Δym), the generation of reactive oxygen species (ROS) and caspase activity. In addition, miR-128a target genes were predicted.ResultsUsing computer-based programs, we identified Bax as a direct target of miR-128a. In the apoptosis assays of HTR-8/SVneo cells, miR-128a decreased the Δψm, depleted ATP levels and increased ROS generation, cytochrome c release as well as caspase activation. Further studies showed that miR-128a induced the apoptosis of HTR-8/SVneo cells by down-regulating Bax through the mitochondrial apoptosis pathway.ConclusionsmiR-128a is an up-regulated miRNA in patient with PE. Our study demonstrated that the miR-128a-induced apoptosis of HTR-8/SVneo cells may contribute to PE and miR-128a may be a novel potential therapeutic target for PE.     

hCG对滋养细胞系侵袭性相关基因表达的影响

目的：揭示人类绒毛膜促性腺激素（hCG）对滋养细胞侵袭性的影响。 方法：以永生化的滋养细胞系JEG-3为研究对象，采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）方法，观察了hCG对滋养细胞系侵袭性相关基因表达的影响。 结果：JEG-3细胞自身表达MMP-2，而不表达MMP-9或uPA，同时还表达这些蛋白酶的抑制因子TIMP-1、TIMP-2和PAI-1。JEG-3细胞还表达组织蛋白酶B，而未见组织蛋白酶D的表达。在与25 IU/ml hCG温育50h后，MMP-2的表达无显著变化，而TIMP-1和PAI-1的表达显著降低，同时TIMP-2的表达被诱导增加，其它基因的表达无明显变化。 结论：高浓度(25 IU/ml)的hCG可能通过改变蛋白水解酶及其抑制因子的表达而减弱滋养细胞的侵袭性。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞的影响

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后，观察细胞形态变化，检测细胞DNA含量的分布，测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳呈凋亡特征性Ladder带；流式细胞仪分析显示，在G1期前出现亚2倍体凋亡峰；端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抑制端合成，从而抑制胃癌细胞的增殖。     

miRNA-181c对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响

目的探讨miRNA-181c(miR-181c)在人肺腺癌组织中的表达及其对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响。方法收集37例肺腺癌患者组织标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺腺癌组织及相应癌旁组织中miR-181c的表达水平。脂质体法将miR-181c模拟物和miR-181c抑制剂分别转染至SPC-A1细胞中,CCK-8增殖实验检测转染后SPC-A1细胞的增殖能力,Transwell法检测转染后SPC-A1细胞的侵袭能力。结果肺腺癌组织中miR-181c的表达水平[3.259(1.637,4.920)×10-3]高于癌旁组织[2.008(1.200,3.292)×10-3],差异有统计学意义(U=-641.0,P0.05)。miR-181c的表达水平与淋巴结转移密切相关(P0.05)。转染SPC-A1细胞120 h后,miR-181c模拟物转染组的细胞增殖能力高于于阴性对照组,差异有统计学意义(2.029±0.034 vs 1.476±0.071;t=7.044,P0.01);而miR-181c抑制剂转染组细胞的增殖能力弱于阴性对照组,差异有统计学意义(0.998±0.050 vs 1.414±0.058;t=5.461,P0.01)。Transwell结果显示,转染miR-181c模拟物后SPC-A1侵袭能力显著增强(432.00±12.22 vs 219.50±9.31;t=14.11,P0.01),转染抑制剂后侵袭能力显著减弱(73.60±5.32 vs 227.30±11.27;t=11.52,P0.01)。结论 miR-181c在肺腺癌组织中高表达,并能促进SPC-A1细胞的增殖与侵袭。     

17-DMAG对人LX2肝星状细胞增殖及凋亡作用的研究

目的研究HSP90抑制剂17-DMAG在体外对人LX2肝星状细胞生长增殖及细胞凋亡的作用。方法 ?体外培养人LX2肝星状细胞,用细胞毒试验法(MTT)观察不同浓度和作用时间的17-DMAG对LX2细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测药物作用后LX2细胞凋亡的发生;Western blot检测α-SMA的表达,并与对照组进行对比。结果 17-DMAG能抑制人LX2肝星状细胞生长,且呈浓度和时间依赖性(P<0.01),随药物浓度加大和作用时间延长,存活细胞数量逐渐减少;流式细胞仪证实17-DMAG可诱导LX2细胞凋亡,与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显增加(P<0.01);Western blot可以证实17-DMAG可使LX2细胞α-SMA表达减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 17-DMAG可呈浓度和时间依赖性的抑制人LX2肝星状细胞的生长,其机制为诱导细胞凋亡,并且通过这种机制来减少α-SMA的表达来抑制胶原的产生。     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的:通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响,初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法:采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应,利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用,以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和BAX表达水平的影响。结果:MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用,其抑制效应具有剂量依赖的特点,细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡,免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达,下调Bcl-2基因表达。结论:粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱＋20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂（Z-VAD-FMK）作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐（MTT）比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

伊马替尼联合槲皮素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼联合槲皮素诱导K562细胞凋亡的机制。方法:将250 nmol/L的伊马替尼、25μmol/L的槲皮素单药及联合作用于K562细胞,通过细胞计数检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡,蛋白印迹法检测相关蛋白的表达。结果:250 nmol/L伊马替尼联合25μmol/L槲皮素对K562细胞有明显的协同诱导凋亡作用,两药联合较单药处理能明显协同下调p-BCR/ABL、p-Crkl蛋白的表达。结论:伊马替尼和槲皮素协同诱导K562细胞凋亡,其机制可能是主要通过协同抑制BCR/ABL蛋白磷酸化水平,从而抑制下游信号通路的激活,导致细胞凋亡。