氨基葡萄糖对白细胞介素1β诱导体外培养人骨关节炎软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响

背景:蛋白聚糖和胶原纤维的降解是骨关节炎发病的主要生理和病理学基础,氨基葡萄糖不仅可以减轻骨关节炎疼痛症状,同时可以延缓骨关节炎的病理改变。目的:了解氨基葡萄糖对白细胞介素1β诱导骨关节炎软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响。方法:取骨关节炎患者的软骨细胞,分阶段酶消化法进行体外原代培养。在培养液中加入白细胞介素1β诱导剂,设立不含药兔血清对照组、白细胞介素1β对照组和加入不同浓度兔氨基葡萄糖含药血清的实验组。结果与结论:各浓度氨基葡萄糖含药血清组体外培养软骨细胞释放入培养液中糖胺聚糖百分比均值明显低于对照组(P<0.01),随氨基葡萄糖浓度的增加,糖胺聚糖百分比逐渐降低;蛋白聚糖合成标记物3B3含量的均值较对照组明显增高(P<0.01),与氨基葡萄糖浓度呈正相关;而蛋白聚糖降解标记物5D4含量的均值则正相反;氨基葡萄糖可以增加骨关节炎患者软骨细胞蛋白聚糖mRNA表达,减低基质金属蛋白酶1,3mRNA表达。表明氨基葡萄糖可以抑制白细胞介素1β对骨关节炎患者软骨细胞蛋白聚糖代谢的促进作用,达到保护软骨,防止骨关节炎的目的。     

氨基葡萄糖对白细胞介素1β诱导体外培养人骨关节炎软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响

背景：蛋白聚糖和胶原纤维的降解是骨关节炎发病的主要生理和病理学基础,氨基葡萄糖不仅可以减轻骨关节炎疼痛症状,同时可以延缓骨关节炎的病理改变。目的：了解氨基葡萄糖对白细胞介素1β诱导骨关节炎软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响。方法：取骨关节炎患者的软骨细胞,分阶段酶消化法进行体外原代培养。在培养液中加入白细胞介素1β诱导剂,设立不含药兔血清对照组、白细胞介素1β对照组和加入不同浓度兔氨基葡萄糖含药血清的实验组。结果与结论：各浓度氨基葡萄糖含药血清组体外培养软骨细胞释放入培养液中糖胺聚糖百分比均值明显低于对照组（P〈0.01）,随氨基葡萄糖浓度的增加,糖胺聚糖百分比逐渐降低;蛋白聚糖合成标记物3B3含量的均值较对照组明显增高（P〈0.01）,与氨基葡萄糖浓度呈正相关;而蛋白聚糖降解标记物5D4含量的均值则正相反;氨基葡萄糖可以增加骨关节炎患者软骨细胞蛋白聚糖mRNA表达,减低基质金属蛋白酶1,3mRNA表达。表明氨基葡萄糖可以抑制白细胞介素1β对骨关节炎患者软骨细胞蛋白聚糖代谢的促进作用,达到保护软骨,防止骨关节炎的目的。     

大黄素对IL-1β诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

[目的]观察大黄素对IL-1诱导下血管平滑肌细胞增殖的影响并探讨其作用机制.[方法]将IL-1β作用于平滑肌细胞,并用大黄素进行干预,实验设置对照组、IL-1β组、大黄素干预组.MTT法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组细胞的周期变化;RT-PCR检测各组细胞PCNA、CyclinD1 mRNA的表达;Western blot检测各组细胞PCNA、CyclinD1蛋白的表达以及JAK2、STAT 3的磷酸化情况.[结果]与对照组相比IL-1β组细胞的增殖能力显著增加(P＜0.01),与IL-1β组相比大黄素干预组细胞的增殖能力显著降低(P＜0.01).IL-1β组S期细胞所占比例(50.71±4.17)％,显著高于对照组(30.91±2.04)％(P＜0.01).大黄素干预组S期细胞所占比例(32.34±4.35)％,显著低于IL-1β组(P＜0.05),同时其G0～G1期细胞所占比例(48.83±4.55)％显著高于IL-1β组的(33.88±1.67)％(P ＜0.01).与对照组相比IL-1β组PCNA、CyclinD1 mRNA以及蛋白的表达都显著升高(P ＜0.01),而大黄素干预组PCNA、CyclinD1 mRNA以及蛋白的表达显著低于IL-1β组(P ＜0.05).与对照组相比IL-1β组JAK2、STAT3蛋白磷酸化程度显著增加(P＜0.05),与IL-1β组相比大黄素干预组JAK2、STAT 3蛋白磷酸化程度显著降低(P＜0.05).[结论]大黄素能够抑制IL-1β诱导的血管平滑肌细胞增殖,并且其抑制作用与JAK2/STAT 3信号通路的阻断有关.     

透明质酸对白细胞介素1β与软骨滑膜联合培养模型的作用

目的:观察不同浓度透明质酸对白细胞介素1β与软骨滑膜联合培养模型中软骨基质代谢的影响与抑制炎性反应的作用,从而阐明粘保护剂治疗骨性关节炎的可能机制。方法:实验于2006-03/11在华中科技大学附属协和医院骨科实验室完成。①实验材料:新鲜狗尸体4具,取肱骨头附近的全厚软骨以及滑膜组织。透明质酸钠购于中国山东正大福瑞达制药有限公司产品。②实验干预和分组:以100μg/L的白细胞介素1β与软骨滑膜联合培养。将0.2,1,2g/L透明质酸加入模型中得到3组透明质酸组,只含白细胞介素1β为阳性对照组,只含培养液为阴性对照组。③实验评估:每3天收集1次培养皿中的溶液标本,3,6,20d收集培养皿中的软骨滑膜标本,行生化和免疫组织化学检查。结果:①溶液标本与组织标本聚氨基葡萄糖检测结果:第3,6天溶液标本中透明质酸组高于阴性对照组(P<0.05);第20天时3种剂量透明质酸组溶液中聚氨基葡萄糖低于阳性对照组(P<0.05)。②溶液标本中前列腺素E2、基质金属蛋白酶3、含氮产物检测结果:第3天时阳性对照组基质金属蛋白酶3浓度高于阴性对照组(P<0.05),第20天,1g/L,2g/L透明质酸组基质金属蛋白酶3浓度较阳性组低[(1.289±2.122),(0.458±0.454),(1.425±0.211)μg/L,P<0.05],第3天时阳性对照组前列腺素E2浓度明显高于阴性对照组(P<0.05),第6天,0.2g/L,1g/L透明质酸组含氮产物浓度低于阳性和阴性对照组[(1.288±0.280),(1.345±0.768),(2.234±0.570),(1.845±0.767)mmol/L(P<0.05)。结论:实验结果支持粘保护剂治疗骨性关节炎的两种机制,即透明质酸对软骨保护的生物学合成作用与透明质酸的炎性抑制反应。     

血管平滑肌细胞坏死释放IL-1β及其对IL-6和细胞增殖的影响

【目的】观察坏死的血管平滑肌细胞对周围正常细胞IL-6表达和增殖能力的影响,同时探讨其可能的作用机制。【方法】采用无血清无糖低氧条件制备血管平滑肌细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液干预正常细胞。实验设置无血清低糖DMEM培养的对照组（control组）、坏死上清干预组（NCS组）、坏死上清与IL-1拮抗剂联合干预组（NCS＋IL—IRA组）、坏死上清与IL-6拮抗剂联合干预组（NCS＋IL-6RA组）、IL-1β干预组（IL-1β组）以及IL-6干预组（IL-6组）。CCK8和BrdUELISA方法检测细胞增殖能力变化;ELISA方法和RT-PCR方法检测各组细胞培养上清液中IL-6分泌及细胞中IL-6mRNA表达情况;Westernblot方法检测各组细胞p21Ras、ERK、p-ERK蛋白的表达。【结果】与对照组相比,NCS组和IL-1β组处理下血管平滑肌细胞IL-6表达有所升高（P〈0．05）,NCS组、IL-1β组和II．一6组细胞增殖能力存在显著性增加（P〈0．05）,同时,p21Ras和p-ERK的表达也存在增加趋势,而NCS＋II,1RA组和NCS＋IL-6RA组细胞增殖能力较NCS组及IL-10组、IL-6组细胞增殖能力有所下降（P〈0．05）,p21RaS和p-ERK的表达也相应有所降低。【结论】坏死的血管平滑肌细胞可能通过释放IL-1β促进了周围正常细胞IL-6的表达,并通过Ras／ERK／C／EBP信号通路促进细胞增殖。     

IL—1β诱导体外培养的猪甲状腺细胞凋亡的实验研究

本文研究白细胞介素-1β(IL-1β)诱导体外培养的猪甲状腺细胞凋亡的实验，旨在探讨细胞因子对甲状腺细胞凋亡的作用。实验运用了甲状腺细胞原代培养技术和吖橙橙染色从形态学上测定细胞凋亡的发生，结果表明经IL—1β诱导后体外培养的猪甲状腺细胞有明显的凋亡特征—凋亡小体。     

IL-1β，MMP-1在兔膝关节骨性关节炎模型软骨中的表达

目的建立兔膝关节骨性关节炎（OA）模型并观察白细胞介素1β（IL-1β）和基质金属蛋白酶（MMP-1）在其软骨中的表达，从而探讨与OA间的关系。 方法采用木瓜蛋白酶注射法建立兔膝OA模型（木瓜蛋白酶组），同时采用向兔膝关节注射生理盐水的方法建立兔膝对照模型（生理盐水组）。通过比较大体评分、Mankin评分、IL-1β及MMP-1表达强度间的差异，观察关节软骨退变情况及探讨IL-1β、MMP-1与软骨退变间的关系。 结果肉眼及电镜观察发现木瓜蛋白酶组软骨退变程度明显重于生理盐水组，木瓜蛋白酶组软骨大体评分及Mankin评分均明显高于生理盐水组，差异有统计学意义（P<0.01），木瓜蛋白酶组软骨细胞IL-1β、MMP-1的表达强度亦明显高于生理盐水组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论向实验兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶及L-半胱氨酸可成功建立兔膝OA模型；IL-1β、MMP-1表达水平与软骨退变严重程度有密切联系。     

烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因的影响

背景：前期研究已证实，烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对白细胞介素1B致椎间盘退变起到保护作用，而烟酰胺对椎间盘退变的保护机制还不很清楚。目的：观察烟酰胺对白细胞介素1β诱导体外培养的兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响。设计、时间及地点：实验于2007-11／2008—05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成。材料：3～4月龄日本大白兔10只，体质量1．5～2．Okg，取LM脊柱节段56个椎间盘组织，用于构建兔椎间盘组织凝胶培养模型。方法：将56枚椎间盘随机分为4组，每组14枚。正常对照组：不加入药物：烟酰胺组：加入0．5g／L烟酰胺；退变组：加入10μg/L白细胞介素1β;治疗组加入10μg／L白细胞介素1β及0．5g／L烟酰胺。培养2周后对各组标本行TUNEL染色及Fas，Caspase-3，Bcl-2，低氧诱导因子1d、葡萄糖转运体1、血管内皮细胞生长因子免疫组织化学染色。主要观察指标：各组标本TUNEL染色及免疫组织化学染色阳性细胞率。结果：TUNEL染色示加入烟酰胺后退变组阳性细胞率较正常对照组上升（P=0．001）。Fas染色退变组阳性细胞率较正常对照组明显上升（P〈0．01）。Bcl-2染色示烟酰胺组较正常对照组阳性细胞率升高（P=0．004）。Caspase-3染色示治疗组阳性细胞率较退变组下降（P=0．024），但仍高于正常对照组（P=0.006）。低氧诱导因子1d染色示烟酰胺组阳性细胞率低于正常对照组（P〈0．01）；退变组阳性细胞率较正常对照组上升（P〈0．01）。葡萄糖转运体1染色示治疗组阳性细胞率高于正常对照组（P〈0．01）。结论：烟酰胺可以抑制白细胞介素1β诱导的椎间盘细胞凋亡，改善白细胞介素10导致的椎间盘能量代谢障碍。     

治疗型关节炎护膝对兔膝骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨OA护膝对兔膝骨性关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:6月龄兔54只,采用改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型,随机分为6组,正常组常规饲养,模型组造模后常规饲养,对照组微波仪治疗,实验1组电(疏密波)治疗,实验2组热(热软膜),实验3组电热(OA护膝),治疗30 min,1次/d,连续治疗16周时处死,采用免疫组化检测软骨细胞增殖、凋亡。结果:16周时,关节软骨细胞凋亡率,各试验组明显高于正常组(P0.01,P0.05),对照组、实验1组和实验2组、实验3组明显低于模型组(P0.01,P0.05),实验3组明显低于对照组、实验1组和实验2组(P0.05);关节软骨细胞增殖率,各试验组明显低于正常组(P0.01,P0.05),对照组、实验1组和实验2组、实验3组明显高于模型组(P0.01,P0.05),实验3组高于对照组、实验1组和实验2组(P0.05)。结论:OA护膝能有效促进关节软骨细胞增殖,抑制软骨细胞凋亡。     

双醋瑞因对白细胞介素1β诱导软骨细胞凋亡的影响

背景：双醋瑞因是一种新型的白细胞介素1阻滞剂,其是否对软骨细胞的凋亡有抑制作用以及是否通过细胞信号转导通路发挥作用的基础应用研究较少。目的：观察双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响。方法：体外培养SD大鼠关节软骨细胞,苏木精-伊红染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,用白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡模型,再用10-4,10-5,10-6mol/L双醋瑞因干预培养。结果与结论：10-4mol/L和10-5mol/L的双醋瑞因可降低白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡率（P〈0.01和P〈0.05）。10-5mol/L双醋瑞因能够显著抑制白细胞介素1β诱导p38磷酸化（P〈0.01）。双醋瑞因干预的软骨细胞中p38mRNA的表达量较模型组下降0.38倍（P〈0.01）。结果证实,双醋瑞因能够抑制软骨细胞中p38蛋白和基因的表达,从而抑制白细胞介素1β诱导关节软骨细胞凋亡。     

白细胞介素1β转化酶在脑缺血再灌注损伤中的表达及对细胞凋亡的调节作用

背景：细胞凋亡是缺血再灌注损害的重要形式之一，白细胞介素1β转化酶是细胞凋亡关键调节因子，其激活可导致蛋白降解引起细胞凋亡。目的：观察在脑缺血再灌注过程中自细胞介素1β转化酶基因的表达及其与细胞凋亡的关系，探讨其在调控脑缺血后细胞凋亡中的作用。设计：随机对照试验。材料：实验于1996-03／2000-12在解放军第三军医大学神经科学中心完成。选择成年Wistar大鼠64只，随机分为2组，脑缺血再灌注组：采用四血管阻塞全脑缺血模型，缺血30min后再灌注，根据处死时间分为再灌注3，6，12，24，48，72h和7d共7个时间点，每个时间点8只。假手术组8只，仅分离，未夹闭双侧颈总动脉。方法：假手术组和脑缺血再灌注组再灌注后每个时间点随机选取4只大鼠采用免疫组化和原位杂交检测。其余4只用于原位末端标记检测。主要观察指标：①各组大鼠脑组织白细胞介素1β转化酶蛋白和mRNA的表达。②各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况。结果：64只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠脑组织白细胞介素1β转化酶mRNA和蛋白的表达：假手术组脑组织多数脑区白细胞介素1β转化酶mRNA和蛋白有少量表达，脑缺血组白细胞介素1β转化酶mRNA和蛋白在神经元内及小胶质细胞均有表达，分布在大脑皮质、小脑蒲肯野细胞、海马及皮质下白质。在缺血再灌注12h后白细胞介素1β转化酶基因表达增加，48-72h为表达高峰。第7天表达下降。②各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况：细胞凋亡在缺血再灌注12h出现[（49．4&;#177;6．8）个／切片]，高峰时间在72h[（228．6&;#177;29．8）个／切片]，且白细胞介素1β转化酶蛋白和mRNA的表达在分布上与神经细胞凋亡的发生有显著相关性（r=0．89，0．68，P〈0．05）。结论：①白细胞介素1β转化酶蛋白和mRNA的表达增加，与缺血后细胞凋亡有显著相关性，从时间上支持白细胞介素1β转化酶表达是导致细胞凋亡的重要因素。②在脑缺血再灌注过程中大脑皮质、海马及基底节区是凋亡细胞的多发部位，而这些部位也是白细胞介素1β转化酶表达增高的区域，进一步证明缺血后白细胞介素1β转化酶的表达参与神经细胞凋亡的调节。     

黄芩素对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应的影响

[目的]探讨黄芩素对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的影响.[方法]将软骨细胞分为正常组(加入不含任何刺激物的培养基),IL-1β组(10 ng/mL的IL-1β),黄芩素低、中、高剂量组(12.5,25,50 μmol/L 黄芩素+10 ng/mL的IL-1β).MTT法检测细胞活力,硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-γ(IFN-γ)及IL-6含量,western blot检测核因子-κB (NF-κB p65)及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.[结果]低、中、高剂量组黄芩素能显著提高软骨细胞活力(P<0.05).与正常组比较,IL-1β组中细胞活力降低(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量提高(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量上调(P<0.01);与IL-1β组比较,黄芩素低、中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量下调(P<0.01).[结论]黄芩素能通过阻断NF-κB及p38 MAPK信号通路进而抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,为临床OA的治疗提供理论依据.     

体外冲击波对兔膝软骨细胞增殖的影响

目的体外观察体外冲击波(ESW)对软骨细胞增殖的影响。方法酶法消化获得正常兔膝软骨细胞,体外分别施加0、1×105、1.5×105、2×105、2.5×105、3×105、3.5×105 Pa ESW 0、300、600、900 次。倒置显微镜观察,HE 染色观察,CCK-8 染色筛选ESW促进软骨细胞增殖最佳压强和次数。结果1.5×105 Pa、600 次ESW干预后,软骨细胞增殖活性达最高;随压强、次数升高,软骨细胞增殖活性明显下降。结论软骨细胞是对ESW应力敏感细胞。ESW在一定压强和次数下显著促进软骨细胞增殖。     

壳寡糖及其衍生物对体外培养成骨细胞增殖的作用特点

背景:甲壳素、壳聚糖降解后得到的壳寡糖和单糖分子质量小、水溶性良好,具有大分子糖所不具备的更独特的生理生化活性.目的:观察壳寡糖及其衍生物N-乙酰氨基葡萄糖、氨基葡萄糖、羧甲基壳寡糖对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1的作用特点.设计、时间及地点:对比观察实验,于2004-02/2005-07在中国海洋大学海洋生命学院生化实验室完成.材料:小鼠颅骨成骨细胞株MC3T3-E1由北京协和医院细胞中心提供:N-乙酰氨基葡萄糖、壳寡糖、氨基葡萄糖、羧甲基壳寡糖为中国海洋大学海洋生命学院生化实验室自制.方法:分别将N-乙酰氨基葡萄糖、氨基葡萄糖、壳寡糖、羧甲基壳寡糖以10,100,500,1 000,2 000mg/L加入DMEM培养基中.将用4种糖培养的成骨细胞按试剂盒方法提取mRNA,进行mRNA差异显示分析.主要观察指标:MTT法测定成骨细胞的增殖情况.倒置显微镜下观察成骨细胞的生长情况.分析4种糖的mRNA差异.结果:N-乙酰氨基葡萄糖在5个质量浓度梯度均能促进成骨细胞增殖,1 000mg/L时效果最为明显;壳寡糖在各质量浓度下都表现出较明显的促进细胞增殖作用,500mg/L为最适质量浓度;氨基葡萄糖表现出双向调节作用,在10,100mg/L时有促进作用,>500mg/L则表现出抑制作用;羧甲基壳寡糖在各质量浓度下均表现出一定的促进成骨细胞生长作用,但促进效果较N-乙酰氨基葡萄糖和壳寡糖弱.光镜观察结果与MTT测定法结果一致.mRNA差异显示4种糖无明显激活新基因的产生.结论:壳寡糖及其衍生物对体外培养的成骨细胞均有不同程度的促进增殖作用,其中N-乙酰氨基葡萄糖和壳寡糖的效果优于氨基葡萄糖和羧甲基壳寡糖,作用中成骨细胞无新基因产生.     

白细胞介素1β转化酶在脑缺血再灌注损伤中的表达及对细胞凋亡的调节作用

背景细胞凋亡是缺血再灌注损害的重要形式之一,白细胞介素1β转化酶是细胞凋亡关键调节因子,其激活可导致蛋白降解引起细胞凋亡.目的观察在脑缺血再灌注过程中白细胞介素1β转化酶基因的表达及其与细胞凋亡的关系,探讨其在调控脑缺血后细胞凋亡中的作用.设计随机对照试验.材料实验于1996-03/2000-12在解放军第三军医大学神经科学中心完成.选择成年Wistar大鼠64只,随机分为2组,脑缺血再灌注组采用四血管阻塞全脑缺血模型,缺血30 min后再灌注,根据处死时间分为再灌注3,6,12,24,48,72 h和7 d共7个时间点,每个时间点8只.假手术组8只,仅分离,未夹闭双侧颈总动脉.方法假手术组和脑缺血再灌注组再灌注后每个时间点随机选取4只大鼠采用免疫组化和原位杂交检测.其余4只用于原位末端标记检测.主要观察指标①各组大鼠脑组织白细胞介素1β转化酶蛋白和mRNA的表达.②各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况.结果64只大鼠全部进入结果分析.①各组大鼠脑组织白细胞介素1β转化酶mRNA和蛋白的表达假手术组脑组织多数脑区白细胞介素1β转化酶mRNA和蛋白有少量表达,脑缺血组白细胞介素1β转化酶mRNA和蛋白在神经元内及小胶质细胞均有表达,分布在大脑皮质、小脑蒲肯野细胞、海马及皮质下白质.在缺血再灌注12 h后白细胞介素1β转化酶基因表达增加,48～72 h为表达高峰,第7天表达下降.②各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况细胞凋亡在缺血再灌注12 h出现[(49.4±6.8)个/切片],高峰时间在72 h[(228.6±29.8)个/切片],且白细胞介素1β转化酶蛋白和mRNA的表达在分布上与神经细胞凋亡的发生有显著相关性(r=0.89,0.68,P＜0.05).结论①白细胞介素1β转化酶蛋白和mRNA的表达增加,与缺血后细胞凋亡有显著相关性,从时间上支持白细胞介素1β转化酶表达是导致细胞凋亡的重要因素.②在脑缺血再灌注过程中大脑皮质、海马及基底节区是凋亡细胞的多发部位,而这些部位也是白细胞介素1β转化酶表达增高的区域,进一步证明缺血后白细胞介素1β转化酶的表达参与神经细胞凋亡的调节.     

麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎关节软骨组织中IL-1β及TGF-β1水平的影响

目的 探讨麝香乌龙丸对关节软骨的修复和保护作用与调节白细胞介素1β(IL-1β)及转化生长因子β1(TGF-β1)水平的关系.方法 选用健康日本大耳白兔30只,随机分成3组,除正常组外,其余两组(造模组、麝香乌龙丸组)均采用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔注射造模,于给药后第4周末处死全部动物,逐层打开膝关节肉眼观察局部组织...     

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)细胞系SUDHL-4细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 用不同浓度IL-21(终浓度1、10、100、1000 ng/m1)处理SUDHL-4细胞不同时间(24、48、72 h),用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,绘制细胞增殖抑制曲线,计算Ic50值;用流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测IL-21处理后SUDHL-4细胞caspase-9、caspase-3、cleaved caspase3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达.用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Survivin基因mRNA表达.结果 IL-21可明显抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈时间.剂量依赖性,其48 h半数抑制浓度(1C50)为140.9 ng/ml.流式细胞术分析发现100.g/ml IL-21处理的SUDHL-4细胞48 h凋亡率(Annexin V-FITC+细胞率)明显增加[(19.7±2.3)%],同时caspase-9、caspase.3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低,均呈时问依赖性.cleaved caspase-3从48 h开始出现明显的剪切带;Bax和c-myc蛋白表达明显增高,而Bid蛋白表达变化不明显.RT-PCR检测显示IL-21上凋c-myc和Bax基因mRNA的表达,下调Bcl-2和Bci-XL基因mRNA的表达,Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显.结论 IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现.     

转化生长因子-β1对脐血单个核细胞增殖周期及凋亡的影响

通过检测转化生长因子 β1 (TGF β1 )对脐血单个核细胞增殖周期及凋亡的作用 ,探讨其对造血进行负调控的机制。采用 5′ 溴脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)掺入法检测TGF β1 对细胞DNA合成的影响 ;应用Westernblot检测TGF β1 对G1 期细胞周期蛋白cyclinA ,cyclinD1,CDK2和CDK4表达的影响 ;用姬姆萨染色和流式细胞分析法检测TGF β1 对细胞凋亡的作用。结果表明 :①培养细胞加入 10 %胎牛血清 (FBS)和 1,2及 5ng ml的TGF β1 12小时后 ,BrdU的OD值与对照 (10 ?S)组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ;继续培养 2 4小时后 ,1ng mlTGF β1组的BrdU检测OD值与 10 ?S组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而 2ng ml和 5ng mlTGF β1 组的OD值与10 ?S组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。②与对照组相比 ,2ng mlTGF β1 还可明显抑制cyclinA ,cyclinD1,CDK2和CDK4的表达。③与 2ng mlTGF β1 共培养 12和 2 4小时后 ,细胞出现凋亡特征性改变 ,凋亡率分别为14 .4 2 %和 31.98% ;而对照组未见明显形态变化 ,凋亡率分别为 4 .71%和 5 .76 %。结论 :TGF β1 可通过抑制造血细胞DNA的合成和G1 期细胞周期蛋白的表达 ,从而阻止细胞进入S期 ,抑制细胞增殖。TGF β1 还可促进造血细胞凋亡 ,因而是一个重要的造血负性调控因子。     

IL-1β对小鼠软骨细胞中 c-myc 蛋白表达的影响

目的：通过观察不同浓度IL-1β对软骨细胞c-myc蛋白表达的影响,探讨IL-1β在骨关节炎软骨损伤中的作用及机制并寻找有效治疗骨关节炎的方法。方法选用20只C57BL/6小鼠,体外进行关节软骨细胞的分离及原代培养;将原代培养的软骨细胞分为4组：A 组为空白对照组,采用含10% FBS 的RPMI-1640常规培养基培养;B、C、D组为IL-1β处理组,分别用含有1、10和100 ng/ml IL-1β的常规培养基培养,12 h后进行实验分析。采用Western blot和流式细胞仪检测法,观察各组c-myc蛋白表达情况及细胞凋亡情况。结果原代培养细胞24 h后开始贴壁,呈圆形或多角形,传至第4代、第5代细胞体积变大,逐渐成为梭形,甲苯胺蓝染色为软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒。与对照组相比较,不同浓度IL-1β处理组软骨细胞 c-myc 蛋白表达水平逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）;与对照组相比较,不同浓度 IL-1β处理组软骨细胞凋亡率逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论实验体外分离小鼠关节软骨,可成功获得高纯度,且传至3代以内活性率超过90%的软骨细胞;IL-1β可以按照剂量依赖方式上调软骨细胞c-myc蛋白的表达,同时增加软骨细胞凋亡率,说明IL-1β可能通过c-myc蛋白诱导软骨细胞凋亡。