食源性腹泻副溶血弧菌分离株调查分析

目的 分析食源性腹泻患者副溶血弧菌（VP）季节分布及感染患者年龄特征、毒力基因、血清学分型.方法 对2014年1月至2016年12月急性腹泻患者粪便分离的125株副溶血弧菌进行常规培养、血清分型及PCR毒力基因检测.结果 副溶血弧菌感染发生有明显的季节性,夏秋季高发,尤以6～10月份为高峰期.感染患者中21～30岁占37.6％,31～40岁占24.8％.分离得到17个血清型,其中O3：K6占59.2％.经单重PCR进行毒力基因检测显示：tdh＋/trh-分离株所占比例为88.0％,tdh-/trh-分离株为6.40％,检测到2株携带（tdh＋/trh＋）基因.结论 湖州地区副溶血性弧菌感染发生呈明显的季节分布特征,且感染的患者以青壮年居多,优势血清型为O3：K6;多数菌株携带tdh＋/trh-毒力基因.     

宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因及耐药性分析

目的分析宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因、Ⅲ型分泌系统(T3SS)及其耐药情况。方法收集分离自腹泻患者粪便样本的副溶血弧菌49株,采用聚合酶链反应(PCR)检测其毒力基因tdh、trh和T3SS1、T3SS2,采用纸片扩散法检测分离的菌株对17种常用抗菌药物的敏感性。结果 49株副溶血弧菌中有48株tdh阳性,1株trh阳性,47株tdh(+)trh(-),1株tdh(+)trh(+),1株tdh(-)trh(-);49株副溶血弧菌均携带T3SS1基因,47株携带T3SS2α基因,1株携带T3SS2β基因。副溶血弧菌对氨苄西林的耐药率最高(75.5%),对三代头孢、四环素类抗菌药物的敏感性较高,对头孢吡肟、左氧氟沙星和碳氢酶烯类抗菌药物(亚胺培南、美洛培南)的敏感性为100%。结论宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因携带率高,对常见抗菌药物较敏感,应及时监测其耐药率变化,指导临床合理用药。     

广东省江门市一起副溶血弧菌食物中毒分离株的病原学特征分析

目的 分析广东省江门市2017年某公司发生的一起副溶血弧菌食物中毒分离株的血清型别、耐药表型和分子特征。方法 对该起食物中毒事件分离到的15株副溶血弧菌进行血清学分型,抗生素敏感性检测,耐热直接溶血毒素基因（tdh）、耐热相关溶血毒素基因（trh）、GS-PCR和orf8基因的PCR检测,脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型分析。结果 15株副溶血弧菌分离株经生化鉴定、血清学鉴定为O3:K6型;抗生素敏感性分析显示,所有菌株均对氨苄西林和头孢唑啉耐药,对其他抗生素敏感;毒力基因PCR检测结果显示,所有菌株均为tdh+trh-型菌株,并且携带GS-PCR和orf8基因;14株病例分离株和1株食物分离株经限制性内切酶（NotⅠ、SfiⅠ）酶切后的PFGE指纹图谱高度相似,仅存在2条带的差异。结论 该起食物中毒的病原体为O3:K6型副溶血弧菌,携带tdh、GS-PCR和orf8基因,具有共同的耐药表型和遗传特征,此次食物中毒事件由2种克隆群的副溶血弧菌引起。     

浙江湖州地区2017—2020年食源性腹泻患者来源副溶血弧菌特征分析

目的 回顾性分析浙江湖州地区2017—2020年食源性腹泻患者分离的副溶血弧菌毒力基因、血清分型及药敏特征,为当地副溶血弧菌的防治提供科学依据。方法 收集浙江省湖州市5家医院食源性腹泻就诊患者粪便中分离的181株副溶血弧菌,采用副溶血弧菌O、K血清试剂对181株副溶血弧菌进行分型,PCR法检测其毒力基因(tdh、trh、tlh和T3SS1、T3SS2)和遗传标志基因(toxRS/new、orf8),K-B法检测20种临床常用抗菌药物耐药性。结果 浙江湖州地区副溶血弧菌在7、8月份检出最高[56.34%(102/181)],感染人群以青壮年(>20岁且≤40岁)为主[15.86%(83/181)]。181株副溶血弧菌主要血清型为O3:K6型,占53.6%(97/181)。181株副溶血弧菌均携带tlh,164株携带tdh,179株携带T3SS1,167株携带T3SS2α基因,1株携带trh基因,未检出携带T3SS2β基因;130株为大流行菌株,51株为非大流行菌株。181株对氨苄西林(AMP)、哌拉西林(PRL)、阿米卡星(AK)、庆大霉林(CN)、头孢呋辛(CXM)耐药性相对较高...     

2016-2019年江苏省南京市人感染副溶血弧菌分子特征分析

  目的  了解江苏省南京市副溶血弧菌临床分离株的分子特征,为其防控提供参考。  方法  收集2016—2019年从腹泻和食物中毒患者分离的副溶血弧菌临床分离株并进行血清型分型,运用聚合酶链式反应（PCR）方法检测菌株的tlh、tdh、trh、toxRS/new、ORF8五种毒力基因,采用多位点序列分型（MLST）对菌株进行分子分型分析。  结果  2016—2019年共收集93株临床分离株,菌株优势血清型为O3∶K6（65/93,69.9%）,均携带tlh基因,73株属于tdh+trh- toxRS/new+的大流行菌群,非大流行菌群菌株中有5株为tdh-trh-非致病株。 共检出13个ST型,以ST3为主（68/93,73.1%）。  结论  南京地区副溶血弧菌以O3∶K6、ST3型大流行菌群菌株为主,非大流行菌群、非致病株并存。     

2015-2017年北京市顺义区腹泻病例副溶血弧菌流行特征与分子分型特征分析

目的 了解2015-2017年北京市顺义区副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的流行特征和分子分型特征,为进一步防控工作提供依据。方法 分离2015-2017年顺义区腹泻病例标本中的副溶血弧菌,对分离株进行血清型和毒力基因检测,结合流行病学和临床资料进行分析。并将所得的O3:K6型副溶血弧菌菌株的脉冲场凝胶电泳（PFGE）图谱作聚类分析。结果 3年间,副溶血弧菌阳性检出率为8.68%（96/1 106）,2份标本各检出2株副溶血弧菌,共获98株菌株;菌株分为9个血清型,O3:K6型最多（73.47%,72/98）;菌株均为tlh+trh-,仅1株tdh-,其余为tdh+;副溶血弧菌夏季检出率高,3年检出高峰均在8月;男女性副溶血弧菌阳性检出率差异无统计学意义（χ2=0.19,P=0.66）;副溶血弧菌阳性病例以16~45岁的青壮年居多,职业以其他职业、商业服务和工人居多;可疑感染食品多为水产类、蛋、肉及其制品;副溶血弧菌阳性病例症状以腹泻、脱水、腹痛为主,且多为水样便;大部分O3:K6型菌株的PFGE图谱聚集成簇,相似度较高,个别菌株相似度较低。结论 北京市顺义区副溶血弧菌感染引起的腹泻夏季高发,青壮年发病较多,水产及其制品为重要的可疑感染食品。O3:K6型为主要流行血清型,其PFGE图谱多聚集成簇。应加强夏季的防控工作。     

基于多重PCR的副溶血弧菌大流行菌群及其毒力基因检测方法的建立与评价

目的 基于多重聚合酶链反应（PCR）建立一种快速方便的检测副溶血弧菌大流行菌群及其毒力基因的方法。方法 结合副溶血弧菌大流行菌群的群特异鉴定方法GS-PCR,与副溶血弧菌致病相关的耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热直接溶血素相关溶血素基因（trh）序列设计引物,建立并优化多重PCR检测方法。用已知的大流行菌株和非大流行临床分离株,对其进行特异性、灵敏度等性能的评价。并对224株食品分离株和3株临床分离株副溶血弧菌进行了再鉴定。结果 副溶血弧菌大流行菌群有群特异PCR标识基因和tdh扩增条带。而其他细菌扩增结果呈阴性。检测灵敏度可达到105 CFU/ml。对实验室保存的224株食品分离株和3株临床分离株进行再鉴定表明,其中5株为副溶血弧菌大流行菌群,其中3株为tdh阳性、trh阴性,2株tdh、trh均阴性。结论 本研究所建立的多重PCR方法特异性好、灵敏度高。为副溶血弧菌大流行菌群及其毒力基因的快速大规模检测提供良好的技术支持。     

2019－2020年浙江省湖州市副溶血弧菌临床分离株特征分析

  目的  了解2019—2020年浙江省湖州市腹泻患者副溶血弧菌分离株的特征。  方法  对2019—2020年分离自腹泻患者的109株副溶血弧菌进行血清学分型,采用荧光PCR方法检测其毒力基因,采用微量肉汤稀释法检测其耐药性,并利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对其进行分子分型。  结果  109株分离株的优势血清型为O3∶K6（72株）。 所有分离株均携带tlh基因,仅2株菌携带trh基因。 108株菌产生72种PFGE带型,不同带型的相似系数为19.10%～100%。 分离株对磺胺甲恶唑的耐药率最高（63.30%）,其次为氨苄西林（49.54%）。  结论  加强腹泻患者副溶血弧菌分离株的持续监测有助于开展副溶血弧菌引起的食源性疾病的风险评估,为其引起的肠道疾病防控及临床治疗用药提供参考。     

13株杨氏枸橼酸杆菌的黏附、细胞毒性和耐药性检测

目的 了解杨氏枸橼酸杆菌（CY）的黏附、细胞毒性和耐药情况。方法 对从安徽省马鞍山市腹泻病例分离到的13株CY开展黏附HEp-2细胞的检测,同时对HEp-2细胞（MOI:100）作用8 h后的乳酸脱氢酶（LDH）释放情况以及对15种抗生素的药敏实验进行分析。结果 5株CY几乎没有黏附性,黏附指数1;6株CY具有中等黏附性,黏附指数1,且50;2株CY具有强的黏附性,黏附指数50。与HEp-2细胞作用8 h后,3株菌引起的LDH释放量20.00%,其余10株菌引起的LDH释放量均20.00%。13株CY对环丙沙星和妥布霉素均敏感（100%）,对氨苄西林和头孢唑啉的耐药率最高（92.30%）。CY1对7种抗生素耐药,属于多重耐药菌,并且具有强的细胞毒性。结论 本研究共检测出3株强细胞毒性的CY和7株多重耐药的CY,建议临床关注枸橼酸杆菌的毒性和多重耐药情况。     

浙江省温岭市2010至2020年副溶血弧菌大流行株感染性腹泻的调查分析

目的 分析浙江省温岭市2010至2020年副溶血弧菌大流行株感染性腹泻的流行病学状况。方法 选取2010-2020年浙江省温岭市食源性疾病检测哨点医院就诊,并报告至国家食源性疾病监测系统的急性腹泻患者900例,根据肠道细菌培养结果统计副溶血弧菌大流行株感染的检出率,分析其危险因素及主要血清型构成分布情况。结果 900例急性腹泻患者中有500例检测出副溶血弧菌大流行株,检出率为55.56%,其血清型主要为O3:K6（占45.45%～85.11%）。单因素分析显示：副溶血弧菌大流行株感染性急性腹泻与性别、职业类型、家庭月收入无关（P>0.05）,而与年龄、食品暴露史、厨房抹布平均更换频率、单独餐具、洗手方式、是否使用家用带盖垃圾桶、是否为公共厨房、患病季节有关（P<0.05）。多因素Logistics回归分析显示：年龄、食品暴露史、厨房抹布平均更换频率、单独餐具、洗手方式、是否使用家用带盖垃圾桶、是否为公共厨房、患病季节为影响副溶血弧菌大流行株感染性急性腹泻的主要危险因素（P<0.05）。结论 副溶血弧菌大流行株感染是急性腹泻的主要病原微生物,其主要血清型为O3:K6,其...     

副溶血弧菌在乳鼠肠道内竞争性定殖实验方法的建立及应用

目的 建立评价副溶血弧菌在乳鼠肠道内定殖能力的实验方法,为研究副溶血弧菌的致病机制奠定基础。方法 构建带有霍乱弧菌lacZ基因的副溶血弧菌临床分离株RIMD2210633(WT)的LacZ菌株(WT-lacZ);比较WT菌株与WT-lacZ菌株以及WT-lacZ菌株与环境分离株VP1907在CD-1乳鼠(5日龄)肠道定殖能力的差别。结果 成功构建X-Gal LB平板上显蓝色的副溶血弧菌LacZ菌株。WT-lacZ菌株和WT菌株在乳鼠肠道内定殖能力无差别,这表明可以用WT-lacZ菌株代替WT菌株进行后续的实验;VP1907与WT-lacZ菌株在乳鼠肠道内定殖的竞争系数在0.1左右,表明WT菌株的定殖能力明显高于VP1907菌株。结论 建立了评价副溶血弧菌肠道定殖能力的乳鼠模型,并应用该模型进行了临床分离株与环境分离株肠道定殖能力的比较分析。     

Evaluation of restriction enzymes for standardizing pulsed-field gel electrophoresis protocol for rapid subtyping of Vibrio parahaemolyticus

We evaluated the cost-effectiveness of the restriction enzymes with rare-cutting sites in the genome of Vibrio parahaemolyticus RIMD 2210633 for pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) analysis. The evaluation indicated that PFGE with both NotI and SfiI was discriminatory, but NotI was more cost-effective. Based on the results of this study, we suggest using NotI and SfiI as the 1st and the 2nd restriction enzyme for standardizing the PulseNet PFGE protocol for molecular subtyping and global surveillance of V. parahaemolyticus.     

一起O3:K6型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原学检测

目的 检测食物中毒患者粪便或肛拭子、剩余食物、调味品、食物加工环节涂抹物分离的病原菌的生物学特性,确定食物中毒的病原.方法 参照GB/T4789--2003方法,对检出的副溶血性弧菌(vP)做血清分型、耐药性、种属特异基因和毒力基因[tdh(耐热溶血素)和砌(耐热相关溶血素)]检测.结果 从153份粪便或肛拭子样品中检出74株VP,并从调味品和加工环节涂抹物及垃圾桶内的剩余食物(猪头肉)中各检出1株VP,血清型均为03:K6型,神奈川溶血阳性(KP),77株VP聚合酶链反应(PCR)扩增都出现相同VP种属特异基因(320 bp)条带,77株副VP毒力基因复合PCR结果,tdh(434 bp)阳性,trh(250 bp)阴性.结论 本次食物中毒是由具较强毒力的03:K6型VP污染引起的.     

北京市顺义区细菌性痢疾临床诊断病例的感染致病菌检测分析

目的 分析北京市顺义区细菌性痢疾临床诊断病例的感染致病菌构成及病原特征,为该类疾病的科学防控提供依据.方法 收集细菌性痢疾临床诊断病例44例,进行志贺菌属、弯曲菌属、沙门菌属、副溶血弧菌、霍乱弧菌、致泻大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌7种常见致病菌的分离培养,对分离菌株进行血清分型、分子分型及毒力基因检测.结果 志贺菌属...     

镁合金的初步生物安全性评价

目的初步评价AZ31B镁合金的生物安全性。方法体外细胞毒性:L929细胞分别与实验组(M)镁合金培养基浸提液、空白对照组(N)DMEM培养基,阳性对照组(P)5%DMSO培养基培养,3 d后进行细胞毒性分级。体外溶血率:稀释兔血分别与实验组(M)镁合金生理盐水浸提液、空白对照组(N)生理盐水、阳性对照组(N)蒸馏水混合后置37℃水浴中孵育,60 min后离心,取上清液测定吸光度(OD),计算镁合金材料溶血率。体外浸提液分析:检测镁合金材料浸提液中镁离子和钠离子浓度,以及pH值。体内急性毒性:分别自小白鼠腹腔注射空白对照组(N)生理盐水和镁合金组(M)镁合金材料生理盐水浸提液,观察和记录动物的状态,72 h后计算动物体质量变化。结果 N组毒性反应分级为0级,M组为4级,P组为3级。M组溶血率为68.1%,具有溶血作用。浸提液镁离子浓度为1.33 mmol/L,钠离子浓度为134 mmol/L;浸提液pH值为10.10±0.29。所有动物注射后在各时间点无不良反应,一般情况好。M组和N组动物体质量的平均变化分别为1.97%和0.43%,小鼠体质量增加百分比差异无统计学意义(t=0.499,P=0.624)。结论体外实验显示高腐蚀率的镁合金有细胞毒性和溶血率,但体内实验并未见到急性毒性反应。     

一起引起食物中毒副溶血性弧菌的检测

2008年7月杭州市下城区某员工食堂暴发一起由副溶血性弧菌(VP)引起的食物中毒事件,采集中毒患者粪便标本、厨师肛拭子标本和食物加工环节涂抹物标本共25份。经常规鉴定,共检出11株VP(10株来自患者粪便、1株来自食物加工环节涂抹物)。对11株VP进行血清分型和耐药性检测发现,11株VP血清型均为O3:K6型;神奈川溶血试验(KP)阳性;生物学性状和药敏试验结果均一致。采用聚合酶链反应(PCR)方法对11株菌进行种属特异基因(R72H)和毒力基因(tdh、trh)检测,同时应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)进行分型和聚类分析,11株菌的VP种属特异基因(R72H)均为阳性,毒力基因复合PCR结果,tdh(434bp)阳性,trh(250bp)阴性;11菌株经PFGE聚类分析得到3种带型,聚类分析相似性百分比为93%。     

急性肠炎患者副溶血弧菌的流行病学与耐药性分析

目的分析副溶血弧菌所致急性肠炎患者的临床表现、流行病学、菌株血清分型、耐药性分析及临床意义。方法对2010年6月至2012年12月所分离的副溶血弧菌进行病例临床信息统计,菌株血清分型与抗生素敏感试验。结果副溶血弧菌感染的临床表现为腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发烧等典型胃肠炎反应。发病高峰在8-9月,以青壮年为主,主要与外出聚餐、食用海鲜产品及食用生和半生食品有关。血清型中以O3:K6为主,占80%;O1:K1占15.24%;O4:K1仅占4.76%。副溶血弧菌对抗生素有较高的敏感性,只对氨苄西林有很高的耐药性。结论副溶血弧菌感染症状典型、有季节性、人群分布差异性,已成为我国一个严重的食源性公共卫生问题之一。不同地区流行的副溶血弧菌的菌株存在较大的差异,必须持续地进行主动监测和污染控制,做到有的放矢。     

2010年杭州市下城区水产品中 副溶血性弧菌的污染调查

目的 调查杭州市下城区各大农贸市场水产品中副溶血性弧菌(VP)的污染情况。 方法 2010年采集下城区各大农贸市场水产品100份,按国标方法进行VP的分离与鉴定;对分离出的VP做血清分型,耐药性检测,并采用PCR法检测其种特异性基因(R72H)和毒力基因(tdh、trh)。 结果 共分离到24株VP,种特异性基因R72H全为阳性,其中2株毒力基因tdh阳性、trh阴性,其余22株tdh和trh均为阴性。 结论 虽然本次分离到的VP绝大部分都不携带tdh、trh毒力基因,但VP是历年来本辖区内引起食物中毒的主要病原菌,故仍有必要加强对水产品中VP的监测管理。     

2014-2018年浙江省丽水市副溶血弧菌流行情况及菌株特征分析

目的了解2014 — 2018年浙江省丽水市副溶血弧菌（Vp）的流行情况、血清型别、携带毒力基因情况及分子分型特征,为预防食源性疾病提供依据。方法分别收集2014 — 2018年丽水市食源性疾病监测中的11 420例临床腹泻患者粪便与食品安全风险监测中的497份食品标本,进行Vp的分离培养,分析阳性菌株的分布特征。 同时对菌株开展血清分型,毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。结果共分离到296株Vp,其中251株来源于腹泻患者粪便,45株来源于食品。 丽水市Vp流行集中于第三季度,患者集中于成年人,且在家庭用餐占多数。 患者来源菌株主要血清型为O3∶K6,毒力基因型为tdh+trh-tlh+,食品来源菌株主要血清型为O2,毒力基因型为tdh-trh-tlh+。 48株Vp可分为42个PFGE带型,带型相似值为 6.16% ~ 100.00%。结论第三季度为Vp的卫生监管重点,要加强对饮食习惯尤其是家庭用餐时对水产品正确处理方面的宣教。 丽水市目前流行的菌株基因相似度低,可能存在多克隆来源。重点监测血清型患者为O3∶K6,食品为O2。     

不同血液净化方法清除维持性血液透析患者血清蛋白结合类尿毒症毒素的效果比较

目的 探讨血液透析（HD）、血液透析滤过（HDF）和血液灌流联合血液透析（HP＋HD）治疗方法对维持性血液透析（MHD）患者血清蛋白结合类毒素--硫酸吲哚酚（indoxyl sulphate,IS）、硫酸对甲酚（pcresyl sulphate,pCS）和马尿酸（hippuric acid,HA）的清除效果.方法 将入选的48例患者随机分为HD组、HDF组和HP＋HD组,采用高效液相色谱-电喷雾电离-串联质谱（high-performance liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry,HPLC-ESI-MS/MS）方法测定不同血液净化方法治疗前后血清IS、PCS和HA浓度,以比较不同治疗方式对蛋白结合类尿毒症毒素的清除效果.结果 对血清IS的清除,HD组从（30.96±12.55）μ g/ml降至（21.03±10.42）μ g/ml （P＜0.05）,下降率为（33.10±12.87）％;HDF组从（32.24±17.11）μ g/ml降至（17.11±8.94）μ g/ml （P＜0.01）,下降率为（43.96±14.96）％;HP＋HD组从（33.52±19.30）μ g/ml降至（14.33±9.81）μ g/ml （P＜0.01）,下降率为（57.96±11.95）％;HP＋HD组下降率显著高于同期HDF组和HD组（P＜0.05,P＜0.01）,HDF组下降率显著高于HD组（P＜0.05）.对血清PCS的清除,HD组从（24.87±13.64）μ g/ml降至（16.80±8.48）μ g/ml （P＜0.05）,下降率为（30.24±9.27）％;HDF组从（30.60±19.18）μ g/ml降至（15.59±12.39）μ g/ml （P＜0.05）,下降率为（43.20±11.87）％;HP＋HD组从（38.92±17.24）μ g/ml降至（17.71±10.22）μ g/ml （P＜0.01）,下降率为（54.22±14.37）％.HP＋HD组下降率显著高于同期HDF组和HD组（P＜0.01,P＜0.01）,HDF组治疗血清PCS水平下降率高于HD组（P＜0.05）.对血清HA清除,HD组从（18.65±14.24）μ g/ml降至（7.38±5.27）μ g/ml （P＜0.01）,下降率为（59.36±7.46）％;HDF组从（27.62±16.07）μ g/ml降至（7.75±4.56）μ g/ml （P＜0.01）,下降率为（69.70±11.93）％; HP＋HD组从（20.48±11.02）μ g/ml降至（6.33±4.78）μ g/m1 （P＜0.01）,下降率为（71