快速ELISA法诊断犬内脏利什曼病及应用价值的研究

本研究建立一种用PVC薄膜作载体,将前鞭毛体可溶性抗原包被在PVC凹板上采用HRP-SPA作第二抗体及无每的TMB作底物的加速ELISA方法,该法简便、经济、实用。与经典ELISA平行对照检测24份骨髓穿刺证实的内脏利什曼病犬血清,结果：快速ELISA法阳性符合率为100%（24/24）,而经典ELISA法为95.83%(23/24);对47份采自非流行区的正常犬血清,两法均仅有1例呈假阳性反应,占左.13%;用快速ELISA法检测实验感染了旋毛虫、肺吸虫、钩虫、弓形虫等犬血清共26份,均未见交叉反应,用该法又调查了四川汶川县黑热病重流行区的124份犬血清,同时进行骨髓涂片检查,结果快速ELISA查出阳性犬39只,占31.45%(39/124),骨髓涂片查见利什曼原虫者有24只,占19.35%(24/124),这24只犬血清对快速ELISA法均呈阳性反应。     

快速ELISA法诊断犬内脏利什曼病及应用价值的研究

本研究建立了一种用PVC薄膜作载体、将前鞭毛体可溶性抗原包被在PVC凹板上,采用HRP-SPA作第二抗体及无毒的TMB作底物的快速ELISA方法,该法简便、经济、实用。与经典ELISA平行对照检测24份骨髓穿刺证实的内脏利什曼病犬血清,结果:快速ELISA法阳性符合率为100％(24/24),而经典ELISA法为95.83％(23/24);对47份采自非流行区的正常犬血清,两法均仅有1例呈假阳性反应,占2.13％;用快速ELISA法检测实验感染了旋毛虫、肺吸虫、钩虫、弓形虫等犬血清共26份,均未见交叉反应。用该法又调查了四川汶川县黑热病重流行区的124份犬血清,同时进行骨髓涂片检查,结果快速ELISA查出阳性犬39只,占31.45％(39/124),骨髓涂片查见利什曼原虫者有24只,占19.35％(24/124),这24只犬血清对快速ELISA法均呈阳性反应。     

快速ELISA法诊断血吸虫病的应用研究

目的对快速酶联免疫吸附试验（ELISA）的血吸虫病诊断实验条件进行优化,并观察其应用价值。方法同时将抗原、待测血清、HRP-SPA共置进行反应,替代常规ELISA法的分步反应。通过比较不同稀释度HRP-SPA的检测效果,确定其最佳工作浓度。观察待测血清和HRP-SPA不同混合反应时间对检测效果的影响,优化快速ELISA法的检测条件。用快速ELISA法、常规ELISA法和胶体染料试纸条法（DDIA）平行检测慢性血吸虫病人、华支睾吸虫病人及健康人血清,观察快速ELISA法的血吸虫病诊断实用价值。结果 HRP-SPA的最佳工作浓度为1∶2 000,待测血清和HRP-SPA最佳混合反应条件是37℃同步反应60 min。快速ELISA法检测慢性血吸虫病人血清抗体阳性检出率为93.8%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为4.0%,检测健康人血清的假阳性率为1.5%,与常规ELISA法和DDIA检测结果相似。结论快速ELISA法具有快速、简便等优点,是一种简便实用的血吸虫病免疫诊断方法。     

HIV抗体快速检测法在术前与乡镇医疗单位中的诊断价值探讨

为研究艾滋病病毒(HIV)抗体快速检测在急诊术前、乡镇医疗单位、家庭自我HIV抗体检测中的实用性和优越性,采用硒标快速法和酶联免疫吸附试验(ELISA)平行检测1 896例受检者血清HIV抗体(抗-HIV1/2),并对检测结果作分析,对DIGFA技术参数进行评估.现将结果报告如下.     

斑点金免疫渗滤法检测华支睾吸虫病患者血清抗体的研究

目的　建立一种检测华支睾吸虫病血清抗体的简便、快速、敏感和特异的新方法。方法　以华支睾吸虫成虫抗原为包被抗原 ,金标记葡萄球菌A蛋白 (SPA)为显色剂 ,建立检测华支睾吸虫病患者血清抗体的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) ;并以dot ELISA作平行对照。结果　DIGFA和dot ELISA分别检测 119例华支睾吸虫病患者血清抗体 ,其阳性率分别为 96 6 %和 92 4% ,两法差异无显著性。DIGFA分别检测正常人血清 40例、囊虫病患者血清 2 0例、日本血吸虫病患者血清 2 5例 ,前者均为阴性 ,后两者的交叉反应率分别为 5 %和 4%。DIGFA与dot ELISA两法的符合率达 90 9%。结论　DIGFA的敏感性和特异性与dot ELISA相近 ,且具简便、快速及不需特殊设备等优点 ,是一种检测华支睾吸虫病患者血清抗体的新方法。     

滤纸血和血清快速ELISA检测囊虫病抗体的比较研究

本文使用滤纸血和血清同步进行快速ELISA试验检测囊虫病抗体的效果作了比较研究。滤纸血和血清的阳性检出率分别是78％、75％。滤纸血和血清的几何平均滴度分别是45和716。选择阳性的血清和滤纸血各5份,在不同时间内进行4次重复试验,血清的OD值变异系数为2～8％,滤纸血为4～12％。滤纸血于4℃冰箱内至少可保存4周,不影响阳性结果的判定。表明滤纸血快速ELISA是一种简便、快速的方法,在囊虫病血清流行病学调查中有其实用价值。     

肺吸虫抗体快速检测试剂盒(金标渗滤法)的研制和应用

目的开发研制简易、快速、经济、准确的肺吸虫病诊断试剂盒。方法以肺吸虫成虫可溶性蛋白为检测用抗原,以胶体金标记羊抗人IgG为探针,采用自行设计的渗滤装置,检测病人血清中肺吸虫特异性IgG抗体;用深圳康百得生物技术有限公司提供的肺吸虫抗体ELISA检测试剂盒作比较。结果用本试剂盒检测90人份肺吸虫病人血清和100人份健康人血清,其敏感性为98.9%(89/90),特异性为100%(100/100),Youden’s指数为0.989。用该试剂盒分别检测25人份血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清,交叉反应率为24%(6/25)和4%(1/25);与姜片虫、囊虫、丝虫、肺结核病人血清均未见交叉反应。ELISA检测结果比较,符合率为93.5%,无显著性差异(χ2=0.7949,P>0.05)。结论肺吸虫抗体快速检测试剂盒(金标渗滤法)敏感性高、特异性强,可与ELISA相媲美,且操作更为简便、快速,结果判读容易,不需特殊仪器设备,非常适合临床检验和现场查病。     

ELISA检测特异性IgG4诊断肺吸虫病的效果观察

目的探讨用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测特异性IgG4诊断肺吸虫病的效果.方法采用ELISA法检测了肺吸虫病病人血清中的特异性IgG和IgG4抗体及肝吸虫、囊虫、旋毛虫、日本血吸虫病病人和正常人血清中的交叉抗体.结果检测肺吸虫病病人血清中IgG4的敏感性为95.35%,检测正常人血清的特异性为100%,与常规使用的酶联葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)检测结果及检测IgG结果比较差异无显著性(P均＞0.05);与其他寄生虫病病人血清中的交叉反应率,IgG4显著低于用常规HRP-SPA检测结果. 结论ELISA法检测肺吸虫病病人血清中特异性IgG4具有较高的诊断应用价值.     

血清旋毛虫P49抗原IgG抗体的斑点金免疫渗滤法检测

目的 建立一种快速诊断人体旋毛虫感染的新途径。方法 以基因工程表达的猪旋毛虫融合蛋白p49/GST为抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfiltration assay,DIGFA),检测人血清抗旋毛虫p49抗原IgG抗体。共检测76份旋毛虫患者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究。结果 抗原抗体通过渗滤在膜上反应,10min肉眼即可观察到结果,在76份患者血清的检测中,阳性率为98.68％,显著高于ELISA法的检出阳性率86.84％,(X2=7.94,P<0.01)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。结论 以纯化的融合蛋白p49/GST为抗原建立的DIGFA可快速准确检测旋毛虫病人血清特异性旋毛虫IgG抗体,具有推广应用的价值。     

Em18重组抗原特异性抗体的制备及对循环抗原检测的初探

目的 用Em18重组抗原ReEm18制备特异性抗体,建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中的循环抗原.方法 ReEm18经亲和纯化,免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,分别制备单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗).用获得的单抗和多抗建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中Em18循环抗原.结果 免疫兔血清抗ReEm18抗体效价达1∶204 800以上.经ReEm18和多房棘球蚴病(AE)患者血清及健康人血清阻断ELISA试验双重筛选融合细胞,共获得14株抑制率＞50%的特异性阳性细胞克隆.将特异性单抗和多抗自由组合进行双抗体夹心ELISA,结果以9号单抗与多抗的配对检测抗原为最优,检测ReEm18的灵敏度达3 ng/m1.用建立的双夹心ELISA方法检测血清,11份AE血清中6份为阳性.结论 获得针对ReEm18的特异性单抗和多抗,建立了敏感的双抗体夹心ELISA方法,血清学初步检测结果表明AE血清中存在可检测的Em18循环抗原.     

MEIA法与ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体结果比较

目的比较MEIA法与ELISA法检NHCV抗体的结果,以及2种方法在实际应用中的区别。方法收集152例ELISA法检NHCV抗体阳性的血清标本,并采用MEIA法检测,对2种检测方法的结果进行比较。结果152例ELISA法检NHCV抗体阳性的血清标本采用MEIA法检测后,144例为阳性,8例为阴性。结论ELISA法操作简单、灵敏度高,但在实际操作中,ELISA检测HCV抗体结果影响因素较多,易出现假阳性问题;MEIA法检测HCV抗体较ELISA法准确、灵敏、快速。     

乙型脑炎病毒抗体捕获ELISA检测方法的初步建立

目的 建立检测乙型脑炎病毒抗体的抗体捕获ELISA方法.方法 以乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位E39特异的单克隆抗体包被ELISA板,吸附乙型脑炎减毒活疫苗株SA14-14-2病毒粒子,再以吸附的病毒粒子捕获乙型脑炎病毒抗体,建立抗体捕获ELISA方法:同时与以乙型脑炎病毒细胞培养上清包被的间接ELISA方法进行对比,并检测临床血清样品105份.结果 间接ELISA方法背景无法消除,1:10、1:100、1:1000各稀释度的阳性血清与阴性血清吸光度(A)值相近,A阳性血清/阴性血清分别为1.02、0.99、1.13,均<2.1.而抗体捕获ELISA方法1:10、1:100稀释度的A阳性血清/阴性血清分别为3.57、2.94,均>2.1;1:1000稀释度的A阳性血清/阴性血清为1.42,<2.1,表明血清稀释度为1:100时可以显著区别乙型脑炎病毒感染的阳性血清与阴性血清,明显消除间接ELISA方法中背景过高的问题.抗体捕获ELISA方法检测105份临床血清样品,A阳性血清/阴性血清为0.257～0.321(0.262±0.050),均<2.1,为乙型脑炎病毒抗体阴性血清.结论 初步建立了乙型脑炎病毒抗体捕获ELISA方法,该方法特异性较高,对于建立乙型脑炎病毒群的快速鉴别诊断方法具有重要意义.     

滴金免疫测定法（DIGFA）检测血吸虫抗体的研究

目的建立一种简便、快速、敏感、特异的检测血吸虫抗体的新方法。方法用滴金免疫测定法（DIGFA）检测血吸虫病人血清抗体,并以ELISA作平行对照。结果DIGFA和ELISA的敏感性分别为97．1％和95．7％;特异性分别为99．1％和100％,两法无显著差异（P＞0．05）。62份其它寄生虫感染血清,除肺吸虫1例,ELISA呈阳性反应外,其余均为阴性。结论实验结果不仅显示了DIGFA的敏感性和特异性与ELISA相似,而且具有简便、快速、不需要特殊设备等优点,是一种值得推广应用的检测血吸虫抗体的新方法。     

华支睾吸虫病金标诊断试剂盒的研制和现场初步实验

目的 研制华支睾吸虫病金标快速免疫诊断试剂盒，评价其敏感性、特异性和现场试用效果。方法 以华支睾吸虫成虫水溶性抗原、分泌排泄抗原和重组抗原磷酸甘油酸激酶(PGK)作为诊断试剂，制备胶体金免疫层析检测(Immunochromatography test，ICT)试剂盒，检测患者血清和唾液中抗华支睾吸虫IgG，并与常规ELISA血清学检测方法和粪便虫卵检查法相比较。结果 实验室检测临床确诊的华支睾吸虫病人血清中特异的IgG，3种抗原的敏感性均为100％。天然抗原除与慢性血吸虫病人血清有较强的交叉反应外，与囊虫、包虫、弓形虫病人血清没有交叉反应。重组PGK抗原同慢性血吸虫病人血清也没有交叉反应。用分泌排泄抗原制备的ICT检测试剂盒在流行区现场检测被调查者的血清和唾液，总符合率为92．31％；ICT与ELISA血清检测的总符合率为81．54％。现场获取了9人的粪便样本，其中4人检出华支睾吸虫卵，其血清ICT和ELISA检测均呈强阳性，另外未检出虫卵的5人中，1人血清ICT和ELISA均呈阳性，另1人仅血清ELISA呈弱阳性。结论 诊断华支睾吸虫感染的ICT抗体检测技术，尤其是无创性唾液检测技术，简便、快速、准确、安全，优于血清ELISA检测和粪便虫卵检测，适用于临床检验和现场大规模流行病学调查。     

用PVC—ELISA法检测实验大鼠广州管圆线虫抗体

本文首次报道用聚氯乙烯凹孔薄膜作载体进行酶联免疫吸附试验(PVC-ELISA)检测实验感染广州管圆线虫SD大鼠血清中特异性抗体,并与常规ELISA平行比较。对67份实验感染广州管圆线虫并经以后解剖证实有此虫寄生的大鼠血清抗体进行检测,全部均显示阳性结果,阳性率为100％;40份正常大鼠血清均为阴性。在判断实验结果时,消光值法及目测法皆可。两法检测结果未见有统计学差异。本文认为,PVC-ELISA法是一种敏感性高、特异性好、简便、经济、快速的广州管圆线虫抗体检测方法。     

支原体肺炎患者的循环免疫复合物

作者报道在支原体肺炎感染中,循环免疫复合物(CIC)的可能致病作用。方法:从114例(住院58例、门诊56例,年龄1～43岁)肺炎支原体感染患者中采血清标本。诊断依据为结合临床有冷凝集素滴度增高,补体结合(CF)滴度≥1:64或抗体滴度(CF和ELISA法)增高≥4倍,并排除其它疾病。46例的抗体无明显增高、但有特异性IgM抗体(ELISA法),提示近期感染。13例健康人血清作对照,先测冷凝集素及CF后贮于-20℃,供嗣后作ELISA检测。将肺炎支原体的MAC株纯化,在1/10mg的肺炎支原体抗原中含5μg蛋白质/ml,将其置于每个小凹中作ELISA检测。对114例急性期支原体肺炎者和13例健康对照者的血清,用ELISA法     

不同载体ELISA诊断囊虫病的实验研究

本文使用Dot－ELLSA、滤纸血快速ELISA和血清快速ELISA试验,同步对91份囊虫病人血清抗体进行检测。结果三法的阳性率依次为93．2％,82．4％和85．7％;三法的几何平均滴度分别是1097,45和716。三法符合率为87.9％。实验表明,Dot—ELISA以敏感性高,可长期保存,无需特殊设备而成为囊虫病诊断和在流行病学调查中值得推广的好方法;滤纸血快速ELISA则以简便易行而更适宜在边远条件差的地区使用。     

快速诊断家畜日本血吸虫病免疫层析试纸条的研制与初步应用

目的开发研制敏感、简便、快速、经济的日本血吸虫病诊断试纸条。方法利用双抗原夹心法,以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)为检测抗原,以胶体金标记SEA为探针,采用自行设计的免疫层析试纸条装置,检测家畜血清中血吸虫特异性IgG抗体,并用ELISA方法进行比较。结果用该试纸条检测107份人工感染血吸虫病羊血清,其检出率为91.6%;检测80份健康绵羊血清,阴性符合率为87.5%;检测20份粪检阳性水牛血清及15份粪检阴性血清,其阳性符合率为100.0%,阴性符合率为86.7%;检测24份肝片形吸虫病羊血清,交叉反应率为12.5%,与锥虫病牛血清未见交叉反应;与ELISA检测结果比较,两种方法具有良好的一致性。结论应用试纸条诊断家畜日本血吸虫病敏感性高、特异性强,且操作简便、快速,不需特殊仪器设备,适合于基层使用。     

ELISA双抗原夹心法检测鼠疫FI抗体的效果评价

目的比较ELISA双抗原夹心法与IHA法检测人血清中鼠疫FI抗体的最低检出限,符合率以及检测ELISA的特异性,以确定ELISA检测技术能否在鼠疫监测、诊断和流行病学调查中得到应用。方法分别用ELISA双抗原夹心法和IHA（间接血凝法）检测血清298份和鼠疫阳性诊断血清1份。结果ELISA双抗原夹心法检出4份阳性血清,IHA也检出4份阳性血清,2种方法阳性检出率无差别,符合率为75％,最低检出限均为1：160。结论ELISA特异性强,阳性检出率与IHA相当,结果容易判定,可以在鼠疫病例诊断及鼠疫监测中作为常规方法推广使用。     

重组多肽酶联免疫吸附法检测抗Scl-70抗体的初步应用

目的制备人Scl-70抗原207～765位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗Scl-70抗体的敏感性和特异性。方法构建编码Scl-70抗原第207至第765位氨基酸片段的重组体,在宿主菌E.coliBL21（DE3）中表达融合蛋白,经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化后,免疫印迹法鉴定抗原性,ELISA检测北京协和医院免疫科血清库中系统性硬化（SSc）及部分其他结缔组织病患者血清抗Scl-70抗体。结果重组融合蛋白在宿主菌中获得可溶性表达,免疫印迹法鉴定表明其能与标准抗Scl-70抗体阳性血清反应,而与正常血清、其他抗血清无反应。在36份SSc患者血清中,天然抗原免疫双扩散（DID）法共检出的6份阳性血清用重组多肽ELISA检测有5份呈阳性,30份经天然抗原DID法检测为阴性的血清用重组多肽ELISA检测有3份呈阳性;20份其他结缔组织病患者血清用重组多肽ELISA检测均为阴性。结论重组的207—765位氨基酸片段是Scl-70抗原的主要抗原表位区域,以重组多肽为基质ELISA检测抗Scl-70抗体的敏感性较高,为进一步研究抗体水平与临床病情变化的相关性奠定了基础。