芒柄花素的植物雌激素作用研究

目的:探讨芒柄花素的雌激素样作用及其可能机制。方法:选取当归、黄芪、红三叶草中含有的黄酮类物质之一——芒柄花素,利用ER阳性T47D细胞,检测其对细胞增殖速率、分裂增殖指数以及ER亚型表达的影响,评价芒柄花素的植物雌激素活性。结果:MTT增殖试验结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素不能促进人乳腺癌细胞T47D的体外增殖;在ICI182,780抑制试验中,芒柄花素可能能够与ICI182,780协同作用抑制T47D细胞体外增殖;流式细胞术测定细胞周期结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素对T47D细胞的分裂增殖指数没有影响;芒柄花素有增强T47D细胞ERα表达的作用(P0.05)。结论:芒柄花素能够在体外条件下增强T47D细胞ERα表达,具有植物雌激素样作用,但该物质不能促进T47D细胞的体外增殖。     

泡桐花提取物的雌激素活性筛选及其对OVA致过敏性哮喘小鼠的保护作用

目的:探讨泡桐花提取物雌激素活性及其对卵清白蛋白(OVA)致过敏性哮喘小鼠的保护作用。方法:体外采用MCF-7细胞模型筛选出泡桐花提取物具有雌激素样活性，采用雌激素受体拮抗剂(ICI182,780)、雌激素受体α拮抗剂(MPP)、雌激素受体β拮抗剂(THC)与雌激素膜受体GPR30拮抗剂(G15)干预雌激素活性有效剂量下的MCF-7细胞增殖，探讨其雌激素受体作用途径;采用小鼠子宫增重试验，计算性未成熟小鼠的子宫指数，以ELISA法检测血清雌二醇(E₂)、促卵泡生成素(FSH)与黄体生成素(LH)含量;采用Westren blot法测定小鼠子宫中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)和雌激素膜受体(GPR30)表达水平，进一步体内验证泡桐花提取物雌激素活性;OVA致过敏性哮喘小鼠模型，分为正常对照组、模型对照组、地塞米松0.5 mg/kg组、泡桐花提取物155、310、620 mg/kg组，每组8只，同时设置雌激素受体拮抗剂ICI182,780组，雾化激发前30 min共同作用小鼠，连续7 d，末次给药24 h后，小鼠脱颈处死，计算免疫器官脾脏和胸腺指数，E...     

新疆石榴皮等9种天然药物植物雌激素活性的实验研究

目的 对几种天然药物进行植物雌激素的活性筛选.方法 采用人乳腺癌细胞增殖法与酵母菌雌激素筛检实验法对9种天然药物进行了植物雌激素活性的研究.结果 成功地建立了E-SCREEN法与Yeast Estrogen Screen实验法,此两种方法均可检测到1×10~(-13) mol/L的雌二醇.MCF-7细胞增殖实验结果表明,鹰嘴豆、新疆石榴皮、罗勒、枸杞水提取物可促使ER(+)MCF-7细胞的增殖(P＜0.05),提示它们具有植物雌激素样活性;酵母双杂交(Yeast two-hybrid)系统实验结果表明,鹰嘴豆、石榴皮水提取物均能使酵母系统中的β-半乳糖苷酶的活性增强(P＜0.05),提示它们具有植物雌激素样活性.结论 E-SCREEN法敏感性高,并有快速、简便等优点,适用于大量化合物的初选.     

脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对MCF-7、MDA-MB231细胞株增殖的影响研究

目的比较脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对受体状态不同的人乳腺癌细胞株增殖的影响。方法运用MTT法研究不同浓度的脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对MCF-7、MDAMB231细胞增殖的影响,并以雌激素受体阻断剂ICI182,780和雌激素受体激动剂DPN、PPT为工具药来评价脱水淫羊藿素和金雀异黄酮雌激素样作用与雌激素受体(ERs)的关系。结果脱水淫羊藿素和金雀异黄酮终浓度为10~(-13)~10~(-7)mol/L时,MCF-7细胞株增殖均随浓度升高而增加,呈一定的剂量相关性;而各受试药物任何浓度对MDA-MB231细胞株均无显著增殖效果。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ICI182,780时,MCF-7细胞增殖作用被拮抗,MDA-MB231细胞增殖无明显变化。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ERα受体通路激动剂PPT时,MCF-7细胞增殖率明显增高(P<0.05),MDA-MB231细胞增殖无明显变化。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ERβ受体通路激动剂DPN时,MCF-7和MDA-MB231细胞增殖均无明显变化。结论脱水淫羊藿素与金雀异黄酮在一定剂量范围内均有雌激素样作用,两者作用相当,体外实验促进MCF-7细胞增殖作用可能主要是由ERα介导,而非ERβ介导。     

赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响

目的：评价赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响。方法：采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，分别以E-SCREEN法观察赤豆提取物对其增殖的影响，以RT-PCR法、Western blot法观察赤豆对孕激素受体mRNA和蛋白表达的影响，并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价赤豆提取物发挥雌激素样作用的机制。结果：与溶剂对照组比较，赤豆（10～200 μg·mL^-1）能显著促进MCF-7细胞的增殖，100 μg·mL^-1时作用达到最大；赤豆提取物能明显诱导MCF-7细胞孕激素受体(PR)基因mRNA和蛋白的表达，以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论：赤豆提取物具有雌激素活性，此作用是通过雌激素受体(ER)介导的。     

薏苡仁水煎液雌激素样活性筛选研究

目的：对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选,探讨其作用机制。方法：首先通过小鼠子宫增重实验和人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖实验对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选;以质粒pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞株为模型,采用以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测技术,评价薏苡仁水煎液雌激素样作用的信号通路。结果：薏苡仁水煎液可显著的诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加（P<0.01）,且在去雌激素的培养基中能够显著促进MCF-7细胞的增殖（P<0.01）; ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,分别由ERα和ERβ介导时,与正常组相比,薏苡仁水煎液的标准化荧光素酶活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：薏苡仁水煎液可诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加,在去雌激素的培养基中诱导MCF-7人乳腺癌细胞的增殖,首次发现薏苡仁具有雌激素样作用,且主要是通过ERβ介导发挥雌激素样作用。     

黑大豆乙醇提取物的雌激素样作用及其机制研究

目的:评价黑大豆乙醇提取物(black soybean ethanol extract,BSE)的雌激素样作用及其作用机制。方法:采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞,分别以E-SCREEN法观察BSE对其增殖的影响、以RT-PCR法观察BSE对其雌激素效应基因mRNA表达的影响,并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价BSE发挥雌激素样作用的机制。结果:与溶剂对照组相比较,BSE(10～200μg.mL^-1)能显著促进MCF-7细胞的增殖,100μg.mL^-1时作用达到最大;BSE能明显诱导MCF-7细胞pS₂,孕激素受体(PR)基因mRNA的表达,并与药物浓度有一定相关性;以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论:BSE能促进MCF-7细胞的增殖,诱导雌激素效应基因mRNA的表达,即BSE能通过雌激素受体发挥雌激素样作用。     

淫羊藿素和脱水淫羊藿素对人类乳腺癌细胞T47D增殖和细胞周期的影响

目的 探讨淫羊藿素和脱水淫羊藿索对人类乳腺癌细胞株T47D增殖和细胞周期的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法测定淫羊藿素和脱水淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D的细胞增殖作用.并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780和雌激素受体ERB激动剂DPN为工具药来评价淫羊藿素和脱水淫羊藿素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对T47D细胞的增殖情况进行分析.结果 淫羊藿素和脱水淫羊藿素在10-8～10-6范围内能促进T47D细胞的增殖,并将T47D细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且淫羊藿素和脱水淫羊藿素促进T47D细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗.结论 淫羊藿素和脱水淫羊藿素具有雌激素活性,此作用可能是通过雌激素受体(ER)介导的.     

金雀异黄酮与芹菜素的雌激素样作用体外研究

目的:用雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达阳性细胞株人乳腺癌细胞MCF-7,检测金雀异黄酮(genistein)与芹菜素(apigenin)的雌激素样活性大小。方法:用MTT法研究金雀异黄酮与芹菜素对体外培养MCF-7细胞增殖的影响;Real-time RT-PCR法检测其对ERα,ERβ,PR,PS2 mRNA表达水平的影响。结果:金雀异黄酮与芹菜素促进MCF-7增殖;金雀异黄酮的1×10-10mol.L-1组显著增加ERαmRNA的表达水平,是对照组的17.76倍,是阳性对照E2组的1.75倍。芹菜素显著促进了PR mRNA表达水平,是对照组4.57倍,并达到E2组1.11倍。两者在不同浓度对ERα,ERβ,PR,PS2 mRNA中的一个或几个均有不同的促进作用。结论:金雀异黄酮与芹菜素均有明显的雌激素样作用,虽对于不同的雌激素应答基因(ERα,ERβ,PR,PS2 mRNA)表现出不同的促进表达作用,但金雀异黄酮更加强烈。提示植物雌激素发挥雌激素样作用的信号途径与雌激素信号途径并不完全相同;黄酮类药物的B环位置是雌激素样活性的关键位点之一,异黄酮(B环处于3位时)的雌激素样活性大于黄酮(B环处于2号位)。     

槲皮素对人类乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察槲皮素（Quercetin，Que）对人类乳腺癌细胞株增殖的影响。方法采用MTT法测定槲皮素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7和非雌激素依赖性乳腺癌细胞MDA-MB231细胞增殖作用，并以雌激素受体拮抗剂ICI182、780为工具药来评价槲皮素发挥雌激素样作用与雌激素受体（ER）的关系，采用流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析。结果与溶剂对照组相比较，Que（10-50μmol／L）能显著促进MCF-7细胞的增殖，而抑制ER阴性MDA-MB231细胞，并将MCF-7细胞周期由G1期向S期推进，促进DNA合成，提高细胞分裂增殖指数，且Que促进MCF-7细胞增殖作用被ER拮抗剂所拮抗。结论Que具有雌激素活性，此作用是通过ER介导的。