川黄柏多倍体诱导研究

目的:改良川黄柏现有品种,丰富遗传育种资源。方法:采用秋水仙素对川黄柏茎段愈伤组织、种子和腋芽进行多倍体诱变处理。结果:将茎段愈伤组织接种在含有0.2%秋水仙素的培养基上,通过培养形成的多倍体植株诱导率为12.45%,经植物形态组织学和染色体数检测,诱导后的植物材料具有明显的多倍体特征。结论:用秋水仙素对川黄柏不同部位进行多倍体诱导,是一种行之有效的生物技术方法。     

北细辛愈伤组织诱导及其解剖结构观察

目的筛选北细辛Asarum heterotropoides var.mandshuricum愈伤组织诱导适宜条件,确定愈伤组织类型。方法以北细辛叶柄和叶片为材料,研究外植体状态、培养基类型及植物生长调节剂种类和浓度配比对愈伤组织诱导发生的影响,同时利用石蜡切片法探讨不同时期愈伤组织的形态结构特点。结果以幼期叶柄和叶片为外植体,高效的愈伤组织诱导培养基为1/2 MS+0.6 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA;但幼期叶片愈伤组织发生所需时间较长。切片观察发现诱导形成的愈伤组织结构紧密,细胞小且排列无规则,为胚性愈伤组织。结论幼期叶柄是北细辛愈伤组织诱导的最佳外植体材料,获得的高效愈伤组织诱导条件将为后续再生体系的成功建立奠定基础。     

八角莲愈伤组织诱导及分化研究

目的 探讨了八角莲的愈伤组织诱导及分化技术.方法 采用八角莲成熟种子为材料,经过种子消毒诱导出芽,成功培育出无菌幼苗,再用幼叶、叶柄进行试管繁殖.结果 种子外植体以70%酒精消毒45 s+3%次氯酸钠消毒5 min组合进行灭菌效果最佳,污染率为0.00%,出芽率为1.9%;种子在MS+6-BA 2.0 mg/L + GA3 0.5 mg/L激素配比上容易萌芽,出芽率为15.6%;在取材部位筛选中,以幼叶为外植体对诱导出芽效果最佳,最佳诱导愈伤组织激素组合为MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.3 mg/L,愈伤组织诱导率为85.7%;结论筛选适合的外植体和激素组合,对八角莲愈伤组织诱导和丛生芽分化具有良好的促进作用.     

乌拉尔甘草不同外植体愈伤组织的诱导及影响因子研究

目的:探讨影响乌拉尔甘草愈伤组织诱导的因素,建立乌拉尔甘草愈伤组织培养方法.方法:采用组织培养法,比较不同外植体、光照、植物生长物质种类及其配比对乌拉尔甘草愈伤组织诱导和生长的影响.结果:不同外植体中,下胚轴愈伤组织诱导率最高(平均 94%),且发生最早,愈伤化程度高,筛选出下胚轴是诱导愈伤组织最佳外植体,在MS+6-BA(1.0～2.0)mg/L+NAA(0.5～1.0)mg/L培养基上,愈伤组织可分化产生不定芽;2,4-D诱导产生非胚性愈伤组织,一定浓度的6-BA与NAA配合,诱导产生胚性愈伤组织;光照影响愈伤组织的诱导及生长.结论:不同外植体、激素含量及光照是影响乌拉尔甘草愈伤组织诱导和生长的主要因子.     

龙脑樟愈伤组织的诱导及龙脑的产生

目的:优化龙脑樟愈伤组织的诱导条件。方法:采用植物组织培养方法和气相色谱方法进行。结果:MS培养基中添加不同浓度配比的激素,愈伤组织的诱导效果不同,愈伤细胞生长状况也不一样,其中在培养基上添加2,4-D4 mg.L-1+6-BA 0.2 mg.L-1愈伤组织的诱导率最高,细胞生长旺盛。同时,发现采用嫩叶为外植体诱导出的愈伤组织中含有龙脑,而采用茎为外植体诱导出的愈伤组织中不含龙脑。结论:龙脑樟愈伤组织诱导适宜的培养基为MS+2,4-D 4 mg.L-1+6-BA 0.2 mg.L-1,龙脑的生成则以嫩叶为外植体。     

防风愈伤组织诱导研究

目的:运用现代生物技术探讨防风愈伤组织的培养条件.方法:以防风叶片为外植体,对防风的愈伤组织进行不同浓度生长素和细胞分裂素诱导.结果:在2,4-D 1 mg·L<'-1>诱导形成的愈伤组织长势好于其他不同浓度,具有显著差异.生长素与细胞分裂素配合使用时,愈伤组织的诱导率明显高于单个生长素的处理,生长情况也有差异.结论:诱导防风最佳外源激素的浓度配比2,4-D 1.0 mg·L<'-1>+6-BA 0.5 mg·L<'-1>.     

盾叶薯蓣四倍体诱导的研究

目的 选育盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis新种质资源,以期为高产、高皂苷元含量薯蓣育种打下基础。方法 以刚露出绿色芽点的盾叶薯蓣愈伤组织块为材料,采用两种方法处理:①愈伤组织块浸泡到秋水仙素水溶液中。②培养基中添加秋水仙素。结果 成功获得了染色体数加倍的薯蓣新材料,其中以1×103mg/L秋水仙素水溶液浸泡24 h效果最好,诱导率达到35.2%,四倍体植株与二倍体亲本相比,二者在外观形态、生理指标、显微结构上有明显区别。结论 四倍体植株体型大、具生长优势,离体条件下利用愈伤组织块诱导多倍体是盾叶薯蓣倍性育种的一条有效途径。     

影响濒危药用植物滇重楼愈伤组织发生的因素

目的研究影响重楼愈伤组织发生的关键因素。方法以重楼的根状茎、侧根、茎、叶、种胚等为材料,在添加不同配比的激素组合的MS培养基中培养。结果在上述5种材料中,只有种胚在胚乳看护培养的条件下才能诱导出愈伤组织;IAA诱导重楼愈伤组织的作用最大,而6-BA对重楼愈伤组织分化的调节作用较好;MS+2 mg.L-1IAA+0.02 mg.L-16-BA是诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率达到53.3%。结论合适的外植体和激素组合是诱导重楼愈伤组织的关键因素。     

阳春砂愈伤组织的诱导

目的:通过阳春砂组织培养获得愈伤组织,建立阳春砂愈伤组织的诱导体系。方法:将阳春砂根状茎芽及阳春砂试管苗的茎段、根尖作为愈伤组织诱导的外植体材料,接种到以MS为基本培养基,分别添加不同浓度的6-苄基腺嘌呤(6-BA),ɑ-萘乙酸(NAA)及2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的培养基中(各培养基的p H约为5. 8),探讨不同外植体材料及不同培养基对阳春砂愈伤组织诱导的影响。结果:研究结果显示,阳春砂根状茎芽及试管苗的茎段、根尖3种外植体材料均能有效地诱导产生愈伤组织;其中阳春砂根状茎芽、试管苗茎段2种外植体材料诱导产生愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA(1. 5 mg·L-1)+2,4-D(1. 0 mg·L-1)+NAA(0. 5 mg·L-1),最高诱导率分别为15%和60%;试管苗根尖诱导产生愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA(2. 0 mg·L-1)+2,4-D(1. 0 mg·L-1)+NAA(1. 0 mg·L-1),最高诱导率76%,为阳春砂愈伤组织诱导的最佳外植体材料。结论:该研究初步建立了阳春砂的根状茎芽及试管苗的茎段、根尖3种外植体的愈伤组织诱导体系,试管苗根尖为愈伤组织诱导的最佳外植体。     

箭根薯愈伤组织诱导及无性系的建立

目的 诱导箭根薯愈伤组织及建立无性系.方法 以箭根薯野生种为材料,采用不同激素组合对不同部位(根茎、叶片、叶柄)进行诱导,对比诱导效果,筛选出最佳部位及各个生长阶段的最佳激素组合.结果 外植体的消毒以0.1％ HgC12溶液处理8 min的效果最佳;诱导愈伤组织最佳外植体为叶柄;愈伤组织诱导的最佳培养基是MS +6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,在此培养基上使用叶柄诱导愈伤组织的诱导率达到100％;不定芽诱导分化的最适培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,分化率高达90％;生根诱导的最佳培养基为含1/2 MS+NAA 0.5 mg/L,生根率高达100％.结论 筛选出诱导箭根薯愈伤组织最佳诱导外植体及激素组合.     

何首乌快繁技术优化及同源四倍体的诱导与鉴定

目的:建立何首乌快速繁殖体系并对之进行优化;探索组织培养条件下诱导何首乌同源四倍体的有效方法.方法:采用正交设计的方法,对何首乌的繁殖培养基进行优化筛选;将顶芽于不同浓度秋水仙碱溶液中浸泡不同时间筛选何首乌同源四倍体的诱导条件.结果:何首乌最佳繁殖培养基为MS +6-BA 1.0 mg· L-1 +NAA 0.3 mg·L-1+ PP3330.4 mg·L-1;0.2％秋水仙碱浸泡芽30 h,或0.3％秋水仙碱浸泡芽18h为诱导何首乌同源四倍体的理想条件,诱导率高达16.7％.结论:采用组织培养方法可进行何首乌的快速繁殖;秋水仙碱是有效的多倍体诱导剂.通过根尖细胞染色体鉴定,共获得25个同源四倍体株系.该实验为何首乌野生资源保护、优良品种的选育奠定了基础.     

厚朴及姜厚朴乙酸乙酯提取部位对小鼠胃肠运动功能的影响

目的: 比较厚朴与姜厚朴乙酸乙酯提取部位对促进胃肠运动功能的药效. 方法: SPF级昆明种小鼠随机分为阴性(或模型)对照组、阳性药多潘立酮35 mg·kg^-1或雷尼替丁45.5 mg·kg^-1组和厚朴高、中、低剂量(0.678,0.452,0.226 g·kg^-1),姜厚朴高、中、低剂量(0.708,0.472,0.236 g·kg^-1)给药组,各组小鼠均连续ig 3 d,比较小肠推进率、盐酸性溃疡率、血清胃泌素含量. 结果: 厚朴和姜厚朴乙酸乙酯提取部位均能不同程度促进胃肠动力功能,在促进小肠推进率上,各给药组与阴性组有显著差异(P<0.05),与阳性药组无显著差异.在抑制溃疡上各给药组与模型组有显著差异(P<0.05).胃泌素含量厚朴低、中剂量与姜厚朴中剂量组血清胃泌素升高与阴性组存在显著差异(P<0.05). 结论: 姜厚朴与厚朴乙酸乙酯提取部位具有促进胃肠运动功能保护胃黏膜的作用,姜厚朴药效优于厚朴.     

秋水仙碱诱导南丹参多倍体的研究

目的:探讨秋水仙碱诱导南丹参多倍体的方法。方法:将秋水仙碱加入培养基中采用幼苗、叶片和愈伤组织3种不同的外植体进行诱导。结果:经预培养1周的叶片和愈伤组织以15 mg.L-1秋水仙碱处理1周的诱导效果最好,加倍率可达33.33%,且多数为整株加倍。加倍植株叶片较肥厚宽大、皱折增多、色深、根粗壮,气孔比二倍体明显增大,染色体数为8~64条不等。应用过氧化物酶和酯酶同工酶技术比较分析表明,变异植株与未加倍植株同工酶谱存在明显差异。结论:用秋水仙碱诱导南丹参成多倍体植株是有效的,已有部分植株已加倍成为同源四倍体。     

厚朴与凹叶厚朴群体遗传学研究

目的:对厚朴与凹叶厚朴的群体遗传学进行研究,为中药厚朴的质量控制提供分子生药学方面的依据。方法:对厚朴与凹叶厚朴15个居群应用2个叶绿体基因间序列psbA-trnH和trnL-trnF进行PCR扩增并测序,计算厚朴与凹叶厚朴单倍型频率,用程序HaploNst分析遗传多样性和遗传结构,应用TCS version 1.13软件构建单倍型网状进化树。结果:厚朴与凹叶厚朴均无特有单倍型存在,但单倍型频率存在显著差异,已开始出现遗传分化的趋势,NST略大于GST。结论:厚朴与凹叶厚朴在遗传上已出现遗传分化的趋势,但尚未完全分化成彼此独立的单系。     

Autotetraploidy induced in Nianmaohuangqin (Radix Scutellariae viscidulae) with colchicine in vitro

Objective

To establish and optimize the propagation of Nianmaohuangqin (Radix Scutellariae Viscidulae) and induce and characterize polyploidy of Nianmaohuangqin (Radix Scutellariae Viscidulae).

Methods

Buds from germinating seed-derived explants were induced by tissue culture. With an orthogonal test, different concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP), indole-3-acetic acid (IAA) and kinetin (KT) were used to determine the optimal concentrations for the propagation of Nianmaohuangqin (Radix Scutellariae Viscidulae). The different concentrations of IAA and rooting powder (ABT) were used to induce rooting. A 0.3% w/v colchicine solution was used to induce polyploidy and the induced buds was identified by root-tip chromosome determination and stomatal apparatus observation.

Results

A large number of buds could be induced directly from epicotyl and hypocotyl explants on Murashige and Skoog (MS) (Murashige and Skoog 1962) medium supplemented with 1.1–1.3 mg/L BAP and 0.2 mg/L IAA. Root induction and development could be observed within 20 days of inoculation on 1/2 MS medium supplemented with 0.2 mg/L IAA and 0.1 mg/L ABT. Furthermore, 27 lines of autotetraploid individuals were obtained with a plantlet chromosome number of 2n=4x=36.

Conclusion

Autotetraploid lines could be obtained through induction with colchicine in vitro, proving that this method might be used for plant selection and breeding.     

厚朴和凹叶厚朴对实验性胃肠动力障碍的药效作用差异研究

目的:比较厚朴和凹叶厚朴缓解实验性胃肠动力障碍的药效。方法:采用左旋精氨酸和硫酸阿托品诱导的鼠胃肠动力障碍模型。观察给予厚朴和凹叶厚朴水煎剂后炭末排出时间?胃内残留率、小肠推进率、血清D-木糖含量、血清胃动素(MTL)和胃泌素(GAS)含量的改变。同时应用Bliss法计算ED50。结果:厚朴和凹叶厚朴均能不同程度的缓解实验性胃肠动力障碍,降低胃内残留率、促进小肠推进率、增加血清D-木糖含量及血清MTL和GAS水平;并且按上述指标计算出2种药物的ED50,发现厚朴凹叶厚朴。结论:同凹叶厚朴相比,厚朴缓解胃肠运动功能障碍的作用较优。     

巫山淫羊藿离体胚培养的研究

目的:研究药用植物巫山淫羊藿组织培养技术,为工厂化育苗提供科学根据。方法:以巫山淫羊藿的种胚为外植体,采用MS培养基,附加不同浓度2,4-D,6-BA,IBA,NAA进行正交试验。结果:诱导愈伤组织的最优培养基为:MS+2,4-D2 mg.L-1+IBA 2 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1;愈伤组织分化的最优培养基为:MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+IBA 1 mg.L-1;诱导芽的最优培养基为:MS+IBA 2 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1;芽增殖的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1。结论:通过诱导愈伤组织途径和丛生芽途径,建立了巫山淫羊藿种胚外植体诱导和培养方法,达到快速繁殖的目的。     

巴戟天不同炮制品补肾壮阳作用的比较研究

为了比较巴戟天不同炮制品补肾壮阳药理作用,采用腺嘌呤灌胃给药的方法建立小鼠肾阳虚模型,分别给予巴戟天、巴戟肉、盐巴戟、制巴戟4种炮制品,以桂附地黄丸为对照,以小鼠体征、体重、睾丸系数、精囊腺系数、血清睾酮(T)、血清皮质醇(cortisol)、血清肌酐(Cr)、组织病理学检查等为评价指标。结果表明,各炮制品均可以改善肾阳虚小鼠的症状,其中盐巴戟组治疗效果最为显著,其次是制巴戟、巴戟肉、巴戟天。该实验结果可为阐明巴戟天炮制原理和补肾壮阳机制提供实验数据。     

Spasmolytic activity of Rosmarinus officinalis L. involves calcium channels in the guinea pig ileum

Ethnopharmacological relevance

Rosmarinus officinalis L. is a plant used around the world for its properties to cure pain in several conditions, such as arthritic and abdominal pain or as an antispasmodic; however, there are no scientific studies demonstrating its spasmolytic activity. Therefore, the aim of the present study was to investigate the effect of an ethanol extract from Rosmarinus officinalis aerial parts and the possible mechanism involved by using rings from the isolated guinea pig ileum (IGPI).

Materials and methods

The IGPI rings were pre-contracted with potassium chloride (KCl; 60 mM), acetylcholine (ACh; 1 × 10⁻⁹ to 1 × 10⁻⁵ M) or electrical field stimulation (EFS; 0.3 Hz of frequency, 3.0 ms of duration and 14 V intensity) and tested in the presence of the Rosmarinus officinalis ethanol extract (150, 300, 600 and 1 200 μg/mL) or a referenced smooth muscle relaxant (papaverine, 30 μM). In addition, the possible mechanism of action was analyzed in the presence of hexametonium (a ganglionic blocker), indomethacine (an inhibitor of prostaglandins), l-NAME (a selective inhibitor of the nitric oxide synthase) and nifedipine (a calcium channel blocker).

Results

Rosmarinus officinalis ethanol extract exhibited a significant and concentration-dependent spasmolytic activity on the contractions induced by KCl (CI₅₀ = 661.06 ± 155.91 μg/mL); ACh (CI₅₀ = 464.05 ± 16.85 μg/mL) and EFS (CI₅₀ = 513.72 ± 34.13 μg/mL). Spasmolytic response of Rosmarinus officinalis (600 μg/mL) was reverted in the presence of nifedipine 1 μM, but not in the presence of hexamethonium 0.5 mM, indomethacine 1 μM or l-NAME 100 μM.

Conclusion

The present results reinforce the use of Rosmarinus officinalis as antispasmodic in folk medicine. Moreover, it is demonstrated the involvement of calcium channels in this activity, but not the participation of nicotinic receptors, prostaglandins or nitric oxide.     

厚朴酚类物质含量层次变异规律研究

目的:揭示厚朴种源间、家系间及家系内个体间酚类物质含量的变化规律,为厚朴良种选育提供依据。方法:以广西资源、湖北五峰及浙江景宁等3个厚朴主要产区种源的半同胞家系子代为材料,采用HPLC测定厚朴酚与和厚朴酚含量。结果:厚朴酚含量、和厚朴酚含量、酚类物质总量种源间均存在极显著差异,均为湖北五峰种源最高,浙江景宁种源最低;种源内家系间、半同胞家系内单株间厚朴酚含量、和厚朴酚含量、酚类物质总量也存在显著差异,含量高的种源家系间、家系内变异也大,但厚朴酚含量与和厚朴酚的比值差异不显著。结论:厚朴酚类物质含量不仅在种源间存在显著差异,种源内家系间及家系内单株间也存在显著差异,且质量好的种源家系间变异更大,因此,根据厚朴种内酚类物质含量层次变异规律,厚朴良种选育应将种源选择赋于重要地位,建立种源、单株配合选择的遗传改良方法与程序。