米诺环素对视网膜神经节细胞保护作用的研究进展

视网膜神经节细胞作为中枢神经系统的一部分,是青光眼和视网膜疾病的主要受损细胞。米诺环素是一种半合成的四环素类衍生物,除广谱抗菌功效外,还具有抗氧化、抗凋亡和抑制小胶质细胞活化的作用,对神经元具有一定的保护作用。研究证明米诺环素对视网膜神经节细胞也具有保护作用,在视神经外伤、青光眼和多种视网膜疾病的研究中均显示了不同程度的效果。本文就米诺环素对视网膜神经节细胞的神经保护作用及其作用机制作一综述。     

米诺环素对急性视神经炎大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的:探讨米诺环素对大鼠视神经炎视网膜神经节细胞(RGCs)的影响,并与甲基强的松龙比较。方法:选取22只雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组又分为实验对照组(EAE组)、米诺环素组、甲基强的松龙组(MP组)。HE染色观察视神经病理改变,TUNEL法检测RGCs凋亡率。结果:EAE组视神经纤维空泡样变性,轴突不规则肿胀,大量炎性细胞浸润,轴突内空泡样变性,髓鞘松解脱落,微丝微管消失,EAE大鼠视神经病理变化符合脱髓鞘性视神经炎改变。正常大鼠几乎未见RGCs凋亡,EAE组、米诺环素组、MP组较正常组相比,差异均有显著统计学意义(P<0.01),EAE组、MP组较米诺环素组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),MP组与EAE组间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:采用豚鼠脊髓匀浆诱导建立大鼠EAE模型,其视神经病理学改变符合脱髓鞘性视神经炎的表现。米诺环素可抑制脱髓鞘性视神经炎RGCs凋亡,而甲基强的松龙对脱髓鞘性视神经炎RGCs无直接保护作用。     

米诺环素对视网膜神经保护作用的研究进展

米诺环素（minocycline）是一种第2代人工半合成的四环素类药,口服吸收好,脂溶性高,可穿透血-脑屏障,对人安全,已在中枢神经系统和视网膜疾病中表现出显著的神经保护作用。已知视网膜小胶质细胞在多种视网膜疾病中均有激活并参与病变发展,而米诺环素神经保护作用机制主要为抑制小胶质细胞和caspase-3激活。本文对米诺环素神经保护作用机制及在视网膜疾病中的保护作用做一综述。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞的保护作用

　　目的　观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠视神经钳夹伤视网膜神经节细胞（RGC）是否具有保护作用。方法　72只Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）、假手术+EGCG组（B组）、视神经钳夹+生理盐水组（C组）、视神经钳夹+EGCG组（D组）等4组,每组各18只。B、D组在视神经钳夹或假手术前2 d起给予腹腔注射EGCG  25 mg/（kg·d）,直至手术后2 d,共5 d;随后改为口服2 mg/（kg·d）。C组以生理盐水替代EGCG。每次每组取6只大鼠,采用3%荧光金经上丘逆行标记RGC方法,比较各组视神经钳夹伤后7、14、28 d RGC的存活数量;采用免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹方法检测各组视神经组织神经丝蛋白（NF-L）的表达。结果　视神经钳夹伤后7 d,C、D组RGC存活数量分别为（943.61±85.06）、（1 134.45±117.85） 个/mm2;14 d时分别为（812.76±172.07）、（1 021.67±94.02） 个/mm2;28 d时分别为（766.94±171.45）、（1 009.72±126.40）个/mm2。各时间点D组RGC存活数量均显著高于C组（t=3.216,2.609,2.792;P=0.009,0.026,0.019）。各时间点A、B组间RGC存活数量差异无统计学意义（t=0.749,0.403,0.254;P值均＞0.05）;视神经钳夹后7、14、28 d,D组视神经组织NFL表达均高于C组（t=9.847,5.731,2.868;P=0.001,0.005,0.045）。结论　EGCG对大鼠视神经钳夹伤后RGC具有一定的保护作用。      

DJ-1蛋白对视神经钳夹伤后小鼠视网膜神经节细胞及视功能的影响

目的:观察Park7基因编码的DJ-1蛋白对小鼠视神经钳夹损伤（ONC）后视网膜神经节细胞（RGC）及视功能的影响。方法:健康雄性C57BL/6J小鼠37只和116只分别随机分为正常组、ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组和对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、绿色荧光蛋白（GFP）-O...     

米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞损伤中的保护作用及分子机制

目的 探讨米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞(RGC)毒性中的保护作用和分子机制.方法 实验研究.原代小鼠RGCs体外培养24 h后,随机分为3组:对照组,L-谷氨酸组(100 μmol/L、500 μmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L)及L-谷氨酸+米诺环素组(30 μmol),观察不同浓度L-谷氨酸对RGC的存活率与轴突生长的损伤作用及米诺环素的保护作用.体内实验,将雌性B6小鼠随机分为实验组(30只)和对照组(30只).两组小鼠腹腔内分别注射米诺环素(实验组,60 mg/kg)或生理盐水(对照组),每天1次,连续7 d.第2天时,两组小鼠玻璃体腔内注射2μl L-谷氨酸(2 mmol/L),诱导RGC损伤.免疫组化染色分析β-Ⅲ-tubulin阳性细胞数目变化及视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达情况,Real-time PCR和免疫印迹法分别检测小鼠视网膜组织中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、GFAP与波形蛋白(Vimentin)的mRNA及蛋白表达水平.结果 体外实验显示,与对照组相比,L-谷氨酸降低RGC的存活率,与剂量和干预时间呈负相关.同时L-谷氨酸可明显抑制RGC轴突的生长,RGC轴突长度>2BL、1～2 BL、<1 BL占总细胞数比例分别从50.38%、7.83%和3.72%降至31.43%、5.05%和1.29%.而米诺环素能明显减轻L-谷氨酸对RGC的毒性作用,改善RGC轴突生长,各组细胞比例回升至51.00%、8.10%和2.43%,谷氨酸与对照组相比、米诺环素组与谷氨酸相比,差异有统计学意义(F=18.87,P<0.01).体内实验结果显示,与对照组相比,L-谷氨酸组小鼠RGC数目显著减少(45.00±10.21和68.50±2.86),而米诺环素治疗后可明显改善L-谷氨酸诱导的RGC损伤,RGC数目恢复至62.00±11.65,(F=7.6,P<0.01).谷氨酸处理后视网膜组织中GFAP的表达水平明显增高,而米诺环素明显降低视网膜组织中GFAP的表达.同时,L-谷氨酸显著提高小鼠视网膜组织中炎症相关因子IFN-γ、IL-1、TNF-α及胶质细胞相关蛋白Vimentin和GFAP的基因及蛋白表达水平,而米诺环素可显著抑制这些因子的表达.结论 L-谷氨酸损伤可诱导RGC凋亡、抑制RGC轴突生长,并上调炎症因子及视网膜相关胶质蛋白的基因与蛋白表达水平,米诺环素对L-谷氨酸所导致的视网膜神经节细胞损伤具有明显的保护作用.     

银杏叶制剂EGb 761对外伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨银杏叶提取物制剂EGb 761对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGC)存活的影响.方法 大鼠48只经荧光金逆行标记后制备视神经损伤的动物模型,随机分为治疗组和对照组,两组分别给予EGb 761 150 mg/kg·d和生理盐水灌胃.在视神经损伤后4d、7d及14d观察视网膜铺片,进行RGC计数.结果 大鼠视神经损伤后4d、7d及14d,RGC数量持续减少,但治疗组均高于对照组,各时间点的差异均有统计学意义(依次为P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).结论 EGb761可促进视神经损伤后RGC的存活,对RGC有保护作用.     

腹腔注射银杏叶提取物促进大鼠视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞存活

目的探讨银杏叶提取物GBE50（Ginkgo biloba extract 50）对大鼠视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法65只SD大鼠随机等分为正常对照组、假手术组、模型组、模型＋生理盐水（NS）组、模型＋GBE 50组,每只鼠的右眼用于实验。正常对照组不作任何处理;假手术组仅分离暴露视神经;其余3个组分离暴露视神经并进行钳夹：模型＋NS组和模型＋GBE 50组分别于实验前1周每日腹腔注射相应体积NS和0．35％GBE 50（100mg／kg）,术后继续给药4周;术后4d,各组随机处死3只大鼠作凋亡RGCs的TUNEL荧光标记;术后4周后处死所有大鼠作光镜检查并计数视网膜垂直经线RGCs。结果正常对照组和假手术组未见TUNEL阳性RGCs;其余3组均见TUNEL阳性RGCs,但模型＋GBE 50组较前两组少。术后4周RGCs数目：模型组（131±10个）、模型＋NS组（137±13个）、模型＋GBE 50组（198±15个）均少于正常对照组和假手术组（P〈0．05）;模型组与模型＋NS组差异无统计学意义（P〉0．05）;但模型＋GBE 50组显著多于模型组和模型＋NS组（P〈0．05）。结论腹腔注射银杏叶提取物GBE 50能部分抑制大鼠视神经钳夹后RGCs凋亡,具有一定的RGCs保护作用。     

大鼠视神经损伤后视网膜小胶质细胞表达的初步观察

目的 研究大鼠视神经损伤后视网膜中小胶质细胞的表达情况.方法 实验研究.选取30只成年雌性健康SD大鼠,按照随机数字表法分为实验组和对照组各15只,分别用于细胞计数、免疫组织化学及免疫印迹实验.实验组在眼球后约1.5 ～2.0 mm处行右眼视神经鞘内切断术,术后5d于视神经断端处用荧光金逆行标记视网膜节细胞,手术后7d处死取材.对照组小鼠右眼行视神经切断术并标记,2d后处死取材.视网膜做铺片用于计数.用免疫组织化学法于视网膜切片上行小胶质细胞的表面标记物Iba-1染色,观察小胶质细胞的形态及数量,同时应用免疫印迹法检测视网膜内Iba-1蛋白含量的变化.两组间比较采用非配对student t-检验进行统计学分析.结果 对照组视网膜中有少量小胶质(Iba-1阳性)细胞表达,并呈非活化状态.视神经切断7d后小胶质细胞明显增多且呈半活化状态,免疫印迹结果显示损伤后Iba-1蛋白表达量明显增加到对照组的2.3倍(t=7.669,P=0.001).视视神经切断7d后节细胞数量为(1182±64)个/mm2,明显减少至对照组的51％(t=23.850,P＜0.01).结论 大鼠视神经损伤后小胶质细胞表达增多且呈部分激活状态,可能是视网膜受损后自我保护的表现之一.     

PEDF对大鼠视神经急性损伤后神经节细胞的保护作用

目的:观察色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)对大鼠视神经急性损伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用.方法:选取健康雌性SD大鼠60只随机分为:空白组、模型组和实验组,每组各20只.采用视神经夹伤方法,建立大鼠视神经急性损伤模型.模型组制作视神经损伤模型成功后即刻向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μL,之后的1、2wk分别向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μL;而实验组在视神经损伤模型制作成功后即刻向玻璃体腔注射PEDF 5μL,同样在1、2wk时分别向玻璃体腔注射PEDF 5μL.通过HE 染色,光镜下观察视网膜形态学变化并且对视网膜神经节细胞进行计数.通过免疫组织化学半定量的方法对Bcl-2和Bax的表达进行检测,观察PEDF对受损视神经的影响.结果:HE染色观察,实验组神经节细胞从细胞形态上要好于模型组,且RGCs数量较模型组多.实验组的Bcl-2和Bax的蛋白表达与空白组、模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),实验组较模型组Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降.结论:PEDF可通过上调视网膜Bcl-2蛋白的表达、减弱Bax蛋白表达,以减弱或抑制视神经损伤后RGCs的细胞凋亡,减轻视神经损伤.     

视神经鞘切开减压术对大鼠视神经挤压伤后RGC凋亡的影响

目地观察早期视神经鞘切开减压术对大鼠视神经挤压伤后RGC凋亡的相关机制。方法大鼠91只分为对照组、损伤组、手术组各7、42、42只通过视网膜切片技术,HE染色,免疫组化SP法于伤后3、7、15各时问点视网膜神经节细胞计数及检测BCL-2和BAX阳性细胞数。结果手术组各时间点RGC计数均高于损伤组,差异有显著性（P〈0．05）。手术组各时间点BCL-2阳性细胞数均高于损伤组,BAX阳性细胞数均低于损伤组,差异有显著性（P〈0．05）。结论早期视神经鞘切开减压术可对大鼠视神经挤压伤后能上调BCL-2基因的表达和下调BAX基因的表达而抑制RGC的凋亡。     

饱和氢气水对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞保护作用的实验研究

 目的 探索饱和氢气水对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。设计 实验研究。研究对象 SPF级SD大鼠18只。方法 对18只大鼠采用随机数表法随机分为3组,每组6只。均选取右眼为实验眼,左眼为正常对照眼。使用40 g微型视神经夹在大鼠视神经球后2 mm处夹持60 s建立视神经夹伤模型。A组给予饱和氢气水腹腔注射,5 ml/kg,每日1次;B组和C组分别给予饱和氢气水和生理盐水滴眼,每次1滴,每日3次。用药第9天,麻醉下采用3%荧光金双上丘两点注射法逆行标记大鼠RGC,第14天深麻醉下取眼球并处死动物,行视网膜定向铺片,距离视乳头中心上下左右各2 mm 拍摄照片,盲法计数RGC。主要指标 RGC存活率。结果 A组、B组和C组RGC存活率分别为40.35%±13.04%、58.34%±14.00%和43.07%±7.80%（F=3.965, P=0.041）。其中B组与A组和C组之间均有显著性差异（P=0.020;P=0.042）;A组和C组之间无显著性差异（P=0.698）。结论 饱和氢气水滴眼2周对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞可能具有一定的保护作用。（眼科,2014, 23： 107-110）     

灯盏细辛对大鼠视神经压榨伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨中草药灯盏细辛对大鼠标定性视神经压榨伤所致的视网膜神经节细胞(RGC)损伤的防护和修复作用。方法　 4 2只健康SD大鼠随机均分为A组和B组。两组均用特制微型视神经夹直接夹持视神经 ,制作成单眼视神经部分压榨伤模型后 ,A组不予任何治疗 ,B组予以灯盏细辛治疗 ,直至处死动物。以上两组按致伤日至处死日动物的存活时间又分为 :A1组和B1组 (损伤后 4d) ,A2 组和B2 组 (损伤后 14d) ,A3 组和B3 组 (损伤后 2 1d) ,每组各 7只大鼠。于处死前 3d双上丘直接注射 3%快蓝标记双眼RGC。处死日行眼球摘除术后 ,将双眼全视网膜组织铺片置于荧光显微镜下 ,在距视乳头 1mm处的颞上、颞下、鼻下及鼻上 4处作荧光摄影 ,并输入计算机经图像分析仪计数RGC。计算RGC标识率 ,即 (损伤眼RGC数 /未损伤眼RGC数 )× 10 0 % ,并进行统计学分析。结果　A组大鼠中 ,A1、A2 及A3 组的RGC标识率分别为 (77 79± 7 11) %、(6 3 76± 3 79) %、(5 4 6 6±4 75 ) % ;B组大鼠中 ,B1、B2 及B3 组的RGC标识率分别为 (80 13± 12 0 3) %、(78 17± 9 19) %及(83 5 9± 12 6 1) %。A2 和A3 组分别与B2 和B3 组比较 ,差异均有非常显著意义 (t=14 10 8,36 2 0 3;P<0 0 1)。结论　大鼠标定性视神经压榨伤后用灯盏细辛治疗 ,     

杞贞胶囊对视网膜神经节细胞保护作用及其作用机制的实验研究

目的 探索杞贞胶囊对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞的保护作用及其作用机制。设计 实验研究。研究对象 SPF级SD大鼠72只。方法 72只SD大鼠随机分为2组：用药组36只;对照组36只。两组大鼠右眼行视神经夹伤,于球后2 mm处用40 g微型视神经夹夹伤视神经60 s。左眼作为正常对照。夹伤后2小时及此后每日予以灌胃给药一次。用药组给予20%杞贞溶液2.5 ml/kg,对照组给予生理盐水2.5 ml/kg。给药第28天取眼球标本,用药组和对照组各取24只行HE染色﹑Tunel试剂盒染色﹑Caspase-3免疫组化染色;剩余每组12只分离视网膜提取mRNA,测定Bax和Bcl-2基因的表达量。主要指标 视网膜厚度﹑Bax和Bcl-2基因表达量。结果 用药组视网膜厚度平均为（109.0±4.4）μm;对照组视网膜厚度为（101.8±7.6）μm（F=29.497,P=0.028）。两组间Bax基因表达差异具有统计学意义（t=1.089,P=0.028）;Bcl-2基因表达差异未见统计学意义（t=0.553,P=0.692）。结论 杞贞胶囊对大鼠视神经夹伤后的视网膜神经节细胞具有保护作用,可能通过下调Bax基因表达和抑制Caspase蛋白活性从而减少视网膜神经节细胞凋亡。     

视神经夹持损伤模型大鼠视网膜和视神经小胶质细胞的活化

背景 外伤性视神经病变(TON)是继发于外力创伤下的急性视神经损伤,预后较差.小胶质细胞作为中枢神经系统中重要的免疫细胞,参与了中枢神经系统疾病与多种眼科疾病的病理生理过程.然而,小胶质细胞在TON的病理发展及损伤修复过程中的作用尚不明确. 目的 比较大鼠视神经夹持损伤后视神经与视网膜中小胶质细胞的形态变化、激活数量、分布情况及活化水平的差异. 方法 将35只SPF级健康雌性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法分为正常对照组,造模后6h、3d、7d、14 d、30 d组和假手术组,每组5只大鼠.造模后各时间点组用夹持钳以50 g的夹持力在大鼠眼球后约2 mm处钳夹视神经10s,建立大鼠视神经夹持模型,假手术组大鼠行相同的手术操作但不夹持视神经,正常对照组不做任何处理.分别于上述时间点制备大鼠视神经和视网膜冰冻切片,采用lectin-FITC荧光标记抗体检测各组大鼠视神经和视网膜中的小胶质细胞数量和激活的小胶质细胞数量. 结果 正常对照组和假手术组大鼠视网膜中小胶质细胞主要位于内丛状层(IPL),少部分位于内核层(INL)和神经节细胞层(GCL),外核层(ONL)和外丛状层(OPL)未见小胶质细胞分布.正常对照组大鼠视网膜小胶质细胞的细胞体较小,以分支状为主,突触细长,可见二级分支.各模型组大鼠视网膜中小胶质细胞主要位于GCL和IPL,小胶质细胞在GCL的数量明显多于假手术组,小胶质细胞多为阿米巴状,部分呈半激活态,少见分支静息态.正常对照组、假手术组及造模后6h、3d、7d、14 d和30 d组大鼠视网膜中小胶质细胞数分别为6.40-±-1.52、7.20±2.05、12.00±3.54、14.00±4.06、18.00±4.36、18.40±3.13和10.80±1.92,造模后各时间点大鼠视网膜中小胶质细胞数量均明显多于正常对照组,造模后30 d小胶质细胞数量明显少于造模后7d和14d组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);造模后3、7和14d组大鼠视网膜中激活小胶质细胞数量明显多于假手术组,差异均有统计学意义(P=0.024、0.009、0.023).正常对照组和假手术组大鼠视神经中小胶质细胞较小,呈棒状或分枝状,分布均匀且稀疏.造模后各时间点组小胶质细胞较假手术组细胞体积增大,呈阿米巴状并分布在近视神经夹持部位.造模后6h、3d、7d、14d大鼠视神经中小胶质细胞数量明显多于正常对照组,差异均有统计学意义(P=0.007、0.001、0.003、0.014).造模后30 d大鼠视神经中小胶质细胞数量明显少于造模后3d、7d和14 d组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).造模后6h、3d和7d组大鼠视神经中活化小胶质细胞数量明显多于假手术组,差异有统计学意义(P=0.005、0.004、0.030),造模后14d、30 d大鼠视神经中活化的小胶质细胞数量较造模后3d组明显减少,差异均有统计学意义(P=0.021、0.004),造模后6h组视神经中激活态小胶质细胞增加并持续到造模后14d.结论 大鼠视神经夹持损伤后一定时间内视网膜及视神经中小胶质细胞增加并活化,视神经中小胶质细胞的活化及其衰减均早于视网膜,视神经中小胶质细胞活化程度更明显.     

超声微泡造影剂联合美金胺增强视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞保护作用

目的 探讨超声微泡造影剂联合美金胺对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞( RGC)的保护作用.方法 将Sprague-Dawley(SD)雄性成年大鼠40只随机分为正常对照组(A组),假手术组(B组),空白对照组(C组),玻璃体腔单独注射美金胺组(D组),玻璃体腔注射美金胺加超声微泡组(E组)5个组,每组8只大鼠,再将各组随机分为视神经损伤后1、2周2个亚组,各亚组4只大鼠.A组不做任何处理;B组只暴露视神经,不进行钳夹,玻璃体腔注射生理盐水,立即用超声波辐照大鼠眼球;C～E组建立视神经钳夹伤模型后,处理方式分别为C组玻璃体腔注射生理盐水,D组玻璃体腔注射美金胺,E组玻璃体腔注射超声微泡造影剂及美金胺,立即用超声波辐照大鼠眼球.视神经损伤1、2周时,各组行逆行荧光金标记RGC并计数;闪光视觉诱发电位(F-VEP)检测,记录P100波潜伏期及振幅;荧光电子显微镜下观察视网膜细胞形态学改变.结果 逆行荧光金标记RGC结果显示,各处理组视网膜定向铺片上均可见金黄色着染的RGC.A、B组RGC数间差异无统计学意义(q=0.018,0.011;P=0.986,0.873);C～E组RGC数均较A组减少,差异具有统计学意义(F=85.944,P=0.012);D组RGC数多于C组,差异具有统计学意义(q=1.721,1.924;P=0.043,0.037);E组RGC数明显高于C、D组,差异具有统计学意义(q=1.128,1.482,P=0.027,0.008;q=1.453,1.855,P=0.031,0.010).F-VEP检测发现,A、B组P100波潜伏期及振幅间差异无统计学意义(q=0.008,0.019,P=0.981,0.946;q=0.072,0.052,P=0.737,0.851) ;C～E组P100波潜伏期较A组延长,振幅较A组降低,差异具有统计学意义(F=134.312,106.312;P=0.017,0.009).荧光电子显微镜下观察发现,A、B组大鼠视网膜各层结构完整,排列整齐,RGC排列紧密整齐,细胞核均匀深染,胞核大小一致.C～E组大鼠的视网膜不同程度水肿变厚,RGC有不同程度的排列紊乱,空泡化及细胞数目减少.结论 超声微泡造影剂联合美金胺能抑制视神经损伤后大鼠RGC的丢失,促进其视功能的恢复,对视神经损伤大鼠的RGC具有保护作用.     

两种常用大鼠视神经钳夹伤模型造模效果的比较

背景 视神经钳夹伤(ONC)动物模型是外伤性视神经损伤致病机制及治疗方法相关基础研究的主要工具,目前常用的造模方法有经眼眶上缘开神经鞘膜视神经钳夹法和经球结膜外眦部夹伤视神经法,但关于2种模型优劣评价的研究很少. 目的 比较2种常用大鼠ONC模型的造模效果,为相关的实验研究中造模方法的选择提供依据.方法 采用随机分配方法将8～10周龄健康成年雄性SD大鼠24只分为经眶上缘开神经鞘膜ONC组和经眶上缘开神经鞘膜ONC 20 s、40 s、60 s组,分别采用经眶上缘开神经鞘膜视神经夹伤法(20 s)及经球结膜外眦部夹伤视神经法在大鼠的一侧眼建立ONC动物模型,各组大鼠的正常对侧眼作为对照.于造模后14 d记录各组大鼠闪光视觉诱发电位(F-VEP)P1波;制备大鼠视神经组织切片,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠视神经的组织病理学改变;采用免疫荧光法观察并计数大鼠视网膜组织中Brn-3α阳性视网膜神经节细胞(RGCs).对2种造模方法的造模过程和检测结果进行比较.结果 造模后14d,经眶上缘开神经鞘ONC组和经球结膜ONC 20 s组、40 s组、60 s组大鼠的F-VEP P1波潜伏期较各自的正常对侧眼均明显延长,差异均有统计学意义(t=-11.64、-8.04、-6.50、-10.84,均P＜0.01);经眶上缘开神经鞘ONC组大鼠P1波潜伏期与经球结膜ONC 20 s、40 s、60 s组大鼠比较均明显延长,差异均有统计学意义(P=0.01、0.02、0.05);各组大鼠术眼P1波振幅与其正常对侧眼比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).造模后14 d,免疫荧光检测显示各组大鼠模型眼视网膜上Brn-3α表达阳性RGCs数均较正常对侧眼明显减少,经眶上缘开神经鞘ONC组大鼠视网膜上Brn-3α表达阳性RGCs数为(13.60±2.14)个/视野,为其正常对侧眼的47.49％,经球结膜ONC 20 s、40 s和60 s组中Brn-3α阳性RGCs数分别为(18.74±3.61)、(15.84±2.31)和(14.58±3.23)个/视野,分别为其正常对侧眼的67.70％、56.69％和50.17％,经眶上缘开神经鞘ONC组大鼠视网膜中Brn-3α阳性RGCs数与经球结膜ONC 40 s和60 s组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).组织病理学检查显示,各组大鼠造模眼神经胶质细胞核排列紊乱,细胞基质空泡化,可见大量炎性细胞浸润,以眶上缘开神经鞘ONC组更为严重.结论 与经球结膜ONC模型鼠比较,经眶上缘开视神经鞘ONC模型大鼠视神经形态结构损害更为严重,视神经的传导功能更为迟缓,RGCs的存活率更低.     

大鼠视神经夹伤模型中莫尼定的视网膜节细胞保护作用

目的 :研究莫尼定对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞的保护作用。方法 :实验用SD大鼠 2 0只随机分为用药组 8只和对照组 12只。所有大鼠右眼用 40 g微型视神经夹紧贴球后夹持视神经 60秒 ,左眼未做夹持。用药组于夹伤前1小时及夹伤后每日腹腔注射莫尼定 1mg/kg ,阴性对照组于夹伤前 1小时及夹伤后每日腹腔注射生理盐水 5ml/kg ,实验观察2 8天。实验结束前 4天双上丘注射 3 %荧光金逆行标记视网膜神经节细胞。做视网膜铺片 ,距离视乳头中心上下左右各2mm拍摄照片 ,使用CPAS图像分析软件做节细胞定量分析 ,节细胞存活率 =右眼节细胞密度 /左眼节细胞密度× 10 0。结果 :用药组、对照组节细胞存活率分别为 61 0 1%和 53 48% ,两者之间存在显著性差异 (P =0 .0 3 5)。结论 :在大鼠视神经夹伤模型中 ,莫尼定具有明显的视网膜节细胞保护作用     

雄激素预处理对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠视神经和视网膜神经节细胞的影响

目的:观察雄激素预处理对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大 鼠视神经形态功 能和视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响。 方法:将雌性Wistar大鼠41只 随机分为正常组10只、未 用药对照组15只和雄激素组16只。正常组和未用药对照组每天以1％乙醇灌胃，雄激素组每 天以0.25 mg/kg甲睾酮灌胃。用药20 d后，未用药对照组和雄激素组注射0.4 ml完全弗 佐剂-豚鼠脊髓匀浆，并辅以注射百日咳疫苗诱导EAE模型。诱导前7 d，大鼠上丘和外侧膝状体 注射荧光金以逆行标记RGC。继续用药至诱导后14～30 d，取正常鼠 和出现症状48～72 h内的未用药对照组和雄激素组大鼠，应用光学显微镜和闪光视觉诱发电 位 （FVEP）观察其视神经形态和功能的变化；荧光显微镜下观察视网膜铺片并计数RGC；原位缺口末端标记法（TUNEL）观察RGC的调亡情况。 结果：诱导10d开始，E AE大鼠相继出现尾及后肢无力，麻痹等症状。与未用药对照组相比，雄激素组的发病潜伏期 延长（P=0.035），症状评分降低（P=0.042）。未用药对照组大鼠视神经纤维走 行纡曲呈波浪状，弥漫脱髓鞘 改变；雄激素组视神经纤维走行较规则，脱髓鞘改变不明显。FVEP显示与未用药对照组相比 ，雄激素组的N₁、P和N₂波潜伏期明显缩短（P＜0.05），N_1^-P和P-N₂振幅提高（P＜0.05）。正常组、未用药对照组和雄激素组RGC数分别为（2284±132）、 （934±78）、（1725±95）个/mm²，雄激素组RGC数较未用药对照组增多（P＝0.028）。正常组、未用药对照组和雄激素组TUNEL阳性细胞数分别为（4.02±0.16）、（24.44±2.22）、（9.84±2.36）个/高倍视野，雄激素组TU NEL阳性细胞数较未用药对照组明显减少（P＝0.025）。 结论:雄激素可降低EAE发病率和症状评分，抑制EAE鼠RGC的凋亡，减轻视神经脱髓鞘改变，改善视神经传导功能。