初治急性白血病多药耐药基因表达水平的定量开究

为了建立一种稳定可靠的多药耐药基因（ＭＤＲ１）ｍＲＮＡ检测方法，探讨ＭＤＲ１基因表达检测的临床价值，我们采用ＲＴ－ＰＣＲ１方法定量检测了Ｋ５６２、Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株和３０例初治急性白血病ＭＤＲ１的表达水平。结果发现：１）耐药Ｋ５６２／ＡＤＭ１细胞系的ＭＤＲ１表达较高，而Ｋ５６２敏感细胞系无表达。２）初治急性白血病患者ＭＤＲ１阳性表达率４０．０％，表达值为０．２２０８±０．０８９６。３）５例正常人对照均无ＭＤＲ１阳性表达。４）初治急性白血病ＭＤＲ１阳性表达组缓解率为４１．７％，明显低于阴性组８８．９％（Ｐ＜０．０１）。我们认为ＲＴ－ＰＣＲ是一种敏感性高、特异性强、可定量检测ＭＤＲ１表达手段，有临床实用价值；另外，初治急性白血病患者ＭＤＲ１表达检测的结果表明，ＭＤＲ１表达增加是化疗的一个不利因素，且对化疗方案的选择有一定的指导意义。     

CYP2D6、GSTM1遗传多态性与肺癌易感性关系

目的探讨中国汉族广东籍人群中ＣＹＰ２Ｄ６、ＧＳＴＭ１的遗传多态性与肺癌易感性关系。方法采用病例—对照研究方法,用ＰＣＲ检测ＣＹＰ２Ｄ６、ＧＳＴＭ１的基因型,限制性酶切电泳鉴定ＣＹＰ２Ｄ６点突变。结果病例组与对照组间未发现ＣＹＰ２Ｄ６多态性分布差异,而ＧＳＴＭ１多态性存在分布差异,病例组为５８．７％,对照组为３５．７％（Ｐ＜０．０５）,ＯＲ值为２．５６（１．１１－２．４４）。结论ＣＹＰ２Ｄ６Ｇ－Ａ突变与肺癌易感性未见有联系,ＧＳＴＭ１－／－型个体患肺癌易感性增高     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。     

消化系癌症血汪及肿瘤细胞相关成分的测定

收集肝癌等５种消化系癌症患者血清，用免疫电泳法测定血清α１－抗胰蛋酶（α１－ＡＴ）水平，结果发现各癌症组血清α１－ＡＴ水平均显著高于对照组（Ｐ〈０．００１）。另选择培养两种分化不同的消化系胃癌细胞，分离胞浆核ＫＣ１抽提液，用ＤＣＣ法测定相应性激素受体，结果ＳＧＣ－７９０１细胞胞浆及胞核抽提液中ＥＲ为３０．２和３５．７ＲＲ为２０．３和２２．７ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白；ＮＫＭ－４５细胞相应ＥＲ为２４．８和２     

胃癌患者全胃切除、代胃及人工括约肌重建术后免疫功能的变化

为了研究全胃切除、胃及幽门重建新术式及术后胃癌患者免疫功能的变化，测定了胃癌患者术后０．５ａ、１ａ血液中ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫＬ、Ｌ、ＩＬ－２、ｓＩＬ－２Ｒ、ＩＮＦ－γ水平。新术式术后患者ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＣＤ４、ＮＫＬ、Ｌ、ＩＬ－２、ＩＮＦ－γ水平明显高于传统术式组（Ｐ＜０．０１），与非肿瘤手术组相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；新术式术后患者ＣＤ８、ｓＩＬ－２Ｒ水平明显低于传统术式组（Ｐ＜０．０１），与非肿瘤手术组相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结果提示，新术式患者术后免疫功能恢复较快，而传统术式患者术后免疫功能恢复较慢且低下。     

乳腺癌HLA—DR表达及其临床价值

采用免疫组化技术，分析了４０例乳腺癌石蜡主要组织相容性抗原ＨＬＡ－ＤＲ与各项临床病理参数和生存预后的关系。根据ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞的多少，４０例病人分成两组：高阳性组（ＧＨ，〉３％）和低阳性组（ＧＬ，≤３０％）。结果显示：１．ＨＬＡ－ＤＲ表达与原发灶大小、淋巴结转移数、ＴＮＭ分期、组织学分极无关，但与癌周淋巴细胞浸润显著相关（Ｐ〈０．０５）；２．高阳性组各时点生存率及总体生存率同于低阳性组（Ｐ〈０     

细胞色素P4501A1,2D6和谷胱甘肽硫转移酶基因多态性与肺癌易感性的研究

目的探讨细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（ＣＹＰ１Ａ１），２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴＭ１）基因多态性与肺癌易感性的关系。方法用病例对照研究方法及ＰＣＲ┐ＲＦＬＰ等技术检测原发性肺癌和住院对照各５９例，分析ＣＹＰ１Ａ１基因ＭｓｐＩＣ型、ＣＹＰ２Ｄ６Ｃｈ型（Ｔ／Ｔ型）和ＧＳＴＭ１缺陷型〔ＧＳＴＭ１（－）〕三种纯合突变型频率分布及其交互作用。结果突变型在病例和对照组的频率分别为（ＣＹＰ１Ａ１ＭｓｐＩＣ型２５．４％、１５．３％（Ｐ＝０．１７），ＣＹＰ２Ｄ６ＣｈＴ／Ｔ型３５．６％，４７．５％（Ｐ＝０．２６），ＧＳＴＭ１（－）型５７．６％、４９．２％（Ｐ＝０．４６），无显著性差异。协同分析发现在男性中，１１．６％（５／４３）肺癌兼有ＭｓｐＩＣ型和ＧＳＴＭ１（－）型，对照组无１例（０／４３），Ｐ＝０．０３。结论结果提示在男性中ＣＹＰ１Ａ１ＭｓｐＩＣ型和ＧＳＴＭ１（－）型可能协同增加患肺癌的危险性。     

CD3AK细胞和LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床和实验研究

将５１例晚期恶性肿瘤患者（男性２３例，女性２８例）分成两组，其中一组（３１例）以ＣＤ３ＭｃＡｂ（ＣＤ３单克隆抗体）和小剂量ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）共同诱导的ＣＤ３ＡＫ细胞治疗，另一组（２０例）输注大剂量ＩＬ－２（１０００ｕ／ｍｌ）诱导的常规ＬＡＫ细胞治疗，以探讨降低ＩＬ－２用量、提高杀伤细胞细胞毒活性的可能性。结果显示ＣＤ３ＡＫ组患者生活质量改善、症状缓解均优于ＬＡＫ组。ＣＤ３ＡＫ组ＰＲ＋ＭＲ率较ＬＡＫ组高２９．０％，Ｓ＋Ｐ率和死亡率分别较ＬＡＫ组低１２．４％和９．６％。同时比较了ＣＤ３ＡＫ细胞与ＬＡＫ细胞的体外增殖和细胞毒活性，结果表明ＣＤ３ＡＫ细胞增殖率高于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１），靶细胞抑制率二者在０．０５水平无显著差异。提示ＣＤ３ＭｃＡｂ在刺激杀伤细胞活性，尤其在提高其增殖能力方面，具有显著的作用，ＣＤ３ＡＫ／ＩＬ－２能更有效地治疗晚期恶性肿瘤。     

粘附性淋巴因子活化的杀伤细胞抗自体白血病细胞作用的研究

建立了一套培养和处理粘附ＬＡＫ细胞（Ａ－ＬＡＫ）的系统，将１２例缓解期急性髓系白血病（ＡＭＬ）患者（ＲＰＳ）的Ａ－ＬＡＫ细胞与常规制备ＬＡＫ细胞（ＲＴ－ＬＡＫ）进行了对照研究，结果显示ＲＰＳ－Ａ－ＬＡＫ细胞于培养第１０天时其扩增指数（２０．１±１３．９）较ＲＴ－ＬＡＫ细胞的扩增指数（７．５±２．１）明显提高（Ｐ＜０．０５）。形态学研究显示Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成，免疫表型分析显示其主要由ＣＤ１６＋的ＮＫ细胞组成，ＲＴ－ＬＡＫ细胞主要由ＣＤ３＋的Ｔ细胞组成。其杀伤活性与ＣＤ１６＋ＮＫ细胞之间有很好的相关性（ｒ＝０．８２，Ｐ＜０．０５）。这提示ＣＤ１６＋ＮＫ细胞是Ａ－ＬＡＫ细胞的主要组成细胞，代表了杀伤功能最强的亚群。     

60Co—γ射线诱发小鼠卵母细胞染色体畸变与剂量效应的相关性研究

本文采用超数排卵技术，观察不同剂量（０￣３Ｇｙ）６０Ｃｏ－ｒ射线全身一次性照射雄性ＩＣＲ小鼠后，ＭＩ卵母细胞染色体的损伤效应。结果表明，各受照射组的畸变细胞率（％）和总染色体畸变率（％）均明显高于对照组，其最适剂量效应方程式分别为Ｙ＝２１．１０５７Ｄ＾０．７９５８和Ｙ＝１．６５０２＋１５．９９８６Ｄ＋３．８５３３Ｄ＾２，而非整倍体率仅在２Ｇｙ以上各组有统计学上的差异。进一步估算在２，２．５和３Ｇ组     

康莱特注射液诱发肾癌细胞凋亡及p53,bcl—2表达的研究

目的;探讨康莱特注射液抗肿瘤的作用机制。方法：利用ＭＴＴ法分析康莱特肾癌细胞的抑制作用,末端脱氧核苷酰转移酶法检测细胞凋亡,免疫组织化学法分析ｐ５３和ｂｃｌ－２基因表达的影响。结果：康莱特抑制肾癌细胞的ＩＣ５０为１９．３１μｌ／ｍｌ,５μｌ／ｍｌ,和１０μｌ／ｍｌ康莱特注射液具有诱发细胞凋亡的作用,细胞凋亡分别为３１．３０％和８９．７６％,康莱特浓度继续增加时,细胞凋亡的数量反而减少,１５μdispla     

骨肉瘤细胞凋亡与p53和bcl-2表达的关系

目的：探讨骨肉瘤细胞凋亡的和５３、ｂｃｌ－２表达及细胞增殖的相关性,及其对患者预后的影响。方法：在８０例骨肉瘤标本中,用ＤＮＡ末端标记方法检测细胞凋亡,免疫组化检测Ｐ５３、ｂｃｌ－２和增殖细胞核怕的表达。结果：８０例骨肉瘤中凋亡指数范围为０．６３￣１８．８％,Ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白检出率分别为３７．５％和６０％,ＰＣＮＡ指数范围为１２￣９６％。统计学分析表明,细胞凋亡与Ｐ５３、ＰＣＮＡ表达呈正相关     

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对人胃癌细胞周期的影响

背景与目的:蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)已成为一个潜在的有价值的抗肿瘤治疗靶点。本研究旨在探讨PKC抑制剂Staurosporine(ST)对人胃癌细胞株MGC-803和SGC-7901的增殖抑制、凋亡诱导及对其细胞周期的影响。方法:在用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率的基础上,通过细胞形态学观察凋亡小体,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化。结果:ST抑制MGC-803细胞生长,24h的IC50为54ng/ml,48h的IC50为23ng/ml;ST抑制SGC-7901细胞的生长,24h的IC50为61ng/ml,48h的IC50为37ng/ml。40、60、100ng/mlST分别作用MGC-803细胞24h后,发现G0/G1期细胞分别为(23.6±1.8)%、(11.6±0.7)%、(3.3±0.2)%,而对照组为(54.3±3.1)%;G2/M期细胞分别为(22.6±4.0)%、(35.5±0.4)%、(36.8±5.5)%,而对照组为(13.5±0.2)%。40、60、100ng/mlST分别作用于SGC-7901细胞24h后,G0/G1期细胞分别为(27.1±1.4)%、(17.0±3.4)%,(13.7±0.7)%,而对照组为(52.5±4.4)%;G2/M期细胞分别为(21.9±2.6)%、(39.5±4.9)%、(38.4±3.1)%,而对照组为(13.5±2.2)%。实验组细胞与对照组比较,ST使两种细胞G0/G1期明显减少及G2/M期明显增加(P<0.01)。200ng/mlST作用24h后两种细胞的G1期前均出现明显的凋亡峰,可诱导细胞出现典型凋亡小体。结论:ST显著降     

凋亡相关蛋白的表达及Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

背景与目的:以顺铂为基础的化疗是卵巢癌治疗的重要组成部分,对顺铂的耐药是卵巢癌治疗失败的原因之一。本研究探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株中凋亡相关蛋白表达及caspase-3活性与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:采用Westernblot法分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中凋亡相关蛋白bcl-2、bcl-xL、bax、bcl-xS的表达,caspase-3活性和其底物多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的变化,并应用流式细胞仪检查不同浓度顺铂作用COC1和COC1/DDP细胞后的细胞凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,bcl-2和bcl-xL的表达明显高于COC1细胞,bax的表达无明显改变,bcl-xS在COC1和COC1/DDP细胞中均无表达。用顺铂处理后,COC1/DDP细胞中caspase-3活性、PARP裂解片段和凋亡率较COC1细胞均明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论:人卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与肿瘤细胞内凋亡抑制蛋白过度表达、caspase-3活性下降有关,而与凋亡诱导蛋白的表达无关。     

梁金菇多糖对K562细胞凋亡及相关分子表达的影响

目的 研究梁金菇多糖（ABPS）对人白血病细胞K562凋亡的影响及其机制。方法 应用荧光显微镜观察凋亡细胞形态。应用流式细胞仪检测ABPS对K562细胞周期的改变及凋亡的影响。应用Western blot检测bcl-6及增殖细胞核抗原（PC-NA）的表达情况。结果 荧光显微镜下观察到K562细胞核碎裂，核溶解和凋亡小体形成等典型的凋亡形态学变化。DNA凝胶电泳观察到“阶梯状”条带，用药5天后，G1期细胞数明显增多，占54.5%,42.0%的细胞发生凋亡。bcl-6表达水平升高，PCNA表达水平下降。结论 ABPS能诱导K562细胞发生凋亡，其机制可能与PCNA表达水平下降，bcl-6表达水平升高有关。     

bcl-2反义寡核苷酸对肾癌细胞Bcl-2蛋白表达抑制及诱导凋亡作用

目的:经Beagle犬肝脏血管注射重组腺病毒介导反义c-myc基因(Ad-ASmyc)载体,观测其体内分布及毒副作用,以评价Ad-ASmyc治疗肝癌的临床前期安全性.方法:选择4只体重8～10kg健康Beagle犬,全麻后开腹,经肝动脉或门静脉注射Ad-ASmyc,注射Ad-ASmyc前及注射后第3,7,14,21天取肝组织及抽取静脉血化验,PCR检测Ad-ASmyc在各器官组织中的分布,常规切片观察各器官病理变化,ELISA方法检测血中抗腺病毒抗体的产生.结果:经Beagle犬肝脏血管注射后,Ad-ASmyc可持续转导正常肝细胞达3周,实验犬一般情况好,血、肝、肾功能无明显异常,在肝脏、脾脏、肾脏、胃、心脏、皮肤中可检测到重组腺病毒的分布,镜下可见Ad-ASmyc剂量依赖性的肝组织轻微的炎症反应,注射后7d血中有抗腺病毒载体的抗体产生,14d达高峰,21d开始下降.结论:经Beagle犬肝动脉或门静脉途径注射Ad-ASmyc均可转导至肝细胞,Ad-ASmyc对实验犬的毒副作用较轻.     

食管癌细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达及其意义

目的 探讨食管癌细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达及其临床意义。方法 采用原位ＤＮＡ末端标记法和免疫组化法分别检测７０例食管鳞癌的细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达情况,计算出凋亡指数和增殖指数。结果 凋亡指数及其与增殖指数的比值与肿瘤的病理分级和淋巴垄转移密切相关（Ｐ〈０．０５）。结论 食管癌的发生发展与细胞凋亡的增殖失控有关。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的：探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响。方法：采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果：NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol／L的NDGA处理后G0／G1期细胞减少（P〈0．05）、S期细胞增多（P〈0．05）,G2／M期细胞无明显变化;细胞经100μmol／L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调（P〈0．01）、bax蛋白与对照组相比表达上调（P〈0．01）。结论：NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关。     

快中子与光子混合照射生物效应的实验研究

目的探讨快中子与光子混合照射的生物效应及作用机制。方法利用35MeVp→Be快中子(N)和6MVX射线(X),分别以0,40,80,120,160,240,320,400cGy和0,100,200,300,400,600,800,1000cGy的不同剂量照射鼻咽癌细胞株CNE1,经克隆形成分析绘制细胞存活曲线,计算快中子的相对生物学效应(RBE),再根据等效剂量设置两个照射方案(1)1周分次照射分别采用X×5次、N×2次和XNXXN的照射方式,照射后进行克隆形成分析,比较存活分数;(2)两次照射分别采用X+N、N+X和X+X的照射方式,比较照射后不同时间点的细胞周期时相分布和细胞凋亡率。结果快中子的RBE为2.4,6MVX射线单次照射200cGy的快中子等效剂量近似为80cGy。克隆形成分析表明,XNXXN照射的细胞存活分数(0.0079)明显低于X×5次(0.018)和N×2次(0.017)照射(P<0.01)。流式细胞分析发现,混合照射诱发的凋亡率较高,两种射线不同顺序照射后细胞周期阻滞的变化不同,X+N组出现了更明显的G2期阻滞。结论快中子和光子混合体外照射对CNE1细胞有协同杀伤效应,细胞周期阻滞和凋亡可能在混合射线的损伤修复机制中起部分作用。     

FasL、bcl—2及PCNA在高、低转移能力小鼠肝癌细胞中的表达

目的：探讨调相关基因FasL、bcl-2和增殖相关基因PCNA，在高淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞HCa-F(F)和低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞（HCa-P(P)中的表达，与它们不同淋巴道转移能力之间的关系。方法采用免疫组织染色方法检测FasL、PCNA、bcl-2在F和P细胞中的表达情况，结果FasL在F细胞原发瘤中的表达显著高于其在P原发瘤中的表达（P＜0．01），bcl-2、PCNA F和P细胞原发瘤中的表达无显著性判别，结论高表达FasL可能赋予F细胞伤机体免疫细胞的能力，并与F细胞较强的转移能力相关。