膀胱癌组织中端粒酶活性检测的意义

目的探讨膀胱癌组织端粒酶活性与膀胱癌病理参数的关系及其临床意义。方法应用改良的TRAP法对40例膀胱癌组织、20例膀胱癌癌旁2cm膀胱组织和10例正常膀胱组织进行端粒酶活性的检测,用Yecan酶免分析仪连续测定其450～630nm的OD值。结果40例膀胱癌组织端粒酶活性强度OD值为0.567±0.251。正常膀胱组织无端粒酶活性存在。癌组织端粒酶活性强度OD值高于癌旁组织OD值(P<0.01)。端粒酶活性强度OD值Ⅲ级>Ⅱ级>Ⅰ级(P<0.05),OD 值在膀胱癌中随分级的增加呈上升趋势。浸润性膀胱癌端粒酶活性OD值明显高于浅表性膀胱癌端粒酶活性OD值(P<0.01)。淋巴结转移的膀胱癌端粒酶活性OD值明显高于无淋巴结转移的膀胱癌端粒酶活性OD值(P<0.05)。复发膀胱癌端粒酶活性OD值明显高于原发膀胱癌端粒酶活性OD 值(P<0.05)。结论膀胱癌组织中端粒酶阳性率及端粒酶活性强度OD值显著高于正常膀胱组织。端粒酶阳性率与膀胱癌病理分级、临床分期、淋巴结是否转移以及是否复发无关。但端粒醇活性强度OD值与膀胱癌的分级、分期、淋巴结转移以及复发有关。膀胱癌各病理参数中端粒酶阳性率经统计学比较差异无显著性,用端粒酶活性强度OD值作为比较可能更能显示其真正的临床意义。     

SYBR Green实时定量端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性

【摘要】目的 采用实时定量端粒重复序列扩增法( RQ- TRAP法)检测不同细胞端粒酶活性。方法 用RQ- TRAP和TRAP-ELISA两种方法同时检测12种细胞的端粒酶活性性,并比较两种方法的检测结果。结果 RQ-TRAP方法能准确特异地检测系列稀释的293T细胞蛋白提取液的端粒酶活性,灵敏度可达8个细胞,扩增效率为99%。阴性对照组则未检测到端粒酶活性。RQ-TRAP方法测得12个细胞系中端粒酶的活性与TRAP-ELISA方法结果有相关性(R2=0.7625)。结论 RQ-TRAP方法检测端粒酶可行,与TRAP-ELISA方法相比,RQ-TRAP方法具有成本低,减少时长和支持高通量等优点,是一种新的可快速可靠定量端粒酶活性的方法。      

胃液中端粒酶活性检测临床意义探讨

日益增多的资料提示,端粒酶激活是恶性肿瘤一个显的生物学特征,是肿瘤细胞区别于正常细胞的根本所在。胃癌组织端粒酶活性的研究国内外已有报道,我们采用TRAP-PCR-ELISA技术检测胃液中脱落细胞的端粒酶活性,探索其在胃癌诊断方面的应用前景。     

胃癌患者外周血中端粒酶活性表达及其临床意义

目的 检测胃癌患外周血中癌细胞端粒酶活性，以探讨端粒酶活性的表达及其临床意义。方法 通过用PCR-TRAP-ELISA法检测52例胃癌患外周血端粒酶的活性，按照肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结有无转移来分析端粒酶与胃癌的关系。结果 外周血中检测端粒酶活性阳性率为53．8％，低于相应的胃癌组织阳性率(81．3％)，胃癌患外周血中肿瘤细胞端粒酶相对活性的升高与患的淋巴结转移和肿瘤的分化程度呈正相关。结论 对患判断肿瘤是否转移复发，检测患外周血中端粒酶活性要优于检测肿瘤组织的端粒酶活性。     

口腔鳞状细胞癌中端粒酶的活性检测

目的 测定口腔鳞状细胞癌组织中端粒酶的活性，了解端粒酶与口腔鳞状细胞癌之间的关系。方法 采用端粒酶PCR，ELISA法对55例口腔鳞癌与20例正常口腔粘膜，18例口腔鳞癌及其癌旁组织中的端粒酶活性进行测定。结果 口腔鳞状细胞癌中端粒酶的活性明显高于正常粘膜组，而自身对照组癌组织的端粒酶活性也明显高于癌旁组织。结论 端粒酶的活性检测可以作为一种有效的口腔恶性肿瘤标记物用于口腔恶性肿瘤的辅助诊断。     

膀胱癌尿脱落细胞端粒酶活性的研究

目的探讨膀胱癌患者手术前后尿脱落细胞端粒酶活性的临床意义。方法应用端粒重复序列扩增—微孔板杂交法对 2 4例膀胱癌患者术前尿、2 0例术后尿和 10例正常人尿进行定量端粒酶活性的检测。结果 2 4例膀胱癌患者术前自排尿端粒酶阳性率 83 3% (2 0 / 2 4 ) ,端粒酶活性OD值 0 4 4 8± 0 2 32 ;术后 2 0例膀胱癌患者自排尿端粒酶阳性率 10 0 % (2 / 2 0 ) ,端粒酶活性OD值0 2 16± 0 16 3;10例正常健康人的尿沉渣标本端粒酶活性检测均阴性 ,端粒酶阳性率为 0 0 % (0 /10 ) ,端粒酶活性OD值 0 0 84± 0 0 5 8;膀胱癌患者术前自排尿脱落细胞端粒酶阳性率和端粒酶活性OD值明显高于术后患者尿及正常人尿的端粒酶阳性率和OD值 (P <0 0 0 1)。结论检测尿标本中的端粒酶活性可以作为一种无创伤性的膀胱癌早期诊断和术后随访的指标之一     

胃癌组织中端粒酶活性的检测及其意义

目的 :研究胃癌组织中端粒酶活性表达 ,探讨端粒酶活性表达与胃癌发生的关系。方法 :收集经手术及病理证实的胃癌标本 6 0例 ,将慢性浅表性胃炎及慢性萎缩性胃炎伴中重度非典型增生各 2 0例作为对照 ,用原位杂交方法检测端粒酶。结果 :6 0例胃癌中端粒酶的阳性率为 88.3% ( 5 3/ 6 0 ) ,2 0例慢性萎缩性胃炎伴中重度非典型增生 2 0例的阳性率为 35 % ( 7/ 2 0 ) ,2 0例浅表性胃炎阳性率为 5 % ( 1/ 2 0 )。胃癌组与慢性浅表性胃炎及中重度非典型增生相比差异有显著性 ( P<0 .0 1) ,非典型增生与浅表性胃炎相比差异有显著性 ( P<0 .0 1) ,不同组织学分型胃癌其端粒酶阳性率差异均无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论 :端粒酶在胃癌的发生中起重要作用 ,但与组织学类型无相关性 ,同时端粒酶在某些癌前病变中也有一定程度的表达。端粒酶的检测对胃癌的诊断及治疗有重要意义。     

食管癌组织中端粒酶活性及PCNA的表达和意义

目的：探讨食管癌组织中端粒酶活性和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达关系及临床意义。方法：采用一杂交技术和免疫组织化学技术检测端粒酶活性，PCNA在30例食管癌中的表达情况。结果：（1）食管癌组织中端粒酶mRNA的阳性表达率为93．3％（28／30），明显高于癌旁组织（距肿瘤3cm处），正常黏膜组织（距肿瘤8cm处），经统计学处理有显著性差异（P＜0．001）；端粒酶活性的表达强度与肿瘤的分化程度，浸润深度，临床分期及淋巴结转移显著相关（P＜0．05），与性别、年龄无相关性。（2）PCNA阳性表达率为93．3％（28／30），其表达强度与肿瘤的分化程度、浸润深度显著相关（P＜0．05），与淋巴结转移无明显相关性。（3）端粒酶活性表达与PCNA密切相关（P＜0．05）。结论：端粒酶的激活在食管癌的发生发展中有一定作用，检测端粒酶活性和PCNA的表达强度对食管癌的诊断，治疗及预后判断有重要意义。二者联合检测更有价值。     

端粒酶在肿瘤疾病中的表达及研究进展

端粒酶是近年来发现的与肿瘤发生发展密切相关的一种逆转录酶 ,已成为肿瘤研究的热点。目前的研究表明[1 ] ,已知 85 %的人肿瘤组织发现了端粒酶活性的表达 ,而与肿瘤相邻的正常组织或良性病变仅为 4%左右 ,这种显著的相关性提示端粒酶在肿瘤细胞恶性状态的形成和发展中起着关键作用。现将端粒、端粒酶与肿瘤发生的机制、端粒酶的检验方法 ,近年来端粒酶在肿瘤疾病中的表达及研究进展以及治疗前景加以综述如下。1　端粒、端粒酶与肿瘤发生的机制端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构 ,像二顶帽子盖在染色体两端 ,在染色体复制及保护染色体稳…     

齐墩果酸对人白血病HL-60细胞端粒酶活性的影响

目前研究表明,正常人体细胞中无端粒酶活性,而大部分肿瘤细胞和胚系细胞（如睾丸、卵巢）中端粒酶活性呈阳性[1]。齐墩果酸具有消炎、增强免疫、抑制血小板降集、降糖、抗氧化和利尿作用等多方面的临床药理作用,还具有护肝、抗高血脂、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤等生物活性[2]。本实验旨在探讨齐墩果酸对人白血病HL-60细胞端粒酶活性的影响,为开发新的抗肿瘤药物提供实验依据。1材料与方法1.1材料人白血病HL-60细胞购自中国科学院上海细胞库。齐墩果酸（O leano lic A c id）购自中国药品生物制品检验检定所,溶于DM SO中,配制成浓度为80mM的原液,再用含10%胎牛血清的1640培养基稀释100倍,配制成终浓度为800μM的使用液。凯基TRAP-PCR银染法端粒酶活性检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。     

人脑肿瘤端粒酶活性表达及其临床意义

目的研究人类脑肿瘤中端粒酶的表达情况,探讨端粒酶活性与恶性脑肿瘤发生和发展的关系。方法采用TRAP—银染法检测37例脑肿瘤组织和4例正常脑组织中的端粒酶活性。结果37例脑肿瘤组织标本中,16例有端粒酶活性的表达,阳性率为43.2%;4例正常脑组织中均未检测到端粒酶活性。结论端粒酶活性的表达与脑肿瘤的恶性程度密切相关,有可能成为恶性脑肿瘤的一个重要标志物。     

脐血浆体外对肿瘤细胞的生长及端粒酶活性的影响

目的：探讨脐血浆对K562、SMC细胞的生长及端粒酶活性的影响。方法：采用MTT法检测脐血浆对K562、SMC细胞生长的影响；采用PCR－ELISA检测脐血浆及AFP对K562、SMC细胞端粒酶活性的影响。结果：脐血浆对K562、SMC细胞有促生长作用，脐血浆及AFP能增中K562、SM细胞的端粒酶活性。结论：脐血浆能促进K562、SMC细胞的生长及增强这两种细胞的端粒酶活性。脐血浆对K562、SMC细胞的促生长作用可能与AFP对端粒酶活性显著增强作用有关。     

喉鳞癌中端粒酶活性的检测及临床意义

目的研究端粒酶活性在喉鳞癌中的表达及临床意义。方法应用TRAP-ELISA法测定喉鳞癌组织及喉正常组织的端粒酶活性。结果喉鳞癌组织的端粒酶活性明显高于喉部正常组织。喉鳞癌组织的端粒酶活性与喉鳞癌的病理分级、临床分期以及颈淋巴结转移具有相关性,与喉鳞癌的临床分型、患者的年龄、性别无关。结论端粒酶活性可作为检测喉鳞癌的发生发展、评价肿瘤恶性度、判断喉鳞癌病人淋巴结转移潜能及预后的指标。     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的　研究紫杉醇对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法　 0 .0 0 1～ 1μmol/L的紫杉醇处理SGC 790 1细胞后 ,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率 ,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率 ,半定量TRAP -银染法测定端粒酶活性变化。结果　不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用 ,且呈时间依赖性及剂量依赖性 ,光镜及流式细胞术分析表明 ,0 .0 1μmol/L的紫杉醇处理后 2 4h ,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰 ,对端粒酶活性的同步检测结果显示 ,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调 ,且随紫杉醇浓度增大 ,抑制作用逐渐增强 ,2 4h酶活性即显著受抑制 ,72h变为阴性。结论　紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用 ,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一 ,端粒酶可作为肿瘤化疗的敏感性指标。     

hTERT反义寡核苷酸对肝癌SMMC-7721细胞株细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的研究hTERT基因反义寡核苷酸（ASPSODN）对SMMC-7721细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法不同浓度的ASPSODN转染到SMMC-7721细胞株24h和48h后分别采用MTT法、TRAP-ELISA法检测SMMC-7721细胞的增殖活性及端粒酶活性。结果各浓度组的ASPSODN均能降低端粒酶活性,作用24h时,不同浓度均明显受抑,其中0.8μmol/L ASPSODN较0.2μmol/L和0.4μmol/L组抑制作用更明显（P〈0.05）,但再增大浓度抑制作用并不随着增加。作用48h后,抑制作用减弱,低浓度组（0.2、0.4μmol/L）端粒酶活性恢复到正常水平,而高浓度组（0.8、1.0、1.2μmol/L）抑制作用依然明显,端粒酶活性低于60%。MTT法检测显示,不同浓度ASPSODN组对SMMC-7721细胞的生长均有抑制作用,随着浓度的增加,抑制作用明显,但随着时间的延长,抑制作用增加不明显。结论 ASPSODN靶向hTERT能特异性抑制SMMC-7721细胞增殖,明显下调端粒酶活性,hTERT可能成为肝癌治疗的一个靶点。     

细胞周期对人脑胶质瘤端粒酶活性的影响

目的：研究人脑胶质瘤中端酶活性在不同细胞周期中的表达情况，以探讨恶性肿瘤细胞周期变化对端粒酶活性的影响。方法：采用端粒重复序列扩增方案（TRAP）－银染法检测了82例脑胶组织标本，并应用流式细胞术（FCM）测定它们的S期细胞比例（SPF），结果：82例脑胶质瘤标本中，有端粒酶活性表达共33例，阳性率为40．2％，星形细胞瘤和间变性星形细胞瘤中，端粒酶活性的表达与SPF无明显相关性，多形性胶质母细胞瘤端粒酶活性检测阳性标本的SPF值明显高于阴性标本，统计学分析再者结果差异有显著性。结论：在细胞周期中端粒酶活性的改变受到多种生物学因素的调节，其中恶性肿瘤本身的增殖活性可能起着关键性的作用。     

灵菌红素对人胰腺癌肿瘤细胞增殖抑制的实验研究

目的　证实灵菌红素对人胰腺癌细胞增殖有抑制作用。方法　活细胞能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物(Formazan)并沉积在细胞中,二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的蓝紫色结晶物,用酶联免疫检测仪在 4 90nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。结果　灵菌红素IC50 值为 2 8μg·ml-1,5～ 4 0 μg·ml-1抑制效果明显。结论　提示灵菌红素对人胰腺癌细胞具有增殖抑制的作用。     

全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN）对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN）组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN）组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态：PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验：PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖（P〈0.0l）,并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期：与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显著（P〈0.01）;在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。     

精脒对CAOV3卵巢癌细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨精脒对CAOV3卵巢癌细胞的生长和端粒酶活性的影响。方法：应用MTT法观察精脒对CAOV3卵巢癌细胞生长的影响,应用TRAP-银染色法检测精脒对CAOV3卵巢癌细胞端粒酶活性的影响。结果：在细胞培养过程中,外源性增加精脒浓度可使细胞生长速度加快。用不同浓度精脒室温处理的CAOV3细胞端粒酶提取液2小时后,端粒酶活性与对照组差异无显著性。CAOV3细胞经不同浓度精脒处理3天后的端粒酶活性与对照组相比明显增高。结论：精脒浓度的升高可引起端粒酶活性的增高,精脒引起的细胞增殖与端粒酶活性增高有关。