5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

目的：探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法：收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组、瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组、正常皮肤成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组及正常皮肤成纤维细胞对照组4组,用RT-PCR检测各组转化生长因子－β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）mRNA、Smad7mRNA的表达,流式细胞术（flow cytometry,ＦＣＭ）检测各组细胞的周期及凋亡。结果：人瘢痕疙瘩成纤维细胞较正常皮肤成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高（P=0.001）,Smad7mRNA表达降低（P=0.001）,细胞周期停滞于G0/G1期（P=0.035）及细胞凋亡（P=0.006）比例降低;5-氮杂-2-脱氧胞苷干预人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,TGF-β1mRNA表达降低（P=0.003）,Smad7mRNA回升（P=0.000）,ＦＣＭ显示瘢痕疙瘩成纤维细胞停滞于G0/G1期比例增加（P=0.000）并且细胞凋亡率增加（P=0.047）,而正常皮肤成纤维细胞组无明显变化（P均>0.05）。结论：甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可影响瘢痕疙瘩形成相关因子的表达并且可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及促进其凋亡,而对正常皮肤的成纤维细胞无明显影响。瘢痕疙瘩的发病可能与相关基因甲基化有关,5-氮杂-2-脱氧胞苷可能成为瘢痕疙瘩治疗的新选择。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞中有关传导分子mRNA水平的实验研究

目的比较转化生长因子βSmad蛋白（TGF-β／Smads）信号传导通路中有关传导分子mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达。方法切取确诊为瘢痕疙瘩患者的部分瘢痕疙瘩组织,正常者的皮肤作为对照组;细胞总RNA提取;反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TIEG、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞TIEG、Smad2 mRNA表达远高于正常皮肤,Smad7 mRNA表达低于正常皮肤（P〈0．05）。结论瘢痕疙瘩中的成纤维细胞表达TIEG增高,使表达Smad2增强,Smad7减弱,促使瘢痕生成。     

γ-干扰素对成纤维细胞结缔组织生长因子mRNA水平的影响

目的:研究干扰素-γ(IFN-γ)对体外培养的成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响,探讨IFN-γ治疗病理性瘢痕的可能机制.方法:体外培养正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的成纤维细胞.采用转化生长因子β1(TGF-β1),IFN-γ及二者联合作用于成纤维细胞,用实时定量PCR方法检测成纤维细胞CTGF的mRNA水平.结果:对正常成纤维细胞、增生性瘢痕成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞,TGF-β1均可以上调其CTGF的mRNA水平(P<0.01),分别提高43倍、22倍和56倍;IFN-γ单独作用可以降低CTGF的mRNA水平,但实验组与对照组的差别无统计学意义;而与TGF-β1联合应用时,IFN-γ可显著拮抗TGF-β1对CTGF的上调作用(P<0.01),分别下调了66%,71.4%和52.4%.结论:IFN-γ可以拮抗TGF-β1对CTGF mRNA的上调作用,这可能是IFN-γ治疗病理性瘢痕的重要机制.     

鞘氨醇激酶在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用

目的 探讨鞘氨醇激酶(SphK)1和SphK2在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用.方法 取12例瘢痕疙瘩患者手术切除的瘢痕疙瘩及其周围正常皮肤标本,原代组织块法培养成纤维细胞,分为正常皮肤组、瘢痕疙瘩组和瘢痕疙瘩加转化生长因子β1(TGF-β1)组(瘢痕疙瘩+TGF-β1组).用免疫荧光法观察各组细胞中SphK1和SphK2蛋白的分布;实时PCR法检测SphK1和SphK2 Mrna的表达;蛋白质印迹法检测SphK1和SphK2蛋白的表达.结果 Sphk1蛋白在3组成纤维细胞中均主要分布于细胞核;而Sphk2蛋白在细胞核和胞质中均有表达.瘢痕疙瘩组SphK1mRNA和蛋白表达(分别为0.0608±0.0190、0.8308±0.1093)明显高于正常皮肤组(分别为0.0383±0.0147、0.6800±0.1126,均P＜0.05),但明显低于瘢痕疙瘩+TGF-β1组[分别为0.0790±0.0280(P＜0.05)、1.4267±0.1938(P＜0.01)];SphK2 Mrna和蛋白在3组中的表达差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖过程中具有重要作用.TGF-β1可促进SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达,提示SphK1可能参与了TGF-β信号转导通路的调节.     

SIRT6通过TGF-β1/Smad信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、侵袭和胶原合成

目的 探讨沉默信息调节因子6(silent information regulator 6, SIRT6)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、侵袭和胶原合成的调控作用和分子机制。方法 收集瘢痕疙瘩和正常皮肤样本，采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测SIRT6 mRNA表达水平，采用Western blot检测SIRT6蛋白表达水平。采取组织块贴壁法从瘢痕疙瘩组织中分离养成纤维细胞。构建SIRT6重组腺病毒(adenovirus, Ad),感染瘢痕疙瘩成纤维细胞实现SIRT6过表达。将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为空白对照组、Ad-NC组和Ad-SIRT6组。采用RT-qPCR检测SIRT6 mRNA表达水平。采用Western blot检测SIRT6、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和SMAD家族成员2/3(SMAD family member 2/3,Smad2/3)蛋白的表达水平。采用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl...     

β1转化生长因子对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌相关的基质金属蛋白酶的影响

目的探讨β1转化生长因子（TGF-β1）对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的调节作用,及TGF-β1与瘢痕的关系。方法培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞经TGF-β1处理,采用酶联免疫法（ELISA）测定瘢痕疙瘩成纤维细胞上清液中MMP-1、MMP-2和TIMP-1的水平。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1、MMP-2和TIMP-1的生成量显著高于正常皮肤（P〈0.01）;加TGF-β1处理后,瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1的分泌量显著降低（P〈0.01）,MMP-2的分泌量显著升高（P〈0.01）,而TIMP-1的分泌量无显著改变（P〉0.05）。结论培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞显示MMP-1、MMP-2和TIMP-1增加,TGF-β1在生成调节过程中起重要作用。     

TGF-β3对病理性瘢痕中成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨TGF-β3,对病理性瘢痕成纤维细胞增殖-凋亡的作用.方法 收集病理性瘢痕标本58例、正常瘢痕标本42例和正常皮肤30例.采用免疫组织化学法检测TGF-β3、PCNA,以及TINEL检测标本中成纤维细胞凋亡水平.结果 TGF-β3在病理性瘢痕组织中的表达低于正常瘢痕组织(P＜0.05),而正常皮肤组织中TGF-β3呈阴性表达.而PCNA在病理性瘢痕成纤维细胞中表达水平与正常瘢痕及正常皮肤相比明显增高(P＜0.05),正常瘢痕中成纤维细胞PCNA表达情况亦高于正常皮肤(P＜0.05);另一方面,病理性瘢痕中成纤维细胞凋亡水平较正常瘢痕降低(P＜0.05).而正常皮肤与正常瘢痕间无显著性差异(P＞0.05);病理性瘢痕组织中成纤维细胞增殖指数增殖指数与TGF-β3呈负相关关系(P＜0.05).结论 TGF-β3可能是通过调节瘢痕组织中成纤维细胞的增殖和/或凋亡水平,来实现对瘢痕形成的调节.TGF-β3,表达水平的失控可能是病理性瘢痕形成的重要诱因之一.     

IRF3调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞外基质表达的研究

目的通过观察干扰素调节因子3（IRF3）对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞外基质表达的作用,探讨IRF3在皮肤纤维化中的调控机制。方法取行瘢痕疙瘩切除手术的10例患者的术中切除的瘢痕疙瘩组织为研究材料,另择8例外科手术患者的正常皮肤组织为对照,培养两者的成纤维细胞。采用real-timeRT-PCR、Westernblot检测成纤维细胞IRF3mRNA、蛋白表达水平,转染siRNAs-IRF3后IRF3蛋白水平;检测TGF-茁1诱导后瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖情况,细胞外基质Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）、a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）I型胶原与TGF-茁受体Ⅰ、Ⅱ,及TGF-茁1信号通路调节蛋白p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3表达水平。结果IRF3在瘢痕疙瘩组织中表达显著上调。下调IRF3的表达,显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并抑制collagenⅠ、a-SMA的表达,同时抑制TGF-茁1诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞的TGF-茁受体Ⅰ、Ⅱ的表达。下调IRF3的表达亦抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3表达水平。结论IRF3表达下调通过抑制TGF-茁1/Smad信号通路,抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞外基质的表达。IRF3或为治疗瘢痕疙瘩新的靶点。     

血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达的影响

目的：观察血管紧张素-（1—7）对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖以及Smad3、Smad7mRNA表达的影响。方法：分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,以Ang-（1—7）、TGF-β1、Ang-（1—7）＋TGF-β1组、TGF-βI型受体抑制剂等干预,通过WST-1法检测细胞增殖,RT—PCR测定心脏成纤维细胞Smad3、Smad7mRNA的表达。结果：①与空白对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的OD值增加（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,0．001～1．0μmol／L血管紧张素－（1-7）和5μg／TGF-β1共同干预后OD值逐渐降低（P〈0．05）。②与对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的Smad3mRNA表达升高（P〈0．05）,Smad7mRNA表达降低（P〈0．05）。结论：血管紧张素-（1—7）能有效抑制TGF-β1引起的心脏成纤维细胞的增殖,其作用不通过TGF-βI型受体介导。     

5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞MMPS及TIMPS表达的影响

目的 研究5-氟尿嘧啶对体外培养的人类瘢痕疙瘩成纤维细胞MMP-1,MMP-2/TIMP-1,TIMP-2mRNA表达的影响,探讨5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩的作用机制.方法 组织块法培养人瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞,用不同浓度的5-氟尿嘧啶作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,检测MTT值;利用半定量RT-PCR分析用药前后MMP-1,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2 mRNA表达变化.结果 5-氟尿嘧啶在体外能明显降低人瘢痕疙瘩成纤维细胞TIMP-1mRNA的表达;对MMP-1,MMP-2,TIMP-2mRNA的表达无显著影响.结论 5-氟尿嘧啶可能通过降低TIMP-1的表达,从而使MMP-1/TIMP-1相对比例增加,达到促进胶原降解,减少瘢痕形成的作用.