大鼠脊髓星形胶质细胞体外划痕损伤模型的建立

星形胶质细胞(astrocytes，Ast)培养和损伤模型是体外研究中枢神经系统损伤修复的基础和热点之一。长期以来，人们对大脑皮层及其他部位的Ast在中枢神经系统损伤修复中的功能做了较多的研究，而对脊髓的Ast有关研究较少。笔者采用机械划痕的方法，制备有效的脊髓Ast体外损伤模型，以便对脊髓Ast在损伤后的基因表达变化作进一步全面分析。     

大鼠脊髓星形胶质细胞损伤后的cDNA文库构建及其基因表达变化

目的比较星形胶质细胞损伤前后的基因表达变化。方法提取新生大鼠脊髓星形胶质细胞体外损伤后2d（损伤组）及未损伤细胞（对照组）的总RNA，采用5’端RNA转录开关机制技术和抑制性消减杂交方法，构建大鼠脊髓星形胶质细胞损伤前后差异表达基因的消减cDNA文库，并将差异性表达片段进行序列分析及基因库中的同源性检索，获得大鼠脊髓星形胶质细胞损伤2d后细胞基因的整体变化趋势。结果脊髓星形胶质细胞损伤后2d，热休克蛋白70、钙调素Ⅱ等基因表达上调；同时β-肌动蛋白等基因表达下调。结论在大鼠脊髓星形胶质细胞机械性划痕损伤后的星形胶质细胞反应中，既有热休克蛋白等基因表达上调，也有β-肌动蛋白等基因表达下调。     

前列腺炎性疼痛与脊髓胶质细胞活化关系的初步研究

目的探讨前列腺炎性疼痛与脊髓胶质细胞活化的关系。方法用完全弗氏佐剂（CFA）刺激SD大鼠前列腺,用免疫组织化学技术对不同时间段大鼠相应脊髓节段（L6和S1）星形胶质细胞和小胶质细胞活化情况进行检测。结果CFA刺激大鼠前列腺后3、10、28天,L6、S1脊髓背角浅层和深层星形胶质细胞和小胶质细胞的活化与对照组相比均显著增加。结论胶质细胞活化在前列腺炎性疼痛的神经病理过程可能具有重要作用。     

星形胶质细胞与脑水肿

在中枢神经系统中，星形胶质细胞（AS）的数量远远超过神经元，它在生理和病理下均发挥极其重要的作用。星形胶质细胞通过多种途径影响脑水肿的发生、发展以及消退。     

培养大鼠皮层星形胶质细胞牵引损伤模型

目的 建立培养大鼠皮层星形胶质细胞牵张损伤模型。方法 取１－２天新生大鼠皮层细胞原代培养，经纯化后星形细胞传代培养于乳胶膜培养皿中，采用计算机控制的牵张损伤装置致伤，通过电镜形态学检察和乳酸脱氢酶，台盼蓝染色定量检测确定损伤程度。结果 不同的驱动压力可使乳胶膜牵张变形，导致培养细胞不同程度损伤。     

活化小胶质细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的疗效初探

目的 研究活性小胶质细胞移植对脊髓损伤后大鼠运动功能恢复的作用.方法 选用成年雌性Wistar大鼠40只,随机分为4组,前两组为运动功能观察组,采用自制改良Allen脊髓打击装置打击脊髓,建立中度脊髓损伤的动物模型,分成移植组和对照组,每组10只.后两组为组织学观察组,用相同方法制作动物模型,也分为移植组与对照组,每组10只.在动物模型制作早期进行新生大鼠小胶质细胞的培养、分离以及纯化,并对小胶质细胞进行鉴定和细胞纯度的测定.移植组术后7 d再次暴露损伤部位,微量注射器以损伤部位为中心注射移植活化小胶质细胞悬液.而对照组不移植.运动功能观察组分别在移植后第1天、第1,2,3,4周对大鼠进行运动功能评分;组织学观察组在相同时相点进行Naoumenko及Feigin小胶质细胞石蜡切片染色,每个时间点移植组和对照组每组随机抽取两只大鼠取材切片,镜下观察并计数小胶质细胞.对所得数据进行统计学分析.结果 术后1,2,3,4周,对照组与移植组随时间延长BBB评分均逐渐升高,移植组术后2,3,4周后肢运动功能评分较对照组明显升高(P＜0.05);Naoumenko-Feigin染色计数,移植组比同期对照组阳性细胞数显著增多(P＜0.05).结论 小胶质细胞移植可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复.     

大鼠星形胶质细胞和少突胶质细胞的纯化培养与鉴定

目的 纯化培养并鉴定大鼠脑组织星形胶质细胞和少突胶质细胞。方法 根据星形胶质细胞和少突胶质细胞的生长时间差异、细胞生长方式及细胞对培养层粘附等特性的不同,改进ＭｃＣａｒｔｈｙ方法纯化培养星形胶质细胞和少突胶质细胞,用免疫组化法对其鉴定。结果 （１）混合培养的星形胶质细胞和少突胶质细胞生长分化状况均优于纯化后的生长,以少突胶质细胞表现更为明显;（２）星形胶质细胞呈向心性生长,细胞相邻的接触面有较多的     

前列腺炎大鼠脊髓胶质细胞活化与兴奋性氨基酸的关系

目的：观察SB203580鞘内注射前列腺炎模型大鼠脊髓磷酸化p38MAPK（p—p38）表达、胶质细胞活化及兴奋性氨基酸（EAAs）的变化。方法：45只SPF雄性大鼠完全随机分为正常组5只,前列腺炎组10只和前列腺炎SB203580鞘内注射镇痛组30只（镇痛组）。镇痛组前列腺注射完全弗氏佐剂（CFA）和脊髓鞘内给药（SB203580）制作大鼠前列腺炎镇痛模型,SB203580剂量分别为0．5、2．5、12．5μg/10μl,观察时间为术后第5d和10d,每组每观察点5只大鼠。分别用Western blot和ELISA法检测各组大鼠L5～S2脊髓背角组织p—p38及神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）含量,氨基酸分析仪测量谷氨酸（Glu）和天门冬氨酸（Asp）的变化。结果：前列腺炎组大鼠L5～S2,脊髓背角中p-p38、GFAP、Glu和Asp随时间显著增高,镇痛组p-p38、GFAP、Glu和Asp显著降低。GFAP与Glu及和Asp均为正相关关系（r=0．457,P=0．0016和r=0．498,P=0．0005）。结论：胶质细胞活化是慢性前列腺炎疼痛大鼠脊髓背角EAAs变化的重要原因,阻断p38MAPK信号通路可有效降低胶质细胞活化程度及EAAs水平。     

星形胶质细胞与中枢神经系统损伤

本文从星形胶质细胞的凋亡，及其产生的营养因子，反应性胶质化和应激反应四个方面，论述了星胶形质细胞在中枢神经系统损伤中的一系列变化及其作用。     

神经干细胞与原浆型星形胶质细胞联合移植对大鼠脊髓半切空洞损伤的修复作用

目的 观察神经干细胞(NSC)与原浆型星形胶质细胞(PAS)联合移植对大鼠损伤脊髓功能和形态的修复作用. 方法 60只Wistar大鼠,制成脊髓L1～L2左侧半切空洞损伤模型,采用随机数字表法分为损伤组(A组)、损伤后移植PAS组(B组)、移植NSC组(C组)、NSC和PAS按2:1比例联合移植组(D组),每组15只.伤后1,4,8周进行伤侧下肢BBB评分、体感诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检测;8周损伤部位脊髓组织进行HE、Nissl、Holmes银染,观察移植物在损伤脊髓中的形态学变化. 结果 (1)行为学观察:4周时,各组间开始出现差异;8周时,组间差异更为明显,尤其D组大鼠最明显,已能行走,行走时频繁足底离地,并能与前后肢体协调运动,B、C组功能有一定改善,可支重性足底踏步,前后肢共济协调,但仍和D组存在明显差距,A组后肢关节活动幅度增加,足底仍不能着地支重.(2)电生理检查:1周时,各组MEP峰潜时(以N1波计算)和SEP峰潜时(以P1波计算)开始出现差异,至4,8周,B、C、D组峰潜时明显缩短,但D组缩短最为显著(P<0.01).(3)病理观察:8周时,A组缺损严重,新生组织较少,B、C、D组缺损组织基本填补完全,损伤空洞闭合,未见明显的炎症反应,B组损伤处可见大量形态不同、大小不等的新生胶质细胞,胶质纤维排列紊乱,病理染色未见神经元;C组损伤处新生组织较多,以神经胶质细胞为主,少量神经元分布,且可见再生纤维连接;D组损伤处新生组织填补缺损完全,胶质纤维中可见形态典型的新生神经元,数量明显多于C组. 结论 NSC和PAS联合移植到损伤脊髓组织后,能够存活、分化并从结构和功能上较好地修复组织缺损区域.     

大麻素受体2在胫骨癌痛大鼠脊髓的表达及意义

目的探讨大麻素受体2（CB2）在胫骨癌痛大鼠脊髓的表达及其在癌痛产生和维持中的作用。方法 雌性SD大鼠42只,体重160～180g,随机分为5组：对照组（C组）、假手术组（S组）、骨癌痛组（BCP组）、DMSO（二甲基亚砜）组（D组）和CB2选择性拮抗剂AM630组（A组）。采用右侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μlWalker256（4×105）乳腺癌细胞制备大鼠胫骨癌痛模型,于接种后第7d从S组和BCP组分别随机选取6只,同C组的大鼠一起处死取脊髓,采用免疫印迹技术观察脊髓CB2的表达,在接种后的第1、2及第3天按照分组D组和A组分别鞘内注射DMSO0.15μl和溶于1%DMSO的AM63015μg。分别于注射肿瘤前1d、注射后的第1、3、5、7、14、21d（T0～6）测定机械痛阈和热痛阈。结果免疫印迹显示C组大鼠脊髓基本没有CB2的表达,与C组及S组相比,BCP组接种后第7d脊髓CB2表达水平升高。鞘内注射AM630癌细胞后大鼠接种后肢提前出现机械痛觉过敏现象。结论脊髓CB2参与大鼠胫骨癌痛的产生和维持。     

癌症痛大鼠模型中镜像痛现象观察

目的：研究癌症痛大鼠模型中镜像痛现象。方法：体重180～200g的雌性SD大鼠随机分为肿瘤组、假手术组和正常组（每组8只）。术前1d～术后15d内,隔天以Von Frey纤维测定其手术侧足（左后足）和非手术侧足（右后足）的机械痛闾,并进行术前、术后及组间比较;术后15d时,以25％乌拉坦0.6ml／100g进行麻醉后,以60g Von Frey纤维刺激各组大鼠右后足（非肿瘤侧或非手术侧后足）2min,2h后灌流取材,进行免疫组织化学染色,计数其L5～L6脊髓背角c-fos免疫反应阳性神经细胞数量。结果：肿瘤组手术侧和非手术侧足的机械痛阈均明显下降,显著低于假手术组（P〈0．01）和正常组（P〈0．01）,而假手术组与正常组之间没有显著性差异（P〉0．05）。在刺激其右后足后,肿瘤组鼠右侧脊髓背角c-fos免疫阳性神经细胞数量明显高于假手术组（P〈0．01）和正常组（P〈0．01）,而假手术组和正常组之间没有显著性差异。结论：癌症痛大鼠模型中存在镜像痛现象,并对伤害性刺激的反应增强。     

大鼠骨癌痛模型的制备及电压依赖性钠通道Nav1.8在其背根神经节的表达研究

目的 建立大鼠骨癌痛模型并观察电压依赖性钠通道Nav1.8在其背根神经节(DRG)的表达,以探讨Nav1.8在癌症性疼痛中的作用.方法 在雌性SD大鼠左胫骨内注射Walker256细胞(103/μl、104/μl、105/μl)后1、3、5、7、10、14天观察机械痛敏阈值和CO2激光热痛敏阈值的变化,与对照组大鼠进行比较,分析癌痛组大鼠出现痛阈降低的时间.于接种细胞后14天取双侧胫骨做病理切片观察肿瘤生长情况.RT-PCR检测癌痛组及对照组大鼠L5～L6DRG Nav1.8基因的表达.结果 所有接种Walker256细胞的大鼠均可见胫骨内实质性肿瘤的膨胀性生长和严重的骨质重构.各癌痛组大鼠分别于第7～14天出现进行性加重的疼痛行为学改变,其左侧(癌痛侧)DRG Nav1.8的表达明显升高(P＜0.05),对侧的表达与对照组之间无明显差异.结论 胫骨内注射Walker256细胞的大鼠在产生浸润性生长的骨肿瘤同时,可伴进行性的痛觉过敏,是骨转移瘤相关疼痛研究可靠的动物模型.Nav1.8基因在骨癌痛模型大鼠DRG中的表达水平上调,提示该通道可能参与骨癌痛的发生过程.     

Bone pain palliation with strontium-89 in breast cancer patients with bone metastases and refractory bone pain

Fifteen patients with breast cancer and skeletal metastases who had bone pain refractory to opioid analgesics and who were not eligible for or had not responded to local field radiotherapy, were treated with strontium-89. All patients had received previous treatment with chemotherapy and radiotherapy for bone metastases. Severity of bone pain, sleeping pattern, mobility and dependency on analgesics were evaluated before and 4, 8 and 12 weeks after⁸⁹Sr administration. Patients received 2 MBq/kg (118–148 MBq) of⁸⁹Sr by i.v. injection. Pain relief and a reduction in analgesic requirements were observed in 7 of the 15 (47%) patients, with a reduction in the severity score from 34% to 71%. Duration of the response varied from 3 to 7 months. A decrease in peripheral blood cell count was observed in 11 patients: a 15%–66% reduction in white cell count and a 14%–75% reduction in platelet count were detected at 12 weeks after treatment in these patients. We conclude that⁸⁹Sr is effective (47% response rate) for bone pain palliation in patients with bone metastases from breast cancer. Dependency on opioid analgesics may be reduced in patients with refractory bone pain.     

去卵巢大鼠骨密度与骨生物力学关系的探讨

绝经后骨折的发生率随骨矿密度的降低而增加[1,2],骨骼由大量的钙(Ｃａ)、磷(Ｐ)等矿物质构成,为了解绝经前后骨密度(ＢＭＤ)变化与生物力学的关系,本研究用双光子骨密度仪动态测定去势前、后的大鼠骨密度,同时测定血清钙、磷、镁及生物力学指标。1　材料和方法11　实验动物和喂养　Ｗｉｓｔａｒ雌性大鼠,10周龄,体重120～170ｇ,每组12只,按体重随机分为2组,1组为实验(切除卵巢)组,第2组为对照组(假书术),动物双鼠喂养,自由进食。16周末去卵巢,第32周末,骨动脉取血,处死。12　实验方法121　双光子骨密度测定(ＢＭＤ)　美国Ｗｉｓｃｏｓｉｎ…     

大鼠原位肝癌纤维间质成分与MR延迟强化的关系

目的：探究大鼠原位肝癌纤维间质成分的特点及其与 MR延迟强化的关系。方法4只 Wistar大鼠原位肝癌模型行肝脏 MR扫描及多期延迟增强扫描,取12个肝癌标本行 HE、苦味酸-天狼猩红染色、Verhoeff Van-Gieson染色、Gordon-Sweets 染色及α-SMA免疫组化染色,观察肿瘤内及周边纤维间质特点及 MR延迟强化特点。结果肝细胞癌内胶原纤维分布于病灶内的纤维间隔中;弹力纤维分布于肿瘤内的纤维间隔及动脉血管壁;网状纤维分布于癌灶内、汇管区及假包膜纤维组织中。胶原、弹力、网状纤维的平均面密度值分别为0.102±0.020、0.063±0.018、0.109±0.032,胶原纤维及网状纤维与弹力纤维间有统计学差异(P<0.01),胶原纤维与 MR延迟强化间正相关(P<0.05)。结论大鼠肝癌 MR延迟强化与病灶内胶原纤维关系密切,MR 可对肝癌内胶原纤维进行无创评估。     

X射线诱导转录因子活化与凋亡的关系

目的 通过观察较高剂量照射的鼠胸腺细胞内几种转录因子活性的变化和胸腺细胞凋亡发展时程，探讨转录因子活性的变化在辐射诱导的免疫细胞凋亡中的作用。方法 通过电泳移动变化分析及流式细胞术的方法分别检测了2Gy X射线全身照射后胸腺细胞内转录因子NF－κB、CREB和OCT－1活性以及胸腺细胞凋亡的动态变化。结果 2Gy X射线全身照射后胸腺细胞内NF－κB两种二聚体p50/p50和p50/p65的DNA结合活性的变化存在着明显的区别，主要以p50/p50活性显著升高为特征，CREB OCT－1的活性也明显增强，活性高峰均出现了照射后4－12h，而它们的活性高峰又恰与2Gy照射诱导的胸腺细胞凋亡的高峰相吻合。结论 较高剂量电离辐射主要诱导NF－κB同源二聚体的DNA结合活性增强；3种转录因子NF－κB p50/50、CREB以及OCT－1可能在2Gy照射诱导的胸腺细胞内具有协同促进细胞凋亡的作用。     

Relationship between atlanto-odontoid osteoarthritis and idiopathic suboccipital neck pain

We discuss the relationship of atlanto-odontoid (AO) (anterior C1-C2 joint) osteoarthritis to suboccipital pain. A questionnaire regarding suboccipital neck pain was presented to 210 consecutive patients undergoing computed tomography (CT) of the brain or sinuses for a variety of indications. In all patients the AO joint and the lateral scout image of the cervical spine were studied. In 104 (49%) degenerative changes were seen at the AO joint. There were 89 patients (42%) who reported pain in the suboccipital region, although this was not the reason for CT in any patient. Statistical analysis of the prevalence of suboccipital neck pain in all patients showed the presence of AO osteoarthritis seen on CT to be associated with occurrence of these symptoms. This association remained significant in the same study population after excluding patients with a history of rheumatoid arthritis, migraine, stress and neck trauma and patients with signs of degenerative changes of C2-C7 on the computed lateral scout image.     

Relationship between atlanto-odontoid osteoarthritis and idiopathic suboccipital neck pain

We discuss the relationship of atlanto-odontoid (AO) (anterior C1–C2 joint) osteoarthritis to suboccipital pain. A questionnaire regarding suboccipital neck pain was presented to 210 consecutive patients undergoing computed tomography (CT) of the brain or sinuses for a variety of indications. In all patients the AO joint and the lateral scout image of the cervical spine were studied. In 104 (49 %) degenerative changes were seen at the AO joint. There were 89 patients (42 %) who reported pain in the suboccipital region, although this was not the reason for CT in any patient. Statistical analysis of the prevalence of suboccipital neck pain in all patients showed the presence of AO osteoarthritis seen on CT to be associated with occurrence of these symptoms. This association remained significant in the same study population after excluding patients with a history of rheumatoid arthritis, migraine, stress and neck trauma and patients with signs of degenerative changes of C2–C7 on the computed lateral scout image.