衍生自人ⅡA型磷脂酶A_2碳末端的多肽C-26杀菌作用研究

目的:考察衍生自人ⅡA型磷脂酶A(2ⅡA型PLA2)碳(C)末端的多肽C-26对不同细菌的体外杀菌作用。方法:根据人ⅡA型PLA2C末端26个氨基酸残基的顺序,合成多肽C-26。采用琼脂铺板计数法,将不同浓度的多肽C-26分别与6种细菌(金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌)在37℃孵育2h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24h,记录每一琼脂板上的菌落形成单位(cfu),计算出多肽C-26作用后对细菌的杀菌率。结果:多肽C-26对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌等革兰阳性(G+)细菌的杀菌作用较强,其杀灭99%细菌的浓度在250～1000mg·L-1之间;对大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌等革兰阴性(G-)细菌的杀菌作用较弱,其浓度在500mg·L-1时对三者的杀菌率为41%～52%。结论:多肽C-26有杀菌作用,推测其具有与ⅡA型PLA2及其他抗菌多肽相似的杀菌机制。     

胸腺五肽及其衍生肽的杀菌活性研究

目的:研究胸腺五肽及其衍生肽的杀菌活性。方法:采用琼脂铺板计数法测定胸腺五肽[精氨酸(R)-赖氨酸(K)-天冬氨酸(D)-缬氨酸(V)-酪氨酸(Y),RKDVY]及其衍生肽1[RKN(天冬酰胺,N)VY]、衍生肽2(RKKVY)对革兰阴性(G-)菌(变形杆菌、大肠埃希菌)和革兰阳性(G+)菌(金黄色葡萄球菌、粪肠球菌)的杀菌活性,其中五肽剂量为15.625~1 000μg/ml,细菌数为102CFU。结果:3种五肽对G-菌均有杀菌活性,且RKKVY、RKNVY杀菌活性强于RKDVY(P<0.01),RKKVY与RKNVY间差异无统计学意义(P>0.05);对G+菌亦有杀菌活性,其杀菌活性由强到弱依次为RKKVY>RKNVY>RKDVY(P<0.01)。结论:胸腺五肽及其衍生肽对G-菌和G+菌均有杀菌活性,具有量效关系。     

2009―2011年本院多重耐药革兰阴性菌的耐药性变迁及对多黏菌素B的体外敏感性

目的分析重庆医科大学附属第一医院2009―2011年多重耐药革兰阴性菌的耐药性变迁并测定多黏菌素B及临床常用抗菌药物对其的体外抗菌活性,为临床制定合理的用药方案提供实验室依据。方法采用K-B法筛选出155株临床分离的多重耐药革兰阴性菌(53株鲍曼不动杆菌、50株肺炎克雷伯菌、52株铜绿假单胞菌),以琼脂稀释法测定其对多黏菌素B、亚胺培南等13种药物的敏感性及MIC值,数据采用Whonet 5.6及SPSS 18.0进行分析。结果琼脂稀释法与K-B纸片法得出的三种多重耐药革兰阴性菌的耐药率无显著差异(P>0.05)。鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南耐药率为58.3%⁶8.2%,对其他抗菌药物耐药率为48.5%68.2%,对其他抗菌药物耐药率为48.5%¹00%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南耐药率小于9.4%,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦耐药率为8.6%100%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南耐药率小于9.4%,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦耐药率为8.6%¹5.9%,对头孢他啶、头孢吡肟耐药率为34.8%15.9%,对头孢他啶、头孢吡肟耐药率为34.8%⁴1.8%,对哌拉西林耐药率为46.3%41.8%,对哌拉西林耐药率为46.3%⁵5.2%。铜绿假单胞菌对头孢他啶、头孢吡肟和亚胺培南耐药率为12.8%55.2%。铜绿假单胞菌对头孢他啶、头孢吡肟和亚胺培南耐药率为12.8%³0.7%。多黏菌素B对3种多重耐药革兰阴性菌保持着96%以上的抗菌活性,MIC50和MIC90均<1 mg·L-1。结论本院多重耐药革兰阴性菌对临床常用抗菌药物的耐药已非常普遍,而多黏菌素B对其仍保持较高的抗菌活性。     

我院2008-2012年临床分离细菌分布和耐药性监测

目的:了解医院细菌耐药趋势,指导临床合理使用抗菌药物。方法:监测我院2008-2012年临床分离细菌的耐药状况,用Kirby-Bauer纸片扩散法检测细菌耐药性,参照2008-2012版美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判定药敏结果,并用WHONET5.4软件统计分析。结果:5年收集该院临床分离菌共10 653株,革兰阳性菌感染呈上升趋势,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率在30.8%⁷4.1%之间,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率在60.7%74.1%之间,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率在60.7%⁷4.0%之间。未发现对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药的葡萄球菌属。革兰阴性菌对青霉素类、头孢菌素类耐药率高;在革兰阴性杆菌中肠杆菌科以大肠埃希菌最多见,非发酵菌科以铜绿假单胞菌多见。肠杆菌科细菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌占42.3%74.0%之间。未发现对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药的葡萄球菌属。革兰阴性菌对青霉素类、头孢菌素类耐药率高;在革兰阴性杆菌中肠杆菌科以大肠埃希菌最多见,非发酵菌科以铜绿假单胞菌多见。肠杆菌科细菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌占42.3%⁶5.2%;肺炎克雷伯菌占40.9%65.2%;肺炎克雷伯菌占40.9%⁷0.1%。结论:细菌耐药性仍呈增长趋势,定期对医院细菌耐药性进行监测有助于了解细菌耐药性变迁,为临床经验应用抗菌药提供依据。     

人ⅡA型磷脂酶A_2衍生肽P26抗菌作用与结构修饰的研究

目的比较人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)C末端衍生的多肽和经修饰后的环肽对不同细菌在体外的杀菌效应,了解其作用机制。方法根据人ⅡA型PLA2氨基酸顺序C末端26个氨基酸残基,合成直链肽P26,同时将其修饰为环肽P26。采用琼脂铺板计数法,将不同浓度的两种多肽分别与6种细菌在37℃孵育2 h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率。结果两种多肽对革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和炭疽杆菌有较强的杀菌活性,环肽P26的作用比直链肽P26强4倍左右;对革兰阴性菌大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌的杀菌作用较弱,而环肽P26的作用更弱。结论衍生自人ⅡA型PLA2 C末端26个氨基酸残基的肽P26和修饰得到的环肽P26对G+菌有较强的杀菌活性,经修饰成环肽后作用更强,可能与环肽分子带的正电荷更集中有关。     

HPLC-荧光法测定人血清中顺式阿曲库铵的浓度

目的:建立测定人血清中顺式阿曲库铵浓度的方法。方法:血清酸化后采用二氯甲烷液-液萃取法处理,以高效液相色谱(HPLC)-荧光法进样测定,色谱柱为Kromasil100-5C18,流动相为1.0%三氟乙酸-乙腈(58∶42),流速为0.8ml/min,柱温为常温,荧光检测波长分别为280 nm(E x)、320 nm(E m)。结果:顺式阿曲库铵血药浓度在15.625² 000ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均提取回收率为78.78%2 000ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均提取回收率为78.78%⁸3.59%,平均方法回收率为98.58%83.59%,平均方法回收率为98.58%¹01.23%,日内、日间RSD均小于10%。结论:本方法操作简便、灵敏度高、重现性好、结果可靠,可满足临床上血清中顺式阿曲库铵血药浓度检测和药动学研究的需要。     

RP-HPLC法同时测定花椒提取物中3种山椒素的含量

目的建立同时测定花椒提取物中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素含量的RP-HPLC色谱法。方法采用PhenomenexSynergi C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,4μm);流动相为乙腈(A)-水(B);流速为1.0 mL·min-1;梯度洗脱:0¹5 min,φ(乙腈)=40%15 min,φ(乙腈)=40%⁵0%,1550%,15²5 min,φ(乙腈)=50%25 min,φ(乙腈)=50%⁶0%;检测波长为270 nm;柱温为30℃。结果羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素分别在6.4860%;检测波长为270 nm;柱温为30℃。结果羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素分别在6.48⁵8.32、1.3158.32、1.31¹1.81和0.6111.81和0.61⁵.48 mg·L-1内线性关系良好。平均加样回收率分别为97.5%、97.4%和97.0%,RSD分别为1.5%、1.6%和1.4%(n=6)。该方法应用于花椒提取物的含量测定,测得3批自制花椒提取物中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素的含量分别为41.2%5.48 mg·L-1内线性关系良好。平均加样回收率分别为97.5%、97.4%和97.0%,RSD分别为1.5%、1.6%和1.4%(n=6)。该方法应用于花椒提取物的含量测定,测得3批自制花椒提取物中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素和羟基-γ-山椒素的含量分别为41.2%⁴6.9%、8.17%46.9%、8.17%⁹.28%和4.47%9.28%和4.47%⁵.11%。结论该方法可为花椒提取物的质量控制提供参考依据。     

我院肾内科2011-2013年住院患者尿路感染病原菌分布及耐药性分析

目的:了解我院肾内科住院患者尿路感染的病原菌分布特点及病原菌耐药现状,为临床选用抗菌药物提供参考。方法:对我院肾内科2011-2013年471例住院患者尿路感染的病原菌分布和抗菌药物耐药性进行回顾性分析。结果:471例患者中,3例为2种病原菌感染,1例为3种病原菌感染,分离出476株病原菌,其中革兰阴性(G-)菌301株(63.24%),革兰阳性(G+)菌136株(28.57%),真菌39株(8.19%)。产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的阳性菌44株,占总菌株数的9.24%,占G-菌的14.62%;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)24株,占总菌株数的5.04%,占G+菌的17.65%。对G+菌敏感性较高的药物有利奈唑胺和万古霉素等,对G-菌敏感性较高的药物有头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦等。结论:我院肾内科住院患者尿路感染以G-菌为主,大肠埃希菌为主要致病菌,耐药性较高;敏感性较好的药物有头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星等。     

美洲大蠊多肽PAP-2对Balb/c小鼠肝癌原位移植瘤免疫微环境的影响

目的 探讨美洲大蠊多肽PAP-2对肝癌免疫微环境的影响,及其作用机制。方法 通过给昆明种小鼠注入H22细胞悬液构建Balb/c小鼠肝癌原位移植瘤模型,将原位移植瘤小鼠随机分为10组：模型组,5-氟尿嘧啶组(20 mg·kg^-1 5-FU),美洲大蠊多肽PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^-1 PAP-2),5-氟尿嘧啶(20 mg·kg^-1 5-FU)+PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^-1 PAP-2),美洲大蠊CⅡ-3组(200 mg·kg^-1 CⅡ-3),脱脂膏组(200 mg·kg^-1脱脂膏),5-Fu组隔天给药1次,其余各药物组每天1次,腹腔注射。通过检测抑瘤率、胸腺指数及脾指数,检测肿瘤组织中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-1β的表达水平,检测小鼠脾细胞中相关淋巴细胞的变化水平。结果 模型组、5-氟尿嘧啶组、美洲大蠊多肽PAP-2高剂量组、5...     

血清降钙素原预示革兰阴性细菌致骨折术后感染的价值评估

目的 初步探讨骨折术后细菌感染患者血清降钙素原(PCT)水平与不同种类细菌感染的相关性,评估PCT水平预示革兰阴性菌引起感染的价值.方法 回顾性分析57例2010年1月至2015年6月骨折术后并发细菌感染患者,以细菌培养结果为标准,分为革兰阴性细菌感染组(G-菌组)和革兰阳性细菌感染组(G+菌组),并对2组PCT的测定结果进行统计分析.同时根据受试者工作特征(ROC)曲线判断PCT的诊断效能.结果 (1)收集的57例细菌感染病例中,革兰阴性菌共35例(61 F.4%),分别为大肠埃希菌胞菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌及阴沟肠杆菌、变形杆菌、鲍曼不动杆菌等;革兰阳性菌22例(38.6%),分别为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌.(2)G-菌组PCT含量显著高于G+菌组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)G-菌与G+菌组血清PCT水平等级分布比较,差异有统计学意义(U=125.5,P<0.01),其中G+组平均秩为17.20,G-组平均秩为36.41,可见PCT水平越大,预示革兰阴性菌感染的可能性越大.(4)根据ROC曲线,当PCT界值设定为4.43 ng/ml时,血清PCT水平区分G-菌与G+菌所致骨折术后感染的灵敏度为88.0%,特异度为81.2%,曲线下面积为0.89.结论 骨折术后细菌感染患者PCT水平与不同种类细菌感染有相关性,对革兰阴性菌与革兰阳性菌感染有一定的判别作用,且对革兰阴性菌引起的术后感染具有较高的诊断价值,有助于指导临床早期合理的使用抗生素.     

重组人血小板型磷脂酶A_2体外抗金黄色葡萄球菌的活性及其影响因素研究

目的:体外评价具有强正电荷性的重组人血小板型磷脂酶A2(RHP-PLA2)对金黄色葡萄球菌的杀菌活性,观察其在不同影响因素及水平下杀菌活性的变化。方法:用琼脂平板计数法测定杀菌活性,并对影响其杀菌活性的pH、Ca2+、Mg2+、肝素(带负电荷)等因素及水平进行测定。结果:RHP-PLA2杀灭99%金黄色葡萄球菌的最低浓度(MBC)为0.08ng.L-1。在MBC时,当pH为5.0、7.4、9.0时,RHP-PLA2杀菌率分别为44.4%、99.8%、99.5%;1～5mmol·L-1Ca2+适于RHP-PLA2发挥杀菌活性;5.12mmol·L-1乙二醇二乙醚二胺四乙酸、10mmol·L-1MgCl2及0.30×10-4IU.L-1肝素可完全抑制RHP-PLA2杀菌作用。结论:RHP-PLA2杀菌活性受pH值和Ca2+浓度的影响。PLA2分子带的正电荷性是其发挥杀菌活性的关键因素。     

我院2011年病原菌分布情况及耐药性分析

目的:汇总我院2011年分离病原菌的构成及耐药性的动态变化。方法:采用回顾性分析方法,对我院2011年病原菌分布、构成及耐药性进行统计、汇总。结果:2011年分离检出的革兰阴性菌2690株(62.65%)中全部耐药的革兰阴性菌占1.33%,革兰阳性菌528株(12.30%),真菌1076株(25.06%);主要病原菌是大肠埃希菌(16.02%)、肺炎克雷伯菌(12.74%)、铜绿假单胞菌(11.29%)、鲍曼不动杆菌(9.41%)。革兰阳性菌对呋喃妥因高度敏感,革兰阴性菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药性最低。结论:抗菌药物使用应加强药敏检测,合理选择抗菌药物。     

不同生长时期的金黄色葡萄球菌对重组人血小板型磷脂酶A_2的敏感性研究

目的:观察不同生长时期的金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)对重组人血小板型磷脂酶A2(PLA2)杀菌作用的敏感性。方法:使用孵育培养和抗生素干预(红霉素预处理)2种方法来观察处于对数生长期或静止期的金葡菌对血小板型PLA2杀菌作用的敏感性,以只加入金葡菌者为空白对照,采用金葡菌存活率为指标评价杀菌作用。结果:血小板型PLA2对对数生长期金葡菌杀菌作用强于静止期金葡菌,120min时二者金葡菌存活率分别为1%、55%;经红霉素预处理后的对数生长期的金葡菌对血小板型PLA2的敏感性降低,120min时金葡菌存活率为63%,而未经红霉素预处理者为1%。结论:生长活跃期金葡菌较静止期金葡菌对血小板型PLA2的杀菌作用更敏感;红霉素可降低金葡菌对血小板型PLA2的敏感性。     

我院2007年病原菌检测及常用抗菌药物的耐药性分析

目的:回顾性分析临床常见病原菌类型及其对常用抗菌药物的耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法:2007年1月-2007年12月,本院检出的876株病原菌类型及药敏试验结果进行分析。结果:临床送检的感染性疾病患者标本中分离病原菌的构成分别为:G-菌为63.15%(553/876)、G+菌为27.17%(238/876)、真菌为9.68%(85/876)。临床常见G-病原菌依次为:大肠埃希菌42.86%(237/553)、铜绿假单胞菌14.65%(81/553)、肺炎克雷伯菌12.30%(68/553)、不动杆菌属11.93%(66/553);G+病原菌依次为:表皮葡萄球菌51.86%(123/238)、金黄色葡萄球菌31.93%(76/238)。对抗菌药物耐药性检测结果显示:多数G-菌对亚胺培南、第3代头孢菌素敏感;G+菌对万古霉素敏感。结论:2007年病原菌仍以G-菌为主,以大肠杆菌最多,球菌中以表皮葡萄球菌最多,均对大部分常用抗菌药物耐药。     

顶空气相色谱法测定洛伐他汀原料药中的有机溶剂残留量

目的:建立测定洛伐他汀原料药中乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯4种有机溶剂残留量的方法。方法:采用顶空气相色谱法。色谱柱为DB-624石英毛细管柱,柱温采用程序升温,检测器为氢火焰离子化检测器,检测器温度为280℃,进样口温度为160℃。结果:乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的检测浓度的线性范围分别为10.0～250(r=1.0000)、10.0～250(r=0.9999)、10.0～250(r=0.9999)、1.78～89μg.mL-(1r=0.9997);平均回收率为97.6～99.1(RSD=0.9～1.9),定量限为0.22～5.61μg.mL-1;4批样品中4种有机溶剂残留量均符合《中国药典》2005年版要求。结论:该方法操作简便、精密度好,结果准确、可靠。     

547株呼吸道感染病原菌的分布及耐药性分析

目的:了解呼吸道感染病原菌的分布及其耐药性。方法:采用常规方法与全自动细菌分析系统鉴定分离的病原菌,用K-B法进行抗菌药物药敏试验。结果:500份呼吸道感染标本中分离出547株病原菌,其中G+球菌196株,占35.83%(196/547)。感染细菌中G-杆菌主要以铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌为主,分别为16.27%,15.36%,13.16%;G+球菌主要以金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主,分别为16.09%,11.15%。G+球菌对青霉素耐药率达100%,G-杆菌对氨苄西林耐药率达93.26%以上。结论:呼吸道感染患者病原菌以G-杆菌为主,对抗生素的耐药呈现上升趋势。     

HPLC法测定茵杖舒胆颗粒与合剂中4种大黄蒽醌的含量

目的:建立茵杖舒胆颗粒剂与合剂中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的HPLC含量测定方法。方法:采用VenusilXBP-C₁₈（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）,检测波长:254 nm,流速:1.0 ml.min^-1,柱温:30℃。结果:4种大黄蒽醌均呈良好的线性（r=0.999 9～1.000 0）,茵杖舒胆颗粒的平均回收率为96.5%～100.3%（RSD=2.18%～3.07%）;茵杖舒胆合剂的平均回收率为97.1%～100.3%（RSD=1.69%～3.00%）。结论:通过对茵杖舒胆颗粒和合剂各6批的含量测定,证明方法简单,准确可靠,重复性好。     

HPLC测定大鼠血浆中盐酸川芎嗪及其代谢物

目的建立川芎嗪(TMP)及其代谢物2-羟甲基-3,5,6-三甲基吡嗪(HTMP)大鼠血浆中的高效液相色谱测定方法。方法血浆碱化后用氯仿-1-氯正丁烷(3∶1)萃取,采用HPLC检测,色谱柱为Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm,5 m),流动相为20 mmol.L 1磷酸二氢钾缓冲液(pH 5.6)-甲醇(72∶28),2-甲基吡嗪为内标,流速:1.0 mL.min 1。检测波长为285 nm,柱温为室温。结果 TMP大鼠血浆浓度测定方法在0.031 25～50 g.mL 1内线性良好(r=0.999 5);HTMP线性范围为0.031 25～5 g.mL 1(r=0.999 8)。TMP、HTMP的定量下限均为0.031 25 g.mL 1,提取回收率为86.2%～93.0%(TMP)、73.8%～95.1%(HTMP),相对回收率为96.9%～117.7%(TMP)、97.5%～104.9%(HTMP),批内和批间RSD均<9%(n=5)。结论该方法简便、准确,重复性好,灵敏度高,适合于TMP及其主要代谢产物HTMP血药浓度测定及药动学研究。