沉默ABCG2对膀胱癌T24恶性生物学行为的影响

目的利用siRNA转染干扰沉默ATP结合盒式G型亚家族成员2（ABcG2）基因,并观察沉默前后T24恶性生物学行为的变化。方法siRNA沉默ABCG2后,观察T24增殖、克隆形成、迁移、侵袭、对放化疗抵抗、成干细胞球能力的影响。结果siRNA能够使ABCG2mRNA和蛋白质的表达下降80％左右,ABCG2被下调后,T24的增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力、对放化疗的抵抗能力、成干细胞球的能力均下降（P〈0．05）。结论沉默ABCG2能够降低膀胱癌T24的恶性及干性,可以作为一个潜在的治疗靶点。     

ABCE1基因沉默对人膀胱癌T24细胞增殖和迁移能力的影响

目的:本实验通过沉默ABCE1基因在人膀胱癌T24细胞中的表达,探讨ABCE1基因对细胞的生长、细胞周期及迁移等方面的作用。方法:设计及合成ABCE1的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染T24细胞。采用RT-PCR和Western blot法检测基因沉默后ABCE1 mRNA和蛋白的表达情况,采用流式细胞术检测T24细胞周期。并通过CCK-8增殖实验、划痕愈合实验和细胞侵袭实验评价沉默ABCE1基因对T24细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。结果:沉默ABCE1基因48 h后,T24细胞ABCE1 mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义。T24的细胞周期被阻滞于G0/G1期,且S期的细胞数减少,差异有统计学意义。与对照组和空白组相比,CCK-8增殖实验显示,实验组T24细胞的增殖受到明显抑制。划痕愈合实验显示,实验组迁移能力显著下降,差异有统计学意义。Transwell小室法示,实验组T24细胞的侵袭能力显著下降,差异有统计学意义。结论:特异性干扰ABCE1基因表达可抑制人膀胱癌T24细胞的迁移能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,ABCE1的siRNA序列可能成为治疗膀胱癌的有效靶点。     

膀胱癌T24耐药株的构建及其特性分析

目的建立膀胱癌T24耐药细胞株,并观察其相关生物学特性。方法采用丝裂霉素(MMC)浓度梯度持续递增法诱导建立膀胱癌T24耐药株,并从生长能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力、微球体形成能力等方面进行比较。结果膀胱癌T24耐药株与亲本细胞相比,其增殖速度明显高于亲本T24细胞;耐药株的克隆形成率、迁移和侵袭能力、成球能力均提高。结论低浓度丝裂霉素持续增量法可诱导形成膀胱癌T24耐药细胞株,且耐药株T24/MMC恶性程度更高,癌干细胞被富集。     

miR-126对不同类型膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的 miR-126对不同类型膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法膀胱癌细胞系(EJ、BIU-87、T24、5637)和正常膀胱组织细胞系(SV-HUC-1)培养48h后,采用qPCR检测miR-126在不同转移潜能膀胱癌细胞株EJ、BIU-87、T24、5637中的表达;使用Lipo-2000脂质体将miR-126 siRNA转染入膀胱癌细胞,采用CCK-8增殖实验、划痕愈伤实验、Transwell实验、细胞黏附实验进行检测。结果与对照组相比,miR-126在EJ、BIU-87、T24、5637细胞株中呈过量表达状态,差异有统计学意义(P0.05)。miR-126 siRNA转染入膀胱癌细胞后,EJ、BIU-87、T24、5637细胞存活率、迁移、侵袭、黏附能力明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-126在不同膀胱癌细胞中呈异常高表达状态,降低细胞内miR-126可以有效抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为膀胱癌的靶向分子治疗提供了新靶点。     

沉默PDK1基因抑制卵巢癌细胞系SKOV3的增殖及侵袭

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)基因对卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力的影响,并初步探讨其机制。方法采用PDK1 siRNA及control siRNA分别瞬时转染干扰实验组和阴性对照组SKOV3细胞。运用Western blot及real-time PCR验证转染效率后,CCK8法、平板克隆形成实验检测细胞增殖及克隆能力;Transwell小室法及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力;流式细胞计量术探索细胞周期及凋亡情况。结果实验组细胞增殖及克隆(P0.01),侵袭及迁移能力(P0.05)显著低于对照组;SKOV3细胞内PDK1基因沉默后缩短了细胞复制期并提高了其早期凋亡能力(P0.01)。结论沉默PDK1基因可显著抑制SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力,并可缩短细胞S期,增加细胞凋亡率。     

靶向干扰GPx1基因对人胶质母细胞瘤细胞生长和迁移的影响

目的:探讨靶向上调和下调谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)对人胶质母细胞瘤细胞株(U87MG、U118MG)增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:合成针对GPx1的siRNA和构建、鉴定pc DNA3.1-GPx1重组质粒,分别用LipofectamineTM2000脂质体瞬时转染人胶质母细胞瘤细胞株U87MG和U118MG。Real-time PCR检测U87MG和U118MG中GPx1 mRNA表达。Western blotting法检测转染后GPx1蛋白表达,用MTS检测法和Transwell实验分别检测转染后细胞的活力、迁移及侵袭能力的变化。结果:siRNA干扰U87MG细胞后在24 h、48 h和72 h对细胞活力的抑制率分别为25.9%、35.7%和34.8%,较对照组明显降低(P0.05);质粒转染U118MG细胞后在24 h、48 h和72 h对细胞活力的促进率分别为22.7%、45.8%和39.8%,较对照组明显增加(P0.05);Transwell结果显示经siRNA干扰,U87MG细胞迁移抑制率为41.6%±8.2%,细胞侵袭抑制率为40.4%±10.1%,经siRNA干扰的细胞迁移和侵袭能力明显下降(P0.05);质粒转染后细胞迁移促进率为55.8%±9.8%,细胞侵袭促进率为60.8%±9.2%,经质粒转染的细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05)。结论:siRNA下调GPx1表达可抑制人胶质母细胞瘤细胞株U87MG的生长、迁移和侵袭;相反,质粒上调GPx1表达可促进人胶质母细胞瘤细胞株U118MG的生长、迁移和侵袭。     

下调uPAR表达抑制高侵袭性人膀胱癌细胞系T24的迁移与侵袭

目的探究尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u PAR)的表达对高侵袭性人膀胱癌细胞系T24体外增殖与侵袭的影响,以及哺乳动物靶向雷帕霉素靶蛋白复合物2(m TORC2)可能的作用。方法设计合成针对u PAR、Rictor、PTEN基因的siRNA和阴性对照NC siRNA。将对数增殖期T24细胞随机分为5组,并设为实验组siu PAR、siRictor、siRictor+siu PAR、siu PAR+si PTEN和对照组NC。用瞬时转染法将以上siRNA及相应组合分别转入5组T24细胞;分别用RT-qPCR和Western blot检测mRNA及蛋白的表达;用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测u PAR siRNA对T24细胞增殖及侵袭的影响。结果 T24细胞中u PAR mRNA和蛋白的表达量显著上调(P0. 05)。沉默u PAR能够显著下调T24细胞中磷酸化Akt Serine-473(P-Akt S473)的表达量(P0. 05),并抑制T24细胞的迁移与侵袭(P0. 05)。敲除PTEN基因的T24细胞中,沉默u PAR基因促进Akt S473磷酸化(P0. 05)。结论沉默u PAR能够抑制T24细胞的迁移与侵袭,在T24细胞中u PAR可能是m TORC2的上游调控因子。     

青蒿素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

目的探讨青蒿素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法将人膀胱癌T24细胞分为空白对照组与青蒿素组(50、100、200μmol/L)。不同浓度青蒿素干预48h后,MTT方法检测T24细胞的增殖活力,流式细胞术检测T24细胞的凋亡率。200μmol/L青蒿素干预48 h后,划痕实验与Transwell侵袭实验检测青蒿素对T24细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot实验检测T24细胞中PI3K、p-Akt与pmTOR的表达。结果不同浓度青蒿素均能显著抑制T24细胞增殖,并促进细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P0.01)。200μmol/L青蒿素干预48 h后,T24细胞迁移与侵袭能力显著降低,T24细胞中PI3K的表达以及Akt和mTOR的磷酸化水平降低(P0.01)。结论青蒿素能够通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

RON基因在膀胱癌组织中的表达及对T24细胞增殖的影响

目的探讨RON基因对T24细胞增殖与迁移的影响。方法收集膀胱癌组织标本,通过RT-q PCR检测RON在膀胱癌组织中的表达,其次用siRNA技术干扰T24细胞RON,用RT-q PCR、Western blot检测干扰效果,CCK-8、Transwell实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及细胞凋亡。结果膀胱癌组织中RON表达与TNM分期呈正相关(P0.05)。在T24细胞的RON-siRNA组,细胞增殖能力减弱(P0.05),迁移与侵袭能力降低(P0.05),凋亡细胞数增加(P0.05),同时P-ERK蛋白表达减少,但Total-ERK表达不变。结论 RON基因促进膀胱癌细胞的增殖与迁移,有望成为膀胱癌治疗的新靶点。     

紫草素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

目的探讨紫草素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法将人膀胱癌T24细胞分为空白对照组与紫草素组(10、20、40μmol/L)。不同浓度紫草素干预48h后,MTT方法检测T24细胞的增殖活力,流式细胞术检测T24细胞的凋亡率。40μmol/L紫草素干预48 h后,Transwell实验检测紫草素对T24细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot实验检测T24细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3/9(Caspase-3/Caspase-9)与基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/MMP-9)的表达。结果不同浓度紫草素均能显著抑制T24细胞增殖,并促进细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P0.01)。40μmol/L紫草素干预48 h后,T24细胞迁移与侵袭能力显著降低,T24细胞中Caspase-3、Caspase-9、MMP-2与MMP-9的蛋白表达水平均显著升高(P0.01)。结论紫草素能够抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

Rac1介导E-cadherin下调引起的白血病细胞行为改变

目的:确定上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)表达下调或缺失在白血病细胞恶性行为中的作用及分子机制,最终阐明骨髓微环境与造血细胞相互作用改变在白血病发生中的作用。方法:通过RNA干扰白血病细胞(Raji细胞)及基质细胞(293T细胞)中E-cadherin的表达;细胞黏附实验测定E-cadherin表达沉默后2种细胞间的黏附能力改变;MTT法测定干扰后293T细胞上Raji细胞的增殖能力;Westernblotting方法确定干扰后Rho家族小GTP酶Rac1的表达。结果:RNA干扰E-cadherin表达后,Raji细胞对293T细胞的黏附能力显著降低,在293T细胞上的增殖能力显著增强,同时Rac1的表达升高。结论:白血病细胞中E-cadherin表达丧失,引起细胞黏附降低,增殖能力增强,表明E-cadherin表达缺失与白血病细胞恶性行为的获得有关,Rac1可能介导了E-cadherin表达缺失引起的细胞行为改变。     

TRIM28siRNA通过活化E2F转录因子1增加非小细胞肺癌PAa细胞对依托泊苷的敏感性

目的 探讨siRNA沉默TRIM28（tripartite motif containing 28）增强非小细胞肺癌（NSCLC）PAa细胞对依托泊苷的敏感性和可能的机制。方法 应用RNA干扰技术沉默TRIM28基因在PAa细胞中的表达;TRIM28siRNA单独或联合依托泊苷处理PAa细胞后,应用MTT法和集落形成实验检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting方法检测各组细胞中E2F转录因子1（E2F1）的表达水平。结果 在PAa中沉默了TRIM28的表达;TRIM28siRNA联合依托泊苷显著抑制PAa细胞的增殖和集落形成,明显诱导细胞凋亡;联合处理的PAa细胞中E2F1mRNA和蛋白水平的表达明显增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。结论TRIM28siRNA联合化疗药物依托泊苷对抑制NSCLC细胞生长有明显效果。     

Protective effect of RIP and c-FLIP in preventing liver cancer cell apoptosis induced by TRAIL

TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand) is a member of the tumor necrosis factor superfamily that can induce tumor selective death by up-regulating death receptor 4 (DR4) and DR5 expression. The study aimed to explore the role of RIP and c-FLIP genes in TRAIL induced liver cancer cell HepG2 and Hep3B apoptosis and related mechanism. RIP and c-FLIP silenced HepG2 and Hep3B cell model were established through siRNA. Western blot was applied to test c-FLIP, RIP, DR4, DR5, FADD, Caspase-3/8/9, ERK1/2, and DFF45 protein expression. Caspase-8 kit was used to detect Caspase-8 expression. Flow cytometry was performed to measure cell apoptosis rate. Acid phosphatase method was applied to determine cell cycle. TRAIL had no significant effect on Caspase-3/8/9, DR4, DR5, ERK1/2, and DFF45 protein expression, but up-regulated c-FLIP and RIP protein expression and reduced FADD expression level. After treated by the chemotherapy drug mitomycin and adriamycin, c-FLIP and RIP expression decreased significantly, while FADD increased. After knockout c-FLIP and RIP gene, HepG2 and Hep3B cell apoptosis rate induced by TRAIL increased obviously. Meanwhile, cell subG1 percentage increased markedly and exhibited G1 phase growth retardation. In addition, after two kinds of gene knockout, Caspase-8 was activated and produce Caspase-3 P20 and P24, leading DFF45 appeared DNA fragment P17 and P25. c-FLIP and RIP can inhibit Caspase-8 activation and prompting HepG2 and Hep3B resistant to cell apoptosis induced by TRAIL.     

沉默婆罗双树样基因4对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡生物学行为的影响

目的:使用小干扰RNA(siRNA)抑制人前列腺癌LNCa P细胞中婆罗双树样基因4(SALL4)的表达并对抑制效果进行测定,检测沉默(SALL4)后LNCa P细胞增殖、集落形成及凋亡等生物学行为的变化。方法:培养LNCa P细胞,分为si-SALL4组、阴性对照组与空白对照组。Real-time PCR与Western blotting技术检测SALL4 mRNA与蛋白水平。采用MTS比色法观察各组细胞增殖能力的变化,采用集落形成实验观察各组细胞集落形成能力的变化,流式细胞术研究SALL4对细胞凋亡的影响,利用Western blotting方法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。结果:与阴性对照组相比,si-SALL4组SALL4 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、细胞集落形成能力均明显降低(P0.05),而凋亡细胞明显增加(P0.05),Bcl-2的表达减弱,而Bax的表达增强。结论:通过siRNA技术沉默(SALL4)表达可抑制前列腺癌LNCa P细胞增殖和集落形成能力,促进细胞凋亡,其促进凋亡作用可能与Bcl-2及Bax表达有关。     

小干扰RNA抑制RUNX2对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨小干扰RNA抑制人RUNT相关转录因子2(RUNX2)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法应用化学合成小干扰RNA技术沉默人乳腺癌MCF-7细胞中RUNX2基因的表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot实验验证基因沉默效率。应用MTT方法检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力变化。结果设计的siRNA能够明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞RUNX2的表达。RUNX2基因沉默后,人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力降低,细胞凋亡率明显提高,侵袭能力显著降低(P<0.01)。结论RUNX2基因是治疗人乳腺癌MCF-7细胞的潜在靶点。     

沉默NANOG表达对人肝癌细胞HepG2中cyclin D1表达及细胞增殖的影响

 目的:探讨RNA干扰沉默NANOG表达后对肝癌细胞HepG2中细胞周期素D1(cyclin D1)表达及细胞增殖的影响。方法:将以NANOG基因为靶点的NANOG-siRNA瞬时转染肝癌细胞HepG2,real-time PCR和Western boltting检测NANOG、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期情况。结果:与mock组比较,转染NANOG-siRNA后,肝癌细胞HepG2中NANOG、cyclin D1 mRNA和蛋白水平均下调(P＜0.05),细胞增殖能力下降(P＜0.05),进入G 0/G 1期的细胞比例增多(P＜0.05)。结论:沉默NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中cyclin D1的表达下降,导致细胞增殖能力下降。     

下调CENP-W对人脑胶质瘤U87细胞的影响

目的:研究下调着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)的表达水平对人脑胶质瘤U87细胞的影响。方法:采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人脑胶质瘤U87细胞CENP-W的表达,采用RT-qPCR和Western blot法评价siRNA的干扰效果,采用MTT法、BrdU实验和平板集落形成实验测定细胞的增殖,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:MTT实验、平板集落形成实验和BrdU实验显示转染siRNA的实验组U87细胞的增殖能力、集落形成能力较空白对照组及阴性对照组明显降低;Transwell实验和划痕实验显示实验组细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组及阴性对照组明显减弱;流式细胞术分析表明实验组细胞的细胞周期被阻滞在G_0/G_1期;实验组细胞凋亡比例较对照组增多(P0.05)。结论:下调CENP-W的表达可抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞的凋亡,提示CENP-W有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。     

沉默/增强Stat1对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究沉默/增强Stat1对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法将胰腺癌细胞(Bx PC-3)分为:对照(control)组、Stat1组和si Stat1组,分别转染Stat1质粒和特异性干扰Stat1表达的siRNA;Western blot法检测Bx PC-3细胞中Stat1、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达;MTT法绘制细胞增殖曲线;Transwell法检测Bx PC-3细胞侵袭能力。结果沉默Stat1表达后,Bx PC-3细胞增殖及迁移能力明显增加,且VEGF、MMP-2和MMP-9表达明显增加。而增强Stat1表达后,Bx PC-3细胞增殖及迁移能力明显降低(P0.05)。结论 Stat1可以抑制Bx PC-3细胞增殖及迁移能力。且VEGF、MMP-2和MMP-9可能在Stat1抑制肿瘤过程中起一定作用。