三氧化二砷对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞增殖和IFN-γ、IL-4分泌的调节作用

 目的探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4^+T细胞增殖以及IFN-γ和IL-4转录和翻译水平的影响。方法免疫磁珠分别分选15只MRL/lpr狼疮小鼠和15只C57BL正常对照小鼠脾脏CD4⁺T细胞,进而将CD4⁺T细胞随机分为空白组(RPMI1640),对照组(PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1),ATO组[PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1(48h)后+ATO1.0μmol·L^-1],体外共培养至72h。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测3组CD4⁺T细胞的增殖和抑制水平;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清液中IFN-γ和IL-4水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上述细胞因子基因的转录水平。结果①分选后获得的CD4⁺T细胞纯度为(94.12±1.08)%,细胞存活率为(95.82±3.41)%;②MRL/lpr小鼠对照组CD4⁺T细胞的增殖水平(A值)(0.343±0.019)较空白组(0.054±0.008)高(P<0.001);却低于C57BL小鼠对照组的水平(0.375±0.018)(P<0.05);③MRL/lpr和C57BL小鼠ATO组CD4⁺T细胞增殖水平(A值)分别为(0.324±0.013)和(0.362±0.013),均低于对照组(P<0.05,P<0.05);④MRL/lpr小鼠对照组IFN-γ的表达水平[(562.287±60.345)ng·L^-1]明显高于C57BL小鼠对照组[(253.208±59.434)ng·L^-1](P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γ的抑制程度大于C57BL小鼠(P<0.05);MRL/lpr小鼠对照组的IL-4表达水平[(41.332±8.039)ng·L^-1]与ATO组[(23.046±3.253)ng·L^-1]和C57BL小鼠对照组[(29.303±8.038)ng·L^-1]比较,也具有明显的统计学差异(P<0.05和P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IL-4的抑制程度高于C57BL小鼠(P<0.05);⑤在转录水平上,与C57BL小鼠相比,ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γmRNA和IL-4mRNA的抑制程度更加明显(P<0.05和P<0.05);ATO对IFN-γ和IL-4表达水平的抑制和转录水平的抑制正相关,r=0.720(P<0.001)和r=0.557(P<0.01)。结论MRL/lpr小鼠存在CD4⁺T细胞的异常增殖,ATO能在不影响细胞存活率的浓度下抑制MRL/lpr小鼠CD4⁺T细胞的异常增殖活化,通过抑制其细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA分泌影响两者的表达,且对MRL/lpr小鼠抑制程度大于C57BL小鼠,表明ATO能抑制狼疮鼠的异常免疫功能,可进一步用于SLE的治疗。     

中药对桥本甲状腺炎患者CD4+T细胞及血清IL-12,TNF-α表达的影响

目的:观察中药组方对桥本甲状腺炎甲状腺自身抗体,辅助性(CD4+)T细胞,血清白细胞介素-12(IL-12),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响以及甲状腺的病理变化,以探讨可能的作用机制。方法:70例桥本甲状腺炎随机分为治疗组和非治疗组各35例。治疗组用中药组方,每日1剂,12周为1个疗程,非治疗组给予优甲乐口服。游离三碘甲腺原氨酸(FT3),游离甲状腺素(FT4),促甲状腺激素(TSH)治疗前后各检测1次;甲状腺免疫标志物的测定:CD4+T细胞,血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb),过氧化物酶抗体(TPOAb),IL-12,TNF-α治疗前后各检测1次;甲状腺粗针穿刺病理检查治疗前后各检测1次。结果:两组患者治疗前后甲状腺功能比较无统计学意义,且治疗组患者治疗前后FT3,FT4,TSH无显著变化,说明中药对甲状腺激素水平无明显影响。两组患者治疗前TGAb,TPOAb,IL-12,TNF-α比较无统计学差异,治疗组治疗后CD4+TC,TGAb,TPOAb,IL-12,TNF-α水平较治疗前及非治疗组明显降低,显示本组药物能很好调节免疫,减轻甲状腺的体液免疫损伤,促进组织修复。结论:本组药物能很好调节免疫,减轻甲状腺的体液免疫损伤,促进组织修复,对桥本甲状腺炎的甲状腺组织具有保护和修复作用。     

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路探讨补中益气汤干预NOD.H-2h4小鼠AIT细胞焦亡的机制

目的 基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）通路探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠细胞焦亡的作用机制。方法 60只NOD.H-2^h4小鼠分为正常组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量（4.10、8.19、16.38 g·kg^-1）组和硒酵母片（0.26 mg·kg^-1）组,每组10只。除正常组外,其余各组均给予0.05% 碘化钠（NaI）灌胃8周造模,继续给药干预8周。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清甲状腺过氧化物酶抗体（TPO-Ab）、甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠甲状腺组织病理学改变;免疫组化法检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测甲状腺组织中细胞焦亡相关蛋白水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠血清TPO-Ab、TgAb水平显著升高（P<0.01）,甲状腺滤泡或增大呈立方状,或破坏萎缩,滤泡周围可见大量淋巴细胞浸润;与模型组比较,给药组TPO-Ab、TgAb水平显著降低（P<0.01）,滤泡形态结构有所改善,淋巴细胞浸润程度有所减轻,其中补中益气汤中剂量组降低和改善效果最为明显。与正常组比较,模型组小鼠甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达显著增加（P<0.01）,NLRP3、剪切的（cleaved） Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,给药组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,其中补中益气汤中剂量组降低效果最为明显,给药组NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 补中益气汤可改善AIT,其机制可能是通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制细胞焦亡实现的。     

黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎大鼠CD4+ T细胞 及其共刺激分子的影响

目的:观察CD4+T细胞及其共刺激分子(CSF)在湿热型溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜中的表达及分布,探讨黄芩汤治疗该病可能的免疫学机制。方法:采用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法造出湿热型体质,结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法建立湿热型UC模型;造模成功后将大鼠分为模型组、黄芩汤组及美沙拉嗪组,用免疫组化SP法检测大鼠结肠黏膜CD4+T细胞,CD28,CD152,OX40T细胞亚型的表达及分布,通过图像数码采集系统及Image pro plus 6.0软件分析平均光密度,以检测各分子表达含量。结果:与正常对照组比较,造模大鼠结肠中CD4+T细胞、CD28,CD152,OX40等T细胞亚型升高(P<0.05),主要分布于黏膜下层及固有肌层;治疗后,黄芩汤和美沙拉嗪组大鼠结肠中CD4+T细胞,CD28,OX40T细胞亚型表达均下降(P<0.05),但CD152的表达无明显变化且维持在模型组水平;黄芩汤组及美沙拉嗪组以上各分子的表达均无统计学差异。结论:黄芩汤可能通过调节CD4+T细胞的CSF的表达含量从而发挥对溃疡性结肠炎的免疫调节作用。     

定心方通过上调CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达对PM2.5所致动脉粥样硬化的影响

目的:观察定心方(DXR)在小鼠吸入PM2.5所致动脉粥样硬化(AS)过程中对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs)表达调控的影响。方法:50只载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠喂食高脂饲料并吸入严重污染的自然空气,随机分为5组,DXR低、中、高剂量组分别灌胃DXR 9.29,18.59,37.18 g·kg~(-1)·d~(-1);辛伐他汀组灌胃辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1);模型组灌胃等剂量生理盐水;10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料吸入过滤空气设为正常组。16周后检测小鼠血清脂质、酶联免疫吸附测定测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素~(-1)0(IL~(-1)0)及转化生长因子-β(TGF-β)水平;流式细胞法检测脾脏CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量;苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉AS斑块形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉AS斑块Foxp3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠主动脉AS斑块形成,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显升高,IL~(-1)0及TGF-β水平明显降低,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显减少,Foxp3蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,辛伐他汀组,DXR中、高剂量组小鼠AS斑块面积明显减小,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显降低,IL~(-1)0及TGF-β水平明显升高,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显增加,Foxp3蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:DXR可通过上调CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs表达发挥抗PM2.5所致AS功效。     

穿心莲对人外周血CD4+T淋巴细胞表面 CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4/CCR5启动子作用机制的研究

目的:探讨穿心莲对人外周血CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4,CCR5启动子的作用机制.方法:健康志愿者口服含穿心莲内酯的穿心莲胶囊后,采集人外周静脉血并分离CD4+T淋巴细胞,RT-PCR、流式细胞术、Western-bloting检测服药前后人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5的表达;采用报告基因技术,中药穿心莲提取物给大鼠灌胃后采集含药血清,将含药血清作用于转染有CXCR4,CCR5启动子载体的H9细胞株,检测穿心莲对CXCR4,CCR5启动子的影响.结果:健康志愿者口服穿心莲后,外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5 mRNA和蛋白表达水平较服药前显著降低;并且穿心莲能够显著降低体外培养细胞CXCR4,CCR5启动子活性.结论:穿心莲能够降低人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4和CCR5的表达,具有潜在的抗HIV-1作用.     

肾阳虚型慢性再障患者CD3+CD19-和CD3+CD25+T细胞与血小板的多重线性回归分析

目的 建立多重线性回归模型分析肾阳虚型慢性再生障碍性贫血（CAA）患者的总T细胞（CD3⁺CD19^-）、活化T细胞（CD3⁺CD25⁺）与血小板（PLT）的线性关系并探讨肾阳虚型CAA患者PLT数量在治疗转归中的预测因素。方法 纳入22例肾阳虚型CAA患者，收集外周血中CD3⁺CD19^-T细胞和CD3⁺CD25⁺T细胞占淋巴细胞的比例和PLT共3个参数并进行线性回归分析。结果 因学生化删除残差（SDR_1）超过3倍标准差的离群值以及强杠杆点（LEV_1） > 0.5者各有1条观测值，对这2条观测值予以删除。回归模型具有统计学意义F（2，17） = 19.479（P < 0.001），R² = 0.696，调整R² = 0.660。纳入模型的2个自变量（CD3⁺CD19^-）和（CD3⁺CD25⁺）对PLT的影响均有统计学意义（P < 0.05），并得到回归方程：PLT = 391.585 -5.104 × （CD3⁺CD19^-） + 23.851 × （CD3⁺CD25⁺）。结论 外周血淋巴细胞中CD3⁺CD19^-T细胞的比例和CD3⁺CD25⁺ T细胞的比例可用于有效地估计和预测肾阳虚型CAA患者在未来临床转归中PLT的值及其变化趋势，有助于临床医师及时判断和评估CAA患者在临床结局中的出血风险及出血症状对患者生存质量的影响，具有较好的预测价值和临床实践意义。     

清肺益肾方治疗痰热壅肺型老年肺炎临床疗效及对血清CD4~+、CD8~+水平的影响

[目的]探讨清肺益肾方治疗老年肺炎(痰热壅肺证)的疗效及对血清CD4~+、CD8~+水平的影响。[方法]将老年肺炎患者随机分为对照组和治疗组,对照组给予抗炎、祛痰平喘、退热等对症治疗,治疗组在此基础上给予清肺益肾方汤剂口服,比较两组临床疗效及治疗前后、随访1个月的血常规、C反应蛋白、症状评分、影像学、血清CD4~+、CD8~+水平的变化。[结果]治疗后,对照组总有效率为80.00%,治疗组总有效率为96.67%,较对照组显著升高(P0.05);治疗组咳嗽、黄痰、口渴症状积分较对照组显著下降(P0.05);治疗组白细胞计数、中性粒细胞比率、C-反应蛋白、胸部CT积分较对照组显著下降(P0.05);治疗组CD4~+于治疗14 d和随访1个月均较对照组显著升高(P0.05,P0.01),且CD8~+于随访1个月较对照组显著降低(P0.05)。[结论]清肺益肾方治疗痰热壅肺型老年肺炎疗效显著,其作用机制可能与减轻炎症反应,同时增强免疫力有关。     

软坚消瘿汤对自身免疫性甲状腺炎大鼠细胞因子及凋亡蛋白Fas、Fasl表达的影响

目的观察软坚消瘿汤对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠自身抗体、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和凋亡蛋白Fas、Fasl的影响,从细胞因子和凋亡蛋白关系角度探讨其作用机制。方法SPF级SD雌性大鼠60只分为正常组、模型组,模型组运用甲状腺球蛋白与弗氏佐剂混合免疫注射法,联合饮用高碘水模拟大鼠EAT。造模完成后的大鼠分为中药组、雷公藤组、模型组。酶联免疫法检测甲状腺抗体、IL-1及TNF-α水平,免疫组化染色法检测大鼠甲状腺细胞Fas、Fasl变化。结果软坚消瘿汤能显著降低EAT大鼠血清自身抗体、IL-1及TNF-α水平,降低甲状腺细胞Fas、Fasl表达。结论软坚消瘿汤通过降低EAT血清中自身抗体及细胞因子水平,致使凋亡相关蛋白Fas、Fasl表达下降,从而起到减轻甲状腺细胞凋亡作用。     

洋金花单体化合物对CD4+T细胞亚群的影响

目的证明洋金花单体化合物对T细胞亚群细胞因子的影响。方法采用MTT比色法测定各化合物对小鼠脾淋巴细胞的毒性,以及混合淋巴细胞增殖反应,及对CD4~+T细胞亚群的影响,采用PCR扩增技术对各细胞因子mRNA进行扩增,对结果进行统计学处理。结果化合物G4有较高的细胞毒性浓度值,并且可强烈抑制T细胞增殖,对Th17细胞和Treg细胞有调节作用。结论洋金花G4对T细胞的增殖有抑制作用,主要可抑制CD4~+T细胞中Th17和Treg细胞相关转录因子的表达。     

益气补肾颗粒治疗对微小残留白血病患者CD4~+CD8~(high) T淋巴细胞和自然杀伤细胞的影响

目的探讨益气补肾颗粒治疗后CD4+CD8highT淋巴细胞的变化及其对微小残留白血病(mini-mal residual leukemia,MRL)预后的意义。方法用多参数流式细胞技术比较分析36例MRL患者应用益气补肾颗粒治疗前后CD4+CD8 highT淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(NK细胞)改变。结果 (1)MRL患者3年持续完全缓解率、生存率分别为75.0%、80.5%,5年持续完全缓解率、生存率分别为63.9%、72.2%。(2)与治疗前比较,治疗后的MRL的CD4+CD8highT淋巴细胞百分率(%)和绝对值显著上升(P0.01);(3)与治疗前比较,治疗后MRL的NK细胞百分率(%)和绝对值均显著上升(P0.05,P0.01)。结论益气补肾颗粒可能通过调节机体自身免疫功能,提高CD4+CD8highT和NK细胞的绝对数量,杀伤或抑制体内残存白血病细胞,延长MRL患者的无病生存期。     

清胰汤对急性胰腺炎大鼠胰腺及肝细胞钙-镁ATP酶的影响

目的：研究急性胰腺炎（AP）大鼠胰腺及肝细胞钙－镁ATP酶的变化及清胰汤等药物对其影响,进一步探讨这些药物治疗AP的作用机制。方法：将81只SD大鼠分为正常对照组、AP组、AP后清胰汤（AP＋清胰汤）治疗组及粉防己碱（Tet,AP+Tet)治疗组共4组,在制备AP动物模型后1h、5h、10h活体取胰、肝组织,通过钙－镁ATP酶的酶组织化学染色检测其活性;同时通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）,测定其组织钙－镁ATP酶的表达。结果：钙－镁ATP酶酶组织化学染色阳性率ATP组低于正常对照组（P＜0.05),且AP组5h的阳性率低于1h;清胰汤、AP+Tet组的高于AP组（P＜0.05),且5h的阳性率高于1h。RT－PCR结果显示：胰腺组织钙－镁ATP酶的表达AP组最低,且AP组5h的表达低于1h;AP+清胰汤、AP+Tet组的表达高于AP组,且5h的表达高于1h;肝组织钙－镁ATP酶的表达各组均为阳性,各组间差异无显著性。结论：AP时大鼠胰腺及细胞钙－镁ATP酶活性降低,清胰汤、Tet可提高细胞钙－镁ATP酶活性,减轻细胞钙超载。