BDNF对哮喘小鼠C7T5节段脊髓后角Kinesin-1表达的上调作用

目的探讨在哮喘发病中,脑源性神经营养因子(BDNF)对哮喘小鼠C7~T5节段脊髓后角内驱动蛋白-1(Kinesin-1)表达的调节作用。方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、Anti-BDNF抗体组,利用AniRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力、免疫荧光方法和western blot方法检测各组小鼠C7~T5节段脊髓后角内Kinesin-1的表达。结果哮喘组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组(P<0.01),与哮喘组相比,Anti-BDNF抗体组吸气阻力和呼气阻力则明显降低;免疫荧光结果显示哮喘组C7~T5节段脊髓后角内Kinesin-1阳性产物的平均光密度值(MOD)显著高于正常对照组(P<0.01);而anti-BDNF抗体组与哮喘组相比,Kinesin-1阳性反应产物的MOD值则明显降低(P<0.01)。western blot方法也得到了相同的结论。结论 BDNF被阻断后,哮喘小鼠C7~T5节段脊髓后角内Kinesin-1的表达降低。     

哮喘小鼠C_7～T_5节段脊髓后角BDNF及其受体TrkB的表达研究

目的探讨在哮喘发病中,脑源性神经营养因子(BDNF)及其高亲和力受体酪氨酸激酶B(TrkB)在哮喘小鼠C7～T5节段脊髓后角内的表达变化。方法BALB/c小鼠20只,按随机数字表法均分为正常对照组和哮喘组,利用AniRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力、免疫荧光方法和Western blot方法检测各组小鼠C7～T5节段脊髓后角内BDNF及其高亲和力受体TrkB的表达变化。结果哮喘组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组(P<0.01),哮喘模型建立成功。免疫荧光结果显示哮喘组C7～T5节段脊髓后角内BDNF及TrkB阳性产物的平均光密度值(MOD)显著高于正常对照组(P<0.01),Western blot方法检测也得到了相同的结果。结论哮喘小鼠C7～T5节段脊髓后角内BDNF及TrkB的表达升高。     

Akt对哮喘小鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位IL-1β表达的影响

目的探讨在哮喘发病机制中,PKB/Akt对哮喘小鼠肺组织及C7-T5段脊神经节和相应节段脊髓后角IL-1β表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、PKB/Akt阻断组,免疫组织化学检测各组小鼠肺组织及C7-T5节段脊神经节和相应节段脊髓后角IL-1β的表达,Western blot方法检测各组小鼠肺组织及C7-T5节段脊神经IL-1β的表达。结果免疫组织化学结果显示,哮喘组肺、C7-T5段脊神经节和相应节段脊髓后角IL-1β阳性产物的平均光密度值(MOD)显著高于正常对照组(P<0.01);而PKB/Akt阻断组与哮喘组相比MOD值明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示:与正常对照组比较,哮喘组小鼠肺、C7～T5段脊神经中IL-1β的IDV(integrated density value)与β-actin IDV的比值均明显升高(P<0.01),而PKB/Akt阻断组明显低于哮喘组(P<0.05)。结论NGF介导的Akt通路的激活可上调IL-1β的表达,介导哮喘气道高反应和炎症反应。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内、脊神经节及脊髓背角内蛋白激酶C表达的抑制作用

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内蛋白激酶C（PKC）表达的抑制作用。方法利用免疫组织化学和Western blotting方法。研究哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC的免疫反应变化。结果哮喘组豚鼠肺内、C—L脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC平均光密度值明显高于对照组（P〈0．01）,而地塞米松组则明显低于哮喘组（P〈0．01）。结论PKC可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠PKC的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。     

NGF对哮喘小鼠肺及初级传入神经元SH2-Bβ表达的调节作用

目的探讨NGF对哮喘小鼠肺及初级传入神经元(C7-T5脊神经节及相应脊髓后角)SH2-Bβ表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组、anti-NGF组,每组10只。利用免疫组织化学方法,免疫印迹法(W estern B lot)测定各组SH2-Bβ的免疫反应变化;M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7-T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值(MOD)分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P<0.01)。而Anti-NGF组小鼠SH2-Bβ免疫阳性产物MOD分别为0.252±0.015、0.158±0.012、0.251±0.024,明显低于哮喘组(P<0.01)。W estern B lot显示哮喘小鼠的C7-T5节段脊髓及肺内SH2-BβMOD与-βactin MOD的比值(0.738±0.021和1.526±0.022)明显高于对照组(0.346±0.017和0.512±0.018,P<0.01);而Anti-NGF组小鼠在肺、C7-T5节段脊髓SH2-Bβ免疫阳性产物MOD与β-actioin MOD的比值(0.436±0.011和0.682±0.015)明显低于哮喘组(P<0.01)。结论肺内、C7-T5脊神经节及对应脊髓后角神经元的SH2-Bβ可能参与NGF介导的哮喘的发病过程。     

TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β表达的上调作用

目的研究NGF的特异性高亲合力受体TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β的表达的调节作用,探讨TrkA介导的信号通路在哮喘发病机制中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、TrkA抗体阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,利用免疫组织化学方法测定IL-1β表达,M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),TrkA组吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学结果显示TrkA抗体阻断组肺(0.324±0.013)、C7-T5节段脊神经节(0.301±0.065)及对应的脊髓后角(0.216±0.019)IL-1β免疫阳性产物平均光密度值明显低于哮喘组小鼠(0.796±0.025、0.745±0.016、0.528±0.011,P<0.01)。结论NGF介导的TrkA通路的激活可上调IL-1β的表达,介导哮喘气道高反应和炎症反应。     

哮喘小鼠肺内及内脏感觉传入系统SH2-Bβ的表达

目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统(C7~T5脊神经节及对应的脊髓后角)的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只。利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7~T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法(Western blotting)检测肺及C7~T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子(NGF)的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析。结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7~T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P<0.01)。Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7~T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±0.022。NGF在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关(r=0.651,P<0.01)。结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7~T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子。     

臂丛根性撕脱伤激活脊髓表达磷酸化CaMKⅡ的时程及定位研究

目的研究大鼠臂丛根性撕脱伤后磷酸化CaMKⅡ的时间和空间定位。方法将SD大鼠（6-8周龄）在手术显微镜下做臂丛根性撕脱伤手术后,应用Western blot方法测定相应脊髓节段（C7、C8）磷酸化CaMKⅡ在1、2、3d时间点及正常大鼠的表达水平。同时应用免疫荧光染色方法检测目标蛋白在1d时间点大鼠脊髓节段的表达水平及空间定位。结果正常大鼠脊髓相应节段检测不到磷酸化CaMKⅡ,在臂丛根性撕脱伤后1～2d对应脊髓节段的磷酸化CaMKⅡ表达明显升高,撕脱伤后3d明显下降并接近正常水平;免疫荧光结果显示：臂丛根性撕脱伤后1d,损伤侧脊髓前角运动神经元和中间神经元明显表达磷酸化CaMKⅡ,对侧脊髓前角运动神经元和中间神经元也有表达。但强度较撕脱侧明显减弱。结论臂丛根性撕脱伤诱导磷酸化CaMKⅡ在损伤节段1d时高表达,然而在3d时逐步下降到正常水平。     

哮喘豚鼠内脏感觉传入部位P物质含量的变化

目的：研究哮喘豚鼠内脏感觉传入各部位内P物质含五的变化,探讨P物质在哮喘发病中的作用机制。方法：放射免疫分析。结果：哮喘豚鼠内脏感觉传入部位P物质水平（结状神经88.23±16.32,C7－C8段脊神经节对．77.22±13.26T1-T2段脊神经节75.96±15.67,T3－T5段脊神经节75．50±19．28,C7－T5段脊阅后角68．25±13．39,孤束核（81．63±17．68）pg/gW．W）明显高于正常对照组（结状神经节70．28±12．29,C7－C8段脊神经节59．87±17．36,T1-T2段脊神经节65．35±13．24,T3－T5段脊神经63．23±12.88,C7－T5段脊伍后角57．52±18．69,孤束核（68．37±16．89)pg/gW.W（P＜0.05）。结论：下呼吸道和肺的内脏感觉传入征路各部位的P物质可能参与哮喘发病过程。     

大鼠肢体IRI后脊髓神经元Fos的表达

目的探讨脊髓神经元是否参与肢体缺血再灌注损伤（IRI）的发病过程以及有关神经元的分布特点。方法Wistar大鼠24只,随机分为4组,A：空白对照组;B：假手术对照组;C：单纯缺血组;D：缺血再灌注组。通过暂时阻断一侧髂总动脉和股动脉,建立肢体缺血再灌注损伤模型。采用免疫细胞化学ABC法,观察大鼠脊髓神经元原癌基因c—fos的表达和分布特点。结果大鼠肢体缺血4h,脊髓相应节段神经元Fos表达活跃。再灌注2h后,Fos表达更加活跃（P〈0．01）。并且Fos阳性神经元较集中分布于脊髓相应节段同侧后角及中央管周围。结论脊髓相应节段同侧神经元可能参与肢体IRI的发病过程,尤其是脊髓后角及中央管周围神经元可能具有更为重要的作用。     

c—Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-2表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂（SP600125）对哮喘小鼠肺组织白介素-2（IL-2）表达的影响。方法30只BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组，制作哮喘模型及干预处理后，处死小鼠，取肺组织，采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-2的表达。结果免疫组化结果显示，哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．76＋0．11，显著高于对照组0．25±0．04，P〈0．01；而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．45±0．08，与哮喘组相比明显降低，P〈0．01。Westernblot结果显示，哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为1．26±0．21，显著高于对照组0．36±0．05，P〈0．01；而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．88±0．11，与哮喘组相比明显降低，P〈0．01。结论c．Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-2的表达。     

常染色体显性成人多囊肾病两家系PKD1、PKD2基因的突变鉴定

目的 鉴定两个常染色体显性成人多囊肾病家系的致病突变.方法 采用酚氯仿法提取家系成员及无亲缘关系的100名健康对照个体的外周血白细胞DNA,PCR扩增先证者致病基因PKD1、PKD2的所有外显子序列及其侧翼内含子剪切区域,直接测序确定DNA序列的变异.通过家系和正常对照的比较分析,对检测到的变异是否与疾病相关进行了初步探讨.结果 在两个家系中共检测到5个序列变异:PKD1:c.2469G＞A,PKD1:c.5014_5015 delAG,PKD1:c.10529C＞T,PKD2:c.568G＞A和PKD2:c.2020-1_2020 delAG.其中PKD1:c.2469G＞A和PKD2:c.2020-1_2020 delAG为新发现的变异.此外,检测到的移码突变和剪切突变未见于家系中健康成员及无亲缘关系的正常对照.结论 PKD1:c.5014_5015 delAG和PKD2:c.2020-1_2020 delAG分别为家系A和B的致病突变,且PKD2:c.2020-1_2020 delAG为先证者新发生的突变.     

神经生长因子对哮喘豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在哮喘豚鼠内脏感觉传入部位的表达及神经生长因子(NGF)对MMP-2的调节作用。方法应用免疫组织化学方法检测豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2免疫反应的变化。用W estern b lot蛋白印迹方法检测豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和MMP-2的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。结果①免疫组织化学结果显示:豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角内MMP-2阳性免疫反应产物的平均灰度值(0-深色,255-浅色),生理盐水组(175.50±4.67、166.47±6.20)与单纯致敏组(172.63±9.51、165.20±5.14)比较没有显著差异(P>0.05);哮喘组(139.87±4.88、125.93±4.49)明显低于生理盐水组和单纯致敏组(P<0.01);哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体,169.73±6.24、152.37±8.67)则明显高于哮喘组(P<0.01)。②W estern b lot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中MMP-2和NGF阳性产物的IDV(Integrated Density Value)与β-actin IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组则明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2的表达。结论C7~T5段脊神经节以及相应节段脊髓背角内的MMP-2可能也参与哮喘的发病过程,NGF诱发MMP-2的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时MMP-2的表达有可能延缓气道重塑的发生,可能是治疗哮喘的新途径。     

A comprehensive search for mutations in the PKD1 and PKD2 in Japanese subjects with autosomal dominant polycystic kidney disease

To elucidate the genotypic and phenotypic characteristics of autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) in Japanese populations, we performed a comprehensive search for mutations in PKD1 and PKD2 in 180 Japanese ADPKD patients from 161 unrelated families. We identified 112 (89 PKD1 and 23 PKD2) mutations within 135 families. Patients with PKD2 mutations account for 23.6% of all Japanese ADPKD families in this study. Seventy‐five out of the 112 mutations have not been reported previously. The estimated glomerular filtration rate (eGFR) decline was significantly faster in patients with PKD1 mutations than in those with PKD2 mutations (?3.25 and ?2.08 ml min^?1 year^?1 for PKD1 and PKD2, respectively, p < 0.01). These results indicate that mutations within PKD1 and PKD2 can be linked to most of the cases of Japanese ADPKD, and the renal function decline was faster in patients with PKD1 mutations than in those with PKD2 mutations also in the Japanese ADPKD. We also found that PKD2 mutations were more frequent in Japanese ADPKD than that in European or American ADPKD.     

锌缺乏对神经病理性疼痛模型小鼠行为学的影响

目的研究饮食锌缺乏对神经病理性疼痛模型小鼠痛域的影响。方法制备饮食锌缺乏小鼠,采用小鼠坐骨神经分支选择损伤模型,金属自显影和原子吸收光谱检测小鼠脊髓后角锌稳态,检测小鼠痛域。结果 AMG结果证实,与假手术组相比,模型组小鼠和锌缺乏组小鼠脊髓后角游离锌离子减少,与模型组小鼠相比,锌缺乏小鼠脊髓后角游离锌离子减少。原子吸收光谱结果表明,锌缺乏组小鼠总锌含量较假手术组减少。痛域检测结果表明,锌缺乏小鼠痛域下降。结论锌离子可能参与小鼠脊髓后角痛觉专递。     

c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-8表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂(SP600125)对哮喘小鼠肺组织白介素-8(IL-8)表达的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组,制作哮喘模型及干预处理后,处死小鼠,取肺组织,采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-8的表达。结果免疫组化结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.75±0.12),显著高于对照组(0.25±0.03,p0.01),而SP600125组小鼠明显低于(0.44±0.06,p0.01)哮喘组。Western blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.51±0.08),显著高于对照组(0.15±0.02,p0.01);而SP600125组与哮喘组相比明显降低(0.29±0.04,p0.01)。结论 c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-8的表达。     

黄芪甲苷通过调控PKD1-HDAC5-VEGF通路促进心肌梗死大鼠血管新生

目的:观察黄芪甲苷(AS-IV)通过调控蛋白激酶D1(PKD1)-组蛋白脱乙酰酶5(HDAC5)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路促心肌梗死大鼠血管新生的作用并分析其可能的作用机制。方法:采用经典的左冠状动脉前降支结扎术复制心肌梗死模型后,将大鼠分成模型组、AS-IV治疗组和AS-IV+CID755673(PKD1阻断剂)组,另设假手术对照组和二甲基亚砜(DMSO)对照组,均采用尾静脉注射的给药方式。4周后处死大鼠,应用HE染色和Masson染色分析左心室心肌组织病理学变化;应用RT-PCR分析心肌组织中PKD1、HDAC5和VEGF m RNA的表达;免疫组化及Western blot法分析心肌组织中PKD1、VEGF及HDAC5蛋白的表达。结果:组织病理学分析表明,假手术组和DMSO组大鼠心肌组织形态正常,而模型组大鼠心肌组织形态紊乱,心肌细胞坏死和纤维化明显;AS-IV治疗后,心肌组织形态改善明显,且新生的血管数量明显增多;AS-IV+CID755673处理后大鼠心肌组织形态再次趋向紊乱,坏死细胞增多,部分血管闭合。模型组心肌组织中PKD1、HDAC5和VEGF的m RNA和蛋白表达明显低于假手术组和DMSO组(P0.05),而AS-IV组显著高于模型组(P0.01),AS-IV+CID755673组明显低于AS-IV组(P0.05)。结论:AS-IV可部分通过调控PKD1-HDAC5-VEGF信号通路发挥促大鼠心肌梗死后心肌组织血管新生的作用。     

NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位IL-1β表达的影响

为探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制,本研究应用免疫组织化学方法检测各组豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位白介素-1β(IL-1β)免疫反应的变化。用Western blot方法分别检测各组豚鼠肺、C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和IL-1β的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。免疫组织化学结果显示(染色反应强度用灰度值表示):生理盐水组与单纯致敏组豚鼠IL-1β阳性免疫反应产物的平均灰度值没有显著差异(P>0.05);与这两个对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓背角内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显降低(P<0.01);在哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体),上述部位内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显高于哮喘组(P<0.01)。Western blot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠肺、C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中IL-1β或NGF目标带的IDV(integrated density value)与内参照IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组上述部位样品中IL-1β或NGF目标带的IDV与内参照IDV的比值均明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调IL-1β的表达。这些结果提示NGF诱发IL-1β的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位IL-1β的表达可能是治疗哮喘的新途径。