血管紧张素Ⅱ对人肾成纤维细胞的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对人肾成纤维细胞（ＫＦＢ）的影响。方法：采用ＥＬＩＳＡ法,四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法、流式细胞仪、免疫组织化学法分别检测ＡｎｇⅡ对ＫＦＢ分泌的胶原酶活性、ＫＦＢ增生、凋亡、Ⅰ型胶原表达的影响。结果;ＡｎｇⅡ能提高ＫＦＢ分泌的总胶原活性、促进味道一、抑制ＫＦＢ凋亡、促进ＫＦＢⅠ型胶原的表达。结论：ＡｎｇⅡ能通过促进ＫＦＢ增生、抑制ＫＦＢ凋亡、促进ＫＦＢⅠ型胶原的表达     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ对培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响。方法大鼠外膜成纤维细胞被随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ不同浓度(10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)和时间(6h、12h和24h)干预组及血管紧张素Ⅱ加AT1受体拮抗剂氯沙坦和/或AT2受体拮抗剂PD123319干预组,用RT-PCR及Western blotting技术结合光密度扫描分析,观察血管紧张素Ⅱ对培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞骨桥蛋白表达的影响。结果血管紧张素Ⅱ10-6mol/L明显刺激外膜成纤维细胞骨桥蛋白的表达,6h、12h和24h桥蛋白较对照组分别升高65.43%、97.03%和105.11%(P<0.05);而24h阴性对照无明显变化。不同浓度的血管紧张素Ⅱ均可诱导骨桥蛋白表达,10-8、10-7、10-6和10-5mol/L管紧张素Ⅱ孵育后分别升高了70.46%、97.37%、123.10%和147.59%(P<0.01)。在血管紧张素Ⅱ刺激前1h分别加入氯沙坦(10-5mol/L)、PD123319(10mmol/L)、氯沙坦(10-5mol/L) PD123319(10mmol/L),共同孵育12h后,其抑制率分别为58.9%、0.92%和59.7%。Western blotting分析,12h不同剂量血管紧张素Ⅱ干预组(10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)骨桥蛋白量较对照组分别提高了50.68%、63.03%和69.86%(P<0.05),氯沙坦明显抑制血管紧张素Ⅱ刺激的骨桥蛋白表达,抑制率达到61.7%(P<0.05),而PD123319作用后抑制作用不明显,抑制率仅为0.85%(P>0.05)。结论血管紧张素Ⅱ能在基因和蛋白水平上刺激大鼠外膜成纤维细胞骨桥蛋白的表达,此作用可能是通过AT1受体介导。     

血管紧张素Ⅱ对肾间质成纤维细胞的作用

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ Ⅱ）在肾间质纤维化过程中的作用机制。　方法：应用ＭＴＴ 比色法检测Ａｎｇ Ⅱ对成纤维细胞的增生,ＲＴＰＣＲ 检测纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ１）ｍＲＮＡ 的表达。　结果：Ａｎｇ Ⅱ可促进肾间质成纤维细胞增生及ＰＡＩ１ ｍＲＮＡ 的表达,且氯沙坦（１０ －４ｇ／Ｌ） 可抑制Ａｎｇ Ⅱ的促增生作用。　结论：Ａｎｇ Ⅱ可能通过直接作用于肾间质成纤维细胞,促进其增生,同时抑制细胞外基质的降解而参与肾间质纤维化的过程,而Ａｎｇ Ⅱ受体拮抗剂拮抗Ａｎｇ Ⅱ促细胞增生作用。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ促血管外膜成纤维细胞胶原生成作用的影响

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管外膜成纤维细胞胶原生成的影响及机制。方法体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,通过放射免疫法测定培养上清中ADM含量,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Western印迹法检测转化生长因子β1（TGFβ1）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA及蛋白的表达。结果AngII呈剂量依赖性地刺激血管外膜成纤维细胞分泌ADM,在AngⅡ（10^-6mol／L）刺激前30min加入氯沙坦或（和）PD123319,氯沙坦（10^-5mol／L）可明显降低AngⅡ刺激的ADM分泌,其抑制率为45％（P〈0．01）,而PD123319（10mmol／L）作用后抑制率仅为3％（P〉0．05）,氯沙坦＋PD123319组与单独氯沙坦组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖地抑制AngⅡ上述作用,其中ADM（10“mol／L）组中I、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30％和31％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了43％和42％（P〈0．01）。ADM受体拈抗剂ADM22-52可增强AngII上述作用,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别增加了38％和43％（P〈0．01）;ADM呈剂量依赖性抑制AngⅡ刺激的TGFβ1mRNA及蛋白表达,其中ADM（10^-8mol／L）组中TGFβ1mRNA及蛋白表达分别抑制了55％和45％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了70％和59％（P〈0．01）;AngⅡ明显下调细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达,ADM呈剂量依赖性抑制上述作用,其中10^-8mol／LADM组细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达分别增加了1．0和0．9倍。结论AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞释放ADM,而自分泌旁分泌的ADM可能通过下调细胞内TGFN表达和上调MMP-2表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥有效的抗血管重构作用。     

黄芪多糖对糖尿病足溃疡渗出液成纤维细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

糖尿病足溃疡渗出液中的IL-1β显著高于急性伤口，50μg／L IL-1β显著增加足溃疡渗出液中成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性及其蛋白表达，100mg／L黄芪多糖可降低MMP-2、MMP-9活性及其蛋白的表达，也可降低50μg／L IL-1β所致的MMP-2、MMP-9高活性及其蛋白高表达。     

辛伐他汀对脂多糖诱导新生大鼠心肌成纤维细胞NO生成和AT2R蛋白表达抑制的影响

目的研究辛伐他汀（Sim）对脂多糖（LPS）调控心肌成纤维细胞（CFs）一氧化氮（NO）生成和血管紧张素Ⅱ受体2型（AT2R）蛋白表达的干预效应。方法体外培养新生大鼠CFs,以第1代CFs作为实验对象,采用硝酸还原酶法测定细胞内NO产量,Western blot检测细胞AT2R蛋白的表达,以AT2R/β-actin值对AT2R表达进行半定量。结果与LPS（10mg/L）单独作用组相比,0.01μmol/L和0.1μmol/L Sim与LPS共同作用组CFs的NO生成和AT2R/β-actin值无显著差异;在1μmol/L和10μmol/LSim与LPS共同作用组,NO生成量显著低于LPS单独作用组（均P<0.01）,而AT2R/β-actin值显著高于LPS单独作用组（分别有P<0.05和P<0.01）。结论高浓度Sim可拮抗LPS引起的NO生成增加和AT2R蛋白表达下降。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球系膜细胞MMP-2和TIMP-2 mRNA表达的影响

正常大鼠肾小球系膜细胞的实验研究显示，血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）对其质金属蛋白酶-2（MMP-2）的mRNA表达起降调节作用，对MMP-2基质金属蛋白酶组织抑制物-2（TIMP-2）的mRNA表达无明显影响。结果是，ATⅡ对MMP-2mRNA／TIMP-2mRNA二者表达的比值，起到降调节作用。     

舒血通络胶囊对动脉粥样硬化大鼠AngⅡ、NO表达及血液相关指标的影响

目的 研究舒血通络胶囊对动脉粥样硬化(AS)大鼠血脂、腹主动脉壁血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、致炎症细胞的比例、一氧化氮(NO)影响.方法 采用维生素D3连续灌胃3 d,标准饲料喂养9周,造成AS模型.观察舒血通络胶囊对AS大鼠血脂、腹主动脉壁AngⅡ致炎症细胞的比例、血清中NO含量的影响.结果 舒血通络胶囊可以显著降低AS大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);模型组大鼠腹主动脉壁中AngⅡ致炎症性细胞的比例较空白组、方药组明显升高(P<0.05);方药组大鼠血清中NO含量较空白组、模型组明显升高(P<0.05).结论 舒血通络胶囊抗AS的作用机制可能是通过抑制AS大鼠血管壁AngⅡ的生成、升高血清中NO的含量来实现的.     

血管紧张素-Ⅱ对成纤维细胞的作用及其机制

1 血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)来源及作用众所周知：肾小球入球小动脉内球旁细胞可以产生分泌颗粒，利用免疫细胞化学方法证明该颗粒为肾素。血管紧张素原主要由肝脏产生并分泌到血液循环中，肾素作用于血管紧张素原而生成血管紧张素-ⅠI(AT—Ⅰ)，AT—Ⅰ主要在肺血管内皮细胞上血管紧张素转换酶的作用下转变成血管紧张素-Ⅱ(AT—Ⅱ)，以AT-Ⅱ形式发挥生理作用。AT-Ⅲ、Ⅳ等均为AT-Ⅱ降解产物，是由蛋白水解酶去除部分肽段形成，但该降解产物可能起到部分AT-Ⅱ作用或其他目前未知的作用。AT-Ⅱ是一种血管强烈收缩因子，其在维持机体血压稳定中起重要作用，目前越来越多证据证明局部肾素-血管紧张素系统的存在。     

血管紧张素Ⅱ诱导血管外膜成纤维细胞产生结缔组织生长因子

目的 研究血管外膜成纤维细胞(AF)能否产生结缔组织生长因子(CTGF)，以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对CTGF的影响。方法 组织贴片法培养WKY大鼠主动脉AF，经AngⅡ(10^-7～10^-9mol／L)处理，应用免疫细胞化学和Western blot的方法，观察CTGF的表达，及AT1受体阻断剂氯沙坦和AT2型受体阻断剂PD123319干预后的CTGF表达。结果 免疫细胞化学显示AF表达CTGF，AngⅡ可以诱导AF以及其上清液中CTGF表达增加。Western blot显示AngⅡ诱导CTGF表达呈剂量和时间依赖性。10^-7mol／L AngⅡ刺激24h诱导AF产生CTGF作用最强。AngⅡ诱导CTGF表达增加作用可以被氯沙坦阻断，而不受PD123319影响。结论 AngⅡ通过AT1受体诱导CTGF合成。     

血管紧张素Ⅱ和醛固酮对培养鼠心脏成纤维细胞Bcl-2蛋白表达的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮对培养的大鼠心脏成纤维细胞Bcl-2蛋白表达的影响,探讨其引起心肌间质成纤维细胞数目增多的原因。方法培养SD大鼠乳鼠心脏成纤维细胞,以10^-8mol／L AngⅡ或10^-8mol／L醛固酮作用于心脏成纤维细胞,24h后收集细胞涂片,进行免疫组化染色,观察Bel-2蛋白的表达情况。得到阳性结果加其拮抗剂。结果10^-8mol／LAngⅡ对心脏成纤维细胞刺激24h后,Bcl-2蛋白的表达呈阴性;10^-8mol／L醛固酮作用24h后,Bcl-2蛋白的表达呈阳性,其受体拮抗剂螺旋内酯可拮抗醛固酮的作用。结论醛固酮促进心脏成纤维细胞Bel-2蛋白的表达,提示醛固酮有可能通过抑制其凋亡的途径使心脏成纤维细胞数目增多,这一作用是通过其核受体实现的：AngⅡ无类似作用,其引起心脏成纤维细胞增多的机制需进一步研究。     

多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

目的:观察多聚二磷酸腺苷核糖合成酶(PARP)抑制剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的乳鼠心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因转录的影响.方法:新生SD大鼠心脏成纤维细胞原代培养,传代.用PARP抑制剂--3-氨基苯甲酰胺(3-AB)预处理细胞,观察3-AB对AngⅡ诱导心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的影响.结果:AngⅡ刺激心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达明显增加,成纤维细胞内PARP活性及PARP1的表达显著增强.使用3-AB抑制PARP1的活性及表达,可以明显降低AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因表达的增加.结论:PARP在AngⅡ诱导的心脏重构过程中发挥了重要的调控作用.     

松弛素对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响

目的:探讨松弛素(RLX)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响及机制。方法:体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,随机分为对照组、AngⅡ组(10-6 mmol/L),RLX组(100μg/L)及AngⅡ+RLX组。采用波形蛋白染色法鉴定血管外膜成纤维细胞,用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达,用Western blot印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达。结果:AngⅡ可显著增加培养液上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量及TGF-β1蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用;AngⅡ可显著下调细胞内MMP-2和MMP-9的蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用(均P<0.05)。结论:AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞胶原合成增加,而RLX通过上调MMP-2、MMP-9表达和下调TGF-β1表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥抗血管纤维化作用。     

潜阳通络方对肝阳上亢型高血压病大鼠血压及血管内皮细胞功能的影响

目的探讨潜阳通络方的降压作用及对血管内皮细胞功能的影响。方法自发性高血压大鼠加灌附子汤制备肝阳上亢大鼠模型，观察潜阳通络方对肝阳上亢型高血压病大鼠血压、血浆内皮素（ET）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和血清一氧化氮（NO）含量的影响。结果与模型组相比，潜阳通络方能明显降低肝阳上亢型高血压病大鼠的血压（P〈0.01），升高血清中NO（P〈0.05），降低血浆中ET（P〈0.01）和AngⅡ（P〈0.05）。结论潜阳通络方可通过改善血管内皮细胞功能而产生较好的降压疗效。     

肾上腺髓质素对大鼠血管外膜成纤维细胞迁移的影响

目的研究肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素II（Ang II）诱导的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞迁移的影响。方法采用体外培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞,运用Transwell技术测定不同浓度ADM对外膜成纤维细胞迁移的影响,用RT-PCR及Western blotting分析Ang II（1×10-6mol/L）及不同浓度ADM干预后大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞内骨桥蛋白的表达。结果在Ang II（1×10-6mol/L）趋化作用下,外膜成纤维细胞迁移活性较对照组显著增强,ADM可抑制Ang II刺激的细胞迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着ADM浓度增加而减少;Ang II（1×10-6mol/L）诱导骨桥蛋白呈高表达,ADM可下调这种表达,呈一定剂量依赖性。结论ADM明显抑制Ang II刺激的外膜成纤维细胞迁移,并且ADM可以抑制Ang II刺激的骨桥蛋白表达。     

HMGB1对心脏成纤维细胞MMP-9表达的影响及其机制研究

目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其可能的机制。方法培养大鼠心脏成纤维细胞,予以100ng/ml浓度HMGB1干预,采用CCK-8检测细胞活力;Westernblot方法检测胞内及细胞上清中MMP-9水平,RAGE与TLR4表达水平及ERK1/2的磷酸化水平。结果 (1)HMGB1干预心脏成纤维细胞24小时,细胞活力与对照组相比无显著差异。(2)HMGB1干预心脏成纤维细胞24小时,胞内MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05),而细胞上清中MMP-9水平显著升高(P<0.05)。(3)HMGB1干预心脏成纤维细胞24小时,TLR4表达升高(P<0.05)而RAGE表达无显著差异。(4)HMGB1干预心脏成纤维细胞5分钟,ERK1/2显著活化(P<0.05)。(5)TLR4中和抗体(20ug/ml)阻断TLR4后,HMGB1+TLR4阻断组的p-ERK1/2表达较HMGB1干预组明显降低(P<0.05)。结论 HMGB1可能通过TLR4活化ERK1/2,促进心脏成纤维细胞分泌MMP-9,进而破坏心肌胶原结构,参与心肌重构。     

替米沙坦对大鼠急性心肌梗死后心肌成纤维细胞的影响

目的观察替米沙坦对大鼠急性心肌梗死(AMI)后梗死区和非梗死区的心肌成纤维细胞活化、增殖和心肌纤维化的动态影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支造成 AMI.术后24 h存活114只.随机分为 AMI 组和替米沙坦治疗组(治疗组),另设假手术组。治疗组于每天上午8时灌胃(替米沙坦60 mg·kg~(-1)·d~(-1)),其余均喂食等量蒸馏水,于4、7、14 d和28 d后测量大鼠心率、血压、心室重量/体重(VW/BW),并计算存活率及梗死区和非梗死区心肌成纤维细胞活化、增殖和胶原容积分数(CVF)。结果 (1)28 d时,治疗组的累积存活率明显高于 AMI 组(45%和40%,P<0.05);14、28 d时治疗组心室相对重量明显低于 AMI 组(P<0.05)。(2)梗死后4 d,AMI 组和治疗组大鼠的梗死区出现大量的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白 VA 表型阳性细胞,7 d后逐步降低;同时该区细胞增殖细胞核抗原(PCNA)染色阳性;28 d时,治疗组α-SMA 及 PCNA 阳性率明显低于 AMI 组(P<0.05),而在非梗死区,α-SMA 及 PCNA 阳性率较低,各组间差异无统计学意义。(3)28 d时,治疗组梗死区 CVF 明显低于 AMI 组(P<0.05);在非梗死区,14、28 d时,治疗组 CVF 明显低于 AMI 组(P<0.01)。结论替米沙坦可改善大鼠 AMI 后心室重构并降低病死率,可明显抑制梗死区成纤维细胞表型转化和增殖,并降低梗死区和非梗死区 CVF。     

血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径。方法 体外培养心肌成纤维细胞(CFB)，分别加入不同浓度AngⅡ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein)，测定细胞^3H—TdR和^3H—Leu掺入率。结果 AngⅡ浓度依赖性促进CFB的^3H—TdR和^3H—Leu掺入率，洛沙坦可完全抑制该效应．Genistein部分抑制该效应。结论 外源性AngⅡ通过CFB的AT1R对该细胞产生增殖反应，作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导。     

RhoA/ROCK通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化

目的血管外膜成纤维细胞(AF)的表型转化在血管重塑过程中起了重要作用。通过观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管AF中RhoA/ROCK通路活性的影响,探讨该通路在AF/肌成纤维细胞(MF)表型转化中的作用。方法AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠血管AF,测定刺激后10、30min RhoA的活性变化,并分别测定2、6、12、24hROCK底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(MYPT1)的磷酸化水平,Western blot检测AF/MF表型转化标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,并观察腺病毒dominant negative N19RhoA(dnN19RhoA,MOI=200)和ROCK抑制剂Y27632(10μmol/L)对α-SM-actin表达的影响。结果AngⅡ刺激使AFRhoA活性的明显增强及ROCK底物MYPT1的磷酸化水平明显增加。刺激30min RhoA活性约为未刺激的3倍,刺激12hMYPT1的磷酸化约为未刺激的3.5倍。dnN19RhoA和Y27632均可明显抑制AngⅡ诱导的血管AFα-SM-actin表达,抑制α-SM-actin表达程度均约为75%。结论AngⅡ可激活血管AF中的RhoA/ROCK通路,该通路参与了AngⅡ诱导的血管AF/MF表型转化。     

肾上腺髓质素对血管外膜成纤维细胞迁移及胶原生成的影响

目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)迁移及胶原生成的影响及机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉AF,运用Trans well技术测定不同浓度ADM对AF迁移的影响,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用RT-PCR及Western blotting分析AngⅡ(10-6mol/L)及不同浓度ADM干预后大鼠胸主动脉AF内骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA及蛋白的表达。结果:在AngⅡ(10-6mol/L)趋化作用下,AF迁移数目较对照组显著增多[(30.26±1.08)∶(4.35±1.26),P<0.01]。ADM可抑制AngⅡ刺激的细胞迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着ADM浓度增加而减少;AngⅡ(10-6mol/L)诱导OPN呈高表达,ADM可下调这种表达,呈一定剂量依赖性;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖的抑制AngⅡ上述作用,其中10-8mol/LADM组中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30%和31%(P<0.01),10-7mol/LADM组则分别抑制了43%和4...