低温微重力培养对大鼠胰岛细胞质量影响的实验

目的:研究低温微重力对大鼠胰岛移植质量的影响，以期减少体外培养对胰岛活性和数量的影响，提高胰岛移植质量。方法:将分离纯化的大鼠胰岛分为3组：大鼠新鲜胰岛移植组（于移植前在普通培养基中培养21 d,对照组）；实验1组（大鼠新鲜胰岛在37 ℃ RCCS中培养21 d）；实验2组（新鲜大鼠胰岛在26 ℃ RCCS中培养14 d后复温至37 ℃继续在37 ℃ RCCS中培养7 d）。　观察各种培养液中的胰岛素含量。并将上述3个实验组不同条件培养的胰岛分别以2000IEQ胰岛移植量植入糖尿病大鼠体内，并观察10周。结果:实验2组的胰岛存活率、胰岛素分泌水平及胰岛素刺激指数均高于对照组和实验1组，差异有统计学意义(P＜0.05)。21 d时实验2组胰岛存活率高达(67.4±4.6)%，而对照组和实验1组胰岛存活率分别降至(28.1±3.3)%和(50.3±3.5)%，3组间差异有统计学意义(P＜0.05)。给糖尿病大鼠移植实验1，2组的胰岛后均能控制血糖至正常水平，但实验2组胰岛移植对糖尿病大鼠7 d内血糖控制优于实验1组；对照组血糖控制差，3组间两两比较均有统计学差异（均P＞0.05）。结论:大鼠胰岛经低温微重力培养后移植，可以明显提高1型糖尿病大鼠的治疗效果。     

胰岛移植

胰岛移植张学春，谭毓铨胰岛素治疗Ⅰ型糖尿病（ＩＤＤＭ）不能完全避免糖尿病性血管、神经病变的发生和发展。移植分泌胰岛素的细胞、组织或器官为ＩＤＤＭ患者提供了可靠的治疗手段。虽然目前胰岛移植的效果还不如胰腺移植，还不能取代药物治疗，然而迄今在治疗ＩＤＤＭ...     

胰岛移植进展

近年来 ,随着胰岛分离、纯化技术的不断改进以及新型免疫抑制剂的问世和应用 ,临床同种胰岛移植已取得令人瞩目的进展[1 2 ] ,有可能在今后数年内得以广泛开展。本文对这些方面的进展作一综述。一、国际胰岛移植登记处的报告据国际胰岛移植登记处 (ITR)最近公布的结果 ,截止到2 0 0 0年 12月 31日 ,全球共有 5 1个研究中心开展了 4 93例成人胰岛移植 ,术后不依赖胰岛素的持续时间超过 12、2 4、36和 4 8个月的例数分别为 4 0、2 2、11和 6例。自体胰岛移植后停用胰岛素最长者已达 13年 ;Ⅰ型糖尿病 (IDDM )患者同种异体胰岛移植后停用胰…     

检测谷氨酸脱羧酶和胰岛细胞抗体早期诊断成人迟发性自身免疫性 …

目的：通过谷氨酸脱羧酶抗体（ＧＡＤＡ）和胰岛细胞抗体（ＩＣＡ）的检测,探讨其对成人迟发性自身免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）早期诊断的价值。方法：１２５例３０岁以后起病的开始无酮症、非胰岛素依赖≥６个月的糖尿病（ＤＭ）患者。其中７２例为需要胰岛素治疗的ＤＭ（ＩＴＤＭ）组,按１００ｇ馒头餐刺激前后的血清ＣＰ水平分为两个亚组：胰岛素缺乏组（ｎ＝３５）和非胰岛素缺乏组（ｎ＝３７）;另外５３例为口服降糖药（ＯＨＡ     

微重力培养提高冻存大鼠胰岛移植的效果

目的观察大鼠胰岛冻存后经三维微重力细胞旋转培养系统(RCCS)培养后移植给受者能否明显提高胰岛移植的效果。方法将分离纯化的大鼠胰岛分为3组。实验1组:即将胰岛在RCCS中培养3d后,悬浮于4℃低温保存液(HTS)中,放置30min,然后进行冻存步骤;冻存1个月后进行复苏,继续在RCCS中培养30d;实验2组:新鲜大鼠胰岛在RCCS中培养30d;对照组:大鼠胰岛在冻存前后均在普通培养基中培养,培养步骤和时间同实验1组。上述3组胰岛复苏后再按各组应用的培养体系培养7d,然后分别以2000IEQ冻存或新鲜胰岛移植入糖尿病大鼠体内,并观察10周。结果每个胰腺纯化后最多收获胰岛1058.47IEQ,最少411.88IEQ,平均(826.95±93.42)IEQ。实验1组、实验2组的胰岛收获率、细胞内胰岛素和DNA含量以及胰岛素刺激指数均高于对照组(P<0.05);实验2组和实验1组的2000IEQ新鲜胰岛或冻存胰岛在移植后1周内可100%纠正糖尿病。结论大鼠胰岛冻存前后经微重力培养后移植可以明显提高1型糖尿病大鼠的治疗效果。     

全程超声引导下经皮门静脉穿刺胰岛移植治疗糖尿病16例报道

目的探讨全程超声引导下经皮门静脉穿刺胰岛移植治疗糖尿病的方法及应用价值。方法回顾性分析2018年10月至2021年5月在中山大学附属第一医院16例次接受全程超声引导下经皮门静脉穿刺胰岛移植治疗糖尿病的受者的临床资料。16例次全程通过超声引导完成移植管路经皮门静脉穿刺植入、胰岛输注监测、穿刺道预防出血处理及出血后的消融止血处理。结果 10例受者[男8例, 女2例, 年龄(45.9±21.1)岁]共接受16次胰岛移植, 其中5例接受1次胰岛移植, 4例接受2次, 1例接受3次。在所有移植过程中均实现一次穿刺成功, 未损伤其他肝外器官, 无持续性门静脉高压、门静脉栓塞、感染发生。3例次术后肝穿刺口出血, 即行超声射频消融止血。16例次胰岛移植术后, 全部受者血糖稳定维持在4～12 mmol/L;5例次(31.3%)实现胰岛素撤除两个月以上, 10例次(62.5%)胰岛素用量较术前减少1/2以上;10例次(62.5%)空腹C肽水平恢复或高于正常水平, 其余空腹C肽水平亦有提升。11例次(68.8%)胰岛移植后受者出现肝脏转氨酶短暂轻度升高, 未见其他并发症。结论全程超声引导下经皮门静脉穿刺胰岛...     

胰岛移植时胰岛细胞结构和功能改变导致胰岛细胞死亡

胰腺移植是治愈糖尿病及防止并发症的唯一手段。成功的胰岛细胞移植的标志是在无外源性胰岛素情况下,患者的血糖保持正常。但目前胰岛细胞移植的成功率极低,294例中仅11％受体不依赖胰岛素时>1周,一年后随访,只有7％的患者摆脱了胰岛素。移植失败的原因,一般认为是免疫排     

成人胰岛细胞的分离纯化及初步的临床应用

目的分离及纯化成人胰岛,以用于同种胰岛细胞移植。方法利用胶原酶灌注消化以及Ficoll分离液分层纯化的方法获得成人胰岛细胞,并应用于2例临床糖尿病患者。结果经双硫腙染色鉴定,分离纯化后的胰岛细胞活性达到80%~90%;且经胰岛素释放试验表明,实验中收获的胰岛具有良好的胰岛素分泌功能。经临床试验,1例糖尿病患者在输入此胰岛后,已脱离胰岛素治疗;另1例患者已停止服用降糖药。结论用胶原酶灌注消化及Ficoll分离液分层纯化的方法获得成人胰岛细胞是可行的。     

肾移植后胰岛移植治疗2型糖尿病1例

目的 探讨肾移植后行胰岛移植治疗2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）的安全性及有效性。方法 1例慢性肾功能衰竭合并T2DM的患者在肾移植术后3个月行胰岛移植治疗。患者在移植前依赖胰岛素治疗,用量为1.26 U/（kg·d）。采用TIPS入路手术：经颈内静脉插入穿刺导管,通过肝右静脉,在肝实质内穿刺门静脉右支,建立门体通道,置管入门静脉主干,将移植的胰岛细胞缓慢注入受者肝脏中。免疫诱导应用巴利昔单抗,联合依那西普。术后免疫抑制方案继续应用他克莫司、吗替麦考酚酯。术后监测血糖、糖化血红蛋白、胰岛素功能系列、以及外源胰岛素用量等。结果 术后当日血糖正常,暂停外源胰岛素,术后1周空腹血糖4.8～8.5 mmol/L,餐后血糖6.9～15.1 mmol/L,术后1周外源胰岛素总量较术前下降了50.14%。术后1周受者糖化血红蛋白为6.3%（术前为6.6%）。术后空腹及餐后C肽及胰岛素水平较术前均有所增长。术后1周行胰岛素释放及C肽释放试验结果提示移植胰岛功能部分恢复,胰岛素分泌有节律。结论 肾移植后胰岛移植对胰岛素依赖的2型糖尿病是一种有效且安全的治疗方式。     

胎胰移植研究进展

自1893年,英国医生威廉第一次试用异种胰腺组织片移植治疗人糖尿病开始,尤其是最近10余年,不少学者在动物实验和临床实践中,对各种来源的胰腺胰岛组织进行了移植观察,发现胎胰作为供体组织,具有许多优点:(1)胎胰富含胰岛组织;(2)胎胰内分泌组织在体内和体外适当条件下具有很大增殖潜力;(3)胎胰外分泌组织较少,移植前可不需特殊制备;(4)胎胰体积较小,冷冻保护剂容易渗透,有利于进行冷冻保存;(5)体外处理可改变胎胰组织的免疫源性。以胎胰作为供体组织,治疗胰岛素依赖型糖尿病,可以说是胰岛移植研究的一个进展。     

胎肝胰岛细胞联合移植治疗糖尿病大鼠

目的探讨胎肝胰岛细胞联合移植治疗糖尿病大鼠的效果,以及胎肝细胞移植诱导糖尿病受者鼠免疫耐受的可行性.方法建立SD大鼠糖尿病模型,将实验动物随机分为正常对照组、糖尿病对照组、胰岛细胞组及肝细胞胰岛细胞联合移植组.将SD胎鼠的胰岛细胞移植于受者浆膜下,观察受者鼠的糖尿病病情变化及免疫状态.结果移植后58.8%(20/34)动物糖尿病得到缓解.联合移植组移植胰岛细胞存活期较胰岛细胞组明显延长(P<0.01);移植后1周,联合移植组血清胰岛细胞肽水平明显高于胰岛细胞组和糖尿病对照组(P＜0.01);脾细胞产生白细胞介素2(IL-2)的活性联合移植组显著低于胰岛细胞组(P＜0.001).结论胃浆膜下是大鼠胰岛移植较理想的移植部位;肝细胞移植可以明显延长移植胰岛细胞的功能存活期,并诱导受者产生特异性免疫耐受和非特异性免疫抑制.     

成人胰岛移植治疗2型糖尿病三例

目的 探讨成人胰岛移植治疗2型糖尿病的安全性与有效性.方法 为3例合并慢性肾功能衰竭的2型糖尿病患者共施行4次胰岛移植,其中2例接受成人胰岛细胞和肾联合移植(每例的胰岛细胞和肾脏来自同一供者,以下简称"联合移植"),1例为肾移植术后5个月连续2次接受胰岛细胞移植,2次胰岛细胞移植间隔9 d.3例移植前均依赖胰岛素治疗,用量为0.5～0.7IU·kg-1·d-1.采用经皮肝门静脉穿刺,胰岛悬液重力输注,将移植胰岛注入到受者的肝脏内.2例联合移植者以巴利昔单抗诱导,术后采用低剂量他克莫司+西罗莫司维持治疗;1例肾移植术后胰岛移植者采用环孢素A+吗替麦考酚酯维持治疗.术后观察胰岛素使用情况,监测血糖、C-肽与糖化血红蛋白水平.结果 第1例联合移植者术后第3天血糖正常,停用外源性胰岛素,但术后1个月时患者的血糖逐渐升高,遂给予少量胰岛素,与术前相比,胰岛素减量2/3.第2例联合移植者术后24 h血糖即恢复正常,停用外源性胰岛素,术后第5天死于肝穿刺部位出血及继发感染.肾移植术后胰岛移植的患者在第1次胰岛移植后胰岛素用量即减少1/2,第2次胰岛移植后完全停用胰岛素.与术前相比,长期存活的2例受者术后空腹C-肽和餐后2 h C-肽值平均升高600 pmol/L.联合移植者术后糖化血红蛋白波动于6.7%～7.3%,肾移植后胰岛移植受者的糖化血红蛋白波动于5.5%～5.9%.结论 成人胰岛移植可有效治疗达到胰岛素依赖期的2型糖尿病.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of islet transplantation for patients with type 2diabetes mellitus (DM). Methods Since December 2007, 4 cases of islet transplantations were performed on 3 patients with type 2 DM and end-stage renal disease (ESRD). Two patients received simultaneous islet-kidney transplant from single-donor (SIK), and one received 2 consecutive islet transplants 5 months following kidney transplantion (IAK). All recipients given insulin with a dose of percutaneous transhepatic portal catheterization. Anti-CD25 monoclonal antibody was used as induction. For SIK, low-doses of Tacrolimus and sirolimus were used as maintenance immunosuppression protocol. For IAK, the maintenance protocol included cyclosporine and MMF.Insulin dose, the level of blood glucose, C-peptide and the value of HbA1 were observed. Results The first patient of SIKhad normal glucose level 3 days after surgery and became insulin independent within the first month, but insulin was administered gradually and the dose reduced to 1/3. The second patient of SIK died of bleeding and secondary infection of liver puncture site 5 days following operation, the blood glucose level recovered to normal 24 h after operation. The insulin dose of the patient of IAK was reduced to 1/2 after the first transplant. The patient became insulin free after the second operation. The level of fasting and postprandial C-peptide of the surviving recipients increased by 600 pmol/L. The value of HbA1 of the SIK was 6.7 %～7.3 %, while that of the IAK was 5. 5 %～ 5. 9 %. Conclusion Islet transplantation is an effective treatment for patients with type 2 DM.     

网膜囊——胰岛细胞移植的新位点

临床胰岛细胞移植已在全世界范围内广泛开展,其理想效果能使糖尿病患者达到胰岛素非依赖。目前,肝脏作为最主要的胰岛细胞移植位点,具有其特有的优势：门静脉系统呈递胰岛素可避免全身高胰岛素血症,手术操作相对简单、创伤小。但这种方法也存在显著缺点：术后早期易激活凝血系统,引起血栓形成,导致早期移植胰岛失功;     

胰岛移植治疗1型糖尿病的现状和未来

1型糖尿病是一种全球性的慢性自身免疫疾病,会造成机体一系列代谢紊乱综合征,严重危害人类健康。胰岛移植可以通过增加1型糖尿病患者体内胰岛细胞的数量,减少患者对外源性胰岛素的依赖、有效控制血糖以及防治长期并发症,是一种安全可靠的治疗方法,这都是外源性胰岛素治疗和移植风险极高的全胰腺移植无法实现的。本文就胰岛移植供受体选择、胰岛细胞的分离纯化及胰岛移植、胰岛移植后的免疫抑制治疗、胰岛移植后的监测指标、胰岛移植临床应用的现状以及面临的挑战做一综述。     

成人胰岛细胞移植治疗1型糖尿病

目的 探讨新型成人胰岛细胞分离、纯化技术分离的成人胰岛细胞移植治疗1型糖尿病的安全性与有效性.方法 采用全氟化碳液(PFC)和UW液双层冷藏胰腺,Liberase酶消化,COBE 2991型专用胰岛细胞分离机分离及连续密度梯度纯化,获取高纯度与高活性的胰岛细胞.通过上腹部小切口,胃右静脉或脐静脉插管,将经短期培养的胰岛细胞经门静脉移植到11例1型糖尿病患者肝脏内.采用达利珠单抗或阿来佐单抗进行诱导,西罗莫司和他克莫司联用的方案预防排斥反应,术后观察胰岛素使用情况,监测血糖、G-肽与糖化血红蛋白水平以及肝功能、肾功能.结果 45个胰腺中,42个成功分离出胰岛细胞,其数量平均为28.5×104胰岛当量(IEQ)/个,纯度为95.7%,活率为93.2%,胰岛素释放试验刺激指数为2.43.11例1型糖尿病患者共行胰岛细胞移植20次,其中移植1次4例,2次5例,3次2例,每次移植胰岛细胞数平均为11 200 IEQ/kg.术后随访6个月至4年,6例完全撤除胰岛素,2例胰岛素用量较术前减少80%,3例减少50%.术后血糖稳定维持在正常水平,C-肽均超过0.166 nmol/L,糖化血红蛋白基本正常,肝、肾功能正常,未发生与胰岛细胞输注相关的并发症.结论 新型成人胰岛细胞分离、纯化方法可靠,采用该技术分离、纯化的成人胰岛细胞移植治疗1型糖尿病临床效果较好.     

输注胰岛抗原特异性Treg细胞延长同系NOD小鼠移植胰岛的存活时间

目的 探讨输注胰岛抗原特异性调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠同系胰岛移植物存活时间的影响.方法·以未成熟树突状细胞(imDC)联合谷氨酸脱羧酶-65在体外诱导童贞T淋巴细胞分化成胰岛抗原特异性Treg细胞.以已发生糖尿病的NOD小鼠为受者,将分离得到的尚未进展为糖尿病的NOD小鼠的胰岛(500胰岛当量)移植至受者的肾包膜下,对照组不行移植,只观察血糖变化;单纯胰岛移植组只进行胰岛移植,不输注胰岛抗原特异性Treg细胞;实验组于术前1d静脉输注1×106个胰岛抗原特异性Treg细胞,然后进行胰岛移植.术后检测受者的血糖,以判断移植胰岛的存活时间,观察胰岛移植物的病理学变化.结果 对照组血糖持续高于11.1 mmol/L;单纯胰岛移植组小鼠的血糖于术后1～2 d降至正常,到7～17d时开始陆续升高,并维持在术前水平,移植物存活时间为(12.2±2.6)d;实验组小鼠的血糖于术后1～2 d降至正常,至第27天开始有小鼠血糖升高超过11.1 mmol/L,第43天时,所有小鼠的血糖均超过11.1mmol/L,移植物的存活时间为(35.2±4.3)d,明显长于单纯胰岛移植组(P＜0.01).单纯胰岛移植组的移植胰岛有明显的淋巴细胞浸润,并伴有胰岛细胞严重破坏,胰岛素染色未见完整的胰岛存在,仅有极少量残存的分泌胰岛素的胰岛细胞;实验组第15天时移植胰岛形态完整,仅有少量淋巴细胞浸润,分泌胰岛素的胰岛大量存在.结论 体外诱导产生的胰岛抗原特异性Treg细胞可以延缓自身免疫系统对移植胰岛的破坏,明显延长NOD小鼠移植胰岛的存活时间.     

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近 10年来 ,糖尿病患病率在世界各国急剧上升 ,已逐渐成为全球性问题。以美国为例 ,糖尿病病人目前有 140 0万例 ,其中 1型糖尿病有 10 0多万例。理论上 ,胰腺移植或胰岛细胞移植能增加病人的胰岛素分泌细胞 ,从而有效地控制糖代谢 ,防止和改善糖尿病的并发症[1～ 3 ] ,同时还有助于避免外源性胰岛素治疗带来的低血糖和胰岛素拮抗[3 ] 。近几年来美国ＮＩＨ对糖尿病研究的基金成倍增加 ,大有赶上癌症基金的趋势。最近 ,世界上著名的糖尿病基金会(ＪｕｖｅｎｉｌｅＤｉａｂｅｔｅｓＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ ,ＪＤＦ)出资 2 0 0 0万美元用于移植…     

中西医结合治疗糖尿病肾病186例临床分析

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病 (ＤＭ )的严重并发症之一 ,已成为终末期肾衰竭最常见原因。但是 ,目前尚未发现一种对ＤＮ的进展有确切治疗效果的临床药物[1] 。为此 ,我们对 186例ＤＮ患者的治疗进行分析 ,总结如下。资料与方法1　病例选择　全部病例均为我院 1998年 1月至 2 0 0 0年 12月住院的ＤＮ患者共 186例。其中 ,男 98例 ,女 88例 ;年龄 36岁～ 72岁 ,病程 3月～ 2 7年 ,均符合 1985年ＷＨＯ的ＤＭ诊断标准及中国肾病基金会制定的ＤＮ蛋白尿的诊断标准。并除外其它可引起尿蛋白排出增加的原因。2　治疗方法　常规糖尿病饮食 ,应用胰岛…     

小鼠骨髓间充质干细胞减轻胰岛移植物排斥反应的作用

目的 探讨同种异基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)与胰岛联合移植对胰岛移植物的免疫调节作用.方法 将18只糖尿病模型小鼠随机分成3组:(1)糖尿病组,不进行任何移植;(2)胰岛移植组,在无菌操作下将10μl纯化后的200个胰岛移植于受者的左肾包膜下;(3)胰岛+MSC移植组,除与胰岛移植组进行相同的移植外,还在胰岛移植前3、2、0d经受者尾静脉分别注射1×106个MSC.移植后,连续监测非空腹血糖至第30 d;第14和28 d对移植部位的左肾进行组织病理学观察;采集外周血进行免疫荧光染色,流式细胞术分析TH1/TH2、Tc1/Tc2细胞的比值、初始和记忆T淋巴细胞的变化、以及骨髓来源的树突状细胞(DC)成熟度和功能的变化.结果 与胰岛移植组比较,胰岛+MSC移植组血糖明显降低,移植部位炎症细胞浸润明显减轻,移植物的存活时间延长;TH1和Tc1细胞明显下降,TH2和Tc2细胞升高,TH1/TH2和Tc1/Tc2细胞比值显著下降;初始T淋巴细胞和记忆T淋巴细胞下调;DC成熟度降低,分泌白细胞介素12(IL-12)的能力下降.结论 MSC与胰岛联合移植可通过对T淋巴细胞和树突状细胞的免疫调节作用,减轻胰岛移植物的排斥反应,从而延长移植胰岛的存活时间.     

体外转染可溶性IL-1RI-Ig基因延长糖尿病小鼠移植胰岛细胞存活时间

目的 探讨糖尿病小鼠移植经可溶性白细胞介素1(IL-1)受体胞外段Fc融合蛋白(sIL-1RI-Ig)基因修饰的胰岛细胞对延长移植物存活时间的作用及机制.方法 将Ad-sIL-1RI-Ig体外转染Balb/c小鼠的胰岛细胞,并将其移植给糖尿病C57BL/6小鼠,观察移植物的存活时间,并检测移植局部组织炎症细胞的浸润以及炎症细胞因子的表达.结果 糖尿病小鼠移植转染sIL-1RI-Ig基因的胰岛细胞后,血糖水平很快下降至正常范围,胰岛移植物存活时间达(39±3)d,而移植正常胰岛细胞的小鼠胰岛移植物存活时间为(9±2)d(P<0.01).糖尿病小鼠移植转染sIL-1RI-Ig基因的胰岛细胞后,胰岛素分泌量随糖负荷增加而升高,并与胰岛素分泌功能正常的小鼠呈相似变化趋势(P>0.05).糖尿病小鼠移植转染sIL-1RI-Ig基因的胰岛细胞后,移植局部组织表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和RANTES等水平明显下调;病理学观察发现移植局部组织浸润的炎症细胞明显少于移植正常胰岛细胞的小鼠.结论 sIL-1RI-Ig基因转染胰岛细胞后,可通过表达sIL-1RI-Ig,阻断IL-1的作用,降低TNF-α、IFN-γ、RANTES等细胞因子的表达,从而减轻排斥反应,延长胰岛细胞移植物的存活时间和提高胰岛素分泌功能.