哺乳动物细胞的基因转移

基因转移是借助于物理的、化学的或生物的手段将外源基因导入受体细胞并检查其在该细胞内表达情况的一种技术,是分子生物学手段和细胞生物学手段的结合。在生命科学发展到当今水平的时代里,基因转移是一项重要而应用广泛的技术。例如:在基础     

哺乳动物细胞中染色体介导的基因转移

染色体介导的基因转移(CMGT)可把一些紧密连锁的基因从一个细胞转移至另一细胞。当把分离到的中期染色体同完整细胞混合时,供体染色体的一部分可被某些细胞摄取并加以表达。如果受体细胞缺乏该染色体所携带的功能性基因,而后者又是该细胞在选择性条件下生存所必需的,转移就可得到证实。因此,在选择性条件下生存的基因转移     

在哺乳动物培养细胞中基因转移和基因图绘制

编码一个基因、多个基因或基因的一部分的遗传物质,从一个细胞转移至另一个细胞,称之为基因转移。其转移的DNA可以小至单个基因和DNA小片段,大至整个基因组。当供体的DNA并入宿主的基因组时,或当核苷酸序列被宿主细胞的细胞质或细胞核识别时,即认为已发生了基因的转     

哺乳类细胞的基因转移技术

哺乳类细胞的基因转移技术是生物医学研究领域中使用的一种重要的、强有力的研究手段。许多生命科学中的重大成就以及目前所进行的研究项目中,都已经或正在从这类技术中得到裨益。本文较系统地综述了哺乳类细胞的基因转移技术的发展和应用,扼要地描述了目前常用的几种转移基因的方法,并比较各种方法的适用性和局限性。同时,亦讨论了基因转移技术的发展对生物医学研究的巨大潜在影响。     

人mUK基因转移增加哺乳动物细胞纤溶功能的研究

为探讨人小分子量尿激酶（ｍＵＫ）基因转移对哺乳动物细胞纤溶功能的影响，用制备的重组逆转录病毒颗粒感染ＣＨＬ细胞转移ｍＵＫ基因，Ｇ４１８筛选后形成的阳性克隆用免疫荧光组织化学染色和酪蛋白－纤溶酶原－琼脂糖平板溶圈法测定ｍＵＫ抗原和活性。结果证实，阳性ｃＨＬ细胞克隆持续表达具有纤溶活性的重组ｍＵＫ，其纤溶功能明显增强。     

定点修饰哺乳动物细胞的基因

尽管已经有人证明了能把细胞基因稳定地插入到哺乳动物细胞里,但至今未能把基因定位到这些细胞正常染色体某个特定的部位。新近Smithies等人做了一些很好的实     

外源基因在哺乳动物细胞中的高效表达

生长激素、干扰素及组织纤溶酶原激活剂等蛋白质药物的获得,使医学发生了深刻变化,而这些药物的大量获得往往依赖克隆基因的表达水平。基因表达特别是基因在真核细胞中的表达是一个极为复杂的问题,受多重因素的调控。本文从转录前水平,转录水平及翻译和翻译后加工等方面综述了近年来对影响基因表达因素的一些新认识、新见解,介绍了增加外源基因在哺乳细胞中表达水平的一些途径,提出了基因定向导入以提高基因表达的潜在途径。     

应用哺乳动物细胞同源重组的基因置换

对遗传病的一种可能的疗法是用正常基因取代突变基因。这种方法可称之为基因取代治疗。它与基因治疗不同,后者是将一个正常的基因拷贝引进带有突变基因的细胞中并允许随机插入一个位点,结果是增加了该基因的一个正常拷贝而并未发生取代。任何类型的基因治疗,都要求(1)用有效的方法将基因或遗传信息引进哺乳动物细胞;(2)遗传信息共价整合到细胞DNA中并能传给后代;(3)该基因被表达;(4)以适当的方法调节其表达。DNA介导     

哺乳动物细胞瞬时转染技术研究进展

正目前全球越来越多的重组抗原及重组抗体用于医疗,尤其针对肿瘤、自身免疫病等难治病症,以及体外诊断试剂。越来越多的高校和企业开始重视重组蛋白新药的开发,这就要求能够快速生产足够候选蛋白用于临床前研究,因此能够快速生产毫克到克级别的重组蛋白瞬时表达体系开始得到     

神经肽Y基因在哺乳动物细胞CHO中的稳定表达

以ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ介导将ｐＲｃ／ＣＭＶＮＰＹ质粒转染入ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛选及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ和ＨＰＬＣ检测，得到稳定表达神经肽Ｙ（ＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ，ＮＰＹ）的细胞株，表达量为２～１０ｎｇ／（ｍｌ·１０７细胞）；表达时相分析结果显示转染细胞在转染后第４天表达量最高。     

腺病毒载体介导HBsAg基因在哺乳动物细胞中的表达

目的　探讨腺病毒载体介导乙型肝炎病毒 (HBV)前S2 S(preS2/S)基因在几种哺乳动物细胞中的表达。方法　制备携带HBVpreS2/S基因的非复制型重组腺病毒Ad-HBs ,体外转染人胚肾细胞 (2 93)、绿猴肾细胞 (Vero)、肝癌细胞系 (HepG2 )和间质干细胞 (MSCs) ,荧光显微镜观察EGFP的表达 ,同时采用RT-PCR检测目的基因的转录 ,ELISA法检测目的基因的表达。结果　MOI为 2 0的重组腺病毒Ad-HBs转染 2 93、Vero、HepG2 细胞和MSCs ,4 8h后 90 %以上的细胞表达EGFP ,同时细胞表达高滴度的HBsAg(A值 >3 2 2 9)。结论　腺病毒载体不仅能够介导HBVpreS2 S基因于连续细胞系细胞中高效表达 ,也能介导HBVpreS2 S基因于干细胞中高效表达     

应用基因重组和基因转移技术抑制血管平滑肌细胞增生的研究进展

应用基因重组和基因转移技术抑制血管平滑肌细胞增生的研究进展梁红佘铭鹏平滑肌细胞增生是动脉壁对刺激的反应。动脉内膜平滑肌细胞增生和表型转换是动脉粥样硬化形态学的主要特征之一，在动脉粥样硬化的发生中起着极重要的作用。动脉再狭窄，严重地影响诸如经皮冠状动脉...     

哺乳动物细胞灌流培养技术的开发与应用

<正>动物细胞培养始于20世纪初,发展至今已成为生物、医学等领域广泛采用的技术方法。同微生物细胞相比,动物细胞表达蛋白质因具有蛋白空间折叠和糖基化修饰等功能而备受青睐[1-2]。近年来,蛋白药物的上市和带来的巨大经济效益,掀起了哺乳动物细胞培养的热潮。对于倍增时间长、对外界环境敏感、培养难度大的动物细胞,如何完善其培养工艺,提高细胞蛋白表达量,并有效投入大规模生产,成为国内外研究的热点。     

哺乳动物细胞线粒体丝氨酸tRNA

最近1～2年在线粒体DNA构造的研究方面取得了长足进步,有关人和牛细胞线粒体DNA的构造几乎巳完全搞清。这些研究结果中特别引人关注的是密码识别的特异性问题。例如,过去要使摇摆假说(Wobble hypothesis)也适应于线粒体最少需要有31个tRNA,但是现在认为哺乳动物细胞     

酵母DNA修复基因部分补偿哺乳动物细胞的DNA切除修复缺陷

RAD10基因是酵母S.cerevisiaeDNA切除修复所必需的基因之一,其表达产物Rad10蛋白由210个氨基酸组成。分子量为24KD。将含有RAD10基因的pRSVNEON-RAD10质粒或与pSVR400质粒连接的pRSVNEON-RAD10质粒(氨甲喋呤可诱     

c-erbB-2基因工程抗体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

原癌基因ＨＥＲ－２／ｎｅｕ／ｅｒｂＢ－２编码的１８５－ｋＤａ跨膜磷酸糖蛋白为受体酪氨酸激酶家族中的成员。已报道ｃ－ｅｒｂＢ－２在多种腺癌中过表达，其中包括１５％～４０％的早期及转移性乳腺癌和卵巢癌［１］。亦有人报道，约７３％的转移性乳腺癌和卵巢癌过表达 ＨＥＲ－２／ｎｅｕ［２］，表明其为乳腺癌靶向性免疫治疗的理想靶分子。我们采用基因工程技术，构建了ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＳｃＦｖ基因，并获得了其在ＣＯＳ７细胞中的表达。ｌ 材料和方法１．ｌ材料ＣＯＳ７细胞为本室保存。载体ｐｃＤＮＡ３．ｌ购自Ｉｎ－ｖｉｔｒ…     

正义和反义表达grp75基因的哺乳动物细胞克隆的建立

为了进一步研究葡萄糖调节蛋白基因及其产物的生理功能和它在疾病发生发展过程中的作用，以ｐｃＤＮＡ３为载体构建了正义和反义的ｇｒｐ７５ｃＤＮＡ真核细胞表达载体系统，并对转染哺乳动物细胞后所筛选得到的阳性克隆进行免疫印迹分析；结果表明转染了正向ｇｒｐ７５ｃＤＮＡ表达系统的细胞克隆在原有ＧＲＰ７５表达的基础上表达量显著增加；     

略谈肾病研究中的基因转移技术

自1991年Koseki等首先以逆转录病毒为载体,将体外转染报告基因-β半乳糖苷酶基因(1ac Z基因)的胚肾种植于新生小鼠的肾包膜下,观察其在肾小球和远端肾小管上皮细胞(肾小管上皮细胞)成功表达以来,国内外已有许多作者采取不同的转基因方法和载体注入途径观察了一些报告基因对肾损伤或肾疾病发生发展过程的影响,从而为实施对肾损伤的保护或肾病的基因治疗提供了重要的理论和实验依据。国内王慧君等也首先报道了经脂质体介导,将饰胶蛋白聚糖(decorin)基因转染大鼠肾小球系膜细胞,并以此为细胞载体,经一侧肾动脉将其输入抗胸腺细胞血清性肾炎(系膜增生性肾小球肾炎)大鼠肾内,实验结果表明被输入的肾小球系膜细胞,不仅可在宿主的肾小球内存活,还能通过分泌其转基因产物——饰胶蛋白聚糖,对模型大鼠病变肾小球转化生长因子β1(TGF—β1)的表达和细胞外基质重要组分,如Ⅳ型胶原和纤连蛋白的沉积起抑制作用,从而达到减轻肾小球硬化进展的预期目标。这些研究结果提示,随着转基因技术的不断改进和完善,其在防治肾脏疾病中的应用将会变得越来越广泛,必将为攻克人类难治性疾病之一——慢性肾功能衰竭探索一条新途径。现就近10年来已被广泛用于肾病研究领域的转基因技术,从其在防治肾脏疾病中所取得的研究进展作一介绍。     

应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建动脉粥样硬化抗体库

目的:利用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建动脉粥样硬化(As)抗体细胞库,以寻找动脉粥样硬化治疗性抗体。方法:将载体pcDNA5/FRT改造成双表达载体pcDNA-DHL。分离动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞,提取总RNA,逆转录为cDNA。PCR扩增抗体重链可变区和Kappa型轻链全长,连接至双表达载体pcDNA-DHL,即动脉粥样硬化抗体基因库pDHL-As,将其转染Flp-In~(TM)-CHO细胞(FCHO),流式细胞术检测重组抗体在细胞表面的表达。加入潮霉素筛选出成功转染pDHL-As载体的细胞,即为动脉粥样硬化全长抗体细胞库。结果:成功构建双表达载体pcDNA-DHL。构建的重、轻链初库容量分别达1.79×10~5和1.80×10~5,理论上抗体库多样性为2.32×10~(10)。动脉粥样硬化抗体库pDHL-As可成功展示在细胞表面,并分选出45个表达抗氧化型低密度脂蛋白抗体的FCHO细胞。结论:本研究成功构建了一个动脉粥样硬化全长人源抗体细胞库。