利巴韦林对肠道病毒体外抑制作用的研究

目的研究抗病毒药物利巴韦林体外抗肠道病毒（EV）的效果。方法采用细胞病变效应（CPE）法和MTT分析法,观察利巴韦林对肠道病毒（EV71、CAV16、CBV3、ECH011、EV84）的抑制作用。结果利巴韦林对Vero细胞的半数毒性浓度（TC50）为2．09mg／mL,0．2mg／mL浓度的利巴韦林对5种肠道病毒均有抑制作用,对CAV16、EV71、ECHO11、EV84、CBV3的抑制率分别为13％、27％、36％、23％、58％。对EV84、EV71病毒,利巴韦林浓度为0．1mg／mL时其抑制率为16．5％、29．5％;对CBV3病毒,利巴韦林抗病毒作用与其剂量呈正相关,半数有效浓度（IC50）为0．125mg／mL,治疗指数（TI）为16．72。结论利巴韦林在体外对肠道病毒具有抑制作用,对不同的肠道病毒其抑制效率不同,对CVB3的抑制率较高。     

雄黄纳米颗粒在基因水平上抑制腺病毒复制的实验研究CSCD

目的建立人腺病毒3型（HAdV-3）感染Hep-2细胞模型,采用荧光定量PCR（Real-timePCR）技术,观察雄黄纳米微粒在基因水平上对HAdV-3DNA表达的影响。方法将实验分为4组,即Hep-2细胞对照组、HAdV-3病毒对照组、雄黄纳米微粒组和利巴韦林组。在HAdV．3感染Hep．2细胞后,分别加入雄黄纳米微粒和利巴韦林作用24h,提取HAdV-3感染Hep-2细胞的总DNA,建立Real-timePCR反应体系,测定各实验组HAdV-3的病毒载量。结果Hep-2细胞对照组无扩增曲线,Ct〉35,腺病毒病原体检测阴性;雄黄纳米微粒组、利巴韦林组和HAdV-3病毒对照组扩增曲线ct分别为29．30±0．08、33．05±1．29、26．01±0．25,腺病毒病原体检测阳性。与HAdV-3病毒对照组病毒复制量（66699932±23．85）相比,利巴韦林组病毒复制量（459124．84±12．82）明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;雄黄纳米微粒组病毒复制量（912435．44±16．57）较HAdV-3病毒对照组病毒复制量有所降低（P〈0．05）。结论建立的HAdV-3感染Hep．2细胞模型可靠,荧光定量PCR方法灵敏性高、特异性强,雄黄纳米微粒对腺病毒的核酸复制有-定的抑制作用。     

雄黄纳米微粒在细胞水平上抑制腺病毒复制的初步研究

目的 建立腺病毒3型( HAdV-3)感染Hep-2细胞模型,观察中药雄黄对腺病毒3型( HAdV-3)感染Hep-2细胞病变的抑制作用.方法 用高能球磨机研磨双蒸水水飞处理制备雄黄纳米微粒,应用砷钼蓝染色法测定雄黄纳米微粒浓度并在Nano Series粒度测定仪上测定其粒度.以MTT法计算药物的半数中毒剂量(TC50).通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,以利巴韦林为阳性对照药,观察雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 雄黄纳米微粒TC50值为0.649 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染Hep-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度( IC50)分别为0.255 μg/ml、0.142 μg/ml、0.117 μg/ml,治疗指数(TI)分别为2.55、4.57和5.55,雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞CPE的抑制作用存在着明显的量效关系.结论 雄黄纳米微粒在体外有抑制HAdV-3病毒复制和直接灭活病毒的作用,并有一定保护Hep-2细胞预防HAdV-3病毒感染的作用.     

蛭丹化瘀口服液体外抑制RSV作用机制的研究

目的 研究蛭丹化瘀口服液体外抗呼吸道合胞病毒作用环节.方法 观察该药在不同浓度和不同的作用环节下RSV对Hep-2细胞的致病作用.结果 蛭丹化瘀口服液对细胞无毒浓度为5.5 mg/ml,并在此浓度中未能阻断RSV对细胞的吸附,细胞产生了完全病变.蛭丹化瘀口服液在2.75～5.50 mg/ml浓度中,药物直接灭活病毒组和先感染细胞再加入药物的治疗组均未产生细胞病变.结论 蛭丹化瘀口服液体外实验无预防RSV感染作用,有直接灭活RSV作用,并对进入细胞内的RSV有抑制作用.     

雄黄纳米微粒在细胞水平上抑制腺病毒复制的初步研究

目的 建立腺病毒3型（ HAdV-3）感染Hep-2细胞模型,观察中药雄黄对腺病毒3型（ HAdV-3）感染Hep-2细胞病变的抑制作用.方法 用高能球磨机研磨双蒸水水飞处理制备雄黄纳米微粒,应用砷钼蓝染色法测定雄黄纳米微粒浓度并在Nano Series粒度测定仪上测定其粒度.以MTT法计算药物的半数中毒剂量（TC50）.通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,以利巴韦林为阳性对照药,观察雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 雄黄纳米微粒TC50值为0.649 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染Hep-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度（ IC50）分别为0.255 μg/ml、0.142 μg/ml、0.117 μg/ml,治疗指数（TI）分别为2.55、4.57和5.55,雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞CPE的抑制作用存在着明显的量效关系.结论 雄黄纳米微粒在体外有抑制HAdV-3病毒复制和直接灭活病毒的作用,并有一定保护Hep-2细胞预防HAdV-3病毒感染的作用.     

利巴韦林对呼吸道合胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡及相关基因表达的影响

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）是婴儿和儿童呼吸道疾病中的最常见的病原体之一，也是各年龄成人呼吸道感染的病原之一。利巴韦林是美国FDA批准治疗RSV的药物，为了观察利巴韦林在发挥抗RSV的作用过程中，对RSV诱导宿主细胞凋亡及对FasL、Fas和Survivin等凋亡相关基因表达的影响，探讨其治疗RSV感染的分子机制。将A549细胞以10^8 cell／L分种于25ml的培养瓶或内含飞片的6孔板，待细胞生长至80％融合时，换成含0．5％ FBS的培养液静息24h。     

金银花体外抗呼吸道合胞病毒的作用研究

目的了解金银花体外抑制呼吸道合胞病毒的效果和强度。方法采用细胞病变抑制实验．噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,观察金银花在人宫颈癌传代细胞（Hela）中对人呼吸道合胞病毒3型的抑制作用,以治疗指数（TT）为评价指标。结果金银花对Hela细胞半数中毒浓度（TC50）为5mg／ml,最大无毒浓度（TC50）为3．6mg／ml;对呼吸道合胞病毒有直接灭活作用,其半数抑制率（IC50）为0．16mg／ml,TI为31．2;在吸附阶段也有作用,其IC50为0．48mg／ml,TI为10．5;同时金银花有抑制呼吸道合胞病毒生物合成作用,其IC50为1．0mg／ml,TI为5;金银花不能阻止呼吸道合胞病毒侵入细胞。结论金银花在体外主要通过直接灭活、阻止病毒吸附和抑制生物合成3种方式发挥抗呼吸道合胞病毒作用。     

中西药联合应用对呼吸道合胞病毒抑制作用的研究

目的 了解病毒唑、护肺口服液及二者联合应用时对呼吸道合胞病毒(RSV)的体外抑制作用。方法 观察不同药物浓度下RSV对Hep—2细胞的致病作用。结果 病毒唑完全抑制RSV复制的最小浓度为7．80μg／ml,护肺口服液则为5．00mg／ml;两药联合应用时,完全抑制RSV复制的病毒唑和护肺口服液的最小浓度分别为减少到0．98μg／ml和0．63mg／m1,比单独用药浓度均降低了87．4％。结论 两种药物对RSV都有体外抑制作用,联合应用时效果最强。     

利巴韦林注射液在细胞水平上抑制EV71病毒复制的初步研究

目的 通过体外实验,观察利巴韦林注射液对肠道病毒71型(EV71)病毒在横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)复制的抑制作用和体外灭活作用.方法 使用在2008年4月安徽阜阳疫情中分离到的EV71病毒,通过三种体外细胞实验:药物在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定实验;药物对细胞的保护作用实验;药物体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定实验.观察利巴韦林注射液对EV71病毒感染横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)中所起的作用.结果 在利巴韦林注射液在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定实验中,1:640利巴韦林注射液稀释度组较病毒对照组延迟病变出现2 d,细胞生长未受到影响.在药物对细胞的保护作用实验中,1:8利巴韦林稀释度组较病毒对照组延迟病变出现4 d.在利巴韦林注射液药物体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定研究中,1:40稀释度组较病毒对照组延迟病变出现2 d,而细胞生长未受到影响.结论 利巴韦林注射液在体外有抑制EV71病毒复制和部分灭活病毒的作用;并有一定的保护细胞抑制EV71病毒感染的作用.本研究对于临床上EV71感染的早期预防和治疗具有一定的指导意义.     

利用噬菌体随机肽库筛选抗呼吸道合胞病毒多肽的实验研究

目的：采用完整的呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV)颗粒筛选噬菌体肽库，以获得能高亲和力结合并能抑制该病毒复制的特异性多肽，方法：Hep-2细胞培养RSV，采用蔗糖密度梯度（30％、45％、60％）和超滤离心纯化病毒，病毒用生物素标记后，应用M13噬菌体PⅢ呈现随机7肽库进行筛选，经过3轮淘筛后，ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与RSV的亲和力，通过TCID50检测其抗病毒复制能力，选取与RSV具有高亲和力的阳性克隆进行DNA测序，据此推导多肽的氨基酸序列，结果：经鉴定得到13个阳性噬菌体克隆能与RSV呈高亲和力结合，其中3个克隆体外能明显抑制RSV的复制，使TCID50由10^－8．1SFU／ml分别降至10^-4.1、10^-4.3、10^3.8SFU/ml。DNA测序发现各个克隆之间缺乏明显的同源序列，但普遍含有较多的脯氨酸，结论：通过噬菌体肽库能筛筛选到抗病毒作用的阳性克隆，为进一步开发高效RSV的诊断和治疗试剂奠定基础。     

金刚烷胺与利巴韦林对不同甲型流感病毒株的体外作用敏感性比较

目的评价金刚烷胺和利巴韦林对不同甲型流感病毒株的体外抑制作用,为临床选择抗流感病毒药物提供实验依据。方法分别接种甲型流感病毒标准实验株[H1H1（A/PR/8/34、A/FM1/47）,H3N2（A/Aichi/2/1968）]和临床分离株[H1N1（A/Guangzhou/GIRD02/2009、A/Guangzhou/GIRD166/2009）,H3N2（A/Guangzhou/GIRD18/2009、A/Guangzhou/GIRD26/2009）],于狗肾细胞（MDCK）,采用空斑试验观察金刚烷胺和利巴韦林对甲1和甲3型流感病毒不同实验株和分离株的敏感性。对测试毒株的MP基因进行序列测定和分析,了解金刚烷胺的药物敏感性。结果金刚烷胺在MDCK细胞的半数毒性浓度（TC50）为335μg/ml,对部分甲型流感病毒标准实验株[A/FM1/47（H1N1）、A/Aichi/2/1968（H3N2）]及临床分离株[A/Guangzhou/GIRD02/2009（H1N1）]有抑制作用（半数有效浓度IC50分别为14.9、20.1、16.8μg/ml）。利巴韦林的TC50为2.05mg/ml,对测试的所有毒株均有抑制作用（IC50为6.8～37μg/ml）。金刚烷胺耐药毒株均为单位点突变（第31位的丝氨酸S置换为天冬酰胺N,S31N）。结论甲型流感病毒对金刚烷胺较易出现耐药,而利巴韦林体外对金刚烷胺敏感株和耐药株均有显著的抑制作用,临床抗流感病毒治疗时可考虑应用。     

六神丸在细胞水平上抗腺病毒的初步研究

目的 建立腺病毒3型（HAdV-3）感染HEp-2细胞模型,评价六神丸混悬液对腺病毒感染HEp-2细胞病变的抑制作用,并进一步探讨六神丸在体外抗腺病毒的量效关系.方法 用乙醇回流法处理制备六神丸液.以MTT法计算药物的半数中毒剂量（TC50）.通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,观察六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 六神丸液TC50值为40.48 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染HEp-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度（IC50）分别为28.91μg/m1、19.28 μg/m1、8.61 μg/ml,治疗指数（TI）分别为1.4、2.1和4.7,六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞CPE的抑制作用存在着一定的量效关系.结论 在预防、治疗及直接灭活给药方式下,六神丸均有一定的抗HAdv-3的作用,但直接灭活效果更明显.     

Comparative studies of the 3''-terminal sequences of several alpha virus RNAs

We have investigated the mechanism by which ribavirin (Rbv), mycophenolic acid, and 2-amino-1,3,4-thiadiazole inhibit the replication of Sindbis virus in Aedes albopictus cells. In each case there was a good correlation between inhibition of virus replication and a reduction (80–90%) in the level of cellular GTP. The antiviral effects of all three compounds could be reversed by (1) equimolar amounts of xanthosine but not by guanosine, (2) actinomycin D (0.2 μg/ml), and (3) α-amanitin (10 μg/ml) in α-amanitin-sensitive cells but not in α-amanitin-resistant cells. In the case of actinomycin D the reversal of the antiviral effects was correlated with a restoration of the GTP pool to near normal levels and a decrease in the amount of phosphorylated Rbv in acid-soluble cell extracts. The role of the phosphorylated forms of Rbv in inhibiting virus replication and the relationship to cellular RNA synthesis are discussed.     

Detection of anti-hepatitis C virus effects of interferon and ribavirin by a sensitive replicon system

Although combination therapy with interferon and ribavirin has improved the treatment for chronic hepatitis C virus (HCV) infection, the detailed anti-HCV effect of ribavirin in clinical concentrations remains uncertain. To detect the anti-HCV effect of ribavirin in lower concentrations, a sensitive and accurate assay system was developed using the reporter replicon system with an HCV genotype 2a subgenomic replicon (clone JFH-1) that exhibits robust replication in various cell lines. This reporter replicon was generated by introducing the luciferase reporter gene (instead of the neomycin resistance gene) into the subgenomic JFH-1 replicon. To assess the replication of this reporter replicon, luciferase activity was measured serially up to day 3 after transient transfection of Huh7 cells. The luciferase activity increased exponentially over the time course of the experiment. After adjustment for transfection efficiency and transfected cell viability, the impacts of interferon and ribavirin were determined. The administration of interferon and ribavirin resulted in dose-dependent suppression of replicon RNA replications. The 50% inhibitory concentration of interferon and ribavirin was 1.80 IU/ml and 3.70 microg/ml, respectively. In clinical concentrations, replications were reduced to 0.09% and 53.74% by interferon (100 IU/ml) and ribavirin (3 microg/ml), respectively. Combination use of ribavirin and interferon enhanced the anti-HCV effect of interferon by 1.46- to 1.62-fold. In conclusion, we developed an accurate and sensitive replicon system, and the antivirus effect of interferon and ribavirin was easily detected within their clinical concentrations by this replicon system. This system will provide a powerful tool for screening new antiviral compounds against HCV.     

Inhibition of Semliki Forest virus multiplication by ribavirin: a potential method for the monitoring of antiviral agents in serum

An enzyme immunoassay (EIA) to determine 50% inhibitory concentrations of ribavirin which suppresses Semliki Forest virus (SFV) multiplication in L-cells is described. Inhibition of SFV replication by ribavirin was measured by detection of viral glycoprotein, on the surface of infected L-cell monolayers, with a horseradish peroxidase labeled monoclonal antibody with specificity for the E2 glycoprotein of SFV. The concentration of ribavirin in culture fluid associated with 50% reduction of control absorbance values was defined as the 50% inhibitory concentration (IC50). The IC50 of ribavirin measured with EIA was mainly influenced by the multiplicity of infection (MOI). At MOI values of 3, 6 and 12 reduction of absorbance values was already obvious at 4.5 h of infection. Furthermore reduction of absorbance values correlated with inhibition of virus production as determined by plaque titration of culture fluids. When the EIA was used for the determination of active ribavirin in serum from treated animals the drug was detectable 1 h after intravenous administration of 4 mg of ribavirin to a concentration of 8 micrograms per ml serum. The results indicate that this simple EIA is suitable for the monitoring of active antiviral drugs in body fluids.