复方861抑制四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的研究

目的:观察复方861对四氯化碳大鼠肝纤维化模型Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:实验分为对照组(20只)、四氯化碳模型组(20只)、复方861干预组(20只)3组,实验8周,处死大鼠,取肝组织,应用RT-PCR检测肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达和病理组织特殊染色.结果:表明与模型组(0.90±0.03、0.9±0.05)比较,复方861组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平分别为0.77±0.06、0.75±0.05,差异具有显著性(P＜0.01).结论:复方中药861能够抑制Ⅰ、Ⅱ型胶原的基因水平,减少细胞外基质的沉积,是其抗肝纤维化的作用机理之一.     

膈下逐瘀汤逆转猪血清诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的:通过观察膈下逐瘀汤对实验性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,探讨其抗肝纤维化的可能机制。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清2.0 mL.kg-1腹腔注射,每周2次共12周诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤每天按7.37 g.kg-1灌胃给药12周。Masson染色法观察肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织MMP-13和TIMP-1含量,实时定量Rt-PCR检测肝组织MMP-13和TIMP-1 mRNA表达。结果:猪血清组肝组织胶原面积为(10.38±2.01)%;MMP-13蛋白(14.05±2.64)ng.g-1;MMP-13 mRNA(1.91±0.73)倍;TIMP-1蛋白(14.91±1.07)ng.g-1;TIMP1 mRNA(18.40±2.84)倍。与猪血清组比较,膈下逐瘀汤给药可显著降低肝组织胶原面积(6.66±1.04)%(P<0.05),增加肝组织MMP-13蛋白(20.03±2.14)ng.g-1和MMP-13mRNA(4.12±0.59)倍(P<0.05),降低肝组织TIMP-1蛋白(13.47±1.22)ng.g-1和TIMP-1mRNA(4.89±0.74)倍(P<0.05)。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维含量,其机制可能与调节MMP-13和TIMP-1的表达有关。     

一贯煎对大鼠肝纤维化拮抗作用的影响

目的:探讨一贯煎对大鼠肝纤维化的拮抗作用。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、一贯煎组。除正常组外,其余3组均建立四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型。造模后,一贯煎组和秋水仙碱组予相应药物灌胃、正常组和模型组以0.9%氯化钠溶液灌胃,灌胃次数为1次/d。灌胃4周后,检测大鼠肝组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1),通过病理染色评价肝纤维化程度。结果:与正常组相比,模型组肝纤维化程度增加,MMP-1降低、TIMP-1升高、MMP-1/TIMP降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,一贯煎组及秋水仙碱组肝纤维化程度减轻,TIMP-1降低(P<0.05);秋水仙碱组MMP-1有降低趋势,一贯煎组MMP-1有升高趋势;两治疗组MMP-1/TIMP-1有升高趋势。结论:一贯煎可拮抗CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其机制可能与调节肝组织内MMP-1/TIMP-1含量,促进胶原纤维降解有关。     

膈下逐瘀汤对免疫性肝纤维化大鼠肝组织MMP-9和TIMP-2表达的影响

目的:观察膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清腹腔注射诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤灌胃给药干预。消化法检测肝组织羟脯氨酸含量,ELISA法检测肝组织MMP-9和TIMP-2蛋白含量,实时定量RT-PCR检测肝组织MMP-9和TIMP-2 mRNA表达。结果:与模型对照组比较,膈下逐瘀汤可显著降低肝组织羟脯氨酸、MMP-9及TIMP-2蛋白含量,下调肝组织MMP-9、TIMP-2 mRNA水平。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与调节MMP-9和TIMP-2的表达有关。     

膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝组织TIMP1和MMP-2表达的影响

目的:探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠皮下注射四氯化碳诱发中毒性肝纤维化病理模型后肝组织TIMP1 mRNA和MMP-2表达的变化及膈下逐瘀汤对其干预作用.方法:Sprague-Dawley(SD)大鼠60只随机分为空白对照组(n=20)、模型对照组(n=20)和膈下逐瘀汤组(n=20)共3组.结论:大鼠皮下注射四氯化碳可诱导肝脏组织TIMP1 mRNA和MMP-2表达水平明显增高,膈下逐瘀汤可以抑制肝组织TIMP1 mRNA和MMP-2的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用.     

抗纤Ⅱ号抗大鼠免疫性肝纤维化的作用研究

目的:研究中药抗纤Ⅱ号对大鼠免疫性肝纤维化的治疗作用并分析其作用机制.方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、抗纤Ⅱ号组,猪血清腹腔注射制作免疫性肝纤维化模型.水煮醇提制备抗纤Ⅱ号并用于大鼠,通过RT-PCR、免疫组化以及病理组织学等观察药物的治疗效果.结果:抗纤Ⅱ号组的肝纤维化分级明显改善.免疫组化结果显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原和TIMP-1的表达在抗纤Ⅱ号组明显低于模型对照组.TIMP-1 mRNA在抗纤Ⅱ号组肝组织中的表达也明显低于模型对照组,治疗效果与秋水仙碱无差异.结论:抗纤Ⅱ号对大鼠免疫性肝纤维化有治疗作用,并可能通过抑制TIMP-1活性表达、促进肝细胞外基质降解来发挥作用.     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.     

抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1及TIMP-1表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:以复方鳖甲软肝片和秋水仙碱为对照药,观察抗纤抑癌方对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化模型大鼠肝脏组织病理的影响,并通过免疫组化方法测定各组大鼠肝脏MMP-1、TIMP-1的表达。结果:与模型组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达显著升高,TIMP-1表达明显降低;鳖甲软肝组和秋水仙碱组MMP-1表达均显著高于模型组。与各治疗组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达高于鳖甲软肝组。结论:抗纤抑癌方具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与增加MMP-1表达、降低TIMP-1表达、促进细胞外基质降解等有关。     

复方鳖甲软肝片减方对CCl_4诱导大鼠肝纤维化的影响及机制研究

目的探讨复方鳖甲软肝片(CBRP)减去处方中紫河车后(即复方鳖甲软肝片减方,MF-CBRP)对肝纤维化大鼠的保护作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为对照组,模型组,阳性对照组(秋水仙碱,0.1 mg/kg),CBRP组(0.594 7g/kg)和MF-CBRP高、低剂量(1.061 0、0.530 5 g/kg)组。除对照组外,其余各组大鼠sc CCl_4大豆油溶液制备大鼠肝纤维化模型,连续6周。造模结束后,各给药组ig对应剂量的药物治疗6周。给药结束后,检测大鼠血清生化指标、脂质过氧化指标以及纤维化因子、羟脯氨酸(Hyp)、血小板衍生因子-α(PDGF-α)和结缔组织生长因子(CTGF)量的变化;观察肝组织HE染色和Masson染色的变化;应用免疫组化和RT-PCR法检测大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)m RNA表达水平。结果与模型组比较,MF-CBRP可以使大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(T-Bil)和碱性磷酸酶(ALP)水平降低(P0.01),AST/ALT、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平显著增高(P0.05、0.01),使超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)量升高(P0.05)、丙二醛(MDA)量降低(P0.01),抑制肝组织中Hyp、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、III型前胶原(PC-III)和IV型胶原(IV-C)的表达(P0.05、0.01),使肝组织中PDGF-α和CTGF量降低(P0.01),抑制MMP-2和TIMP-1 m RNA表达(P0.01),降低α-SMA免疫组化的阳性表达面积(P0.01),改善肝组织病理学结构病变。与CBRP比较,MF-CBRP抗肝纤维化效果轻微减弱。结论 MF-CBRP通过减轻氧化胁迫、抑制胶原纤维增生、逆转肝星状细胞激活和抑制肝生长因子表达来抗大鼠肝纤维化,但其抗纤维化活性稍弱于CBRP。     

三七总皂苷对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-13及其抑制因子-1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-13、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1表达的影响,探讨PNS抗肝纤维化作用的可能机制.方法:将大鼠随机分成正常组、模型组、PNS低、中、高剂量(50,100,200 mg·kg-1)组和秋水仙碱(Col,0.1mg·kg-1)组.除正常组外其余各组采用CCl4皮下注射的方法诱导肝纤维化大鼠模型,每周2次,连续18周.于造模第9周起,给药组分别灌胃相应的受试药物,正常组和模型组灌胃等容量的生理盐水,疗程10周.实验结束后,计算肝脏、脾脏指数;比色法测定血清中ALT,AST含量;同时取固定部位肝脏组织,HE染色观察肝组织病理学改变,免疫组化技术测定肝组织中MMP-13,TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR技术测定MMP-13,TIMP-1mRNA的表达.结果:与模型组相比,三七总皂苷(100,200 mg·kg-1)不仅可减轻大鼠肝纤维化程度,降低肝脏、脾脏指数及血清ALT,AST的含量,还可显著升高肝纤维化大鼠肝脏MMP-13的表达,降低TIMP-1的表达.结论:三七总皂苷对大鼠肝纤维化具有一定的保护作用,其机制可能与上调MMP-13,抑制TIMP-1的表达,促进胶原降解有关.     

加味四逆散对脂肪肝大鼠肝组织PPARα mRNA表达的影响

目的观察加味四逆散对脂肪肝大鼠肝组织PPARα mRNA表达的影响,探讨其治疗脂肪肝的机理.方法采用复合致病因素造成大鼠脂肪肝模型,以加味四逆散为治疗组,脂必妥片作对照,研究加味四逆散对脂肪肝大鼠肝组织PPARα mRNA表达的影响.结果模型组大鼠肝组织PPARαmRNA表达减少,加味四逆散能增加脂肪肝大鼠肝组织PPAR α mRNA的表达.结论加味四逆散促进PPAR α mRNA表达可能是临床治疗脂肪肝的重要机制之一.     

复方雷公藤汤对肾病大鼠肝脏减毒增效作用的实验研究

目的:借助复方雷公藤汤及其拆方对肾病大鼠的干预效应,考察雷公藤不同配伍对雷公藤的减毒增效作用;筛取治疗肾病综合征毒效关系最优化的中药小复方。方法:大鼠尾静脉注射阿霉素,复制微小病变肾病综合征模型。以复方雷公藤汤及其拆方实施干预,以强地松做阳性对照,检测生化指标、组织病理学指标。结果:与模型公藤组24 h尿蛋白(92.60±18.124 3)相比较,全方组(48.60±11.749 2)、雷芪组(53.20±13.206 1)、雷甘组(56.40±16.520)降低24 h尿蛋白;全方组TP 68.47±5.250 4、ALB 28.97±3.009 3、雷芪组TP 68.21±4.191 27、ALB 27.58±2.618 2、雷甘组TP 67.51±5.420 8、ALB 26.56±1.898 1与模型公藤组TP 58.98±4.8401、ALB 20.98±3.493 4均升高TP、ALB,与模型公藤组chol 1.487 0±0.647 1、TG 1.704 0±1.582 4相比较,全方组chol 0.786 0±0.134 4、TG 0.557 0±0.138 7、雷芪组chol 0.70±0.129 7、TG 0.650 9±0.120 3、雷甘组chol0.974 0±0.328 9、TG 0.668 0±0.184 5均降低;与模型公藤组AST 133.2±7.871 2、ALT 62.60±7.919 0相比较,全方组AST 72.70±10.144 0、ALT 41.80±8.966 6、雷甘组AST 84.20±5.633 2、ALT 38.20±5.846 2、雷金组AST 115.50±9.686 8、ALT 66.10±9.596 9、雷归组AST 128.7±10.739 9、ALT 61.60±8.821 7;差异显著(均P0.05)。雷公藤不同配伍组对肾脏组织形态学、超微结构上较对照组病理损害有不同程度减轻。全方组、雷甘组、雷何组肝脏组织形态学、超微结构上较对照组病理损害有不同程度减轻。结论:全方组、雷芪组、雷甘组起到增效作用。全方组、雷甘组、雷何组可减低雷公藤肝脏毒性。     

清热化瘀中药复方对急性肝衰竭大鼠肝组织HMGB1表达的干预研究

目的:观察清热化瘀中药复方——清肝方对急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响,从mRNA水平探讨其抗ALF的机制。方法:采用D-氨基半乳糖(D-GalN)单次腹腔注射构建ALF大鼠模型,125只SD大鼠以是否接受造模和药物干预随机分为空白组、模型组、复方甘草酸苷组和清肝方组,每组再以36,96 h 2个时间点继续随机分为1,2两个亚组,共8组,其中亚组1用于造模后36 h取血及肝组织标本,亚组2用于96 h后观察大鼠的生存率。用全自动生化分析法检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和总胆红素(TBiL);全自动血凝分析法检测血浆凝血酶原时间(PT);常规HE染色作肝组织病理学观察。实时荧光定量(RT-PCR)检测HMGB1 mRNA的表达变化,以管家基因β-actin为对照,2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量。结果:模型组、复方甘草酸苷组及清肝方组估计平均生存时间分别为64.6,71.9,83.3 h;log-rank检验提示清肝方组累积生存率高于模型组(P<0.05)。空白组、清肝方组和复方甘草酸苷组肝组织HMGB1 RNA/β-actin值均显著降低(0.006±0.003,0.067±0.033,0.112±0.027 vs 0.245±0.153,均P<0.01),清肝方组低于复方甘草酸苷组(P<0.01)。与模型组相比,空白组、清肝方组和复方甘草酸苷组在血清ALT,AST,TBiL和血浆PT水平方面与模型组相比均明显下降(P<0.01),清肝方组低于复方甘草酸苷组(P<0.01)。清肝方组和复方甘草酸苷组肝组织损害程度积分与模型组相比明显下降(1.84±0.13,2.85±0.20 vs 3.56±0.24,均P<0.01),清热化瘀复方组低于复方甘草酸苷组(P<0.01)。结论:清肝方可有效改善D-GalN诱导的大鼠的肝功能、凝血功能及肝脏病理,降低死亡率,其发挥作用的分子机制与抑制HMBG1的表达有关。     

复方绞芪方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织SCD-1表达的影响

目的:观察复方绞芪方对高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织SCD-1表达的影响,探讨其防治NASH的作用机理。方法:以高脂高糖饮食喂养SD大鼠12周建立NASH模型,以不同剂量的复方绞芪方进行干预,测定大鼠血清ALT、AST、FFA含量和肝组织匀浆TG、CHOL含量变化、常规HE染色观察肝组织的病理改变并计算NAFLD活动度积分(NAS);用免疫组织化学法检测肝组织SCD-1的表达。结果:模型组大鼠的血清ALT、AST、FFA水平以及肝组织中的CHOL、TG含量较正常组明显增加,肝组织NAS计分明显升高,SCD-1蛋白表达明显下降。应用复方绞芪方进行干预后,大鼠的NAS计分较模型组显著降低,肝功能明显改善,血清FFA水平明显下降同时肝组织中CHOL和TG含量也明显下降,肝组织中SCD-1蛋白表达明显增加。结论:高脂高糖饮食诱导的NASH大鼠存在脂肪酸代谢酶的紊乱;复方绞芪方通过调节脂肪酸代谢酶的活性,增加SCD-1的表达,减少脂质在肝脏聚集及相关的肝功能损害,这可能是其防治NASH的作用机制之一。     

糖肝康对糖尿病脂肪肝模型大鼠肝脏HO-1表达的影响

目的:观察中药糖肝康对糖尿病脂肪肝模型大鼠肝脏中血红素加氧酶(HO-1)免疫组化表达的影响。方法:用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)联合高糖高脂饮食的方法复制糖尿病脂肪肝大鼠模型,药物干预12周后,观察大鼠肝脏中HO-1免疫组化的表达。结果:糖肝康可减少糖尿病脂肪肝模型大鼠肝脏中HO-1的异常表达,模型对照组肝脏组织HO-1免疫组化阳性积分较空白对照组显著升高(P0.01);糖肝康大、中、小剂量组与模型对照组相比,阳性积分明显降低(P0.01),糖肝康大剂量组与护肝宁对照组相比也有显著性差异(P0.05)。结论:糖肝康可通过减少HO-1的异常表达,在改善糖尿病脂肪肝方面发挥积极作用。     

肺气虚证模型大鼠肾组织钠离子转运相关蛋白表达变化研究

目的检测肺气虚大鼠肾脏组织与钠离子转运相关蛋白表达,为中医学肺肾相关理论提供实验依据。方法复制肺气虚大鼠模型,应用免疫组化方法检测肾小管上皮性Na^＋：通道（ENaC）、Na^＋-K^＋-2Cl^-转运体（rBSC1）蛋白表达,放免方法测定血浆与肺组织中醛固酮（ALD）、心房钠尿素（ANP）含量。结果与对照组比较,模型组大鼠肾小管ENaC、rBSC1蛋白表达明显上调,同时血浆与肺组织中ALD水平升高而ANP水平下降。结论肺组织通过释放ALD和ANP调节肾小管上皮细胞ENaC、rBSC1蛋白表达,从而调节肾小管对Na^＋与水的重吸收而影响机体水液代谢过程。     

加减三甲散对肝纤维化大鼠肝脏微血管密度和PDGF-B表达的影响

目的:观察加减三甲散对肝纤维化大鼠肝脏微血管密度及PDGF-B表达的影响,从分子生物学角度探讨其作用机制。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠24只,随机分成正常组、模型组、加减三甲散组、阳性对照组(复方鳖甲软肝片)。采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型,以加减三甲散干预,并以复方鳖甲软肝片做对照药物,治疗60天后检测各组大鼠肝脏微血管密度(MVD)及PDGF-B的表达。结果:模型组大鼠MVD、PDGF-BmRNA及蛋白含量均较正常组升高(P0.01),加减三甲散组大鼠MVD、PDGF-BmRNA及蛋白含量均较模型组下降(P0.01或P0.05),与鳖甲片组比较无差异(P0.05)。结论:加减三甲散可在一定程度上逆转大鼠肝纤维化进程,其可能机制是通过下调大鼠肝组织中的PDGF-B的表达水平,减少肝脏病理性血管增生,降低微血管密度,从而抑制肝纤维化进程。     

降脂益肝冲剂对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织PPARα及Trx mRNA表达的影响

目的观察降脂益肝冲剂对非酒精性脂肪肝(nonal coholic fatty liver,NAFL)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)及硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)mRNA表达的影响,探讨其治疗脂肪肝的机理。方法采用高脂胆固醇饮食造成大鼠脂肪肝模型,以降脂益肝冲剂为治疗组,研究降脂益肝冲剂对NAFL大鼠肝组织PPARα及Trx mRNA表达的影响。结果模型组大鼠肝组织PPARα及Trx mRNA表达均减少,降脂益肝冲剂能上调二者的表达。结论降脂益肝冲剂促进PPARα及Trx mRNA表达可能是其治疗NAFL的重要机制之一。     

中药丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨中药丹芍化纤胶囊对实验性肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibi- tor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠80只分为正常组、肝纤维化模型组、自然恢复组、低剂量治疗组、高剂量治疗组,除正常组外,其余采用CCl_4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后两治疗组分别予以低剂量(0．5g/kg)、高剂量(1．0g/kg)丹芍化纤胶囊灌胃治疗8周。实验结束后测定肝脏指数、血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT),光镜下观察肝组织纤维化程度,检测尿羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)排出量,同时用免疫组化SABC法检测肝组织中,TIMP-1的表达。结果治疗组与模型组、自然恢复组比较：肝脏指数、血清HA及ALT显著下降(P＜0．05,P＜0．01)；肝纤维化程度显著减轻(P＜0．05,P＜0．01)；尿Hyp排出明显增加(P＜0．01)；治疗组肝组织中TIMP-1的表达与模型组和自然恢复组比较则显著降低...