654-2对内毒素性肺损伤内皮素-1 mRNA表达的影响

内皮素ＥＴ－１主要是由血管内皮合成和释放的强烈收缩血管活性肽。本文旨在研究６５４－２对内毒素性肺损伤时内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ表达的影响。１　资料与方法１－１　动物分组　雄性健康ＳＤ大鼠２１只,体重１８０～２３０ｇ。随机等分成对照组、内毒素组和６５４－２组。１－２　方法　实验前禁食１２小时,自由饮水,全部动物麻醉均用３％苯巴比妥３０ｍｇ／ｋｇｉｐ。对照组分别在麻醉后即时和１小时后各静注生理盐水０－５ｍｌ１次,内毒素组在麻醉后即时静注生理盐水０－５ｍｌ,１小时后静注精制内毒素（ＬＰＳ,０－５…     

间歇低氧对大鼠内皮素及其受体基因表达的影响

目的观察慢性间歇低氧诱发大鼠高血压发病过程中内皮素(ET)及其受体的动态变化,探讨慢性间歇低氧诱发高血压的发病机制。方法将Wistar大鼠(n=72)随机均分为间歇低氧组(IH组)、实验对照组(SC组)和空白对照组(UC组)。IH组大鼠循环给予氮气和压缩空气(每一循环60s,使舱内最低氧浓度达4%~6%,然后恢复至21%,8h/d),SC组大鼠循环给予压缩空气,UC组大鼠不给予任何处理。观察第7、21、42天时各组大鼠的血压、血浆ET-1水平及不同组织ET-1和内皮素A型受体(ETAR)mRNA的表达。结果第42天时IH组大鼠平均动脉压(MAP)较实验前升高约8mmHg(P<0·01),而两对照组大鼠MAP无显著变化。IH组大鼠血浆ET-1水平随间歇低氧时间的延长逐渐升高,从第7天[(157±35)ng/L]开始显著高于SC组[(123±29)ng/L]和UC组[(119±28)ng/L]水平(P<0·05),并且与MAP呈正相关(r=0·605,P=0·002);其心脏和肾皮质ET-1mRNA的表达随间歇低氧时间的延长也逐渐增加,从第21天开始显著高于两对照组水平(P<0·05);其主动脉、心脏和肾皮质ETARmRNA的表达与两对照组比较,差异无显著性(P>0·05)。SC组与UC组比较,各项观察指标差异均无显著性(P>0·05)。结论慢性间歇低氧可导致ET-1表达增加,使血循环ET-1水平升高,而对ETAR的表达没有影响,提示ET-1的过度表达可能是慢性间歇低氧诱发高血压的重要原因之一。     

ET—1及其受体拮抗剂对脐动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨内皮素-1（ET-1）及其特异性ETA-R拮抗剂（BQ123）对脐动脉血管平滑肌细胞（HUSMC）增殖的影响。方法 组织块培养HUSMC，传代后分为对照组、ET-1组、BQ123 ET-1组。形态学连续观察HUSMC表型变化、MTT测定（OD值）、^3H-TdR掺入法（cpm值），观察ET-1及BQ123对HUSMC增殖的影响。结果 ET-1组HUSMC呈“合成型”；对照组和BQ123 ET-1组HUSMC呈“收缩型”。100nM的ET-1，可促进HUSMC增殖，BQ123可完全抑制ET-1引起的增殖作用。结论 ET-1可剂量依赖地促HUSMC增殖，ETA-R拮抗剂可完全抑制ET-1的上述作用，具有临床应用前景。     

内皮素-1促进人脐动脉平滑肌细胞增殖

目的:探讨内皮素-1与血管平滑肌细胞增殖的关系.方法:用噻唑蓝比色法观察内皮素-1对血管平滑肌细胞增殖的影响,流式细胞仪法观察对血管平滑肌细胞增殖周期的影响.结果:与对照组比较,内皮素-1明显促进血管平滑肌细胞增殖;促进平滑肌细胞DNA合成;促进平滑肌细胞从G0期向S期的转变,G0/G1期细胞百分比明显降低,而S期细胞百分比增加.结论:内皮素-1对血管平滑肌细胞增殖有明显的促进作用.     

脑出血患者血肿周围星形细胞内皮素-1表达的变化

目的：探讨内皮素-1与星形细胞之间相互关系及其在脑出血的作用。方法：采用内皮素-1抗体SP免疫组化技术对脑出血患者尸检材料血肿周围脑组织反应性星形细胞内皮素-1表达水平进行检测。结果：发现脑出血组反应性星形细胞增生、肥大变性，存在内皮素-1的表达，而对照组星形细胞形态基本正常，偶见阳性。结论：内皮素-1及反应性星形细胞可能参与脑出血的病理机制。     

低频电磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响

目的 观察不同磁场强度、不同作用时间的低频电磁场（LFEMF）对培养的大鼠主动脉的血管平滑肌细胞（VSMC）骨桥蛋白（OPN）基因表达的影响，以探讨磁场是否能用于经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后冉狭窄（RS）的防治。方法 用含10％小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC，随机分为对照组、不同磁场强度（20，40，60mT）及作用时间（10，20，30min）实验组，应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western Blot技术结合光密度扫描分析，观察LFEMF对VSMC的OPN表达的影响。结果 各LFEMF组均明显抑制VSMC的OPN mRNA和OPN蛋白的表达，且具有磁场强度依赖性抑制作用，但无时间依赖性（P〈0．05）。结论 LFEMF能在基因水平上抑制VSMC的OPN的表达。     

肝硬化患者血浆内毒素、内皮素-1和一氧化氮水平变化及相关性研究

目的探讨肝硬化患者血浆内毒素(LPS)、内皮素-1(ET-1)以及一氧化氮(NO)水平的变化,了解三者之间及它们与肝功能损害程度的关系。方法用鲎试验定量检测法,放射免疫法和硝酸酶还原法,测定65例肝硬化患者(其中ChildA、B、C级分别为19、26、20例)和29例健康人血浆LPS、ET-1以及NO水平。结果肝功能ChildA、B、C级组血浆NO水平分别为(31.27±9.55)、(53.29±10.68)、(77.35±9.63)mmol/L,ET-1水平分别为(51±15)、(75±18)、(103±16)ng/L,LPS水平分别为(0.063±0.037)、(0.203±0.079)、(0.398±0.105)Eu/mL。肝硬化患者血浆NO、ET-1及LPS水平随肝功能恶化逐渐升高。另外,随着腹水量增加,血浆NO、ET-1及LPS水平也呈递增性变化。相关性分析显示,肝硬化患者血浆LPS、ET-1和NO三者之间呈正相关。结论联合监测血浆LPS、ET-1与NO水平有助于判断肝硬化腹水患者病情,对于指导治疗,改善预后可能具有重要的临床价值。     

支气管哮喘急性期与缓解期血浆内皮素-1测定的临床意义

内皮素 - 1(ＥＴ - 1)是日本学者Ｙａｎａｎｇｉｓａｗａ等在 1988年首次从猪主动脉内皮细胞培养液中分离纯化的一种生物活性肽 ,其主要作用是收缩血管平滑肌。ＥＴ - 1对支气管平滑肌及肺血管平滑肌亦有收缩作用[1] ,并参与许多肺部疾病的病理生理过程。为进一步探讨血浆ＥＴ - 1在支气管哮喘急性发作时的作用 ,我们观察了哮喘患者急性期与缓解期血浆中ＥＴ - 1变化。一、对象与方法1.研究对象 :(1)支气管哮喘组 :38例 ,男 2 1例 ,女 17例 ,年龄 17～ 74岁 ,平均年龄 48 1岁。所有病人均符合第四版《内科学》中哮喘病的诊断标准[2 ] 。 (2 …     

细胞周期蛋白A对培养大鼠血管平滑肌细胞起始识别复合物1表达水平的影响

目的 探讨细胞周期蛋白A （Cyclin A）对培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）周期起始识别复合物1（ORC1）表达水平的影响.方法 采用组织块贴片法原代培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,利用双胸苷使VSMCs达到细胞周期同步化,应用逆转录聚合酶链反应技术和流式细胞仪检测不同细胞周期VSMCs的ORC1和Cyclin A mRNA和蛋白表达.结果 经鉴定培养的细胞为VSMCs,采用血清饥饿法、双胸苷阻断法和秋水仙素阻抑法分别获得了处于不同细胞周期的同步化的VSMCs：G0/G1期（89.22 ±3.54）％,G1/S交界期（66.74±7.16）％,S期（63.24±4.06）％,G2/M期（51.64±11.18）％,各期比较差异有统计学意义（P均＜0.01）.Cyclin A在静止状态对VSMCs的ORC1 mRNA和蛋白无影响,在G2/M期达到高峰[（52.133 3 ±2.122 1）％],与G1/S期[（10.9167±0.531 1）％]、S期[（7.656 7±0.412 4）％]比较,差异有统计学意义（P均＜0.01）.ORC1在G2/M期达到最低值[（1.276 7 ±0.161 7）％],与G1/S期[（13.371 0±1.057 3）％]、S期[（3.043 3 ±0.538 0）％]比较,差异有统计学意义（P均＜0.01）,可能原因是Cyclin A阻止ORC1结合在VSMCs染色质上.结论 CyclinA可能调控ORC1在VSMCs细胞周期的启动.     

血管紧张素-(1-7)对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血管紧张素-（1—7）[ANG-（1—7）]对体外培养兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法体外培养兔肺动脉平滑肌细胞，鉴定后传代培养，取4～7代细胞，应用不同浓度ANG-（1—7）干预，并与血管紧张素-Ⅱ（ANG—Ⅱ，浓度10^-6mol／L）、空白组对照。通过台盼蓝染色法细胞计数、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，确定肺动脉平滑肌细胞的生长趋势变化。结果10^-12～10^-10mol/L浓度ANG-（1—7）与相应对照组比较，细胞数、光吸收值（A值）变化不明显，无统计学意义，10^-9～10^-5mol／L浓度组，ANG-（1—7）＋ANG—Ⅱ（浓度均为10^-6）组与空白对照组比较，细胞数和A值均下降，差异有统计学意义，与血管紧张素-Ⅱ组比较差异也有统计学意义；10^-6、10^-5浓度组与ANG-（1—7）＋ANG—Ⅱ（浓度均为10^-6mol／L）组引起的变化差异不明显，无统计学意义。结论ANG-（1—7）呈剂量依赖性抑制胎牛血清诱导的兔肺动脉平滑肌细胞增殖，在浓度为10^-6时效果最明显，再增加浓度效果无明显增强，这种抑制作用与ANG-Ⅱ的存在无明显关系。     

Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的 研究低氧条件下Rho激酶是否参与低氧引起的血管平滑肌细胞增生。方法 组织块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）。应用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法观察细胞增生情况；流式细胞仪观察细胞周期的变化；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测Rho激酶的表达。结果 缺氧组MTT比色吸光度（A）值显著高于常氧组．缺氧24h＋Rho激酶抑制剂Y27632组A值显著低于缺氧24h组；缺氧组细胞周期G2／M期细胞比例显著高于常氧24h组，缺氧24h＋Y27632组细胞比例显著低于缺氧24h组。Western blot结果表明各缺氧组Rho激酶表达均明显高于常氧组，其中以缺氧24h组表达增高最明显；Rho激酶在缺氧24h＋Y27632组明显低于缺氧24h组。结论 缺氧可诱导PASMCs增殖，缺氧诱导的增生PASMCs中Rho激酶活性水平增加，提示缺氧致PASMCs增殖过程中Rho激酶可能发挥重要作用。     

辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及FGFR1与p21ras表达的干预作用

目的:观察辛伐他汀对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中FGFR1、p21ras蛋白表达的影响。方法:体外培养大鼠VSMC,建立VSMC增殖模型,应用不同浓度的辛伐他汀干预,MTT法测定细胞增殖活力;免疫印迹法检测FGFR1与p21ras蛋白的表达。结果:与对照组比较,辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P<0.05);与对照组(FGFR1208.07±10.70,p21ras202.43±12.36)相比,低剂量组(FGFR1181.47±7.43,p21ras182.00±8.98)的FGFR1、p21ras表达差异无显著性(P>0.05),中剂量组(FGFR1144.90±9.03,p21ras147.03±9.13)、高剂量组(FGFR1104.43±8.08,p21ras100.3±8.37)的表达均较明显降低(P<0.05),中、高剂量组FGFR1、p21ras表达较低剂量组均显著降低(P<0.05),高剂量组表达又较中剂量组显著降低(P<0.05),呈剂量依赖性。结论:辛伐他汀能抑制VSMC增殖,该作用是通过抑制FGFR1、p21ras蛋白表达实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一。     

内皮素-1在糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化中作用

目的探讨内皮素-1（endothelin-1,ET-1）在糖尿病性勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（corpus cavernosum smooth musclecells,CCSM）表型转化中的作用。方法采用链脲佐菌素建立糖尿病性ED大鼠模型,采用改良组织块贴壁法体外培养正常大鼠及糖尿病性ED大鼠CCSM,将CCSM分为对照组、糖尿病性ED组、对照＋ET-1组和糖尿病性ED＋ET-1组,其中对照＋ET-1组与糖尿病性ED＋ET-1组加入10^-7mol／LET-1,对照组与糖尿病性ED组加入PBS缓冲液。采用RT—PCR法检测4组碱性调宁蛋白（calponin 1,Cnnl）和骨桥蛋白（osteopontin,OPN）mRNA表达情况。结果糖尿病性ED＋ET-1组CnnlmRNA表达水平（3．51±0．15）低于对照组（10．21±1．52）和糖尿病性ED组（4．79±0．56）,糖尿病性ED组和对照＋ET-1组（5．04±0．64）低于对照组（P〈0．01）;糖尿病性ED＋ET-1组OPNmRNA表达水平（6．97±0．74）高于对照组（1．22±0．21）和糖尿病ED组（5．35±0．62）,糖尿病性ED组和对照＋ET-1组（4．98±0．46）高于对照组（P〈O．01）。结论ET-1不仅对收缩型CCMS有促表型转化作用,对合成型CCMS也有促表型转化作用,且ET-1对CCSM的作用是不可逆的。     

血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白对血管平滑肌细胞的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ1型受（AT1受体）体相关蛋白（ATRAP）对AT1受体介导的血管平滑肌增殖和新构建的影响。方法：采用细胞培养和转染，将[，H]胸腺嘧啶掺入测定DNA合成、动物实验和外科程序。结果：[^3H]胸腺嘧啶掺入测定显示，ATRAPcDNA转染的血管平滑肌细胞（VSMCs）与pcDNA转染的VSMCs比较．过度表达的ATRAP明显抑制了AT1受体介导的VSMCs的增生，有时间依赖性。Western blotting结果显示．过量表达的ATRAP中含磷或不合磷的细胞外信号调控激酶（ERK）抗体表达均较对照组增高。组织病理学观察．过量表达的ATRAP明显抑制了AT1受体介导的VSMCs的增生。结论：过度表达的ATRAP明显抑制了AT1受体介导的VSMCs的增生，ATRAP的生长抑制作用可能是通过在VSMCs中的AT1受体介导的细胞外信号调控激酶（ERK）的后期激活。     

低频电磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶的影响

目的 观察不同磁场强度及作用时间的低频电磁场（LFEMF）对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）表达基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的影响。方法 用含10％小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC，随机分为对照组、LFEMF不同磁场强度（20，40，60mT）及时间（10，20，30min）干预组，运用MMP-2活性酶图分析法结合光密度扫描分析，观察LFEMF对VSMC的MMP-2表达的影响。结果 不同磁场强度组均明显抑制MMP-2的活性，且具有剂量依赖性，但抑制作用不随时间延长而变化，不具有时间依赖性。结论 适当强度和作用时间的LFEMF抑制VSMC的MMP-2活性的表达，磁场对经皮腔内冠状动脉成形术（PTCA）及支架植入术后的再狭窄（RS）可能具有防治作用。     

大剂量阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2的影响

目的研究不同剂量阿托伐他汀对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的影响。方法用含10%小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC,随机分为对照组,不同剂量阿托伐他汀干预组,运用MMP-2活性酶图分析法结合光密度扫描分析,观察不同剂量阿托伐他汀对VSMC的MMP-2表达的影响。结果不同剂量阿托伐他汀组均明显抑制MMP-2的活性,且具有剂量依赖性。结论阿托伐他汀可以显著降低VSMC的MMP-2的表达,大剂量抑制作用更强。     

Fas和FasL在Na+/H+交换器-1抑制诱导缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

目的探讨Fas、FasL在Na^＋／H^＋交换器-1（NHE-1）抑制所诱导的缺氧大鼠肺动脉平滑叽细胞（PASMCs）凋亡中的作用。方法将转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMCs置于缺氧条件下（O2的体积分数低下1％）培养。缺氧培养2、6、12、24和48h后用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况；半定量逆转录-聚合酶链反应（sqRT—PCR）疗法检测细胞内fas和fasL mRNA表达变化；免疫细胞化学法检测细胞内Fas和FasL蛋白表达变化。结果转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMCs在缺氧培养时，其细胞凋亡率随缺氧时间的延长而逐渐升高，但细胞内fas、fasL mRNA及Fas、FasL蛋白表达与对照组细胞比较差异均无显著性。结论Fas／FasL死亡通路可能不参与NHE-1抑制而诱导缺氧大鼠PASMCs凋亡的调控。     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞磷酸酶PHLPP蛋白表达的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及氧化低密度脂蛋白(oxLDL)促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的细胞内信号转导机制.方法:体外培养的免血管平滑肌细胞分3组处理,以细胞计数、噻唑盐比色法测定细胞增殖能力,Westem Blot定量磷酸酶PHLPP蛋白表达水平.结果:IGF-1(100 μg/L)使VSMC计数及MTF比色A值分别增至对照组的3.02倍及3.06倍.oxLDL(50 μg/mL)使上述两值分别增至对照组的2.03倍及2.91倍.两者均可以显著抑制PHLPP蛋白表达水平.结论:IGF-1及oxLDL的促VSMC增殖作用可能与抑制PHLPP蛋白的负性调节细胞生长作用有关.