C57-ras致癌性转基因模型杂交1代的脏器及血液学参数测定

目的测定自主建立的致癌性转基因动物模型C57-ras小鼠杂交F1代的血液生理生化值和主要脏器重量,计算脏器系数并作统计学分析。方法选取同窝C57-ras转基因阳性鼠和BALB/cJ小鼠交配后的杂交1代CB6F1-Tg小鼠,雌雄各半,采血,测量血液生理指标和血清生化指标,并称主要脏器重量。结果血液生理指标中,CB6F1-Tg转基因阳性(+/-)雌鼠和阴性(-/-)雌鼠间比较,MCHC存在极显著性差异(P<0.01);CB6F1-Tg转基因阳性(+/-)雄鼠和阴性(-/-)雄鼠间比较,PLT、PCT、EOS%、NEUT、NEUT%、LYM%存在显著性差异(P<0.05),NEUT%、LYM%存在极显著性差异(P<0.01)。血清生化指标中,CB6F1-Tg阳性(+/-)雌鼠和阴性(-/-)雌鼠比较,ALT、TP、ALB存在显著性差异(P<0.05),TG存在极显著性差异(P<0.01)。主要脏器重量和脏器系数均无显著性差异(P>0.05)。结论测定了新建C57-ras致癌性转基因小鼠模型F1代阳性小鼠和阴性小鼠的主要生物学特性,为该模型在致癌性安全性评价等领域的实际应用中提供参考。     

Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能及子代离乳前体质量的影响

目的探讨小窝蛋白Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠离乳前繁殖性能及体质量的影响。方法分别对Caveolin-1基因敲除小鼠和同源C57小鼠进行体质量、初产日龄、胎次间隔时间、平均产仔数及离乳存活率的观察及分析。结果 C57BL/6小鼠鼠仔平均体质量均高于Caveolin-1基因敲除鼠,在1、7、14 d时两者比较差异无统计学意义(P>0.05);21 d时,两者差异具有统计学意义(P<0.05);两组初产日龄、胎次间隔时间及平均产仔数差异无统计学意义(P>0.05),但C57BL/6小鼠离乳存活率明显高于基因敲除鼠,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Caveolin-1敲除小鼠的体质量下降、繁殖性能下降。     

fos-GFP转基因小鼠学习记忆能力的变化

目的研究fos-GFP转基因小鼠学习记忆能力的变化。方法转基因组和对照组小鼠分别采用高架十字迷宫、旷场实验、水迷宫测试、条件性场景恐惧记忆测试方法进行小鼠的自发活动、焦虑状态及学习记忆能力测试。结果 fos-GFP转基因小鼠与正常小鼠旷场内运动距离、运动速度、在旷场边缘区逗留的时间及在十字迷宫中开放臂探究的时间比较差异无显著性(P>0.05);两组小鼠水迷宫训练中各时间点找到平台的潜伏期比较差异无显著性(P>0.05);两组小鼠水迷宫测试中在各象限时间百分比比较,差异无显著性(P>0.05)。fos-GFP转基因小鼠在无特定场景提前接触的条件恐惧测试中的僵立时间与正常小鼠比较差异有显著性(t=9.48,P<0.001)。结论 fos-GFP转基因小鼠海马依赖性的联合型学习记忆能力有所提高。     

飞行人员正常眼暗适应曲线

目的:检测飞行人员正常眼的暗适应阈值,以建立该项指标的正常值曲线范围,为制定相关体格标准提供数据。方法:对58名现役海军航空兵健康飞行人员以单眼及双眼组分别进行了G/W暗适应阈值测定(1～3min时限内)。结果:(1)单眼组绝对阈值(?)=1.83㏒,双眼组(?)=1.89㏒,两组间无显著性差异(t=—0.5,P>0.05),两组各时限阈值((?))间亦无显著性差异(t=-0.12～1.13,P>0.05)。(2)绝对阈值无左、右眼别差异(t=0.17,P>0.05),但有年龄差异。结论:58例飞行人员正常眼暗适应绝对阈值(?)=1.86㏒,正常值范围为1.46～2.26㏒,正常暗适应曲线值可供飞行人员体检及医务鉴定参考之用。     

脂蛋白脂肪酶基因敲除小鼠脂代谢动态观察

目的通过脂蛋白脂肪酶(LPL)基因敲除杂合子LPL(+/-)小鼠模型脂质代谢的动态观察,进一步明确LPL在脂代谢中的关键作用。方法野生型16周龄C57小鼠6只(对照组)、16周龄LPL(+/-)小鼠6只[LPL(+/-)16周龄组]、28周龄LPL(+/-)小鼠6只[LPL(+/-)28周龄组],螺旋CT测量小鼠内脏脂肪和皮下脂肪的含量,内眦静脉采血分离血清检测血清甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平,然后处死小鼠,检测3组小鼠内脏脂肪和腹部及股部皮下脂肪的质量,并制备肝脏、四肢骨骼肌、腹部及股部皮下脂肪、内脏脂肪、胰腺组织匀浆,检测肝脏、骨骼肌、内脏脂肪、皮下脂肪和胰腺的TG和FFA水平。结果LPL(+/-)16周龄组小鼠血清、肝脏、骨骼肌、内脏脂肪、胰腺中的TG、FFA水平及皮下脂肪FFA水平较对照组均呈不同水平的增加,但差异无统计学意义(P>0.05),皮下脂肪TG的增加有统计学意义(P<0.05)。LPL(+/-)28周龄组小鼠血清、肝脏、骨骼肌、内脏脂肪、胰腺及皮下脂肪中的TG、FFA水平较LPL(+/-)16周龄组增加,但仅肝脏和内脏脂肪TG水平与LPL(+/-)16周龄组之间有统计学意义(P<0.05)。LPL(+/-)28周龄组的血清、肝脏、皮下脂肪、内脏脂肪TG及骨骼肌、皮下脂肪、胰腺FFA水平较对照组增高,差别有统计学意义(P<0.05)。LPL(+/-)16周龄组的内脏脂肪质量高于对照组,差别具有统计学意义(P<0.05);LPL(+/-)28周龄组小鼠内脏脂肪和皮下脂肪的质量和含量均高于对照组和LPL(+/-)16周龄组,差别均具有统计学意义(P<0.05)。结论LPL是脂代谢的关键酶,LPL(+/-)小鼠血清及组织脂质变化显著。     

吸入糖皮质激素对哮喘小鼠肺部炎症和支气管肺泡灌洗液中白介素-12、干扰素-γ的影响

目的通过观察各实验组小鼠肺部炎症情况和检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子白介素-12和干扰素-γ(IFN-γ)的水平,探讨糖皮质激素对小鼠支气管哮喘的治疗作用机制。方法清洁级BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、布地奈德组。以卵清蛋白致敏激发法建立哮喘小鼠模型。显微镜下观察肺组织病理切片;收集BALF,计算嗜酸性粒细胞(EOS)绝对计数百分比;用ELISA法测定BALF中IL-12和IFN-γ的水平,并做相关性分析。结果哮喘组小鼠BALF中白细胞总数、EOS数目和百分比分别与正常组、布地奈德组相比均明显增加(P<0.01),在正常组、布地奈德组之间比较差异无显著性(P>0.05)。哮喘组小鼠BALF中IL-12和IFN-γ水平分别与正常组和布地奈德组相比均减低(P<0.05),在正常组和布地奈德组对这两个指标进行比较差异无显著性(P>0.05)。各组小鼠BALF中IL-12和IFN-γ水平都呈正相关关系。结论布地奈德可促进IL-12和IFN-γ的表达,减轻肺部炎症,可能是糖皮质激素治疗哮喘的重要机制。     

新生儿缺氧缺血性脑病机体免疫功能变化的研究

目的:探讨缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)新生儿外周血T淋巴细胞亚群和血清免疫球蛋白的改变及二者关系,综合分析细胞免疫和体液免疫在新生儿HIE发病中的特点。方法:不同程度HIE患儿30名作为HIE组;同期出生的正常新生儿18名作为正常对照组。流式细胞术测定外周血T细胞亚群,免疫比浊法测定血清免疫球蛋白,SPSS16.0统计分析软件处理结果。结果:T细胞亚群的比较:HIE组CD3+、CD4+较正常对照组明显降低,差异有显著性(P<0.05);轻度组与中重度组比较无显著性差异(P>0.05),CD8+、CD4+/CD8+在三组间表达均无显著性差异(P>0.05)。血清免疫球蛋白的比较:HIE组IgM较正常对照组偏低,差异有显著性(P<0.05);轻度组与中重度组比较无显著性差异(P>0.05)。IgG、IgA在三组间表达均无显著性差异(P>0.05)。结论:新生儿缺氧缺血性脑病对细胞免疫的影响主要表现在总T细胞(CD3+)和辅助/诱导T细胞(CD4+)的降低;对体液免疫的影响主要表现在血清免疫球蛋白IgM的降低。     

Nrf2基因敲除小鼠的繁育及生长发育的生物学特性

目的 了解ICR-Nrf2小鼠的生物学特性.方法 用原种繁殖扩群,观察繁殖性能及仔鼠的生长发育.结果 ICR-Nrf2--/-与ICR-Nrf2-+/+比 ,总的产仔数与离乳数减少 (P<0.01或 P<0.05);体重在出生后第3周时差异有显著性(P<0.01), 第5周至第25周时同性别间差异非常显著 (P<0.01).结论 Nrf2基因缺失小鼠的产仔数、离乳数均少于野生型小鼠,仔鼠的生长速度也较野生型小鼠慢.     

枸橼酸莫沙比利对小鼠胃肠运动的影响

目的:观察枸橼酸莫沙比利对小鼠胃肠运动的影响。方法:60只正常小鼠随机分为枸橼酸莫沙比利组、多潘立酮组及正常对照组,分别检测各组小鼠胃内色素相对残留率及小肠推进比,并进行组间比较。结果:枸橼酸莫沙比利组小鼠胃内色素相对残留率较正常对照组低(P<0.05),与多潘立酮组相比无显著性差异(P>0.05),小肠推进比较正常对照组高(P<0.05),优于多潘立酮组(P<0.05)。结论:枸橼酸莫沙比利对正常小鼠的胃排空及肠推进运动均有明显的促进作用,为全胃肠道的促动力药物。     

乙酰唑胺对小鼠缺氧耐受和游泳耐力的影响

目的探讨乙酰唑胺对小鼠缺氧耐受和游泳耐力的影响。方法分别给小鼠乙酰唑胺200mg/kg(乙酰唑胺组,n=20)、心得安16mg/kg(心得安组,n=20)、等量生理盐水(生理盐水组,n=20),均连续给药3天并于末次给药1h后测定小鼠25℃时的常压缺氧耐受能力和血清乙酰胆碱酯酶(AchE)活性;同时测定小鼠在负重7%、水深15cm、水温20℃条件下的游泳耐力。结果乙酰唑胺组耗氧率比生理盐水组显著降低(P<0.05),与心得安组比较差异无显著性(P>0.05);乙酰唑胺组AchE活性较生理盐水组显著升高(P<0.01),与心得安组比较差异无显著性(P>0.05);乙酰唑胺组游泳力竭时间比生理盐水组显著缩短(P<0.01),与心得安组相比差异无显著性(P>0.05)。结论乙酰唑胺能提高小鼠机体抗常压的缺氧耐受能力和降低小鼠游泳耐力。     

水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的: 繁殖和鉴定水通道蛋白3(AQP-3)基因敲除小鼠。方法: 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性纯合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果: AQP-3杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论: 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得AQP-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

SRC-3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的繁殖和鉴定SRC-3基因敲除小鼠.方法将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雄性纯合子,就将其与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠.结果SRC-3杂合子小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠.结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得SRC-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径.     

CyclinD(-/-)/Patched(+/-)双基因敲除鼠的构建

目的构建CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠以验证Hh传导系统与Rb系统的关系。方法应用已有的杂合子CycD基因敲除鼠CycD（＋／-）与杂合子Ptc基因敲除鼠Ptc（＋／-）进行交配繁殖,得到双基因杂合子敲除鼠CycD（＋／-）／Ptc（＋／-）,再利用该双基因杂合子敲除鼠进行二次交配繁殖,得到实验组CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠。结果实验得到了双基因敲除鼠CycD（-／-）／Ptc（＋／-）、双基因杂合子基因敲除鼠CycD（＋／-）／Ptc（＋／-）、CycD单基因敲除鼠CycD（-／-）／Ptc（＋／＋）。结论通过本实验方法得到CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠,可用于进一步揭示Ptc基因与CycD基因相互影响调控的作用及Hedgehog与Rb信号传导通路在哺乳动物中的相关性。     

水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1（aquaporin-1，AQP-1）基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖，繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型，提取每只小鼠尾部基因组DNA，用PCR法进行鉴定，一旦获得雄性纯合子，将其与雌性杂合子交配，依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功，并得到较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

NLRP3基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖及鉴定NLRP3基因敲除（NLRP3^-/-）小鼠。方法 将引进的NLRP3基因敲除杂合子小鼠,单独进行饲养及配种繁殖,繁殖后其子代出现3种基因型：野生型、杂合子型及纯合子型,提取每只小鼠的基因组DNA,用PCR和T7E1酶切方法进行鉴定,将获得的纯合子小鼠与异性杂合子交配,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠。结果 NLRP3杂合子小鼠的饲养及繁殖均获得成功,获得了NLRP3基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养、繁殖及鉴定方法是从NLRP3基因敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应( PCR)方法鉴定子代小鼠基因型. ASIC1 基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子( ASIC1+/-)、纯合子( ASIC1-/ -)和野生型( ASIC1+/ +).     

C3在迟发型超敏反应中的作用

目的 探讨补体成分3（C3）在迟发型超敏反应（DTH）中的作用。方法用卵白蛋白（OVA）诱导C3基因敲除（C3^-/-）和野生型（C3^＋/＋）小鼠足垫部位的DTH，测量足垫厚度的变化，并对反应部位组织进行HE和免疫组化染色检测。分离小鼠脾脏T淋巴细胞，用巨噬细胞作为抗原提呈细胞，在体外分别用丝裂原和特异性抗原刺激，用^3H-TdR掺入法评价T淋巴细胞的增殖活性。结果OVA诱导足垫DTH后，C3^-/-小鼠足垫厚度和局部浸润单个核细胞的数量都显著低于C3^＋/＋小鼠的，其中浸润的单个核细胞主要为CD4^＋T淋巴细胞。2种小鼠的T淋巴细胞对丝裂原刺激的反应相似，而已致敏C3^-/-小鼠脾脏T细胞对特异性抗原再次刺激后的增殖反应显著低于C3^＋/＋小鼠。结论C3缺陷明显影响DTH应答，提示C3在DTH中起了重要作用.     

类固醇受体辅活化子-1基因敲除小鼠的繁殖与筛选

目的 繁殖和鉴定SRC-1基因敲除小鼠.方法 将所引进的雄性野生型小鼠和雌性SRC-1基因敲除小鼠进行交配繁殖,繁殖成功后其子代均为杂合子,杂合子和杂合子再交配就可以得到野生型、杂合型及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雌性和雄性纯合子,其子代就均为纯合子.结果 SRC-1小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦成功获得了较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及筛选方法,可以获得较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.     

瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6基因敲除小鼠模型的建立

目的 建立Trpv6基因剔除小鼠模型,为在体研究Trpv6的生物学功能及其与骨代谢关系创造条件。 方法 从Ensembl数据库中获得小鼠Trpv6基因组序列。设计基因剔除策略,构建基因剔除载体pBR322-MK-Trpv6。以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得双抗性克隆。PCR鉴定出正确同源重组的胚胎多能干细胞（ES细胞）克隆。将正确同源重组的ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合体小鼠。挑选嵌合率在50%的雄鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得的灰鼠,PCR鉴定为杂合子小鼠。杂合子小鼠交配后获得纯合子小鼠。 结果 成功构建了打靶载体pBR322-MK-Trpv6。电穿孔后,共获得24个正确同源重组的克隆,同源重组效率为25%。同源重组的克隆经显微注射后,共获得4只嵌合率大于50%的雄鼠。嵌合鼠与野生型C57BL/6J交配,获得57只来源于ES细胞的灰鼠,PCR鉴定证实17只为杂合子小鼠,阳性率为33.3％。杂合子小鼠交配获得纯合子小鼠。经Western印迹证实纯合子小鼠无Trpv6蛋白的表达。 结论 已成功建立了Trpv6基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象。     

促肾上腺皮质激素释放激素基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)基因敲除(KO)小鼠饲养、繁殖及基因型鉴定的方法。方法从美国Jackson实验室引进CRH KO小鼠,按照遗传学规则,对杂合子型(CRH+/-)小鼠进行配对繁殖,提取幼鼠尾部组织全基因组DNA,通过聚合酶链反应(PCR)对幼鼠基因型进行鉴定。结果 CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠的繁殖和饲养均获得成功,采用PCR成功地对所获得的小鼠进行基因分析,在子代小鼠中存在野生纯合子型(CRH+/+)、杂合子型(CRH+/-)及CRHKO纯合子型(CRH-/-)小鼠。CRH-/-小鼠较另外2种基因型小鼠存活率明显下降,但3种基因型小鼠在出生后10 d及30d体质量无明显差异。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法可从杂合子型(CRH+/-)小鼠中获得CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠。