急性胰腺炎胰腺微循环血小板内皮细胞粘附分子-1的表达

目的　探讨急性胰腺炎 (AP)胰腺微循环中血小板内皮细胞粘附分子 1 (PECAM 1 )表达的变化规律。方法　Wistar大鼠 48只 ,诱发AP动物模型 ,用流式细胞仪分析脾静脉血中白细胞PECAM 1的表达。结果　与正常组相比 ,各实验组多形核白细胞 (PMN)PECAM 1的表达下调 ,在急性坏死性胰腺炎 (ANP)组差异有显著性 ,ANP 2h组 [(63 .0± 1 9.2 ) % ,P <0 .0 5] ,ANP 4、6h组[(38.1± 2 1 .2 ) %、(32 .9± 1 4 .5) % ,P <0 .0 0 1 ] ;淋巴细胞PECAM 1的表达轻度下调 ,差异无显著性(P >0 .0 5)。结论　胰腺微循环中PMNPECAM 1表达的下调说明PMN的激活 ,可促进PMN外渗 ;抑制PMNPECAM 1的过度表达可能是治疗AP和 /或阻断AP向坏死型转化的一种潜在途径     

中药复方TCMP-1对急性胰腺炎血小板内皮细胞粘附分子-1表达变化的研究

目的 探讨急性水肿性胰腺炎(AEP)血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)表达的变化规律及中药复方TCMP-1对AEP的治疗作用。方法 Wistar大鼠54只,诱发AEP动物模型,并给予TCMP-1干预,用流式细胞仪分析脾静脉血中多形核白细胞(PMN)PECAM-1的表达。结果 (1)在AEP自然病程组中,外周循环和胰腺微循环PMN PECAM-1的表达水平在AEP 2、4 h组相近,自AEP 4 h组开始,外周循环PECAM-1的表达上调直至AEP 8 h组;胰腺微循环PECAM-1的表达下调直至AEP 8 h组;在AEP 8 h组,PMN PECAM-1的表达有显著性差异(P<0.05)。(2)在AEP 8 h治疗组与AEP 8 h自然病程组中,体循环PMN PECAM-1的表达有显著性差异(P<0.05)。结论 (1)下调体循环PMN PECAM-1的表达水平或抑制PMN PECAM-1的过度表达,可以阻止胰腺微循环中PMN与内皮细胞的粘附。(2)抑制PMN PECAM-1的过度表达是中药复方TCMP-1实现其疗效作用的主要机制之一。     

急性水肿性胰腺炎内源性RAS的活化与局部微循环障碍关系的研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)胰腺内源性肾素一血管紧张素系统(RAs)的活化与胰腺局部做循环障碍之间的关系，为进一步阐明AP时胰腺局部微循环损伤的机制提供实验依据：方法采用异硫氢酸荧光素(FTTC标记红细胞进行胰腺局部微循环活体观察，放免法检测局部微循环血浆及咦腺局部组织AngⅡ的含量变化。结果(1)与正常对照组相比，AEP组胰腺微循环血浆及局部组织AngⅡ的表达自2h开始上调，直至8h(P＜0．05)，其中自4h开始局部组织AngⅡ的含量明显高于血浆中AngⅡ的含量，差异有显著性(P＜0．05)；(2)与正常对照组相比，AEP组胰腺局部组织在疾病早期即开始出现血液流速减慢、流量减少等微循环障碍表现；(3)胰腺局部微循环血量随着RAS活化的上调而逐渐减少，相关分析显示两者呈显著线性相关(r=0．5449，P＜0．05)。结论胰腺局部组织的RAS参与AP早期的微循环损伤的病理过程，抑制或拮抗胰腺局部组织的RAS的活化可能有助于胰腺局部微循环障碍的改善。     

急性水肿性胰腺炎大鼠胰腺微血流变化和环氧合酶-2的表达

目的　探讨环氧合酶 2 (COX 2 )mRNA的表达在急性水肿性胰腺炎 (AEP)大鼠胰腺局部微血管变化中的作用。方法　皮下注射蛙皮缩胆囊肽 (Caerulein)诱发急性水肿性胰腺炎。RT PCR检测胰腺COX 2mRNA表达。分光光度法检测胰腺炎指标 :血浆髓过氧化酶 (MPO)和血清淀粉酶 (AMS)的活性。异硫氰酸荧光素标记红细胞 (FITC RBC)技术对胰腺活体进行局部微血管观察。结果　COX 2mRNA在正常对照组各时点均呈低水平表达 ,而在AEP组表达在Caerulein诱发后上调 ;与正常组相比 ,AEP组血清淀粉酶 (AMS)、血浆髓过氧化酶 (MPO)活性水平增加 (P <0 0 5 ) ;与对照组相比 ,AEP组的胰腺微血管改变如下 :胰腺毛细血管血流 4～ 8h减少、功能毛细血管密度 4～ 8h减少、毛细血管在 8h趋于通透。结论　COX 2在AEP组中的表达上调是客观反映胰腺微循环功能损害 ,如毛细血管灌流、血流及组织水肿等的指标。     

胰腺炎微循环障碍加重过程中血管内皮生长因子的表达及意义

目的:探讨在胰腺炎微循环障碍加重的过程中,血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况及其意义。方法:选取实验用大鼠共30只,其中15只大鼠处理为急性水肿型胰腺炎(AEP),另外15只大鼠则处理为胰腺炎微循环障碍加重后的急性坏死型胰腺炎(ANP),测量2组大鼠血清中VEGF的含量,检测VEGF在胰腺组织中的表达情况,同时将胰腺置于光学显微镜下,观察病理改变。结果:2组血清中均有较高的VEGF含量,ANP组高于AEP组(P<0.05);ANP组大鼠胰腺组织中的VEGF表达明显升高,与AEP组相比差异有统计学意义(P<0.01);光学显微镜下观察2组大鼠的胰腺组织,AEP组间质充血,存在坏死的腺泡灶,而ANP组则出现间质的出血,腺泡灶也存在大范围的坏死,同时大量红细胞沉积,坏死更加明显。结论:在胰腺炎微循环障碍加重之后,VEGF出现明显的高表达,在临床上可以作为疾病加重的指标之一。     

水肿型胰腺炎向坏死型胰腺炎进展中VEGF的表达及意义

目的：探讨在胰腺微循环障碍加重过程中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及意义。方法：将大鼠随机分为假手术对照组（N组）、急性水肿型胰腺炎组（AEP组）及急性坏死型胰腺炎组（ANP组）。于建模后6、12和24h,分别采用ELISA法检测各组血清中的VEGF、TNF-α及淀粉酶（AMY）含量,免疫组织化学方法检测各组胰腺组织中VEGF蛋白的表达情况,并分析比较。结果：AEP组与ANP组胰腺组织中各时相点VEGF染色评分均明显高于N组（P〈0．05）;建模6hANP组的评分显著高于AEP组（P〈0．05）,而12和24hANP组的评分均明显低于AEP组（P〈0．05）。ANP组和AEP组血清VEGF、TNF-α与AMY含量均显著高于N组（P〈O05）;ANP组与AEP组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）,但AEP组建模24hVEGF含量和12hAMY含量与ANP组差异无统计学意义（P〉0．05）;血清VEGF与TNF-α（正相关（P〈O.05）。结论：VEGF作为相对独立的微循环影响因素与全身炎症反应呈正相关,但在胰腺微循环障碍持续加重期,胰腺组织及血管内皮细胞严重受损,VEGF表达减少,胰腺坏死病变难以逆转。     

中药复方“清下1号”对急性水肿性胰腺炎局部微循环损伤的作用

目的探讨大鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)动物模型的早期微循环改变及中药复方清下1号（MCP-1）对AEP胰腺微循环的作用。方法用异硫氰酸荧光素-荧光标记红细胞(FITC-RBC)胰腺活体微循环技术、微血管树脂/墨汁灌注光镜和扫描电镜、透射电镜技术,用蛙皮缩胆囊肽诱发大鼠急性胰腺炎（AP）动物模型,观察36只Wistar大鼠的早期微循环改变、MCP-1应用后胰腺局部微循环的反应。结果与AEP自然病程组比较,MCP-1治疗组血清淀粉酶由（2997.7±801.4）?IU/L降至（1909.7±295.5）?IU/L（P<0.01）;胰腺间质炎性细胞浸润减少;腺泡细胞胞浆内空泡减少;毛细血管密度由（52.8±6.1）%增至（63.2±5.5）%（P<0.01);微血管管径由（4.5±0.4）?μm增至（5.9±0.6）?μm（P<0.05）;FITC-RBC显示胰腺微循环流速、流量增加,灌流稳定(0.87±0.06)nl/min（P<0.01)。结论MCP-1具有显著改善AP胰腺微循环的作用,抗AP胰腺局部微循环损伤是实现MCP-1疗效的重要机制。     

急性胰腺炎大鼠TNF-α和IL-10mRNA的表达及其意义

目的:探讨急性胰腺炎大鼠胰腺组织中TNF-αmRNA和IL-10 mRNA的表达及其对疾病发展和转归的意义。方法:以牛磺胆酸钠制备大鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)模型20只和急性坏死性胰腺炎(ANP)模型20只,另取10只正常大鼠作为对照。造模12h后各处死10只大鼠,检测血清和胰腺组织TNF-α和IL-10水平及其胰腺组织中的mRNA转录水平,并观察胰腺组织的病理变化。结果:正常组、AEP组和ANP组的血清TNF-α水平分别为126pg/ml、186pg/ml和337pg/ml,组织TNF-α水平分别为118pg/ml、210pg/ml和443pg/ml。正常大鼠血清和胰腺组织中无法检测到IL－10,而AEP和ANP组血清IL－10水平为660pg/ml和124pg/ml,组织IL－10水平为669pg/ml和202pg/ml。AEP大鼠组织中IL-10mRNA表达增强,ANP大鼠TNF-α mRNA表达增强。结论:AP大鼠胰腺组织中TNF-α和IL-10 mRNA的表达与其在血清和胰腺组织中的浓度成正比,而急性胰腺炎时胰腺本身可能就是产生细胞因子的主要器官。     

"清下1号"对急性水肿性胰腺炎胰腺局部微循环的作用

中西医结合治疗急性胰腺炎(AP)取得了可喜的成绩,但疗效的作用机制尚不清楚.我们运用蛙皮素(caerulein)诱发急性水肿性胰腺炎(AEP)动物模型,观察我院常用中药复方"清下1号"(MCP-1)对AEP胰腺微循环的影响,为阐明AP中西医结合治疗作用原理以及临床经验的推广提供依据. 1.材料与方法:健康成年雄性Wist-ar大鼠36只,随机分为(1)对照组(n=12),于实验开始后经皮下注射生理盐水;(2)AEP自然病程组,于实验开始后1 h、2 h经大鼠左背腹膜后间隙皮下注射蛙皮素5.5μg/kg和7.5μg/kg;(3)MCP-1治疗组,于最后一次注射蛙皮素后1h经鼻饲管给予MCP-1 20 ml/kg.     

大黄素诱导细胞凋亡对不同类型急性胰腺炎腺泡死亡方式的影响

目的 探讨大黄素(emodin)诱导细胞凋亡对不同类型急性胰腺炎(AP)腺泡细胞死亡方式影响及其可能机制.方法 制作大鼠急性水肿型胰腺炎(AEP)与急性坏死型胰腺炎(ANP)模型.使用大黄素进行治疗.采用原位TUNEL及RT-PCR等技术,观察胰腺组织内细胞凋亡、NF-κBmRNA、Bax mRNA及TNF-α mRNA等变化情况.结果 各组大鼠胰腺细胞凋亡指数与胰腺组织病理学评分呈负相关;大黄素治疗可诱导各型AP模型腺泡细胞凋亡,胰腺病理学改变及组织学评分改善,胰腺组织内NF-κB mRNA及Bax mRNA表达增加.结论 诱导不同类型AP胰腺细胞凋亡可明显减轻AP病情.大黄素为治疗AP的有效药物,可能通过影响NF-κB活化及Bax的表达来诱导AP时腺泡细胞的凋亡,减轻胰腺炎的严重程度.     

大鼠急性胰腺炎凋亡相关微小RNA表达谱分析

目的 分析大鼠急性胰腺炎凋亡相关微小RNA(miRNA)的表达谱.方法 将SD大鼠36只随机分为:空白对照组、急性水肿性胰腺炎组(AEP)和急性坏死性胰腺炎组(ANP).AEP组模型采用L-精氨酸150 mg/kg腹腔注射建立,ANP组模型采用L-精氨酸2400 mg/kg腹腔注射建立;各组于造模后12 h,检测血清淀粉酶、脂肪酶含量;TUNEL法检测胰腺组织腺泡细胞的凋亡,对胰腺组织进行病理学评分,各组选择2例应用miRNA芯片技术检测miRNA的表达,筛选表达差异miRNA,进行层次聚类分析.结果 与ANP组比较,AEP组的血清淀粉酶、脂肪酶和病理学评分明显降低(P＜0.05),胰腺腺泡细胞凋亡指数显著升高(P＜0.05);实验组与空白对照组比较各指标差异有统计学意义(P＜0.05).miRNA芯片分析:与空白对照组比较,ANP组和AEP组表达差异均在2倍以上;且与ANP组比较,AEP组表达差异在2倍以上,差异有统计学意义(P＜0.05)的miRNA认为是凋亡相关miRNA(AA miRNA).表达差异AA miRNA共计有8条,其中与ANP组比较,2倍以上升高AA miRNA的共5条;2倍以上降低AA miRNA的共3条.结论 急性胰腺炎发病过程某些miRNA可能参与胰腺炎腺泡细胞凋亡过程的凋节.

Abstract：

Objective To analyze micro RNA (miRNA) expression profile relating to rats apoptosis due to acute pancreatitis.Methods Thirty-six SD rats are randomly divided into:blank control group,acute edematous pancreatitis (AEP) and acute necrosis pancreatitis (ANP).AEP group model is established by L-arginine(150mg/kg) intraperitoneal injection and ANP group model is established by L-arginine (2400 mg/kg) intraperitoneal injection;inspect every group's serum amylase and lipase content 12 h after molding;inspect the apoptosis of acinar cell in pancreatic tissue by TUNEL method and give the pancreatic tissue the pathological score;choose 2 from every group to inspect miRNA expression by miRNA chip technology,and screen out the miRNA with differential expression and make hierarchical clustering analysis.Results Compared with ANP group,AEP group's serum amylase,lipase and pathological score decline dramatically (P＜0.05 ),and apoptosis index of pancreatic acinar cells increases significantly (P＜0.05 );there are dramatic differences between the experimental group indexes and blank control group indexes (P ＜0.05 ).miRNA chip analysis:In comparison with blank control group,the expression differences of ANP group and AEP group are both more than 2 times;in comparison with ANP group,the expression difference of AEP group is more than 2 times,and the miRNA with dramatic difference (P ＜0.05 ) by statistical analysis is regarded as apoptosis associated miRNA ( AA miRNA).There are 8 AA miRNAs with expression difference,and compared with ANP group,5 increase more than 2 times;3 reduce more than 2 times.Conclusion In the process of acute pancreatitis,pathophysiologic changes are associated with miRNA expression profile,and some miRNA may participate in the regulation of pancreatic acinar cell apoptosis process.     

急性胰腺炎大鼠脑组织TNF-α mRNA和蛋白表达及其意义

目的 探讨急性胰腺炎大鼠脑组织中TNF-α mRNA和蛋白的表达及其对胰性脑病发病机制的意义.方法 应用5%、1%的牛磺胆酸钠分别诱导急性坏死性胰腺炎(ANP)和急性水肿性胰腺炎(AEP)大鼠模型,同时设立假手术组,每组16只.分别于模型诱导后12 h,以酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血液和脑脊液标本中TNF-α的含量,RT-PCR方法测定脑组织TNF-α mRNA的表达,Western-Blot测定TNF-α蛋白的表达水平,免疫组化观察TNF-α蛋白的定位表达.结果 ANP组、AEP组和假手术组的血清TNF-α水平分别为1065.6pg/ml、577.5pg/ml和543.8pg/ml,脑脊液TNF-α水平分别为820.9pg/ml、307.4pg/ml和481.6pg/ml.ANP组血清和脑脊液TNF-α水平同AEP组和假手术组相比,差异均有显著性(P＜0.05).ANP组脑组织TNF-α mRNA和蛋白的表达明显增强.ANP组TNF-α蛋白的表达定位于大脑小胶质细胞和神经元细胞.结论 在ANP病程中,大鼠脑组织可能是细胞因子过度表达的来源之一;脑组织中,TNF-α主要由小胶质细胞和神经元细胞表达;TNF-α的过度表达可能是ANP早期脑髓鞘损伤的原因之一.     

胰腺癌血清相关蛋白质分子的差异表达

目的 利用双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)的方法建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常对照人群外周血清的差异蛋白质双向凝胶电泳图谱并分析差异蛋白质点.方法 双向差异凝胶电泳分离20例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者和20例正常对照组人群外周血清蛋白,比较不同血清中蛋白质表达的差异.结果 成功建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人之间的外周血清蛋白质双向差异凝胶电泳图谱,软件分析共发现了168个明显差异表达的蛋白质点,其中在胰腺癌组与正常对照组的比较中有22个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,29个蛋白质点下调;在胰腺癌组和慢性胰腺炎组的比较中有24个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,54个表达下调;在慢性胰腺炎组和正常对照组的比较中有20个蛋白质点表达上调,19个蛋白质点表达下调.结论 双向差异凝胶电泳是快速有效的分离蛋白质新的方法,得到的双向差异凝胶电泳图谱以及显著表达差异的蛋白质点为质谱鉴定提供了实验基础.

Abstract：

Objective To analyze and compare the proteomes expressed by human pancreatic carcinoma, chronic pancreatitis and normal control groups. Methods Differencial expression of the proteomes in peripheral serum was analyzed by fluorescence 2-D difference gel electrophoresis (2D-DIGE). Results 2D-DIGE protein maps in 20 patients with pancreatic cancer, 10 patients with chronic pancreatitis and 20 normal controls were analyzed and 168 spots were identified by gel-analysis software. Between pancreatic cancer group and normal control group 22 protein spots were up-regulated and 29 spots down-regulated; 24 spots were up-regulated and 54 spots down-expressed between pancreatic cancer group and chronic pancreatitis group; 20 spots were up-regulated and 19 spots down-regulated between chronic pancreatitis group and normal control group. Conclusion 2D-DIGE was a rapid and efficient method to separate proteins. 2D-DIGE protein maps and different protein spots would provide an exprimental basis for the phase of mass spectrometry.     

急性胰腺炎大鼠TNF-α mRNA、IL-10 mRNA表达和胰腺细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠急性胰腺炎早期胰腺组织中TNF－αmRNA、IL－10mRNA的表达和细胞凋亡的变化规律。方法 以牛磺胆酸钠诱导20只大鼠急性水肿性胰腺炎（AEP）模型,20只急性坏死性胰腺炎（ANP）模型,另取10只正常大鼠作为对照。术后12h各处死10只大鼠,检测血清和胰腺组织中的TNF－α和IL－10水平,分析两者在胰腺组织中的mRNA较录水平,检测胰腺细胞的凋亡率。结果 正常、AEP和ANP组的细胞凋亡率分别为2．98％、17．29％和8．39％。制模后TNF－αm和IL－10增强ANP大鼠TNF－α表达增强。结论 急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的TNF－α和IL－10的表达与其在血清和胰腺中的浓度成正比,胰腺本身可能就是产生细胞因子的主要器官。胰腺细胞凋亡率与疾病的严重程度呈负相关,凋亡是对胰腺损伤的良好反应。     

一种研究急性胰腺炎加重病理机理的动物模型

介绍一种急性水肿性胰腺炎（ＡＥＰ）向坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）转变的大鼠模型。１０７只ＳＤ大鼠随机分为假手术组、ＡＥＰ组和ＡＮＰ组。ＡＥＰ通过胰管结扎、外分泌刺激诱发。在ＡＥＰ模型基础上静注大剂量Ｄｅｘｔｒａｎ１１０诱发ＡＮＰ。结果显示：血清淀粉酶水平在ＡＥＰ、ＡＮＰ组明显增高，胰腺泡细胞胞浆游离钙离子浓度在ＡＮＰ诱发后持续增高；胰腺出血、实质坏死、钙沉积在ＡＮＰ组常见。超微结构显示ＡＮＰ组胰毛细血管内皮剥脱、坏死。由此表明，胰腺缺血可能通过腺泡细胞钙超负荷的作用促发ＡＥＰ向ＡＮＰ转变。该大鼠模型因临床联系较好、病变渐进，不失为一种从细胞和分子水平研究急性胰腺炎加重病理机理的动物模型     

急性坏死性胰腺炎大鼠脑脊液髓磷脂碱性蛋白水平变化的初步研究

目的:研究急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠24h内脑脊液髓磷脂碱性蛋白(MBP)水平的动态变化。方法:应用5%和1%的牛磺胆酸钠分别诱导ANP和急性水肿性胰腺炎(AEP)大鼠模型,同时设立假手术对照组。分别于模型诱发后3、6、9、12及24h,经大鼠小脑延髓池抽取脑脊液。以酶联免疫吸附(ELISA)法测定标本中的MBP含量。结果:诱发ANP后3h,脑脊液MBP水平明显高于AEP组和假手术组(P<0.01);6h和9h时仍维持于较高水平(P<0.05),12h开始缓慢降低。而AEP组和假手术组的MBP水平无明显变化,在24h内维持于较低水平。结论:ANP大鼠早期时脑脊液MBP水平已异常升高,提示脑组织髓鞘结构已有损害。检测脑脊液MBP水平变化对临床胰腺炎病人并发脑功能障碍的诊断和预后评估具有重要意义。     

急性坏死性胰腺炎胰外器官微循环改变及乌司他丁的影响

目的 探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)时肺、肾、肠微循环的变化及乌司他丁(UTI)的保护作用。方法 SD大鼠48只，随机均分为对照组、ANP组及UTI组。ANP组、UTI组于胰被膜下均匀注射5％牛磺胆酸钠制成ANP模型，对照组则注射等量生理盐水。UTI组于制模后即由股静脉缓慢注射UTI 10000u/kg，对照组及ANP组则注射等量生理盐水。分别于制模后2h及6h采用放射性生物微球法测定肺、肾及末端回肠组织的血流量变化。结果 与对照组相比，ANP组制模后2h及6h肺、肾、肠组织血流量显著减少(P＜0．05)；与ANP组相比，UTI组2h及6h各组织血流量均有明显增加(P＜0．05)。结论 微循环障碍是ANP胰外器官损害的重要原因之一，UTI对ANP时胰外器官微循环障碍有明显的保护作用。