神经元型一氧化氮合酶基因在脑震荡大鼠脑组织中的表达

背景脑震荡是一种轻型颅脑损伤,因其客观指标较少,常为临床诊断和治疗带来难度.在基础研究方面,脑啡肽和多巴胺在其中的表达及其意义尚不清楚.目的探讨神经元型一氧化氮合酶(neuron nitric oxide synthase,nNOS)在大鼠实验性脑震荡中的表达及意义.设计随机对照实验研究.地点和对象实验地点解放军军事医学科学院放射医学研究所.健康Wistar雄性二级(清洁级)大鼠80只,军事医学科学院实验动物中心清洁级动物房饲养,水料任意,用于复制脑震荡动物模型,依致脑震荡所用砝码质量不同,随机分为对照组,50,100,200 g组.主要观察指标实验动物于伤后1,3,7,14及30 d活杀取脑组织,经免疫组化和原位杂交等技术研究nNOS在脑震荡中的变化规律.结果100 g组见典型脑震荡的临床表现,其病理改变为脑血管扩张,脑组织瘀血、水肿,神经元变性、坏死,尼氏体减少甚至消失.nNOS蛋白和mRNA于伤后3 d表达增强,7 d达高峰,14 d后开始减少,30 d仍呈阳性表达.阳性部位见于大脑皮质、海马、丘脑和小脑神经元胞浆内.结论脑震荡以血液循环障碍和实质细胞变性、坏死为主要病理改变;nNOS基因表达参与脑震荡发生时脑组织损伤的病理过程,可能对神经细胞变性、坏死起重要调节作用.     

脑啡肽和多巴胺在实验性脑震荡大鼠脑组织中的表达及意义

背景：脑震荡的机制未明，脑啡肽和多巴胺在其中的表达及意义不清。目的：探讨大鼠脑震荡脑组织中脑啡肽和多巴胺的表达及意义。设计：随机对照实验研究。地点和材料：实验地点：解放军军事医学科学院。健康Wistar雄性二级(清洁级)大鼠80只，军事医学科学院实验动物中心清洁级动物房饲养，水料任意，用于复制脑震荡动物模型。依致脑震荡所用砝码质量的不同随机分为对照组和50，100，200g组。干预：实验大鼠于伤后1，3，7，14及30d活杀，取脑组织，经免疫组化染色等技术，研究脑震荡发生发展中脑啡肽和多巴胺的变化规律。主要观察指标：①临床表现。②病理学改变。③脑啡肽和多巴胺表达的免疫组化染色结果。结果：100g大鼠组出现典型的脑震荡临床表现，其病理改变为脑血管收缩与扩张、脑组织瘀血与水肿、神经元变性、凋亡与坏死。脑啡肽于伤后1d表达增强，阳性部位见于大脑、小脑和海马区的血管内皮细胞浆中；于伤后7d达高峰。14d后表达逐渐减少，30d仍高于正常水平。多巴胺于伤后7d，在大脑、海马区、丘脑及小脑各部分血管内皮细胞、血管壁的表达明显增多，但各时间点无明显变化。结论：脑震荡后以血液循环障碍和实质细胞变性和坏死为主要病理改变。脑啡肽和多巴胺参与了脑震荡发生时脑损伤的病理生理过程，可能对血管损伤、血脑屏障和神经细胞变性、坏死起重要的调节作用。     

脑啡肽和多巴胺在实验性脑震荡大鼠脑组织中的表达及意义

背景:脑震荡的机制未明,脑啡肽和多巴胺在其中的表达及意义不清。目的:探讨大鼠脑震荡脑组织中脑啡肽和多巴胺的表达及意义。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验地点:解放军军事医学科学院。健康Wistar雄性二级(清洁级)大鼠80只,军事医学科学院实验动物中心清洁级动物房饲养,水料任意,用于复制脑震荡动物模型。依致脑震荡所用砝码质量的不同随机分为对照组和50,100,200g组。干预:实验大鼠于伤后1,3,7,14及30d活杀,取脑组织,经免疫组化染色等技术,研究脑震荡发生发展中脑啡肽和多巴胺的变化规律。主要观察指标:①临床表现。②病理学改变。③脑啡肽和多巴胺表达的免疫组化染色结果。结果:100g大鼠组出现典型的脑震荡临床表现,其病理改变为脑血管收缩与扩张、脑组织瘀血与水肿、神经元变性、凋亡与坏死。脑啡肽于伤后1d表达增强,阳性部位见于大脑、小脑和海马区的血管内皮细胞浆中;于伤后7d达高峰。14d后表达逐渐减少,30d仍高于正常水平。多巴胺于伤后7d,在大脑、海马区、丘脑及小脑各部分血管内皮细胞、血管壁的表达明显增多,但各时间点无明显变化。结论:脑震荡后以血液循环障碍和实质细胞变性和坏死为主要病理改变。脑啡肽和多巴胺参与了脑震荡发生时脑损伤的病理生理过程,可能对血管损伤、血脑屏障     

bFGF和NGF基因在大鼠脑震荡脑损伤中的表达研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和神经生长因子（NGF）基因在大鼠实验性脑震荡脑损伤中的表达及意义。方法：采用Wistar雄性二级大鼠复制脑震荡动物模型，于伤后1d、3d、7d、14d及30d活杀取脑组织，经免疫组织化学和原位杂交等技术研究bFGF和NGFmRNA和蛋白在脑震荡中的变化规律。结果：100g组见典型脑震荡的临床表现。bFGF蛋白和mRNA于伤后1d表达增强，3-7d达高峰，14d后开始减少，30d仍高于正常水平。阳性部位见于大脑皮质、海马、丘脑和小脑神经元胞浆内。NGF蛋白和mRNA于伤后1d，损伤区大脑皮质、海马、丘脑和小脑神经元胞浆内呈强阳性反应，表达明显增多，3-30d持续呈强阳性至阳性，但随时间的推移，呈减少趋势。结论：bFGF基因表达参与脑震荡发生时脑组织损伤的病理过程，可能对神经细胞变性、坏死起重要调节作用；NGF基因表达参与脑震荡脑损伤和恢复的全过程，尤其在早期急性期起重要调节作用。     

肿瘤坏死因子-α和细胞间黏附分子-1在大鼠实验性脑震荡脑组织中的表达研究

目的：探讨大鼠实验性脑震荡脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达及其意义。方法：采用Wistar雄性二级大鼠复制脑震荡动物模型,于伤后1、3、7、14及30日活杀取脑组织,经免疫组织化学等技术研究脑震荡发生、发展中TNF-α和ICAM-1的变化规律。结果：砝码100g组见典型脑震荡的表现,其病理改变为脑血管收缩与扩张,脑组织淤血与水肿,神经元变性、凋良心与坏死。TNF-α于伤后1日表达增强,阳性部位见于大脑皮腩、海马神经细胞胞浆中,伤后3日达高峰,7日逐渐减少,14日后基本恢复至正常水平。ICAM-1于伤后1日,见海马、大脑及小脑的血管内皮细胞和血管壁明显增多;此外海马及大脑皮质神经元亦见阳性,于7日达高峰,14日后开始减少,30日仍高于正常水平。结论：脑震荡以血液循环障碍及实质细胞变性和坏死为主要病理改变;TNF-α参与脑震荡发生时早期炎症反应、血管损伤及血-脑脊液屏障功能的调节;ICAM-1参与脑震荡发生时炎症反应、血管内皮细胞黏附及神经细胞损害的过程。     

高压氧对急性一氧化碳中毒大鼠迟发型脑损伤影响的组织病理学特点

背景：临床上有3％～30％的急性一氧化碳中毒患者会发生一氧化碳中毒后迟发性脑病，出现以痴呆、精神症状和锥体外系症状为主的神经系统症状。目前，其发病机制还不清楚。 目的：探讨一氧化碳中毒迟发性脑损伤的病理损伤机制，及高压氧对迟发性脑损伤的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：解放军第四军医大学航空航天医学系航空卫生教研室。 材料：实验于2004-03在解放军第四军医大学航空航天医学系航空病理学和分子生物学实验室进行。取清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠80只，单纯随机分为3组，正常对照组1O只，模型组35只，高压氧组35只，后2组又分为染毒后6h、1，3，5，7，14，21d7个时间点，每个时间点5只。 方法：①模型组：将大鼠放入染毒罐中，吸入一氧化碳与空气的混合气体60min，一氧化碳的体积分数保持在2500&;#215;10^-6，制备急性CO中毒动物模型。②高压氧组：同模型组造模，染毒后3h开始行高压氧治疗，压力0．2MPa，氧的体积分数保持在0．90以上，整个过程共115min，染毒后前3d2次／d，之后1次／d，每周休息1d。③正常对照组不干预。 主要观察指标：①采用组织病理学、免疫组织化学等方法检测大鼠染毒后各时间点大鼠脑组织病理改变的特点。②通过细胞超微结构观察和原位末端转移酶标记（TUNEL）等方法进行细胞凋亡的检测，观察急性各组大鼠脑神经元凋亡的发生情况。 结果：造模后大鼠死亡率约为10％。①模型组大鼠脑内发生广泛的病理损伤，脑皮质、海马，纹状体和小脑等部位神经元出现变性坏死，其中大脑皮质、海马等部位损伤较重。苏木精-伊红、TUNEL染色和电镜观察表明大鼠海马神经元发生凋亡，凋亡神经元从染毒后第3天开始显著增加，第7天达到高峰（P〈0．01），以后逐渐减少。②高压氧组：与模型组相比，脑内神经元变性坏死明显减轻，各时间点大鼠海马区损伤均轻于模型组；凋亡神经元数目减少，尤以中毒后5和7d明显（P〈0．01）。高压氧促进模型大鼠海马区Bcl-2蛋白表达，尤以CO暴露后3，5d明显（P〈0．01）。 结论：①急性一氧化碳中毒大鼠出现广泛的迟发性神经元损伤，表现为迟发的神经元坏死和凋亡。②高压氧治疗可以有效减少变性坏死神经元，促进凋亡抑制基因bcl-2表达，从而抑制神经元坏死和凋亡。     

高功率微波辐射对大鼠脑皮质及海马神经肽Y、nNOS表达的影响

目的：探讨高功率微波（HPM）辐射对大鼠脑皮质和海马形态结构以及神经元神经肽Y（NPY）、神经型-氧化氮合酶（nNOS）表达的影响。方法：分别采用10，30和100mW／cm^2HPM辐射Wistar大鼠，并于微波辐射后6h，1d，3d，7d，14d和28d时处死，同时取出大脑皮质和海马组织。通过HE染色观察实验大鼠脑皮质及海马的形态结构改变情况；采用免疫组化和图像分析技术检测实验大鼠脑皮质和海马神经元NPY、nNOS表达的变化。结果：实验大鼠经10，30，100mW／cm^2HPM辐射后，其脑皮质及海马区神经元固缩、深染；HPM辐射后3d时，大鼠神经元胞浆内nNOS表达显著增加（P〈0.05），NPY表达显著降低（P〈0.01）。结论：10，30及100mW／cm^2HPM辐射可引发大鼠脑皮质和海马神经元损伤，致使其NPY及nNOS表达异常。     

神经干细胞移植对实验性脑挫裂伤大鼠神经元及其环路的修复再生作用

背景：神经干细胞体内可发育成终末神经细胞，替代受损组织，重建神经环路恢复功能。目的：探讨神经干细胞移植对动物实验性脑挫裂伤的治疗作用。设计：完全随机对照实验研究。地点与材料：郑州市第二人民医院脑外科。18只Wistar(来源于河南省实验动物中心)成年大鼠雌雄不拘。清洁级。干预：将18只大鼠随机分为3组。对照组：单侧大脑半球致伤未移植；实验组：单侧致伤行细胞移植；双侧半球致伤组：一侧对照，对侧移植。主要观察指标：损伤区脑组织大体观察和该区脑组织苏木精-伊红染色切片。结果：移植组(侧)大脑半球肉眼观损伤区脑组织基本平坦，镜下见大量新生的细胞和血管，而变性或坏死细胞少见。实验组(侧)大脑局限性凹陷。组织坏死，镜下有细胞变性、坏死，区域性融合呈空泡状，缺乏细胞增生迹象。结论：神经干细胞移植对实验性脑挫裂伤具有显著的修复作用。     

聚集素在大鼠急性脊髓损伤后神经功能康复过程中的表达

背景：聚集素具有许多重要的生物学功能，特别是病理条件下对组织细胞具有显著的保护作用。观察聚集素在脊髓损伤中的表达变化将有助于明确继发性脊髓损伤的作用途径并提供可能的治疗手段。 目的：观察急性脊髓损伤组织中聚集素的表达变化。 设计：随机对照动物实验。 单位：中国医科大学附属第一医院骨科。 材料：实验于2003-01／2006-01在中国医科大学实验动物部完成。选择成年健康SD大鼠65只，体质量250-300g，由中国医科大学实验动物部提供。 方法：65只大鼠随机分为3组，即脊髓损伤组、假手术组及正常对照组，各组分别为30，30及5只。采用改良Allen重物打击法制备大鼠脊髓背侧损伤模型，损伤部位为T10节段；假手术组仅行T10全椎板切除；正常对照组未手术。脊髓损伤组和假手术组分别分为伤后及术后12h，1，3，7，14，21d共6个时间点，每个时间点麻醉处死5只。分别在伤后不同时间点对各组大鼠脊髓损伤组织取材制成冰冻切片，进行苏木精-伊红染色观察脊髓损伤组织变性坏死情况，进行聚集素免疫组化染色观察聚集素阳性反应物的沉积、分布情况，应用半定量图像分析法测定聚集素阳性反应物的平均灰度值（与聚集素免疫反应强度呈反比）。 主要观察指标：①各组大鼠脊髓损伤组织变性坏死情况及聚集素阳性表达情况。②各组大鼠脊髓损伤组织聚集素阳性反应物平均灰度值。 结果：65只大鼠全部进入结果分析，无脱失。①脊髓损伤组大鼠损伤后1d聚集素阳性表达增加；伤后7d达到高峰；伤后14d逐渐减少；伤后21d趋于稳定，随时间延长存在动态变化过程。假手术组及正常对照组伤后各时间点均有聚集素阳性表达，但均表达稳定，随时间延长无动态变化过程。②脊髓损伤组在伤后1，3，7，14，21d时聚集素阳性反应物的平均灰度值显著低于假手术组相应时间点及正常对照组（t=6．33-15．57，P〈0．01）；而假手术组伤后各时间点聚集素阳性反应物的平均灰度值与正常对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：聚集素在急性脊髓损伤组织中表达明显增加，并且存在动态变化过程。     

脑缺血再灌注后神经元特异性烯醇化酶和S-100β蛋白变化与神经功能等级评定的关系

背景：脑脊液和血浆中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经组织蛋白S-100β含量在脑缺血性损伤时升高的程度能反映脑损伤的程度和预后。目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NSE和S-100β的变化规律及其意义。设计：随机对照的研究。地点及对象：本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成。成年健康雌性SD大鼠36只，体质量230-270g，清洁级，由中国科学院上海实验动物中心提供。方法：实验由作者完成。方法：用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，应用神经等级评分观察脑缺血再灌注后行为功能的恢复，免疫组织化学法检测脑组织中NSE和S-100β的动态变化。主要观察指标：各组大鼠皮质区、纹状体NSE，S-100β含量及神经功能评分。结果：皮质区、纹状体区的NSE和S-100β免疫阳性反应均于缺血再灌注后12h明显增强，并随时间变化而逐渐下降，至14d降至正常水平。神经功能评分再灌注2h—1d时为3．00分，再灌注3，7，14d恢复至1．50分(t=2．60．4．48，P&;lt;0．05)。结论：脑缺血再灌注损伤后脑组织NSE和S-100β蛋白表达增加，并与神经功能恢复有相关性。     

高压氧对大鼠海马神经元Bcl-2蛋白表达的影响

背景：高压氧是治疗急性一氧化碳中毒的首选方法。但是，高压氧治疗急性一氧化碳中毒的机制，尤其是治疗一氧化碳中毒迟发性脑病的机制，目前还不清楚。目的：观察急性一氧化碳中毒大鼠海马区神经元病理改变，研究高压氧治疗对一氧化碳中毒大鼠海马区神经元Bcl-2蛋白表达的影响。设计：以实验动物为研究对象，完全随机设计，对照实验研究。单位：一所军医大学医院的急诊科、一所市级医院的检验科和一所军医大学的高压氧治疗中心。材料：实验在解放军第四军医大学航空航天医学系高压氧治疗中心实验室进行，选择60只雄性sD大鼠。干预：60只大鼠随机分成3个组(正常对照组、一氧化碳中毒组，一氧化碳中毒高压氧治疗组)，每组20只，各组大鼠分别暴露在空气或一氧化碳气体(体积分数为3．2&;#215;10。)中60min，对一氧化碳中毒高压氧治疗组大鼠行高压氧治疗。制备大鼠海马区脑组织病理切片行常规苏木精-伊红染色和Bcl-2染色，观察一氧化碳中毒后第1，3．5和7天大鼠海马区神经元损伤和Bcl-2蛋白表达变化的特点。主要观察指标：病理形态学改变和Bcl-2蛋白表达变化。结果：一氧化碳中毒组大鼠海马可见大量变性坏死神经元，高压氧治疗组海马区神经元变性坏死减少，Bcl-2蛋白表达增多，尤以染毒后3和5d明显(P&;lt;0．05)。结论：高压氧治疗可以促进急性一氧化碳中毒大鼠海马区神经元Bcl-2蛋白表达，具有保护神经元的作用。     

高压氧对急性一氧化碳中毒大鼠迟发型脑损伤影响的组织病理学特点

背景:临床上有3%～30%的急性一氧化碳中毒患者会发生一氧化碳中毒后迟发性脑病,出现以痴呆、精神症状和锥体外系症状为主的神经系统症状。目前,其发病机制还不清楚。目的:探讨一氧化碳中毒迟发性脑损伤的病理损伤机制,及高压氧对迟发性脑损伤的影响。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第四军医大学航空航天医学系航空卫生教研室。材料:实验于2004-03在解放军第四军医大学航空航天医学系航空病理学和分子生物学实验室进行。取清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠80只,单纯随机分为3组,正常对照组10只,模型组35只,高压氧组35只,后2组又分为染毒后6h、1,3,5,7,14,21d7个时间点,每个时间点5只。方法:①模型组:将大鼠放入染毒罐中熏吸入一氧化碳与空气的混合气体60min,一氧化碳的体积分数保持在2500×10-6,制备急性CO中毒动物模型。②高压氧组:同模型组造模,染毒后3h开始行高压氧治疗,压力0.2MPa,氧的体积分数保持在0.90以上熏整个过程共115min,染毒后前3d2次/d,之后1次/d,每周休息1d。③正常对照组不干预。主要观察指标:①采用组织病理学、免疫组织化学等方法检测大鼠染毒后各时间点大鼠脑组织病理改变的特点。②通过细胞超微结构观察和原位末端转移酶标记(TUNEL)等方法进行细胞凋亡的检测,观察急性各组大鼠脑神经元凋亡的发生情况。结果:造模后大鼠死亡率约为10%。①模型组大鼠脑内发生广泛的病理损伤,脑皮质、海马、纹状体和小脑等部位神经元出现变性坏死,其中大脑皮质、海马等部位损伤较重。苏木精-伊红、TUNEL染色和电镜观察表明大鼠海马神经元发生凋亡,凋亡神经元从染毒后第3天开始显著增加,第7天达到高峰穴P<0.01雪,以后逐渐减少。②高压氧组:与模型组相比,脑内神经元变性坏死明显减轻,各时间点大鼠海马区损伤均轻于模型组;凋亡神经元数目减少,尤以中毒后5和7d明显(P<0.01)。高压氧促进模型大鼠海马区Bcl-2蛋白表达熏尤以CO暴露后3,5d明显(P<0.01)。结论:①急性一氧化碳中毒大鼠出现广泛的迟发性神经元损伤,表现为迟发的神经元坏死和凋亡。②高压氧治疗可以有效减少变性坏死神经元熏促进凋亡抑制基因bcl-2表达熏从而抑制神经元坏死和凋亡。     

脑缺血再灌注老龄大鼠脑组织核转录因子кB和一氧化氮合酶的变化

目的：从脑组织核转录因子κB、热休克蛋白和一氧化氮合酶（eNOS、iN-OS、nNOS）表达变化揭示老年脑缺血再灌注损伤可能的病理生理机制.方法：实验于2003-01/2004-09在河南中医学院老年医学研究所完成.SD雄性青年（五六月龄）、老龄（21月龄）大鼠各44只,采用大脑中动脉局灶性脑缺血法复制动物模型,排除手术过程中死亡和造模不成功者,设青年假手术组（n=6）、青年模型组（n=30）、老龄假手术组（n=6）、老龄模型组（n=30）.各模型组又分为缺血3 h和再灌注1,3,6,12 d 4个时间点,每个时间点6只.观察缺血3 h和再灌注1,3,6,12 d神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、核转录因子κB、热休克蛋白、一氧化氮合酶表达的变化.结果：实验大鼠青年组36只、老龄假组36只,全部进入结果分析.①青年模型组和老龄模型组脑组织含水量（各时间点）、神经症状积分（再灌注1,3,6 d）、核转录因子κB（再灌注1,3,6,12 d）、热休克蛋白（缺血3 h,再灌注1,3,6 d）、eNOS（再灌注1,3,6 d）、nNOS（各时间点）和iNOS（再灌注1,3,6 d）的表达分别高于同时段青年、老龄假手术组.②老龄模型组神经症状积分（缺血3 h,再灌注6 d）、核转录因子κB（再灌注1,3 d）、nNOS（缺血3 h,再灌注1 d）和iNOS（再灌注1,3 d）表达高于青年模型组,而eNOS（再灌注3,6 d）和热休克蛋白（缺血3 h,再灌注1 d）表达低于同时段青年模型组.③各组大鼠脑组织病理观察,假手术大鼠大脑皮质各层神经元结构完整,无炎性浸润、出血灶等.青年模型组大鼠神经元、胶质细胞肿胀,血管扩张充血、管周水肿、炎性细胞浸润积聚.老龄模型组大鼠神经元、胶质细胞肿胀,排列紊乱,血管扩张充血、管周水肿、炎性细胞浸润（血管套）,血管外细胞外间隙水肿.④脑组织神经细胞、微血管基底膜电镜观察,假手术组神经元细胞器形态结构正常.青年模型组大鼠脑组织神经元、胶质细胞造模3 h胞质、线粒体开始水肿,线粒体嵴和膜开始消失,内质网脱颗粒;微血管周围轻度水肿,部分基底膜断、水肿;1～3 d逐步加重,12 d损伤减轻.老龄模型组大鼠脑组织神经元、胶质细胞造模3 h后胞质、线粒体高度水肿,线粒体嵴和膜消失,微血管周围水肿,基底膜缺损;3 d超微结构破坏达到最严重,微血管基底膜大部分溶解、破坏,甚至消失,内皮细胞胞膜缺损,绒毛缺失.结论：脑缺血再灌注损伤与核转录因子κB、iNOS、nNOS表达增强有关,老年脑缺血再灌注损伤严重可能为随着增龄核转录因子κB、iNOS、nNOS表达增强和热休克蛋白、eNOS表达降低所致.     

电针损伤大鼠中脑后神经元结构和功能的变化

背景：神经元的功能状态与机体的生命活动密切相关。目前已有多种实验方法来鉴定神经元轴突的结构和功能变化。但对于树突，人们给予的重视还很少。目的：观察电针损伤大鼠中脑后神经元微管相关蛋白2(MAP2)免疫反应变化。设计：设立对照的动物实验研究。地点和材料：地点为吉林大学中日联谊医院中心实验室。Wistar大鼠，雌雄不限，体质量(180&;#177;120)g，每组6只动物。干预：电针损伤大鼠中脑，不同时间取脑组织，行MAP2免疫组织化学染色。主要观察指标：神经元MAP2免疫反应及不同时间病理变化。结果：正常大鼠脑组织MAP2免疫反应发生在神经元的树突和胞体。电针损伤后可见MAP2免疫反应不同的神经元：固缩神经元，轻度受损神经元，正常神经元。结论：在中枢神经系统损伤实验性研究中，MAP2免疫反应是观察神经元功能状态的一项好指标。     

脑缺血再灌注损伤过程中一氧化氮合酶的表达

背景:一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)是一氧化氮(nitric oxide,NO)合成的关键因素,由于NO在体内易与氧和血红蛋白等物质结合而迅速失活,不易准确定量测定。因此,测定NOS活性是深入研究NO在脑缺血再灌注损伤发病机制的重要环节。目的:研究脑内不同类型NOS在脑缺血再灌注损伤过程中的作用。设计:随机对照的动物实验。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。材料:实验于2005-05/12在山东省脑病防治重点实验室完成。选择成年健康雄性Wistar大鼠28只,清洁级,体质量220~260g,由山东大学实验动物中心提供。按随机数字表法分为假手术组和脑缺血组,假手术组4只,脑缺血组24只。脑缺血组又分为缺血1h再灌注6h,12h,1d,3d,7d,14d6个时间点,其中每个时间点4只。方法:应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型。应用免疫组织化学技术检测脑缺血再灌注后不同时间点脑内不同类型NOS的表达。主要观察指标:①甲苯胺蓝染色的两组神经细胞;②脑缺血组大鼠脑内神经元型NOS(neuronalNOS,nNOS)、内皮型NOS(endothelial NOS,eNOS)和诱导型NOS(inducible NOS,iNOS)在不同时间点的表达和分布。结果:①脑缺血组损伤区神经细胞出现核固缩、细胞碎片等,各时间点间细胞差异无显著性。②再灌注后6h脑内神经细胞即出现nNOS,eNOS和iNOS表达,随着再灌注时间的延长逐渐增强,脑组织神经元细胞不同类型NOS表达的区域一致,主要在皮质和纹状体区。脑内nNOS和iNOS于再灌注12h~7d保持较高的表达水平,而eNOS于再灌注6h~3d保持较高水平,持续时间短,升高和降低时间均早于nNOS和iNOS;但3种NOS均于再灌注1d到达表达高峰。3种NOS在皮质区和纹状体区的表达变化趋势基本一致。结论:脑缺血再灌注损伤后eNOS高表达时间较早,持续时间短,而nNOS和iNOS高表达时间稍迟,持续时间长。     

脑缺血再灌注老龄大鼠脑组织核转录因子κB和一氧化氮合酶的变化

目的:从脑组织核转录因子κB、热休克蛋白和一氧化氮合酶(eNOS、iN-OS、nNOS)表达变化揭示老年脑缺血再灌注损伤可能的病理生理机制。方法:实验于2003-01/2004-09在河南中医学院老年医学研究所完成。SD雄性青年(五六月龄)、老龄(21月龄)大鼠各44只,采用大脑中动脉局灶性脑缺血法复制动物模型,排除手术过程中死亡和造模不成功者,设青年假手术组(n=6)、青年模型组(n=30)、老龄假手术组(n=6)、老龄模型组(n=30)。各模型组又分为缺血3h和再灌注1,3,6,12d4个时间点,每个时间点6只。观察缺血3h和再灌注1,3,6,12d神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、核转录因子κB、热休克蛋白、一氧化氮合酶表达的变化。结果:实验大鼠青年组36只、老龄假组36只,全部进入结果分析。①青年模型组和老龄模型组脑组织含水量(各时间点)、神经症状积分(再灌注1,3,6d)、核转录因子κB(再灌注1,3,6,12d)、热休克蛋白(缺血3h,再灌注1,3,6d)、eNOS(再灌注1,3,6d)、nNOS(各时间点)和iNOS(再灌注1,3,6d)的表达分别高于同时段青年、老龄假手术组。②老龄模型组神经症状积分(缺血3h,再灌注6d)、核转录因子κB(再灌注1,3d)、nNOS(缺血3h,再灌注1d)和iNOS(再灌注1,3d)表达高于青年模型组,而eNOS(再灌注3,6d)和热休克蛋白(缺血3h,再灌注1d)表达低于同时段青年模型组。③各组大鼠脑组织病理观察,假手术大鼠大脑皮质各层神经元结构完整,无炎性浸润、出血灶等。青年模型组大鼠神经元、胶质细胞肿胀,血管扩张充血、管周水肿、炎性细胞浸润积聚。老龄模型组大鼠神经元、胶质细胞肿胀,排列紊乱,血管扩张充血、管周水肿、炎性细胞浸润(血管套),血管外细胞外间隙水肿。④脑组织神经细胞、微血管基底膜电镜观察,假手术组神经元细胞器形态结构正常。青年模型组大鼠脑组织神经元、胶质细胞造模3h胞质、线粒体开始水肿,线粒体嵴和膜开始消失,内质网脱颗粒;微血管周围轻度水肿,部分基底膜断、水肿;1～3d逐步加重,12d损伤减轻。老龄模型组大鼠脑组织神经元、胶质细胞造模3h后胞质、线粒体高度水肿,线粒体嵴和膜消失,微血管周围水肿,基底膜缺损;3d超微结构破坏达到最严重,微血管基底膜大部分溶解、破坏,甚至消失,内皮细胞胞膜缺损,绒毛缺失。结论:脑缺血再灌注损伤与核转录因子κB、iNOS、nNOS表达增强有关,老年脑缺血再灌注损伤严重可能为随着增龄核转录因子κB、iNOS、nNOS表达增强和热休克蛋白、eNOS表达降低所致。     

脂多糖诱导帕金森病模型中炎症因子的机制

目的：探讨脂多糖诱导帕金森病大鼠模型过程中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶等细胞毒性因子的作用。方法：实验于2003-07／2004-07在中山大学附属第一医院神经科实验室进行,取35只雄性SD大鼠随机分为4组：7，14，30d组，每组10只，对照组5只。对照组不做任何处理，3个不同时间点组立体定位注射脂多糖(20μg，质量浓度5g／L)入大鼠黑质。于注射后不同时间点观察大鼠行为学改变，并采用免疫组织化学及原位杂交等方法动态观察酪氨酸羟化酶神经元、肿瘤坏死因子a、白细胞介素1B、诱导型一氧化氮合酶等的表达。结果：29只动物进入结果分析。①行为学改变：脂多糖术后7d仅表现为轻度的旋转，每30min旋转(85&;#177;13)r，至14d时旋转次数增多，每30min旋转(121&;#177;17)r，30d时达高峰，每30min旋转(295&;#177;21)r。②7，14，30d组术侧黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数量较正常组明显下降(P&;lt;0．001)，30d组下降达高峰；正常组仅有少量或无肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶的表达，术后7d各阳性神经元表达较正常组显著增多(P&;lt;0．05)，术后14d表达至高峰，术后30d较14d明显下降但仍高于正常对照组，其中诱导型一氧化氮合酶阳性神经元表达于术后30d仍维持较高水平。③各组均检测到酪氨酸羟化酶mRNA表达，7，14，30d组表达数量较正常组明显下降(P&;lt;0．01)，30d组其表达下降达高峰(P&;lt;0．001)。正常组有少量肿瘤坏死因子d、白细胞介素1B、诱导型一氧化氮合酶mRNA表达，术后7d表达明显增加，术后14d达高峰，术后30d组肿瘤坏死因子d、白细胞介素1BmRNA表达明显降低，诱导型一氧化氮合酶mRNA表达仍维持较高水平。结论：脂多糖可诱导肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶等细胞毒性因子的释放，其表达高峰期明显早于多巴胺能神经元显著减少期，提示这些细胞毒性因子在多巴胺能神经元变性过程中起协调作用，加重神经元的损害，促进帕金森病的发展，提示抑制免疫和炎症过程可能有效阻断或减轻这种恶性循环的病理过程。     

硫酸镁对大鼠急性颅脑损伤后白介素-1β表达的影响

目的：研究硫酸镁对急性颅脑损伤后白介素－1β（Inter leukin-1β,IL－1β）表达的影响,探讨镁离子保护创伤神经元的可能机理。方法：建立大鼠脑外伤模型,采用免疫组化方法观察镁离子对颅脑损伤后IL－1β表达的影响。结果：实验大鼠大脑局部损伤及区及周围神经细胞中IL－1β阳性产生物表达明显增加,伤后4h,8h,12h较1h升高非常显著（P＜0．01）;伤后给予硫酸镁可以抑制IL－1β的过高表达,其组织学中神经组织变性、坏死及血管炎性反应也明显减轻。结论：颅脑损伤后,受损脑组织中IL－1β表达增加,硫酸镁可以通过抑制后IL－1β表达,起到保护创伤神经元的作用。     

脑缺血再灌注老龄大鼠脑组织核转录因子кB和一氧化氮合酶的变化

目的从脑组织核转录因子κB、热休克蛋白和一氧化氮合酶(eNOS、iN-OS、nNOS)表达变化揭示老年脑缺血再灌注损伤可能的病理生理机制.方法实验于2003-01/2004-09在河南中医学院老年医学研究所完成.SD雄性青年(五六月龄)、老龄(21月龄)大鼠各44只,采用大脑中动脉局灶性脑缺血法复制动物模型,排除手术过程中死亡和造模不成功者,设青年假手术组(n=6)、青年模型组(n=30)、老龄假手术组(n=6)、老龄模型组(n=30).各模型组又分为缺血3 h和再灌注1,3,6,12 d 4个时间点,每个时间点6只.观察缺血3 h和再灌注1,3,6,12 d神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、核转录因子κB、热休克蛋白、一氧化氮合酶表达的变化.结果实验大鼠青年组36只、老龄假组36只,全部进入结果分析.①青年模型组和老龄模型组脑组织含水量(各时间点)、神经症状积分(再灌注1,3,6 d)、核转录因子κB(再灌注1,3,6,12 d)、热休克蛋白(缺血3 h,再灌注1,3,6 d)、eNOS(再灌注1,3,6 d)、nNOS(各时间点)和iNOS(再灌注1,3,6 d)的表达分别高于同时段青年、老龄假手术组.②老龄模型组神经症状积分(缺血3 h,再灌注6 d)、核转录因子κB(再灌注1,3 d)、nNOS(缺血3 h,再灌注1 d)和iNOS(再灌注1,3 d)表达高于青年模型组,而eNOS(再灌注3,6 d)和热休克蛋白(缺血3 h,再灌注1 d)表达低于同时段青年模型组.③各组大鼠脑组织病理观察,假手术大鼠大脑皮质各层神经元结构完整,无炎性浸润、出血灶等.青年模型组大鼠神经元、胶质细胞肿胀,血管扩张充血、管周水肿、炎性细胞浸润积聚.老龄模型组大鼠神经元、胶质细胞肿胀,排列紊乱,血管扩张充血、管周水肿、炎性细胞浸润(血管套),血管外细胞外间隙水肿.④脑组织神经细胞、微血管基底膜电镜观察,假手术组神经元细胞器形态结构正常.青年模型组大鼠脑组织神经元、胶质细胞造模3 h胞质、线粒体开始水肿,线粒体嵴和膜开始消失,内质网脱颗粒;微血管周围轻度水肿,部分基底膜断、水肿;1～3 d逐步加重,12 d损伤减轻.老龄模型组大鼠脑组织神经元、胶质细胞造模3 h后胞质、线粒体高度水肿,线粒体嵴和膜消失,微血管周围水肿,基底膜缺损;3 d超微结构破坏达到最严重,微血管基底膜大部分溶解、破坏,甚至消失,内皮细胞胞膜缺损,绒毛缺失.结论脑缺血再灌注损伤与核转录因子κB、iNOS、nNOS表达增强有关,老年脑缺血再灌注损伤严重可能为随着增龄核转录因子κB、iNOS、nNOS表达增强和热休克蛋白、eNOS表达降低所致.     

施万细胞移植对中脑损伤神经元修复的影响

背景：神经元的功能状态与机体的生命活动密切相关。神经元受损后生长相关蛋白-43(GAP-43)表达预示着神经元是否有再生。目的：探讨施万细胞移植对损伤的大鼠中脑神经元修复的影响。设计：随机对照实验研究。地点和对象：实验地点为北京市神经外科研究所；研究对象Wistar大鼠，雌雄不限，体质量(180&;#177;20)g,随机分为实验组和对照组，每组6只动物。干预：BrdU标记的新生大鼠施万细胞移植至电针损伤的大鼠中脑区域，不同时间处死动物，免疫组织化学方法观察BrdU和GAP-43的表达并通过图像分析系统处理实验结果。主要观察指标：移植的施万细胞在脑内的存活时间；损伤神经元的再生情况。结果：施万细胞移植后8个月仍可见BrdU阳性细胞，其数目增加15％，并主要向大脑皮质迁移；移植后1个月损伤的中脑神经元GAP-43的表达与对照组相比差异有显著性意义。结论：施万细胞移植可促进中脑损伤神经元的修复。