不同玻璃化冷冻载体对胚胎复苏的影响

目的比较分析封闭式玻璃化冷冻载体-JYstraws和及开放式载体-medicult管用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的效果。方法以本中心2010年10月至2013年7月的患者卵裂期胚胎（1678个）为研究对象,选择合适的胚胎进行玻璃化冷冻。实验分为封闭式载体-JY straws管冷冻组和开放式载体．medicult管冷冻组,比较其复苏胚胎成功率及复苏胚胎完整率。进一步,我们将冻存的胚胎按照胚胎质量分为优质胚胎和非优质胚胎,分别比较两种冷冻载体对不同质量胚胎的复苏效果。结果开放式载体-medicult管的胚胎复苏成功率（98．69％）和复苏完整率（90．23％）明显高于封闭式载体-JYstraws的胚胎复苏率（87．41％）和复苏完整率（65．41％）。无论优质胚胎还是非优质胚胎,开放式载体的复苏成功率及复苏胚胎完整率均好于封闭式载体。结论开放式载体-medicult管胚胎解冻效果更好。     

超快速玻璃化冷冻人早期胚胎的临床应用价值初探

目的观察cryotop超快速玻璃化冷冻人早期胚胎的临床效果并探讨其应用价值。方法玻璃化冷冻试剂盒购自日本KITAZATO Biopharma公司,对新鲜周期胚胎移植后未妊娠患者的胚胎施行胚胎复苏,观察胚胎复苏后的存活率,胚胎分级和临床妊娠情况。结果共行胚胎复苏63个周期,201个胚胎,胚胎复苏后存活189个,胚胎复苏存活率为94.03%（189/201）;移植胚胎63个周期,移植胚胎总数187个,平均每周期移植胚胎2.97个（187/63）;临床妊娠30个周期,临床妊娠率为47.62%（30/63）,种植率为20.32%（38/187）,多胎率为23.33%（7/30）,流产率为6.67%（2/30）。结论 cryotop超快速玻璃化冷冻法简便且胚胎存活率高,是一种较好的冷冻人早期胚胎的方法。     

玻璃化和程序化冻融人卵裂期胚胎结果分析

目的探讨冻融周期中玻璃化和程序化两种不同方法对人卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法回顾性分析35例玻璃化冷冻复苏周期和123例程序化冷冻复苏周期资料,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、完整性胚胎存活率,冻融前后的优质胚胎率,临床妊娠率、胚胎种植率。结果①玻璃化法与程序化法冷冻前优质胚胎率无显著性差异（70．83％和71．97％,P〉0．05）,冷冻后优质胚胎率差异显著（63．89％和47．75％,P〈0．05）,复苏后的胚胎存活率差异显著（95．83％和86．16％,P〈0．05）,完整性胚胎存活率差异极显著（90．28％和63．32％,P〈0．01）;②玻璃化法与程序化法临床妊娠率差异显著（48．57％和29．27％,P〈0．05）,种植率差异显著（31．88％和18．83％,P〈0．05）。结论在冻融人卵裂期胚胎的过程中,玻璃化优于程序化,可以更好的提高累积临床妊率。     

GMP法玻璃化冷冻人胚胎的效果观察

目的探索GMP法玻璃化冷人胚胎的可行性。方法选用IVF中多精受精的4-10细胞阶段的胚胎为研究对象，先后在玻璃化1液（10％乙二醇＋10％二甲亚砜）和玻璃化2液（20％乙二醇＋20％二甲亚砜＋0．3M蔗糖）中分别平衡1mim和0．5mim，然后用GMP管虹吸胚胎直接浸入液氮。其结果与常规的程序化慢冻进行比较。结果GMP法的存活率、胚胎完整率、卵裂球存活率比程序化慢冻法更高（分别为94．4％对73．9％，P〈0．01；79．6％对33．9％，P〈0．01；91．6％对67．8％；P〈0．01），但卵裂球完全死亡率更低（0％对10、4％；P〈0．01）。结论GMP法玻璃化冷冻人胚胎是可行的。     

种属和发育期及不同实验条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响

背景：人卵裂期胚胎冷冻复苏的研究中,不同的实验条件及实验动物模型是否与人类胚胎具有相同的敏感性从而反映出实验方案的优劣值得探讨。 目的：观察胚胎种属和发育期及不同冷冻条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响。 方法：将人卵裂期胚胎作为对照组,将KM小鼠胚分为2细胞,4细胞,8细胞组。各组胚胎随机采用以下实验方案：①冷冻操作环境温度18~20 ℃、24~26 ℃和37 ℃。②慢速程序化方案、自制straw叶片玻璃化方案和CPS玻璃化方案。③与玻璃化液接触时间< 40 s、40~60 s和60~90 s。各组胚胎比较不同实验条件下胚胎复苏率和培养24 h发育率。 结果与结论：①对照组24~26 ℃冷冻操作环境温度复苏率高于37 ℃冷冻操作环境(P < 0.05)。②对照组和4细胞鼠胚组采用自制straw叶片玻璃化方案复苏率高于慢速程序化方案(P < 0.05),培养24 h胚胎发育率差异无显著性意义(P > 0.05)。③各组胚胎与冷冻保护剂接触不同时间胚胎复苏率差异无显著性意义(P > 0.05)。表明卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏效果优于慢速程序化,24~26 ℃操作环境、减少冷冻保护剂剂量和缩短接触时间可改善玻璃化冷冻复苏结局;相同冷冻条件下,胚胎种属和发育阶段对冷冻复苏结局有影响,4细胞鼠胚更适合作为研究人类卵裂期胚胎冷冻复苏的实验模型。     

比较胚胎在玻璃化冷冻预处理液不同时间对冻融胚胎质量及临床妊娠率的影响

目的研究胚胎在玻璃化冷冻预处理液不同时间对冻融胚胎质量及临床妊娠率的影响。方法选择至少3个优胚冷冻的周期,根据胚胎在玻璃化冷冻预处理液2—5分钟随机分为四组。结果四组患者冻融周期的基本情况差异无统计学意义,复苏率、临床妊娠率及胚胎种植率差异无统计学意义。结论胚胎在玻璃化冷冻预处理液时间影响不明显,控制在2—5分钟为宜。     

GMP玻璃化法冻存人早期胚胎的临床应用

目的探讨GMP玻璃化法冷冻技术的临床应用效果。方法应用GMP玻璃化法冷冻技术保存了解12例患者的33个优质胚胎并复苏后移植。结果复苏了12例患者的33枚胚胎,32枚存活并移植,胚胎存活率为96.97%（32/33）,6枚胚胎种植,种植率为18.75%（6/32）,5例获得妊娠,妊娠率为41.67%（5/12）。结论GMP玻璃化法是一种可应用于临床的冷冻保存技术。     

人卵裂胚和囊胚的玻璃化冷冻及临床应用

目的探索人卵裂胚及囊胚玻璃化冷冻的有效性。方法来源于生殖中心IVF或ICSI助孕的共270个胚胎（卵裂胚167个,囊胚103个）,用Cryoloop作为胚胎载体和相同的玻璃化方法进行冷冻、复苏和移植,观察其复苏存活率、临床妊娠率、植入率和流产率。结果卵裂胚和囊胚的复苏率、植入率和妊娠率分别为97.0%、33.1%、42.9%和96.1%、43.9%、52%,流产率分别为13.3%和15.4%。结论以Cryoloop为胚胎载体,使用相同的玻璃化冷冻方法对人类卵裂胚和囊胚均可获得同样理想的冷冻效果和临床结局。     

玻璃化冷冻人卵裂期胚胎的效果观察

目的观察总结玻璃化冷冻第三天(D3)胚胎复苏后的存活率与妊娠率。方法对人D3早期胚胎进行玻璃化冷冻,统计分析了2013年1月份至2013年12月份来我中心进行冷冻胚胎复苏移植的215个周期。结果胚胎复苏215个周期,共493个胚胎,胚胎复苏后存活487个,胚胎存活率为98.8%(487/493),487个存活胚胎均予以移植;临床妊娠90例,临床妊娠率为41.9%(90/215)。妊娠的90例中分娩59例,流产31例(其中宫外孕4例)。妊娠90例中单胎68例,双胎20例,3胎2例。结论玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎的损伤较小,适用于临床对卵裂期胚胎长期保存的需求。     

小鼠卵巢组织玻璃化冷冻的初步研究

目的建立一种有效的卵巢组织玻璃化冷冻方法。方法采用乙二醇和蔗糖两步法、小鼠卵巢组织经5m in、10m in、15m in 3种不同的预平衡时间处理,在玻璃化溶液中暴露相同的时间后直接投入液氮进行玻璃化冷冻。复苏后与新鲜的卵巢组织均进行HE染色、提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳。结果玻璃化冷冻复苏后,预平衡时间为10m in的实验组小鼠卵巢组织中的卵泡保持了较好的形态结构。提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,各实验组与新鲜对照组的结果相似。结论采用乙二醇和蔗糖两步法、预平衡为10m in、直接投入液氮的玻璃化冷冻方法可能是一种有效的卵巢组织片冷冻保存方法。该玻璃化冷冻方法没有造成细胞DNA的损伤。     

钢丝环法胚胎玻璃化冷冻技术的初步应用

目的探索自制钢丝环用于人卵裂胚及囊胚玻璃化冷冻的效果。方法来源于生殖中心IVF或ICSI助孕的共33个胚胎（卵裂胚20个,囊胚13个）,用自制钢丝环作为胚胎载荷物行玻璃化冷冻,复苏和移植后,观察其复苏存活率、临床妊娠率、植入率和流产率。结果卵裂胚和囊胚的复苏率、植入率和妊娠率分别为85%、23.5%、28.6%（2/7）和76.9%、40%、33.3%（2/6）,无流产病例。结论使用自制钢丝环作为胚胎载荷物行玻璃化冷冻,对人类卵裂胚和囊胚均可获得良好的临床效果,可以作为常规冷冻的一种应急或补充技术。     

玻璃化冷冻技术在卵母细胞冻存上的应用

玻璃化冷冻保存技术由于具有操作简便、冻融损伤小并且不需要仪器精密控温的特点,已经成为最具应用前景的冷冻保存技术。玻璃化冷冻受到冷冻保护剂成分、浓度、作用时间、作用温度以及降温速率的影响。卵母细胞由于其特殊的细胞学特性,冷冻保存相对困难。玻璃化冻存技术应用于卵母细胞的冷冻保存能获得较好的存活率、受精率以及卵裂率。但是,经过玻璃化冻融的卵母细胞受精后囊胚形成率还不理想,高浓度的冷冻保护剂是否具有细胞毒性,是否会影响胚胎发育等问题尚待解答。因此,还需要更深入的研究来改善卵母细胞的玻璃化冷冻保存技术。     

玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞和颗粒细胞的影响

目的探讨玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织对卵泡内卵母细胞和颗粒细胞的影响。方法分别应用两种玻璃化冷冻方案(ED20和EE40)冷冻小鼠卵巢组织,常规组织学检测新鲜和复苏卵巢组织内卵泡形态,同时应用TUNEL方法观察冻融前后卵泡内卵母细胞和颗粒细胞凋亡情况。结果ED20组和EE40组卵泡存活率分别为78.99±5.99%和71.50±5.81%,明显低于新鲜卵巢组织。冻融组织卵泡凋亡率较冷冻前显著升高。ED20组、EE40组和新鲜对照组颗粒细胞凋亡的卵泡比例分别为8.30±2.14%、11.98±2.34%和4.95±1.62%,差异有显著性;而冷冻前后卵母细胞凋亡的卵泡比例无明显差异。结论玻璃化冻融过程对小鼠卵泡中颗粒细胞的损伤较大,而对卵母细胞的影响较小。     

冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响

目的探讨慢速冷冻和玻璃化冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响。方法回顾性分析2011年1月~2015年12月在北京大学第一医院进行卵裂期冷冻胚胎移植的1331个周期,包括慢速冷冻周期431个和玻璃化冷冻周期900个,比较两种不同冷冻方法的胚胎复苏率、完整胚胎率、临床妊娠率、种植率、流产率等各项指标,并分析卵裂球损伤对胚胎发育潜能的影响。结果玻璃化冷冻的胚胎复苏率(92.53%)、完整胚胎率(75.43%)、临床妊娠率(45.72%)、种植率(27.41%)高于慢速冷冻(76.93%、48.46%、39.52%、19.88%,P0.05);而流产率分别为12.20%、12.56%(P0.05);周期取消率分别为3.71%、1.33%(P0.05)。慢速冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:36.2%、37.7%、42.0%、44.3%(P0.05);玻璃化冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:20.5%、42.3%、48.8%、54.1%(P0.05)。结论玻璃化冷冻法更适合于人卵裂期胚胎冷冻保存,其冷冻胚胎移植周期的妊娠结局要优于慢速冷冻法;卵裂球损伤对玻璃化冷冻复苏胚胎的发育潜能影响较大。     

玻璃化法与慢速程序法对人第3天胚胎冷冻复苏效果的比较

目的比较玻璃化法与慢速程序法对人第3天（D3）胚胎冷冻复苏的效果。方法将接受体外受精-胚胎移植患者的取卵周期移植后剩余的D3胚胎分别进行玻璃化法或慢速程序法冷冻,比较胚胎解冻后的复苏率、妊娠率等指标。结果玻璃化法冷冻解冻78个周期,228个胚胎,存活210个（92.11%）,完整胚胎172个（81.90%）,移植77个周期,临床妊娠32个周期（41.56%）,种植率20.95%;慢速程序法冷冻解冻157周期,702个胚胎,存活405个（57.69%）,完整胚胎207个（51.11%）,移植148周期,临床妊娠58个周期（39.19%）,种植率17.78%。玻璃化法的胚胎复苏率、完整胚胎率高于慢速程序法（P〈0.05）;玻璃化法的临床妊娠率和种植率略高于慢速程序法,但差异无统计学意义。结论玻璃化法的冷冻复苏率比慢速程序法高,更适用于人D3胚胎的冷冻保存。     

不同玻璃化冷冻方案对小鼠卵巢组织的影响

目的比较不同组合的冷冻保护剂对小鼠卵巢组织的影响,为人类卵巢组织玻璃化冷冻的保护剂选择提供实验依据。方法将20只小鼠的卵巢进行玻璃化冷冻,组织标本随机分为4组,新鲜的和冻融后的卵巢皮质分别进行光学显微镜观察、TUNEL实验和免疫组织化学分析。结果光镜观察发现各实验组的各级卵泡形态正常率均明显低于对照组,B组的始基卵泡形态正常率和初级卵泡形态正常率均高于A组和C组,差异有统计学意义（P〈0．05）。A组和C组冻融后卵泡凋亡率、卵母细胞凋亡率和颗粒细胞凋亡率均高于B组,有统计学差异（P〈0．05）。另外,B组卵泡Bax蛋白阳性表达率低于A组和C组,而B组Bcl-2蛋白阳性表达率高于A组和C组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论实验结果提示：与其它组合相比,EG与PROH的组合更适合小鼠卵巢组织的玻璃化冷冻。     

OPS法玻璃化冷冻小鼠不同成熟时期卵母细胞的研究

目的比较OPS法玻璃化冷冻小鼠不同成熟时期卵母细胞解冻后体外成熟、体外受精及胚胎发育能力。方法收集ICR小鼠生殖泡期（GV）未成熟卵和成熟卵,分五组行OPS（open pulled straw,开放式拉细麦管）法玻璃化冷冻,Ⅰ组：直接冷冻GV期卵;Ⅱ组：GV期卵在体外培养8h后冷冻;Ⅲ组：GV期卵在体外培养16h后冷冻;Ⅳ组：GV期卵体外培养成熟（IVM）后冷冻;Ⅴ组：直接冷冻体内成熟卵。解冻后比较各组卵受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果Ⅰ组（GV期卵）冷冻解冻后存活率达57．5％,显著高于Ⅱ组（34．1％）,Ⅲ组（32．0％）,Ⅳ组（29．6％）及Ⅴ组（31．0％）（P〈0．01）。各组体外受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异不显著（P〉0．05）。结论采用OPS法玻璃化冷冻小鼠卵母细胞,冷冻GV期卵较冷冻其它成熟时期卵效果好。     

玻璃化冷冻在保存女性生育能力中的应用

随着体外受精-胚胎移植（IVF-ET）技术的不断发展,低温冷冻保存已经成为人类辅助生殖技术（ART）中必不可少的一个环节。目前,人们可以通过低温冷冻卵母细胞、胚胎或卵巢组织来保存女性的生育能力。常用的冷冻方法有慢速冷冻法和玻璃化冷冻法。近年来,玻璃化冷冻已经成为ART领域中引人注目的焦点之一。本文综述了玻璃化冷冻在保存女性卵母细胞、胚胎和卵巢组织中的研究进展。     

玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞孤雌发育的影响

目的 探讨玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞孤雌发育的影响.方法以小鼠MⅡ期卵母细胞为模型,将未经冷冻直接进行培养的卵母细胞设为对照组,将经玻璃化冻融后再进行培养的卵母细胞设为试验组,观察是否出现单原核或卵裂及囊胚形成情况.结果未经玻璃化冻融处理的卵母细胞有2.96%发生孤雌发育,而经玻璃化冻融处理的卵母细胞孤雌发育率达13.50%,两者存在明显差异.(P<0.05),但均未见囊胚形成.结论玻璃化冷冻可诱发卵母细胞发生孤雌发育,但这些孤雌发育的胚胎难以发育到囊胚阶段.     

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果及临床结局的比较

目的比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果及临床结局。方法对3396个玻璃化冷冻周期和685个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较解冻后胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率等指标。结果玻璃化冷冻后的胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率均显著高于程序化冷冻,且复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻。结论相对于程序化冷冻法,玻璃化冷冻法具有更好的冷冻复苏效果以及临床结局,更适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。