对常规IVF授精后4小时未排出第二极体的卵母细胞行补救ICSI

目的比较常规IVF授精后4h和20h补行卵胞浆内单精子注射（rescue ICSI）的效果。方法回顾分析2006年1月-2007年12月在我院生殖医学中心接受常规IVF治疗的21例非男性因素不育患者,授精后4h行补救ICSI,并与另组实施的18个常规IVF授精后20h行补救ICSI周期进行比较。结果 4h补救ICSI组的受精率为76.3%,高于20h补救ICSI组（53.0%）,有统计学意义（P〈0.05）。4h补救ICSI组中11例临床妊娠（52.3%）,其中2个双胎,8个单胎和一个流产。而20h补救ICSI组无一例妊娠。结论和授精后20h行补救ICSI相比,授精后4h行补救ICSI可以获得较好的受精率、妊娠率和种植率。     

短时体外受精后原核形成观察的相关研究

目的通过追踪观察卵子短时体外受精后原核（pronucleus,PN）的出现情况,评价PN出现的时间在预测IVF周期受精情况的价值,并探讨其与胚胎质量的关系。方法2009年1月～5月在本中心接受IVF-ET助孕治疗的62个周期,对IVF卵数≥5的助孕周期进行观察。授精后4h脱颗粒并观察原核出现情况,6h、7h、8h、9h、10h分别观察一次并记录。D1（21h）换液并观察记录受精情况,D3天移植,对胚胎进行评分。结果共观察721枚行常规IVF的卵子,受精504枚,受精率为69.9%;4、6、7、8、9、10、21h的原核出现率分别为0%、2.91%、14.84%、29.68%、46.74%、56.59%、71.15%（相关系数为：r=0.768,P〈0.01）。共获胚胎495枚,其中可用胚317枚,优质胚119枚,以上不同时间段出现原核的可用胚胎率分别为66.67%、64.29%、65.38%、64.71%、62.32%、62.24%（P〉0.05）,优质胚胎率为28.57%、26.19%、24.04%、23.53%、22.45%（P〉0.05）。受精率≥65%的周期共41例,在授精后8h至少有一个原核出现,原核出现率为12.5～80%;受精率〈65%的周期共21例,授精后8h原核出现率为0%,其中,完全未受精2例;0〈受精率≤30%的周期有7例。结论IVF周期原核开始出现的时间为4～6h,原核出现时间与最终受精率之间存在相关性,原核出现越早受精失败或低受精的风险性越低;8h仍未出现原核的周期,受精失败或低受精率的风险较大;较受精后6h或更早,我们认为8h采取补救ICSI确定受精情况更方便、准确。原核出现时间与胚胎质量无明显关系。     

精液优化后置时间与受精时间对胚胎质量的作用评价

目的探讨精液优化后置时间与体外受精时间对胚胎质量评价。方法 61个IVF周期,共获卵610枚:实验组:200枚卵子,精液优化后2h制作精子微滴加入培养后卵子,待2h后将拆除部分颗粒细胞的受精卵转移至新鲜的受精微滴皿中,培养14h-16h;对照组:410枚卵子,常规精液优化后2h,制作精子微滴加入培养后卵子,培养受精16h-18h。两组均在次日拆蛋,观察原核及受精情况,受精66h-72h观察其卵裂,并进行胚胎评分,比较两组的受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优质胚胎率。结果实验组的受精率、卵裂率、可利用胚胎率分别为:77%、96.1%、59.5%;对照组为:74.6%、94.1%、53.4%;两组受精率、卵裂率、可利用胚胎率比较结果无统计学差异,P0.05。但实验组中可利用胚胎率较高于对照组;实验组的优质胚胎率为:53.4%较对照组43.4%高,统计学比较有显著性差异P0.05。结论降低精液优化后置时间和缩短受精时间不仅不影响胚胎的受精率、卵裂率;且会提高胚胎的可利用胚胎率、优质率,延伸临床的种植潜能,增加患者周期妊娠率。     

不同精子来源及受精方式对胚胎冻融结局的影响

目的探讨常规体外受精(IVF)、精液精子与穿刺后精子卵胞浆内单精子注射(ICSI)对胚胎冻融结局的影响。方法分析我中心2013年1月至2013年12月间行胚胎冻融移植周期的临床妊娠结局,其中IVF周期1479,ICSI周期258,早期补救52例;来源于精液精子组105个周期,行穿刺后精子组33个周期。结果 IVF组、ICSI组与早期补救ICSI组间的复苏胚胎存活率相比无差异(96.5%、95.0%vs 99.0,P0.05);三组之间种植率、妊娠率相比也无统计学差异(27.7%、25.3%vs 35.1%;41.0%、39.5%vs 46.2%,P0.05)。精液精子组与穿刺精子组的复苏胚胎存活率、种植率和妊娠率之间差异不显著(P0.05)。结论 ICSI及穿刺后精子行ICSI胚胎其冻融后的存活率和妊娠率与常规IVF之间无显著差异。     

补救ICSI的妊娠结局分析(附补救后冷冻胚胎复苏妊娠一例)

目的对体外受精(IVF)完全失败的周期及时补行卵细胞浆内单精子显微注射(rescue ICSI)后的临床妊娠结局的探讨和分析。方法IVF受精失败后及时将MⅡ卵母细胞进行补救ICSI。结果补行ICSI后10周期中移植9个周期19个胚胎,妊娠1例双胎,种植为10.5%;有2个周期有冷冻胚胎并行复苏胚胎移植,单胎妊娠1例。补救ICSI累计移植胚胎25个,种植3个累计种植率为12.0%,但2例均以流产告终。结论补救ICSI妊娠率低、流产率高与卵子过度老化有关,冷冻复苏补救ICSI的胚胎,可以消除胚胎发育与子宫内膜发育不同步的因素。在IVF受精率低的周期中可以将未受精的卵母细胞补行ICSI后行胚胎冷冻-复苏移植,可以增加取卵周期的妊娠率。     

HCG后不同时间短时授精对常规体外受精妊娠结局的影响

目的研究HCG$i射后不同时间（42h与40h）行短时授精（3h）对体外受精胚胎移植（IVF-ET）受精率、卵裂率及临床妊娠率的影响。方法对郑州大学附属洛阳中心医院生殖中心实施IVF-ET的962例患者新鲜周期进行回顾性总结和分析，根据HCG注射后不同时间授精分为2组（A组：2009年3月-2012年3月HcG后42h授精440例；B组：2012年4月-2013年9月HCG后40h授精共522例。对两组平均年龄、受精率、卵裂率及临床妊娠率之间的关系进行分析。结果两组年龄、受精率和卵裂率无差异，但临床妊娠率具有显著统计学差异。结论HcG后不同时间短时授精将影响IVF-ET胚胎发育及临床妊娠率。     

人卵母细胞胞浆形态与卵胞浆内单精子显微注射受精率与胚胎质量的关系

目的了解人卵母细胞胞浆形态与卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后正常受精率、卵裂率和优质胚胎率的关系;方法选择2014年2月至2014年8月行ICSI治疗的110个周期中1017枚人卵母细胞。按卵母细胞内是否含有特殊形态结构分为:无特殊结构卵子(A)和含有折光体(B1)、滑面内质网小囊聚集体(SERC)(B2)、空泡(B3)和胞浆颗粒异常(B4)。通过卵子准备、精子准备和ICSI操作过程,了解卵母细胞正常受精、卵裂和培养后优质胚胎率;结果 A组与B3组正常受精率分别为75.98%和42.31%,两组比较有显著性差异(χ~2=29.469,P0.05)。结论不含有空泡的卵子通过ICSI授精,可以得到较高的受精率,卵子内其他一些异常结构对受精及胚胎发育的影响还需要大样本的研究。     

短时授精时间对卵母细胞的受精情况及胚胎发育情况的影响

目的探讨短时授精的时间对常规IVF的受精率及胚胎发育情况的影响。方法将病人授精时间分为4h、6h两组,观察卵母细胞的受精情况及胚胎发育情况。结果两组受精数占获卵数的比率分别为71.1%、75.9%,两组比较差异有显著性意义。受精后正常受精的卵比率为78.4%、79.9%,两组比较差异无显著性意义。卵裂率分别为97.1%、94.5%,两组比较差异有显著性意义。胚胎发育D3优质胚胎率分别为59.9%、54.83%,两组比较差异无显著性意义。结论延长短时授精的时间可以增加受精率,并不能增加正常受精卵的比率,反而使卵裂率降低。     

短时受精不同脱颗粒细胞方式对体外受精结局的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗中几种短时受精脱颗粒细胞方式对胚胎质量及临床结局的影响。方法将261个IVF-ET周期根据脱颗粒细胞时间分为：短时受精后18小时脱颗粒细胞组（A组）94个周期、短时受精后5h脱颗粒细胞组（B组）95个周期和短时受精5h后部分（1/3-1/2）脱颗粒细胞组（C组）72个周期。分别比较三组的受精率、多精受精率、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果三组的受精率、正常受精率、多精受精率、卵裂率、临床妊娠率和流产率差异无统计学意义（P〉0.05）,A组的优胚率、胚胎利用率和胚胎种植率显著高于B组（P〈0.05）。结论短时受精后即刻剥除部分卵子颗粒细胞观察第二极体,在确保受精的情况下剩余卵母细胞保留自体卵周颗粒细胞共培养,可以提高常规IVF的胚胎质量,从而提高常规IVF总的临床妊娠率和胚胎种植率。     

IVF周期中短时受精的安全性研究

目的探索IVF周期中短时受精的安全性。方法回顾性分析2013年1月~2015年6月期间的IVF周期,比较和统计分析103例长时受精和122例短时受精的IVF周期中的受精率、正常受精率、多精受精率,优质胚胎率、妊娠率、种植率、流产率、宫外孕率及活产率。结果 (1)长时受精组和短时受精组女性患者的年龄、获卵数经统计无显著性差异(P0.05)。实验组和对照组的受精率、正常受精率差异显著(P0.01),多精受精率和优质胚胎率无显著性差异(P0.05)。(2)新鲜移植后,长时受精组和短时受精组妊娠率、着床率、流产率、宫外孕率和活产率分别为59.4%/63.6%、57.4%/43.9%、10.5%/9.5%、5.3%/9.5%、50.0%/54.5%,经统计均无显著性差异(P0.05)。(3)冷冻移植后,长时受精组和短时受精组妊娠率、着床率和活产率分别为56.7%/64.1%、38.0%/44.3%、10.5%/8.5%、5.3%/6.8%、47.8%/53.3%,经统计均无显著性差异(P0.05)。讨论无论是新鲜移植或冷冻移植,短时受精同长时受精相比对妊娠结局均无显著差异性(P0.05);从短期的临床数据来看,短时受精在临床的应用是安全可行的。     

部分卵胞浆内单精子显微注射112例分析

目的分析本中心行部分卵胞浆内单精子显微注射的病例,探讨half-ICSI的指征的可行性。方法选择2004年1月至2008年12月在本中心行half-ICSI的112个周期,按适应症分三组,A组为男方中度少弱畸精子症,B组为前次IVF受精失败或低下(30%),C组为不明原因不孕,以同期常规IVF治疗的1377个周期为对照,分别比较三组中发生受精失败或低下发生率(受精率30%)情况的比例,以及half-ICSI的效果。结果 half-ICSI的112个周期共获卵1633个,行IVF766个卵,受精率为54.7%,其中完全不受精27个周期,受精低下(30%)11个周期,行ICSI部分867个卵,MII765个,受精645个,受精率84.3%,移植周期临床妊娠率为39.4%(其中IVF完全不受精者临床妊娠率为32.0%)。112个周期有38个周期发生受精失败或低下,发生率为33.9%(38/112),其中A组发生率31.8%,B组50.0%,C组30.8%。对照组发生受精失败或低下率为7.0%(96/1377),结果有显著性差异(P0.05)。结论对存在高危因素的病人在同一治疗周期中行half-ICSI可明显减少因不受精无胚胎移植的情况出现,从而提高妊娠率,又因有IVF胚胎移植,可减少ICSI子代遗传和先天缺陷的风险。     

Influence of sperm parameters on outcome of subzonal insemination in the case of previous IVF failure. off.

Subzonal insemination (SUZI) has been proposed for patients with sperm male factor infertility, and in cases of in-vitro fertilization (IVF) failures. However despite SUZI, there still remain couples with very low fertilization rates and even with fertilization failures. Since sperm parameters are known to influence the IVF fertilization rate, we investigated the relation between sperm parameters and the SUZI issue in cases of previous IVF failures with normal or subnormal sperm. Twenty-seven couples were included in the study and were split into two groups according to whether they had normal or subnormal sperm. In the first part of the study a randomized prospective trial comparing SUZI to classic IVF insemination was carried out (11 cycles). In the second part, all the oocytes had SUZI (35 cycles). None of the control inseminated oocytes fertilized. Including all the cases, the fertilization rate after SUZI was 29.8% with a pregnancy rate of 15.2% per cycle. We concluded that: (i) SUZI is efficient for achieving fertilization in cases of IVF failures; (ii) the post SUZI fertilization rate is inversely correlated to the percentage of acrosome defects in the semen (P < 0.001); and (iii) when the sperm is normal, the oocyte quality might be responsible for the previous IVF failures. In spite of a good fertilization rate for this indication, it seems that the chance of having a baby is low.     

超短精卵共孵育时间对小鼠体外受精的影响

目的 探讨不同精卵共孵育时间对小鼠体外受精受精率、氧化应激产生及胚胎质量的影响,及小鼠体外受精最短的精卵共孵育时间。 方法 分别比较ICR小鼠精卵共孵育30s、2min、10min、05h、2h、4h及18h的体外受精的受精率及囊胚形成率,并对精卵共孵育0h、2h及18h培养液的丙二醛浓度进行检测。结果 各组获得卵细胞数分别为52、53、53、46、48、48及47,受精率分别为67.3%、81.1%、83.0%、87.0%、85.4%、81.3%及48.9%。精卵共孵育30s组的受精率显著低于0.5h及2h组（P ＜0.05）,而18h组的受精率显著低于2min、10min、0.5h、2h及4h组（P ＜0.05）。2min组的受精率相比10min、0.5h、2h及4h组均无差异（P ＞0.05）。各组的囊胚形成率分别为82.9%、65.1%、70.5%、67.5%、75.6%、71.8%及65.2%,两两比较差异均无显著性（ P ＞0.05）。精卵共孵育0h、2h及18h丙二醛浓度检测的均值分别为（1.06±0.21）×10^-3mol/L、（1.44±0.22）×10^-3mol/L及（2.00±0.21）×10^-3mol/L,各组间两两比较差异均有显著性（ P ＜0.05）,丙二醛浓度随着精卵共孵育时间的缩短而降低。结论 小鼠体外受精精卵共孵育时间缩短至2min不会降低受精率,同时随着孵育时间的缩短,产生的氧化应激也随之减少。     

精子DNA碎片与活性氧的关系研究及对IVF结局的影响

目的探讨不育男性的精子DNA损伤程度与精液常规分析各项指标及活性氧的关系,以及对常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法接受常规IVF受精的夫妇135例,男性患者作为研究对象,按照精子DNA损伤率将患者分为3组:正常组(精子DNA损伤率0%～15%)79例、轻度损伤组(精子DNA损伤率15%～30%)49例、重度损伤组(DNA损伤率>30%)7例。分析精子DNA损伤对精液常规指标(体积、浓度、活动力和形态)的影响,观察三组患者精浆中过氧化氢(H2O2)、过氧化氢酶(CTA)浓度的变化及三组间受精率、卵裂率、优胚率、种植率、临床妊娠率的差异性。结果重度损伤组的精子活力(a+b)明显低于正常组和轻度损伤组(P<0.05),重度损伤组及轻度损伤组的精子畸形率明显高于正常组(P<0.05)。重度损伤组的优胚率明显低于正常组和轻度损伤组(P<0.05),三组间受精率、卵裂率、植入率和临床妊娠率无统计学差异。重度损伤组精浆中的H2O2浓度明显高于正常组和轻度损伤组(P<0.05),而CTA浓度无统计学差异。结论精子DNA损伤与高H2O2水平有关。精子DNA损伤可导致精液的活动力下降,精子畸形率增高,降低优胚率,不利于IVF-ET的结局。     

卵胞浆内单精子注射在男性与非男性不育患者中的应用

目的比较卵胞浆内单精子注射（ICSI）在男性不育与非男性不育患者中的助孕结局。方法回顾性分析2009年1月至2010年12月在我院接受ICSI治疗109个周期,将其分组：A组：男性不育73周期,包括射精组43个周期,手术抽吸精组30个周期,B组：非男性不育36周期,均为射精组。结果①A组：手术抽吸精组中女方年龄、平均获卵数与B组比较结果有统计学意义,P〈0.05;②射精组与手术抽吸精组：两组的正常受精率、卵裂率、优胚率、种植率、妊娠率比较,结果无统计学差异,P〉0.05;③B组中移植（ET）胚胎数、种植率、妊娠率、流产率与A组相比较,结果有统计学差异,P〈0.05;与正常受精率、卵裂率、优胚率,结果比较无统计学差异,P〉0.05。结论①ICSI仍是治疗男性因素的首要指证;②取精方式对妊娠率无影响;③对非男性因素,能获得较高的受精率,有临床治疗价值。     

Endocrinology: Micromanipulation of mouse gametes with laser microbeam and optical tweezers

Micromanipulation of mouse gametes with a commercially availablecompact laser microbeam system was studied. Both the normalin-vitro fertilization (IVF) group and the laser zona dissection(LZD) group were tested under normal (2X10⁶ motile spermatozoa/ml)and low (500 000 motile spermatozoa/ml) insemination conditions.Subzonal insemination (SUZI) was also tried in a small groupof gametes and the results were compared with those of the lowinsemination groups. Fertilization rates and blastocyst formationrates for the IVF and the LZD-treated groups were respectively53 and 60% and 60 and 78%, which were not significantly different.However, under low insemination conditions, the results weresignificantly better in the LZD-treated group (58% fertilizationrate and 83% blastocyst formation rate) compared to the resultsof the IVF group (33 and 48%) (P < 0.05). The SUZI-treatedgroup showed the lowest fertilization rate (18%). No significantdifference between the LZD and the IVF group was observed withrespect to parthenogenetic activation. LZD has a beneficialeffect on fertilization rates in cases of reduced sperm qualit.     

影响不明原因不孕患者IVF受精率的因素分析

目的探讨不明原因不孕患者首次IVF治疗影响其受精率的因素。方法将44个首次行IVF方案的不明原因不孕患者的,根据受精率高低划分为受精率高组（A组28例,受精率〉50%）和受精率低组（B组16例,受精率≤50%）,比较2组之间年龄、不孕年限、促排卵方案、成熟卵母细胞数、优质胚胎数、妊娠率及种植率有无差异。结果 44例患者在年龄、基础FSH、启动Gn数、用药时间、总Gn用量、获得卵细胞均无明显统计学差异,但A组不孕时间短于B组,且获得成熟卵母细胞的比率较B组高,获得的优质胚胎率也显著高于B组,有统计学差异（P=0.002,P〈0.05）;A组临床妊娠率为32%,高于B组的14.28%。结论不明原因不孕患者行首次IVF治疗时,应综合分析年龄、不孕时间及获卵数来判断受精方式,不要盲目扩大ICSI指征。     

精子顶体酶活性与体外受精关系的探讨

目的探讨精子顶体酶活性与体外受精的关系。方法将236个体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗周期根据顶体酶活性分成三组：A组≥48.2μIU/106精子,共95周期;B组：30～48.1μIU/106精子,共92周期;C组〈30μIU/106精子,共49周期;比较三组间的受精率、卵裂率、优质胚胎率。结果 A、B、C组的受精率分别为77.02%、74.11%和48.69%,卵裂率分别为97.80%、96.65%和90.29%,优质胚胎率分别为41.32%、40.79%和33.42%。三组间卵裂率、优质胚胎率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。C组的受精率明显低于A组（P〈0.05）,且完全不受精的发生率高于A、B组（P〈0.05）。B组与C组相比受精率下降,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论当顶体酶活性低于30μIU/10^6精子时受精率显著下降,可考虑行部分卵胞浆内单精子注射治疗。     

采用FISH技术对202例ART患者早期自然流产绒毛全染色体的非整倍体研究

目的探讨通过辅助生殖技术（ART）治疗妊娠后早期自然流产与胚胎染色体非整倍体的关系。方法采用FIsH技术对202例经ART治疗妊娠患者早期自然流产胚胎绒毛进行了全染色体的非整倍体分析,其中IVF患者132例,IcsI患者70例．结果经ART治疗妊娠患者早期自然流产胚胎绒毛染色体非整倍体发生率为63．86％（129／202）,其中以三体型最常见,占83．72％（108／129）;IVF组与ICSI组的非整倍体率分别为64．39％和62．86％（P〉0．05）;新鲜胚胎移植组与冷冻胚胎移植组非整倍体发生率分别为62．99％和65．33％（P〉0．05）;≤35岁组和〉35岁组的非整倍体率分别为55．00％和76．83％（P〈0．01）。结论经ART治疗妊娠患者早期自然流产大部分由胚胎染色体非整倍体所致,并且随着孕妇年龄的增加胚胎染色体非整倍体发生率增加。