基于核酸序列的扩增技术在异基因外周血干细胞移植后受者HCMV感染诊断的应用

本研究探讨基于核酸序列的扩增技术（nucleic acid sequence based amplification, NASBA）检测mRNA对异基因外周血干细胞移植受者术后人类巨细胞病毒（HCMV）感染的诊断价值，并评价该技术对抗病毒治疗的指导意义。以128例移植术后患者为研究对象，采集移植术后外周血352份；利用NASBA检测外周血中HCMV基质外壳蛋白PP67（UL65）mRNA，并与HCMV DNA的结果进行比较。结果表明：352份血标本中，HCMVmRNA阳性105份（29．83％），HCMV DNA阳性183份（51．99％）。128例患者术后有45例发展为HCMV病，HCMV DNA和HCMV mRNA检测诊断HCMV病的敏感性和特异性分别为95.56％（43／45）、93.33％（42／45）和60．24％（50／83）、97．59％（81／83）。两者特异性的比较差异具有显著性（P〈0、05）。结论：HCMV-PP67的NASBA检测方法具有快速、敏感性高和特异性强等优点，可作为快速检测HCMV病的方法用于临床。该法检测结果与移植受者的临床症状相关。故也可用作监视异基因造血干细胞移植受者术后HCMV感染和指导抗病毒治疗的依据。     

造血干细胞移植患者人巨细胞病毒监测的临床意义

目的探讨荧光定量聚合酶链反应对造血干细胞移植患者人巨细胞病毒活动性感染的早期诊断价值。方法收集40例造血干细胞移植患者共416份血标本,应用实时荧光定量PCR方法动态监测血浆HCMV—DNA载量,并与60例健康体检者血浆HCMV—DNA载量对比分析。结果416份血标本中96份阳性,阳性率23．1％,病毒载量介于5．0x10^2-1．0x10,拷贝／ml之间。结论实时荧光定量PCR方法检测HCMV—DNA适用于造血干细胞移植后巨细胞病毒活动性感染的早期诊断。     

造血干细胞移植术后人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB抗原血症及gB特异性CD8＋T细胞测定

目的探讨HCMVgB抗原血症在HCMV感染中的诊断价值以及gB诱导的特异性CD8＋T细胞在控制病毒激活中的作用。方法根据移植术后时间进行分组,免疫组化法检测92份异基因造血干细胞移植术后白细胞样本中的gB、IE和pp65抗原,分析gB抗原检测在监测HCMV感染中的意义。应用SYFPEITHI和REVEALTM主要组织相容性抗原-肽结合力测定筛选出潜在T细胞表位,进而合成MHC-肽五聚体,应用基于流式细胞术的五聚体染色分析筛选出gB相对优势表位。结果 HCMV gB抗原与pp65和IE抗原检测均呈正相关,其阳性率（82.6%）和pp65抗原阳性率（90.2%）差异无显著意义（P=0.065）,但比IE抗原阳性率（92.4%）低（P=0.035）。三种抗原检测阳性率在移植术后1年内无显著差异;而在移植术1年后,gB阳性率低于IE和pp65阳性率（P=0.005）,并且在gB阴性而IE或pp65阳性的标本中,IE或pp65阳性值处于一个较低的范围（1~6/5×104WBC）。gB332-340可能是CD8＋T细胞的免疫优势靶位,其诱导的gB特异性CD8＋T细胞与gB抗原血症的发生呈现负相关。结论 HCMV gB对移植术后早期诊断感染有潜在的价值,并可能是一个提示病毒感染能力的指标;在对长期随访病人HCMV感染的监测中,gB与pp65、IE正相关,或许成为诊断HCMV感染的重要补充;gB特异性CD8＋T细胞的免疫应答在控制HCMV感染中可能起到重要作用。     

FQ-PCR检测造血干细胞移植受者HCMV感染及与淋巴细胞免疫表型变化的关系

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测人巨细胞病毒（HCMV）DNA含量在异基因外周血造血干细胞移植（allo-PBSCT）受者HCMV激活感染中的诊断价值和淋巴细胞免疫表型变化与HCMV激活感染的关系。方法应用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测allo-PBSCT后受者HCMV DNA和抗HC-MV lgM抗体;用流式细胞仪测定淋巴细胞亚群。结果39例allo-PBSCT受者中19例检出HCMV DNA（〈30 d的有5例,2-3个月的13例,〉100 d的1例）。HCMV感染后血清HCMV、IgM阳性检出率非常低（4/19）,且出现时间较晚。移植后早期HCMV DNA阳性组与阴性组及健康组比较CD4^＋细胞、CD19^＋细胞及CD4/CD8比值显著下降,CD8^＋细胞和CD16＋56^＋细胞升高。HCMV阳性患者CD4/CD8比值在感染前后比较差异也有统计学意义。结论allo-PBSCT后HCMV活动性感染易发生于allo-PBSCT后早、中期,高峰期在移植后30-60 d;HC-MV活动性感染与细胞免疫功能紊乱互为因果,加重病情。     

核酸基础序列扩增法检测移植术后巨细胞病毒IE-mRNA的实验研究

传统检测移植术后巨细胞病毒（Human cytomegalovims．HCMV）感染的方法很多，但各一定的局限性。我们自2004年1月建立了核酸基础序列扩增法（NASBA法）检测IE—mRNA和pp67-mRNA的试验条件，对42例器官移植受者的外周血标本进行了检测，并与pp65抗原检测结果相比较。     

人巨细胞病毒PP65抗原检测在中枢神经系统感染性疾病中的应用

人巨细胞病毒（HCMV）可侵袭中枢神经系统，引起相应的感染性疾病及并发症甚至死亡。HCMV的低基质磷酸蛋白65（HCMV-PP65）抗原是HCMV感染表达的早期抗原，用单克隆抗体混合物C10／C11检测HCMV-PP65抗原，是监测HCMV在疾病中活动性感染的标准方法之一。本研究对25例中枢神经系统感染患者进行了HCMV-PP65抗原检测，现报告如下。     

人巨细胞病毒感染与非特异性下腰痛的相关性研究

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染与非特异性下腰痛（NLBP）的关系，HCMV活动性感染与NLBP临床症状和内皮素（ET）的相关性。方法：PCR、HE染色检测尿沉渣HCMV—DNA和包涵体：ELISA、放免法测定血浆HCMV抗体和内皮素水平。结果：（DNLBP患者病毒包涵体、HCMV抗体阳性率明显高于正常对照组（P〈0．05）。②NLBP患者HCMV—IgM抗体阳性组与阴性组，在疼痛加重病程、疼痛程度和内皮素水平方面差异均有显著性意义，t值分别为-4．74（P〈0．01）、3．67（P〈0．01）、4．32（P〈0．01）。结论：NLBP患者腰痛症状可能与HCMV活动性感染相关。成年人HCMV活动性感染后导致的NLBP患者，尿沉渣涂片经HE染色后光镜下见不典型HCMV包涵体．     

再生障碍性贫血患儿干细胞因子受体表达水平的检测

造血干细胞缺陷是引起再生障碍性贫血（再障）发病的主要因素，而干细胞因子受体（C-KIT）蛋白广泛分布于各种发育阶段的造血干细胞，和其配体SCF结合后，可以调节造血干细胞的增殖、分化、凋亡、转移和黏附。为探讨细胞因子受体C-KIT在再障中的表达情况，我们对再障患儿c-kit基因转录水平及其蛋白表达水平进行检测。     

胸腔积液检测人类巨细胞病毒和人乳头瘤病毒的结果分析

研究提示，人类巨细胞病毒（HCMV）和人乳头瘤病毒（HPV）在胸水标本中有较高的阳性发现，HCMV和HPV感染可能是导致或加重胸腔积液的重要因素，现分析如下。     

人巨细胞病毒在免疫力低下人群中耐药研究新进展

随着抗人巨细胞病毒（HCMV）药物的进展,更昔洛韦（ganciclovir,GCV）等抗病毒药物对HCMV感染引起的相关疾病有较好的疗效,其他多种新型抗病毒药物也着手于体内外的各项试验。抗病毒药物治疗HCMV病外,更大用途是预防感染症状的发作。因为人群中HCMV感染是普遍的,且又呈现潜伏感染状态,一旦宿主免疫功能受损失控,潜伏-激活感染的危害是严重的。目前临床上针对移植特殊群体预防HCMV潜伏．激活主要的策略有：（1）普遍给药预防：对所有可能HCMV感染或激活的危险人群在开始移植时或移植术后立即进行抗病毒治疗;     

缬更昔洛韦预防肺移植术后人巨细胞病毒感染13例临床分析

目的探讨缬更昔洛韦预防肺移植术后人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染的效果。方法回顾性分析13例肺移植患者的临床资料,根据患者术前血清学HCMV抗体IgG、IgM检测、HCMV-DNA检测及供体血清学检测结果对患者进行HCMV感染危险分层。结果 13例均为HCMV感染中危患者;肺移植术后给予缬更昔洛韦900mg/d,口服,共3个月,定期检测HCMV抗体IgG、IgM及HCMV-DNA;1例术后死亡,1例失访,11例随访3~20个月,患者血清学HCMV抗体IgM及HCMV-DNA均为阴性,均未发生HCMV感染,未发生白细胞计数及血小板计数减低等情况。结论口服缬更昔洛韦3个月预防肺移植术后HCMV感染安全、有效。     

人类巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖过程中Hoxc4及Hoxc6基因表达的影响

本研究探讨人类脐血造血干细胞（HSC）向淋巴系祖细胞（CFU—TL）分化过程中hoxc4、hoxc6基因表达的情况,并且用人类巨细胞病毒（HCMV）和／或全反式维甲酸（ATRA）进行干扰,在基因水平探讨HCMV感染导致脐血CFU—TL损伤的机制。采用体外定向培养CFU—TL,经MTT法检测后,应用荧光定量RT-PCR技术检测经人HCMV和／或ATRA处理的人脐血CFU—TL中hoxc4、hoxc6基因的mRNA表达水平。HCMV—AD169滴度为10^6蚀斑形成单位（PFU）／ml,按0．1ml 10^5 PFU／ml接种培养体系。结果表明：正常对照组、病毒处理组、维甲酸处理组hox04、hoxc6基因均在增殖分化的第3天少量表达,第7天表达最强烈（P〈0．05）,第12天表达明显下降。各组中hoxc4基因表达量高于hoxc6组（P〈0．05）。与正常对照组比较,维甲酸组（6×10^-8 mol/L）的hoxc4、hoxc6基因表达上调（P〈0．05）,而病毒处理组hoxc4、hoxc6基因表达下调（P〈0．05）。结论：hoxc4与hoxc6基因在脐血CFU—TL中各组呈现规律的表达,提示hoxc4、hoxc6均与淋巴系造血有密切的相关性。HCMV能使hoxc4、hoxc6基因表达下调．提示HCMV致造血细胞损害可能与hoxc4、hoxc6基因表达异常有关。ATRA能显著上调hoxc4、hoxc6基因的表达。     

肝移植术后外周血巨细胞病毒核酸水平与T细胞亚群变化的关系

人巨细胞病毒 (HCMV )感染是移植术后的常见并发症 ,且治疗效果差 ,死亡率高[1]。本研究用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)对肝移植术后HCMV感染进行检测 ,并对肝移植术后非HCMV感染和HCMV感染受者外周血T淋巴细胞亚群进行监测 ,了解机体免疫功能状态 ,指导临床治疗。一、材料和方法1.研究对象 :肝移植受者 3 3例 ,男 2 9例 ,女 4例 ,平均年龄 40岁。2 .试剂和仪器 :FQ PCR检测试剂盒 (中山大学达安基因诊断中心 ) ,FITC标记鼠抗人CD4 和FITC标记鼠抗人CD8(PHARMI0NGEN公司 )。 570 0型PCR扩增仪 (美国PE公司 ) ,FAC…     

造血干细胞移植后BK病毒监测的临床意义

本研究旨在建立造血干细胞移植后BK病毒(BKV)感染的快速检测方法,探讨该方法的可行性和应用价值。根据BKV基因序列设计引物,构建用于检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测BKV的方法,并对36例造血干细胞移植术后患者的尿液标本中BKV含量进行检测。结果表明:成功构建了BKV的定量标准品和荧光定量PCR检测BKV的方法,并经过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证;在36例造血干细胞移植患者中有20例尿液定量检测出BKV,阳性率为55.56%,尿液负荷量BKV拷贝数为2.46×104-7.8×109/ml。结论:BKV实时荧光定量PCR检测方法的建立对造血干细胞移植后出血性膀胱炎的早期诊断、预防、治疗具有重要意义。     

原位杂交检测豚鼠巨细胞病毒mRNA方法的建立

人巨细胞病毒（HCMV）宫内感染对子代的影响越来越引起人们的重视，但是，HCMV宫内感染机制尚不明确。由于CMV具有严格的种属特异性，其动物模型中，豚鼠巨细胞病毒（guinea pig cytomegalovirus，GPCMV）感染的表现与HCMV感染极为接近，且可经胎盘垂直传播导致宫内感染，有研究者已经建立GPCMV宫内感染动物模型探讨HCMV的宫内感染机制。本研究采用地高辛标记的三相寡核苷酸探针进行原位杂交，从病毒基因转录水平检测豚鼠亲代和子代标本中GPCMV晚期mRNA，在基因水平上建立一种稳定、快速、敏感、特异、安全且易于操作的分子杂交试验方法，为GPCMV宫内感染模型的全面、深入研究提供有价值的试验手段。     

荧光定量PCR检测HCMC DNA的临床意义与探讨

本试验采用荧光定量聚合酶链反应（fiuorescence quantitativePCR,FQ—PCR）法检测人巨细胞病毒（HCMV）DNA,并探讨其在HCMV感染诊断和治疗中的应用价值。     

宏基因组二代测序在异基因造血干细胞移植术后肺孢子菌肺炎和免疫相关肺炎诊断中的临床价值

目的 探索宏基因组二代测序（mNGS）在异基因造血干细胞移植术后肺孢子菌肺炎和免疫相关肺炎诊断中的临床价值。方法 纳入2019年8月—2021年8月于四川省人民医院医疗集团（成都东篱医院）行异基因造血干细胞移植术后出现肺部弥漫性、多发性病灶的患者。回顾性分析肺泡灌洗液的mNGS结果和传统病原学检测针对耶氏肺孢子菌的检出率、免疫相关肺炎的发生率，并总结临床特征与mNGS结果的相关性。结果 24例感染患者的mNGS结果中，有5例为单纯病毒，4例为病毒合并细菌、真菌，排除这9例患者。在可评估15例患者中8例（53.3%）检出肺孢子菌，均经标准剂量复方磺胺甲唑为基础的抗肺孢子菌肺炎治疗后康复；7例（46.7%）未检出明确病原菌的患者中，5例（33.3%）经过标准的糖皮质激素为基础的免疫抑制剂治疗后康复，2例（13.3%）经标准剂量复方磺胺甲唑为基础的抗肺孢子菌肺炎治疗后康复。结论 针对异基因造血干细胞移植后临床难以鉴别的肺部弥漫性、多发性病变，采用肺泡灌洗液mNGS的阳性结果可以精准、快速筛选出肺孢子菌肺炎患者，而其阴性结果可以在较大程度上提示免疫相关肺炎的可能性，具有很好的鉴别诊断意义。     

黄疸患儿尿中人巨细胞病毒检测

人巨细胞病毒（HCMV） 感染可造成新生儿的多器官、多系统受累.据文献报告,活产新生儿感染HCMV占1%～2%[1].黄疸是HCMV感染累及消化系统的最常见临床表现. 研究表明, HCMV可侵犯肝细胞和肝内外胆管系统, 是引起新生儿黄疸的重要病原[2], 因此检测黄疸患儿的HCMV, 对于明确临床诊断和治疗都具有重要意义.本研究采用荧光定量PCR（FQ-PCR）方法检测1 096例黄疸患儿和500例对照组患儿尿液HCMV-DNA, 以期了解黄疸患儿HCMV的感染情况.     

FQ-PCR检测造血干细胞移植受者HCMV感染及与淋巴细胞免疫表型变化的关系

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)DNA含量在异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)受者HCMV激活感染中的诊断价值和淋巴细胞免疫表型变化与HCMV激活感染的关系。方法应用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测allo-PBSCT后受者HCMV DNA和抗HC-MV lgM抗体;用流式细胞仪测定淋巴细胞亚群。结果39例allo-PBSCT受者中19例检出HCMV DNA(<30 d的有5例,2~3个月的13例,>100 d的1例)。HCMV感染后血清HCMV、IgM阳性检出率非常低(4/19),且出现时间较晚。移植后早期HCMV DNA阳性组与阴性组及健康组比较CD4 细胞、CD19 细胞及CD4/CD8比值显著下降,CD8 细胞和CD16 56 细胞升高。HCMV阳性患者CD4/CD8比值在感染前后比较差异也有统计学意义。结论allo-PBSCT后HCMV活动性感染易发生于allo-PBSCT后早、中期,高峰期在移植后30~60 d;HC-MV活动性感染与细胞免疫功能紊乱互为因果,加重病情。     

造血干细胞移植中人巨细胞病毒检测：荧光定量聚合酶链反应的早期诊断价值

背景：动态监测造血干细胞移植受者血浆人巨细胞病毒载量,快速筛选出早期活动性人巨细胞病毒感染者,进而指导临床用药,提高造血干细胞移植的成活率。目的：探讨荧光定量聚合酶链反应对造血干细胞移植患者人巨细胞病毒活动性感染的早期诊断价值。方法：收集41例造血干细胞移植患者共656份血标本,应用实时荧光定量PCR方法动态监测血浆人巨细胞病毒DNA载量,并与60例健康体检者血浆人巨细胞病毒DNA载量对比分析。结果与结论：656份血标本中96份阳性,病毒载量介于5.0×10^2-1.0×10^7 IU/mL之间。治疗有效者人巨细胞病毒DNA迅速转阴,治疗耐药者持续阳性,12例连续阳性者2例死于巨细胞病毒活动性感染。实时荧光定量PCR方法检测人巨细胞病毒DNA适用于造血干细胞移植后巨细胞病毒活动性感染的早期诊断。