RFA联合TACE和HFH对兔VX2肝移植瘤细胞凋亡的影响

目的：探讨射频消融（RFA）联合经动脉化疗栓塞（TACE）和高频热疗（HFH）治疗对兔VX2肝移植瘤细胞凋亡的影响。方法建立兔VX2肝移植瘤模型,随机分为 RFA＋ TACE治疗组（A组）,RFA＋ TACE＋ HFH 治疗组（B组）,RFA＋HFH治疗组（C组）和TACE＋ HFH治疗组（D组）。检测各组治疗后的血清谷丙酸转氨酶（ALT）,了解治疗的安全性。TUNEL法检测癌组织凋亡及计算凋亡指数;免疫组织化学、Western blot和实时荧光定量PCR技术检测Caspase‐3蛋白和mRNA水平。结果血清ALT在B组升高最明显。与其他组比较,凋亡指数在B组显著升高（P＜0．05）。免疫组织化学法表明Caspase‐3蛋白在各组中出现强弱不同的表达,在B组表达明显增强。Western blot和实时荧光定量PCR显示Caspase‐3蛋白和mRNA在B组表达最高,与其他组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 RFA＋ TACE＋ HFH治疗能有效杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤细胞的凋亡,但对于肝功能的损害也较为严重。     

犬肝射频消融后移行区PET/CT表现与血管内皮细胞生长因子表达的相关性

目的 探讨犬肝射频消融(RFA)后移行区PET/CT表现与血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的相关性.方法 选成年健康杂种犬15只,随机数字表法分为5组(即刻组、1周组、2周组、4周组和8周组),每组3只.对每只犬肝脏行2次RFA治疗,消融后的实验犬于所在组对应的时间点行PET/CT检查,完成检查后静脉注射氯化钾溶液处死,剖腹取肝脏标本行病理检查.取移行区组织用酶联免疫吸附法观察VEGF的表达特征,并将PET/CT表现与VEGF浓度进行对比分析.结果 移行区肝组织VEGF的动态改变与SUV值呈显著正相关(r=0.933,P＜ 0.001).RFA术后超急性期(即刻组)PET/CT未出现代谢变化,表现为等代谢,VEGF浓度与SUV值均接近正常肝组织.此后炎性细胞的浸润和肉芽组织的形成使组织代谢增高,PET表现高代谢,VEGF浓度与SUV值逐渐增高(1～2周);随着肉芽组织逐渐成熟,代谢程度也随之减低,VEGF浓度与SUV值逐渐降低(2～8周);肉芽组织被纤维组织代替后(8周组)代谢接近正常肝组织,VEGF浓度与SUV值也恢复到接近正常肝组织水平.结论 犬肝RFA术后移行区PET/CT表现与VEGF动态表达具有相关性.     

乳腺癌高强度聚焦超声消融后残留肿瘤增殖能力的变化

目的 探讨兔乳腺种植瘤经高强度聚焦超声(HIFU)消融后残留肿瘤增殖能力的变化.方法 兔鳞癌细胞株VX＿2肿瘤组织块接种于新西兰兔乳腺,建立兔乳腺种植瘤模型,2周后行HIFU治疗,通过控制探针侧温度,造成肿瘤残留.56只兔子随机分为对照组(n=16)和HIFU组(n=40),经电子显微镜和琥珀酸脱氢酶(SDH)组织化学染色检查确认消融效果和残留肿瘤组织消融后不同时间点检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况,同时观察动物生存时间和肿瘤脏器转移的情况.结果 HIFU组消融后,残留肿瘤的PCNA表达呈-过性降低,21 d后恢复至消融前水平.HIFU组的生存时间明显长于对照组,而肺部及腹腔脏器出现转移的时间明显晚于对照组(P<0.05).结论 即使HIFU未能一次完全消融肿瘤,在短时间内也能有效抑制残留肿瘤的生长和转移,延长机体的生存时间.     

乳腺癌高强度聚焦超声消融后残留肿瘤增殖能力的变化

目的探讨兔乳腺种植瘤经高强度聚焦超声（HIFU）消融后残留肿瘤增殖能力的变化。方法兔鳞癌细胞株VX2肿瘤组织块接种于新西兰兔乳腺,建立兔乳腺种植瘤模型,2周后行HIFU治疗,通过控制探针侧温度,造成肿瘤残留。56只兔子随机分为对照组（n=16）和HIFU组（n=40）,经电子显微镜和琥珀酸脱氢酶（SDH）组织化学染色检查确认消融效果和残留肿瘤组织消融后不同时间点检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况,同时观察动物生存时间和肿瘤脏器转移的情况。结果HIFU组消融后,残留肿瘤的PCNA表达呈一过性降低,21d后恢复至消融前水平。HIFU组的生存时间明显长于对照组,而肺部及腹腔脏器出现转移的时间明显晚于对照组（P〈0．05）。结论即使HIFU未能一次完全消融肿瘤,在短时间内也能有效抑制残留肿瘤的生长和转移,延长机体的生存时间。     

多种病理因素对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响及VEGF的干预作用

目的 研究缺氧、H2O2、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对血管内皮细胞(VEC)增殖、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及血管内皮生长因子(VEGF)的干预作用,探讨VEGF预防经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄和支架内血栓形成的机制.方法 将VEC分成对照组、缺氧处理组、缺氧+VEGF处理组、H2O2处理组、H2O2+VEGF处理组、OX-LDL处理组、OX-LDL+VEGF处理组、TNF-α处理组和TNF-α+VEGF处理组.利用四氮唑盐比色法检测各组细胞吸光度值,观察VEC增殖情况,采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,通过RT-PCR法了解各组细胞凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/Fas mRNA表达情况.结果 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α处理组凋亡细胞和Apo-1/Fas mRNA表达明显多于对照组和相应VEGF处理组,而细胞增殖和Bcl-2 mRNA表达则明显低于对照组和相应VEGF处理组(均P<0.01).结论 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α能抑制VEC增殖,诱导VEC凋亡,而VEGF能部分拮抗上述作用,其抗凋亡作用可能与Bcl-2 mRNA表达上调和Apo-1/Fas mRNA表达下调有关,为VEGF用于预防PCI后再狭窄和支架内血栓形成进一步提供了理论依据.     

经皮穿刺瘤内注射碘油化疗药乳剂治疗兔移植性VX2瘤疗效研究

目的 观察瘤内注射碘油化疗药乳剂(CALE)治疗兔VX2瘤疗效.方法 12只荷瘤兔(24瘤灶)随机分3组,行瘤内注射碘油(碘油组)、化疗药物(化疗药组)和CALE(CALE组)2 ml,对照组2只4瘤灶.术后第7天处死动物,计算瘤体坏死率.取材行镜下观察并检测增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF).结果 碘油组、化疗药组、CALE组坏死率分别为(2.22±0.56)%、(7.25±0.82)%和(27.02±3.46)%,3组间有显著差异(P＜0.01).PCNA和VEGF:对照组分别为(76.50±1.67)%和(66.63±1.05)%;碘油组分别为(75.80±0.65)%和(65.3li-O.52)%;化疗药组分别为(51.28±2.11)%和(44.56±1.80)%;CALE组分别为(27.81±0.69)%和(25.85±1.19)%.治疗各组间PCNA和VEGF均有显著差异(P＜0.01),CALE组抑制最显著.病理:CALE组治疗效果最明显呈大片凝固坏死,瘤细胞碎裂;电镜见均质化无结构.结论 经皮瘤内注射CALE可引起肿瘤明显坏死并可抑制PCNA和VEGF的表达,疗效良好.     

兔VX2肝种植瘤盐酸消融治疗两周后CT灌注参数分析

目的:肝癌的盐酸消融治疗是一种局部、微创、安全、可以重复进行的治疗方法,与手术相比,能减少对正常组织的损伤,避免开腹手术对患者的打击,减少手术相关发病率和死亡率,并且花费低、住院时间短.盐酸消融对高风险、不能手术的患者很大程度上能起到代替手术的作用.目前,在评估盐酸消融疗效方面还存在争议,但是随着技术的进步和经验的累积,盐酸消融必将在腹部肿瘤的治疗中有着更加广阔的前景.本实验通过建立兔VX2肝种植瘤模型探讨了不同时相VX2肿瘤的CT灌注参数特征,为进一步评价功能影像学在肝种植瘤盐酸消融疗效预测提供实验依据,探讨血流动力学参数对盐酸消融治疗疗效预测的可能性及血流动力学参数变化的特点.本实验通过观察兔肝VX2种植瘤盐酸消融治疗2周后CT灌注参数的变化及盐酸消融组(治疗组)与空白对照组(对照组)CT灌注参数的变化进而为临床肝癌治疗提供科学的依据.方法:新西兰大白兔20只,采用组织块种植法制成兔肝VX2模型,随机分为治疗组和对照组,2周后治疗组兔接受盐酸消融治疗.于治疗后14 d分别对两组行CT灌注扫描动态监测.选取肿瘤中央区、周边区和瘤周正常肝组织的感兴趣区(ROI),分别测量灌注值(PV)、强化峰值增量(PEI)、达峰值时间(TTP)、血容量(BV).统计学处理采用独立样本的t检验及自身配对t检验分析治疗组与对照组及每组自身灌注参数的变化.结果:治疗组与对照组肿瘤中央区及瘤周区PV、PEI、BV存在明显差异(P＜0.05);治疗组与对照组肿瘤中央区及瘤周区TTP无显著差异(P＞0.05).结论:PV、PEI、BV灌注参数的变化可以反映兔VX2肝移植瘤内部血流动力学的差异,早期区别肿瘤细胞血流稀疏区和增殖旺盛的集区,为从微观角度观察兔VX2肝移植瘤盐酸消融提供了基础,对临床盐酸消融患者提高生活质量及远期预后意义重大.     

声学造影评价兔VX2肝肿瘤射频消融疗效观察

目的 应用超声造影(CEUS)判断兔肝VX2肿瘤射频消融后肿瘤的灭活情况,探讨CEUS在评价肝癌射频消融疗效的可靠性.方法 9例兔VX2肝肿瘤模型作RFA治疗后4d作Sonovue介导的CEUS检查,分析比较各兔子CEUS图片,确定肿瘤部位、数目、边界和肿瘤的坏死程度,选取有代表性的图片作径线测量和勾画出消融灶面积比例并与病理作比较,采用网格分析法计算出CEUS评价RFA疗效的诊断指标.结果 9例兔子中8例发现残留肿瘤灶,1例完全消融,残留灶在CEUS上表现为“快进快退”增强特点,消融灶一直呈无增强状态.以超声测量相关径线与病理对比基本无差异,消融灶面积比例分别为0.55±0.27和0.53±0.33,存在高度正相关(R2=0.89,P=0.001),其诊断敏感率、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确率分别为86％、88％、91％、80％和86％.结论 CEUS能较可靠评价RFA疗效.     

氩氦刀冷冻、射频消融和微波凝固对兔VX2肝癌消融作用的对比

目的探讨氩氦刀冷冻、射频消融及微波凝固对兔VX2肝肿瘤消融的作用机制。方法取成功制作VX2肝癌模型新西兰大白兔(接种VX2细胞株后3周)27只,随机分为3组,每组9只,分别给予氩氦刀冷冻、射频消融和微波凝固。3 d后处死全部兔子,观察并估计肿瘤的大小,切下肿瘤标本,送作病理检查。结果①消融靶区横径在A组(氩氦刀冷冻组)为(2.28±0.12)cm,B组(RFA组)为(1.96±0.09)cm,C组(MCT组)为(1.93±0.10)cm,A组与B组和C组比较差异有显著性(P<0.001),B组与C组比较差异无显著性(P>0.05)。②消融靶区平均面积在A组为(5.79±1.34)cm2,B组为(4.40±0.43)cm2,C组为(4.31±0.59)cm2,A组与B组和C组比较差异有显著性(P<0.01),B组与C组比较差异无显著性(P>0.05)。③肿瘤完全消融率(消融靶区完全覆盖整个肿瘤区)在A组为88.9%(8/9),B组为44.4%(4/9),C组为33.3%(3/9),A组完全消融率与B组和C组比较差异有显著性(P<0.05);B组与C组之间比较差异无显著性(P>0.05)。④消融靶区肿瘤细胞残留率在A组为22.2%;B,C组均为77.8%,A组肿瘤细胞残留率与B,C组比较差异有显著性(P<0.05);B组与C组之间比较差异无显著性(P>0.05)。⑤A组消融靶区中肿瘤细胞完全坏死率(66.7%)高于B组和C组的50.0%。但差异无显著性(P>0.05)。结论3种微创治疗在消融兔VX2肝癌中,无论是在消融靶区面积和横径方面、消融靶区肿瘤完全消融率方面,还是在消融靶区肿瘤细胞残留率方面和消融靶区中肿瘤细胞完全坏死率方面,氩氦刀冷冻均优于RFA和MCT。而RFA和MCT效果相当。     

新辅助放化疗对直肠癌病人术后临床效果及预后研究

目的探讨新辅助放化疗前后直肠癌病人肿瘤微血管密度(MVD)、增殖细胞核抗原(PCNA)及血管内皮生长因子(VEGF)的变化及其临床效果和对预后的影响。方法选择行新辅助放化疗+手术切除的直肠癌病人96例为观察组,同期仅行手术切除的直肠癌病人86例为对照组,观察组病人采用术前新辅助放化疗:术前采用6 MV X线直线加速器进行常规分割放疗、化疗;新辅助放化疗结束后4~6周进行直肠癌根治性手术。观察组取未行新辅助放化疗前及行新辅助放化疗后手术切除标本进行MVD、PCNA及VEGF表达检测;对照组取手术前病检标本及手术切除标本进行MVD、PCNA及VEGF表达检测。比较2组病人手术前后MVD、PCNA及VEGF表达及临床效果与预后情况。记录3年随访统计复发率。结果手术后,观察组病人MVD、PCNA表达显著降低,与对照组差异均有统计学意义(P＜0.01);2组病人VEGF表达差异无统计学意义(P＞0.05)。术后随访3年,对照组复发率为9.3%,观察组复发率为2.1%,2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论新辅助放化疗可以降低直肠癌病人MVD及PCNA表达。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.