电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究

目的：探讨电离辐射致骨基质细胞（BMSC）凋亡的规律，方法：采用流式细胞仪，电镜技术观察不同剂量60Coγ射线照射后BMSC的凋亡变化。结果：经50Gy剂量照射后，BMSC未见有明显的形态学改变，而经100和200Gy照射后BMSC出现了明显的凋亡改变，流式细胞检测显示，经50Gy 剂量照射后，BMSC的凋亡率与正常对照组相比变化不明显（P＞0．05），100Gy照射后BMSC的亡率出现了明显改变（P＜0．01），而且这种变化始于照射后4h，至照后24h到达高峰，随后凋亡率慢慢下降，200Gy照射组的凋亡率高于100Gy组，但差异不明显（P＞0．05），结论；体外培养的BMSC受一定剂量的60Coγ射线照射后可发生凋亡，并具有较强的辐射抗性。     

电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究

目的探讨电离辐射致骨髓基质细胞(BMSC)凋亡的规律。方法采用流式细胞仪、电镜技术观察不同剂量6OCoγ射线照射后BMSC的凋亡变化。结果经50Gy剂量照射后,BMSC木见有明显的形态学改变,而经100和200Gy照射后 BMSC出现了明显的凋亡改变。流式细胞检测显示,经50Gy剂量照射后,BMSC的凋亡率与正常对照相比变化不明显(P＞0.05);100Gy照射后BMSC的凋亡率出砚了明显改变(P＞0.01),而且这种变化始于照射后4h,至照后24h到达高峰,随后凋亡率慢慢下降;200Gy照射组的凋亡率略高于100Gy组,但差异不明显(P＞0.05)。结论体外培养的BMSC受一定剂量的6OCoγ射线照射后可发生凋亡,并且有较强的辐射抗性。     

烧伤小鼠血清对离体培养的骨髓基质细胞的影响

目的 研究小鼠烧伤血清对离体培养的骨髓基质细胞的影响。方法 利用流式细胞仪、HE染色等技术观察小鼠烧伤后不同时间的血清对小鼠骨髓基质细胞（BMSC）贴壁率和基质祖细胞（CFU－F）集落形成的作用及对不同剂量的^60Coγ射线体外照射后的BMSC的影响。结果 小鼠烧伤后1－11d的血清对基质细胞贴壁率和CFU－F的形成主要表现为抑制作用，13－15d的血清主要表现为刺激作用。小鼠烧伤后15d的血清可明显减少50、70Gy照射后BMSC的凋亡和坏死。结论 小鼠烧伤后不同时间的血清对BMSC的作用不同，可能与血清内细胞因子的变化有关。     

胶质瘤细胞系对γ射线辐射敏感性实验研究

目的:探讨γ射线杀伤胶质瘤细胞的剂量-效应关系、时间-效应关系和杀伤作用的机制,比较两种不同种属来源的胶质瘤细胞系对γ射线照射的敏感性.方法:以胶质瘤细胞系C6和SHG-44为实验对象,应用60Co放射源产生的γ射线行单次照射,设对照组、4 Gy,8Gy,16 Gy,32 Gy和64Gy组.照射后光镜下观察细胞形态改变并进行细胞凋亡检测,流式细胞术测定照射后不同时间和不同剂量照射时瘤细胞坏死、凋亡和存活的比例.结果:照射后24 h,32 Gy和64Gy组两种细胞均可见多数细胞出现明显的类似凋亡的细胞形态学改变,Hoechst33342染色可见细胞核呈致密浓染.随着照射后观察时间的延长,两种细胞的凋亡率逐渐提高,6 h后各时间点细胞凋亡率均高于对照组,差异有非常显著性(P＜0.01).两种细胞在照射后48 h凋亡率与48 h前各时间点相比明显增高,差异有非常显著性(P＜0.01).48 h后各个时间点的凋亡率与48 h相比,无显著差异(P＞0.05).随着照射剂量的增加,照后48 h两种细胞凋亡率均逐渐增高,与对照组相比差异有非常显著性(P＜0.01),但32Gy以上剂量照射后细胞凋亡率趋于稳定.在各种照射剂量下两种胶质瘤细胞坏死率与对照组相比均无显著差异(P＞0.05).SHG-44细胞与C6细胞相比,在吸收剂量为4 Gy、32 Gy和64Gy时凋亡率较高,有非常显著差异(P＜0.01).结论:γ射线照射可以诱导体外培养的C6和SHG-44胶质瘤细胞发生凋亡.细胞凋亡高峰出现在照射后48 h左右.随着剂量的增大,凋亡的比例增加,但凋亡率提高至一定的水平(50%左右),将照射剂量继续增加则不能引起凋亡率的明显提高.与C6细胞相比,SHG44细胞对γ射线更加敏感.     

两株人肝癌细胞放射敏感性的体外研究

目的用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402的放射敏感性.方法人肝癌细胞HepG2和BEL-7402体外培养,应用集落形成法测定6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率,计算细胞放射敏感性参数;应用HE染色和流式细胞术测定细胞受5Gy照射后细胞凋亡率.结果HepG2的D0为1.5Gy,Dq值为0.8Gy,n为1.8,SF2为0.45±0.05;BEL-7402的D0为1.6Gy,Dq为1.3Gy,n为2.4,SF2为0.63±0.05.两株细胞受照后出现凋亡现象,照射后24h内随时间延长细胞凋亡率逐步升高.结论HepG2和BEL-7402具有较高的放射敏感性,可能与其受照后发生凋亡有关.     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。     

电离辐射诱导pEgr-hPTEN 表达增强其体外抗肿瘤作用

目的：研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外稳定转染联合X射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG-44增殖和诱导细胞凋亡的作用。 方法：以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的表达载体pEgr-hPTEN转染人胶质瘤SHG-44细胞,筛选稳定转染细胞克隆并扩增培养,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞仪及生长曲线测定稳定转染联合0~10 Gy X射线照射对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。 结果：SHG-44-hPTEN稳定转染细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5 Gy以内呈剂量依赖性增加。稳定转染联合辐射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,照射后第8天稳定转染不同剂量组细胞数仅为稳定转染0 Gy假照组的30.0%~50.0%和未转染0 Gy假照组的7.7%~13.0%;稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0 Gy假照组的1.5~2.3倍、未转染照射组的1.9~4.4倍及未转染0 Gy假照组的3.4~5.1倍。 结论：体外基因-放射联合作用可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,具有显著的肿瘤抑制作用。     

伽玛刀照射对胰腺癌细胞凋亡的影响

[目的] 探讨伽玛刀照射对胰腺癌Panc-1细胞凋亡的诱导作用. [方法] 利用直接免疫荧光法流式细胞术检测伽玛刀照射不同时间后培养Panc-1细胞的凋亡率,同时透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化.[结果] 2、10、15、20、30、50 Gy剂量照射停止后24 h,细胞凋亡率分别为2.75%、11.5%、27.1%、18.2%、13.7%、3%; 在15 Gy以内细胞凋亡率随着照射剂量增加而增加,15 Gy以上随着照射剂量增大而减少.用15 Gy 照射后12、24、36、48 h细胞凋亡率分别为14.7%、27.1%、11%、5.2%;24 h前随时间延长,细胞凋亡率增加,24 h后随时间延长而减少.[结论] 伽玛刀对胰腺癌细胞具有剂量依赖诱导凋亡作用,其凋亡出现高峰为照射后24 h,15 Gy.     

西藏小型猪全身辐射后淋巴结早期损伤效应

目的探讨西藏小型猪全身辐射后淋巴结和外周血淋巴细胞早期损伤效应。方法将48头西藏小型猪随机分成6组,分别接受0、2、5、8、11和14 Gy的全身辐射,辐射后接受6、24和72 h 3个不同时间点的观察,同时接受组织学和凋亡分析。结果组织学观察证实淋巴结淋巴细胞计数随剂量增加及观察时间的延长而下降。电镜观察发现11 Gy以下辐射见明显的凋亡细胞而14 Gy辐射见典型的组织坏死。凋亡分析显示2～11Gy凋亡率呈明显剂量-时间效应,于11 Gy照射后24 h达峰值(38.71±1.64)%。外周血淋巴细胞计数随辐射剂量增加及观察时间的延长明显下降,于14 Gy辐射后72 h达最低值(0.06±0.01)×109.L-1。结论 11 Gy辐射以下及辐射后24 h以内淋巴结淋巴细胞损伤呈剂量-时间效应,同时,11 Gy以下淋巴细胞以凋亡为主,而14 Gy辐射主要诱导淋巴细胞坏死。     

不同剂量X线照射对小鼠免疫功能损伤的动态观察研究

目的:观察不同剂量X线照射对小鼠免疫功能的影响进而研究辐射损伤的机制.方法:100只小鼠随机分为0Gy、2Gy和8 Gy3个剂量组,三个干预组分别为20、30、50只小鼠.分别用X射线全身照射1次,照射后4h、3d和14d,分别抽取小鼠眼球血,用流式细胞仪进行外周血T淋巴细胞亚群CD4 和CD8 的测定.另取出新鲜胸腺和脾脏分别研碎,制成细胞悬液,用流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果:不同剂量的X线照射后4h,胸腺和脾脏细胞的凋亡率即明显升高,3天时达高峰,14天时略有恢复.且同一时段细胞的凋亡率与照射剂量成正比.外周血淋巴细胞亚群数量改变,CD4 与CD8 均下降,其中以CD8 T细胞对辐射最为敏感,下降幅度最大.结论:本实验着重观察了大剂量X射线整体照射后,小鼠胸腺、脾脏及外周血淋巴细胞凋亡的规律.     

人肺腺癌细胞A549放射治疗前后Dystrobrevin蛋白表达的变化

目的射线诱导肺腺癌A549细胞凋亡,于凋亡高峰时检测放疗前后dystrobrevin的表达,探讨其与放射剂量及凋亡的关系。方法人肺腺癌A549细胞株培养24 h后用10 Gy X线照射,分别培养6 h、14 h、23 h、40 h,应用Hoechest33258荧光染色在荧光显微镜下观察细胞形态变化——细胞的凋亡,并计算凋亡率。采用Western blot检测0 Gy、6 Gy、10Gy照射A549细胞14 h后dystrobrevin蛋白表达水平的变化。结果 10 Gy X射线照射A549细胞株后14 h凋亡率达到高峰。Western blot检测显示,随着放射剂量的增加,α-dystrobrevin有下降的趋势,而ε-dystrobrevin有升高的趋势。结论人肺腺癌A549细胞株在能量为6-MV,剂量率为300 cGy/分,接受10 Gy X线照射后14 h出现明显的凋亡;并且在此时间点上随着放射剂量的增加α-dystrobrevin和ε-dystrobrevin变化趋势不同。     

当归多糖对急性辐射损伤小鼠骨髓基质细胞及血管内皮生长因子的影响

目的：研究当归多糖（angelica polysaccharides,APS）对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞（bone marrow stromal cell,BMSC）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的保护作用。方法：直线加速器一次性全身均匀X射线（4.0 Gy）照射BALB/c小鼠,照射后腹腔注射不同剂量的APS或生理盐水,并于照射后第7、14、21天处死小鼠,取外周血进行常规检查;观察BMSC贴壁情况、细胞80%贴壁时间;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测VEGF mRNA的表达水平。结果：与正常组相比,辐射第7、14、21天外周血白细胞及血小板计数明显减少;BMSC贴壁细胞数少且折光性差,达80%贴壁时间明显延长;G0/G1期细胞比例及细胞凋亡率升高;VEGF mRNA的表达降低。辐射APS高剂量组和辐射APS低剂量组均能增加外周血各指标计数,BMSC贴壁细胞数增多且折光性变好,达80%贴壁时间缩短,G0/G1期细胞比例及细胞凋亡率均显著降低,VEGF mRNA的表达显著增加。结论：APS可能通过增强VEGF的表达,提高BMSC的增殖能力,减少其凋亡,从而加速机体造血功能的恢复。     

辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的：研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用。方法：体外通过脂质体转染SMMC7721细胞。转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10 Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为正常SMMC7721组,分别接受0(假照组)、2和5 Gy X线照射的转染空质粒pshuttle-Egr1组及转染重组质粒pshutlle-Eyr1-shTRAIL组,采用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;分别取SMMC772细胞、转染STRAIL细胞、转染空载体及照射组细胞,采用克隆形成实验检测细胞存活率。结果：不同剂量X射线照射SMMC7721-shTRAIL细胞上清中可溶性TRAIL表达量明显高于假照组（P< 0.001）;与假照组比较,照射转染后SMMC7721细胞的凋亡细胞百分数明显增加（P<0.05或P<0.001）,细胞存活率明显下降（P<0.05
或P<0.001）。结论：pshuttle-Egr1-shTRAIL     

早期非小细胞肺癌体部立体定向放疗基础和临床研究——不同照射剂量联合吉非替尼对肺癌细胞系H358的影响

目的：探讨不同剂量单纯照射及照射联合吉非替尼对非小细胞肺癌细胞系 H358存活率、增敏比及细胞凋亡、细胞周期的影响。方法体外培养肺腺癌细胞 H358分为空白对照组、单纯照射组、单纯吉非替尼（Iressa）组、照射＋Iressa组,照射剂量为0、2、4、6、8、12、16、20 Gy,药物浓度为1μmol/L。通过细胞克隆形成实验,观察4组 H358细胞存活情况,描绘细胞存活曲线;采用四噻唑比色试验（MTT）观察两组细胞生长受抑制情况,计算增敏比（SER）;运用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。结果（1）随着照射剂量增加细胞存活分数减小,单纯照射组单次剂量达到20 Gy时,细胞克隆集落形成率为0,照射＋Iressa组单次剂量达到16 Gy时克隆集落形成率为0;（2）照射＋Iressa 组与单纯照射组相比,两组 OD 值差异有统计学意义（F剂量＝62．644,P ＜0．001,F药物＝233．572,P ＜0．001）,两组 OD值随着照射剂量的增高而减小,不同剂量之间 OD值差异有统计学意义（F未加药＝354．972,P＜0．001;F加药＝231．740,P ＜0．001）,两组细胞放射增敏比（SER）与药物显著相关（P ＜0．001）,照射＋Iressa组SER较单纯照射组明显增高;（3）随着照射剂量的增加,凋亡率增高（P ＜0．001）,H358细胞凋亡率与Iressa药物作用相关（P ＜0．001）,单纯Iressa作用后细胞周期阻滞主要出现在G0/G1期,照射＋Iressa组及单纯照射组主要出现G2/M期阻滞。结论增加单次照射剂量可降低 H358细胞存活率,细胞凋亡与 Iressa药物之间存在相关性,照射＋Iressa能够增加细胞凋亡率,照射前使用Iressa能够增强照射对细胞的放射敏感性。     

紫外线致HeLa细胞损伤作用的研究

目的观察UVB辐射对体外培养的HeLa细胞的损伤作用。方法培养HeLa细胞,用紫外线以一定时间(1、5、10、15分钟)进行照射。MTT法检测细胞增殖活性,荧光显微镜检测各受试组细胞凋亡率。结果UVB照射后24h,上述细胞均出现增殖活性下降,活性下降程度与照光时间成正比;UVB照射可诱导HeLa细胞产生凋亡,其凋亡率随UVB照射时间延长而增加。结论紫外线辐射可引起真皮成纤维细胞损伤。     

UV对HLEC凋亡的诱导

目的研究不同剂量紫外线(UV)照射对体外培养人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的诱导。方法以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一紫外线光源对HLEC进行照射。按UV照射时间将HLEC分为0 min、5 min、10 min、15 min及30 min组,对凋亡进行定性及定量检测,并分析UV照射剂量与凋亡率间的关系。结果定性检测证实UV照射后HLEC发生凋亡,AO-EB染色法及Annexin-V+PI双染流式细胞计数定量检测均显示UV照射时间的延长凋亡率增加。结论 UV照射可诱导HLEC凋亡,凋亡率在一定时间内与UV照射剂量和时间呈正相关。     

电离辐射对Jurkat细胞γ-H2AX蛋白表达的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat细胞γ-H2AX蛋白表达的影响。方法：采用流式细胞术（FCM）分别检测2.0 Gy X线照射后不同时间点（0、0.5、1.0、4.0、8.0、16.0及24.0 h）和0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy不同剂量X线照射后Jurkat细胞γ-H2AX表达变化,并于量效实验同时进行Jurkat细胞凋亡率检测。结果：与假照组比较,2.0 Gy X线照射后Jurkat细胞γ-H2AX表达水平于1.0 h内达最大值,1.0 h后开始呈时间依赖性下降,16.0 h仍高于假照水平（P<0.01）,24.0 h降至与对照无明显差异;不同剂量X线照射后1.0 h,Jurkat细胞γ-H2AX的表达水平在0.5 Gy以内没有明显变化,0.5 Gy以后呈剂量依赖性升高,4.0 Gy时达最高水平（P<0.01）,6.0 Gy时表达略下降;不同剂量X线照射后8.0 h,γ-H2AX表达在0～4.0 Gy范围内随剂量增大而逐渐升高,4.0 Gy时达到最高水平（P<0.01）,6.0 Gy时表达有所下降。结论：X射线能诱导Jurkat细胞γ-H2AX表达增高,在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。     

~(60)Coγ射线对HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的　探讨γ射线对人宫颈癌细胞系HeLa端粒酶活性的影响。方法　不同剂量的γ射线照射HeLa细胞后 2 4、72、12 0h ,用TRAP ELISA法检测端粒酶的活性。结果　γ射线照射后细胞能增加端粒酶的活性。较低剂量(0 .5～ 1.5Gy)γ射线照射后 2 4h ,端粒酶的活性呈剂量依赖式增加 ;2～ 3Gy时增加的幅度减低 ;而较高剂量 (4 12Gy)γ射线照射时 ,又呈剂量依赖式增加。与照射后 2 4h相比 ,在较高剂量 (4 12Gy)照射后 72及 12 0h ,酶的活性呈剂量依赖式减少。结论　HeLa细胞受γ射线照射后 ,端粒酶活性增加 ;不同剂量范围 ,增加幅度不同。     

电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响.方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照.采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化.结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG2细胞表现为随着照射剂量的增加,G1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G2/M期阻滞.4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡.结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G2/M期阻滞;4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡.     

p38和ERK信号途径在UVB导致细胞凋亡中的作用

目的 探讨p38和ERK信号途径在紫外辐射B(UVB)导致细胞凋亡中的作用.方法 以HaCat细胞为实验村料,"MTT"法观察细胞存活率;Hoechst33258染色后以荧光显微镜观察凋亡细胞的形态:免疫印迹观察此过程中的可能信号转导通路.结果 UVB照射剂量不同,培养时间相同时,随剂量增加,HaCat细胞存活率逐渐减少;照射剂量相同,培养时间不同时,随时间延长,细胞存活率下降到最低值后开始恢复;UVB照射5 min组的凋亡最高,并且5 min照射组在照后培养12h时.凋亡率最高;UVB照射后p38及其下游的p53表达,而P44/42无改变.结论 UVB照射,能引起HaCat细胞的生长抑制和凋亡且呈剂量依赖和时间依赖性;UVB导致细胞凋亡可能是通过p38信号途径,而不是ERK信号途径.