MIF对耐ADM人乳腺癌细胞MCF-7/ADM 体内外耐药逆转作用

目的：采用动物体内外结合方法探讨米非司酮（mifepristone, MIF）对耐阿霉素（adriamycin,ADM）人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药逆转作用。方法：四甲基偶氮唑蓝法检测5 μmol/L MIF对 MCF-7/ADM体外耐药逆转作用。MCF-7/ADM接种裸鼠皮下构建裸鼠移植瘤模型,空白对照组（NS组）为0.2 mL生理盐水腹腔注射+0.5 mL食用油灌胃;ADM组为5 mg/kg ADM腹腔注射+0.5 mL食用油灌胃;MIF组为30 mg/kg MIF灌胃+0.2 mL生理盐水腹腔注射;ADM+MIF组为5 mg/kg ADM腹腔注射+30 mg/kg MIF灌胃。观察各组裸鼠移植瘤情况。结果：（1）5 μmol/L MIF对MCF-7/ADM细胞的抑制率小于5%,与未用MIF组的抑制率比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率为17.21 mg/L,而对非耐药乳腺癌细胞MCF-7细胞的半抑制率为0.42 mg/L,ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率明显高于MCF-7的半抑制率（P＜0.05）。（3）5 μmol/L MIF与ADM联合处理MCF-7/ADM细胞后,MCF-7/ADM半抑制率为1.96 mg/L,明显低于单用ADM组的半抑制率（P＜0.05）。逆转ADM耐药倍数为8.78。（4）ADM+MIF组瘤体积［（232.5149±309.2377）mm3］均低于NS组的瘤体积［（962.2309±261.1313 ）mm3］（均P＜0.05）,也低于MIF组的瘤体积［（778.2846±42.6919）mm3］,还低于ADM组的瘤体积［（508.9648±16.2609） mm3］（均P＜0.05）。MIF+ADM组的瘤质量抑制率为78.0%。结论：MIF对耐阿霉素的人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外均有逆转耐药性的作用。     

新藤黄酸联合阿霉素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)与阿霉素(adriamycin,ADM)联合作用对人乳腺癌细胞MCF-7的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞株,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态变化;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)细胞核染色实验观察GNA与ADM单独与联合作用对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响;膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染流式细胞仪检测给药后乳腺癌细胞MCF-7凋亡率。结果 MTT检测结果显示,在GNA浓度为0.125~4μmol/L和ADM浓度在0.5~16μmol/L范围内,人乳腺癌细胞MCF-7的细胞存活率随GNA和ADM剂量增加而降低,且联合用药组细胞存活率低于单独用药组。倒置显微镜和荧光显微镜下,与对照组比较,细胞明显缩圆变小,染色细胞核破碎,呈现凋亡状态,而联合用药组凋亡细胞数量明显高于单独用药组。AV-FITC/PI双染经流式细胞仪检测发现,GNA与ADM单独和联合作用均诱导MCF-7细胞凋亡,与单独用药组比较,联合用药组细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论 GNA与ADM单独和联合作用均能诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡,且两者联合作用可产生协同效应,其作用机制可能与诱导细胞凋亡相关。     

乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/A的建立

目的建立人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/A,对其生物学特性进行初步分析评价,为后续乳腺癌多药耐药机制研究提供一株较理想的细胞模型.方法以阿霉素(ADM)为诱导药物,人乳腺癌细胞系MCF-7为诱导对象,采用ADM低浓度持续加量诱导方法,建立人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/A,比较两组细胞形态变化和倍增时间,MTT法测定细胞耐药倍数及多药耐药指数,实时荧光定量PCR检测MDR1、MMP-2、CD44v6 mRNA表达水平.结果建成的MCF-7/A耐药细胞株,耐ADM指数为74,撤药培养60d后耐药指数仍维持在50以上,耐药性稳定,并与多种化疗药物有交叉耐药性,MCF-7/A耐药细胞株撤药培养倍增时间较亲本细胞明显缩短,MDR1、MMP-2、CD44v6 mRNA表达水平较亲本细胞均有明显增加(均P<0.01).结论建立的MCF-7/A模型具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于乳腺癌多药耐药及侵袭转移机制的研究.     

雷公藤红素对阿霉素耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的 研究雷公藤红素对人阿霉素耐药MCF-7/ADR乳腺癌细胞生长的作用.方法 采用MTT试验检测MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药情况以及雷公藤红素对MCF-7/ADR细胞生长的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染试验分析雷公藤红素对MCF-7/ADR耐药细胞凋亡的诱导作用;应用流式细胞周期分析检测雷公藤红素对MCF-7/ADR耐药细胞周期的影响.结果 MCF-7/ADR细胞对阿霉素耐药指数达14.54;而雷公藤红素能有效抑制阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR的生长,并呈现浓度依赖性,作用48 h的IC50是1.04 μmol/L,MCF-7/ADR对雷公藤红素的耐药指数仅为0.87.2 μmol/L雷公藤红素作用8 h后,Annexin V-FITC染色阳性的MCF-7/ADR细胞比例较对照显著升高,差异有统计学意义(P<0.05).在1 μmol/L雷公藤红素作用24 h后,G1期细胞比例由对照(59.22±3.78)%升高至(77.44±4.21)%,而S期细胞比例由对照(37.51±2.91)%降至(19.65±2.25)%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 雷公藤红素能激活MCF-7/ADR细胞凋亡的发生,并诱导MCF-7/ADR发生 G1/S细胞周期阻滞,从而对阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞的生长发挥高效抑制作用.     

青蒿素对乳腺癌多药耐药MCF-7/ADR细胞的逆转作用

目的探讨青蒿素在乳腺癌多药耐药中的应用。方法采用MTT法观察青蒿素联合阿霉素(ADR)对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞生长增殖的影响;应用流式细胞技术测定青蒿素联合ADR对MCF-7/ADR细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。结果 10、20、40μmol/L青蒿素实验组的细胞耐药逆转倍数分别为1.53、1.90和3.62倍。青蒿素联合ADR可抑制MCF-7/ADR细胞膜P-gp蛋白的表达,0、10、20、40μmol/L青蒿素作用后的细胞表面P-gp表达阳性率分别为(33.41±4.63)%、(23.07±5.48)%、(21.82±3.87)%和(16.62±1.27)%,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05);各组细胞内总P-gp的表达水平分别为(37.19±5.16)%(、35.30±4.77)%(、37.45±5.19)%和(34.98±3.50)%,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论青蒿素与ADR同共作用于MCF-7/ADR细胞,使细胞对ADR的敏感性增高,青蒿素具有部分逆转MCF-7/ADR细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能是通过影响细胞质和细胞膜之间的P-gp交换,降低细胞膜上P-gp表达水平,提高药物在细胞内的聚集,增强药物对肿瘤细胞的杀伤作用。     

藤黄酸的研究进展

藤黄为藤黄科植物藤黄树分泌的干燥树脂,具破血散结、解毒、止血、杀虫之功效,用于癌症、脑水肿等多种病症的治疗,其中藤黄酸是其主要有效成分。从藤黄酸的抗肿瘤作用、药动学和新剂型等方面阐述藤黄酸的研究进展,讨论研究过程中存在的问题,为今后藤黄酸的进一步研究开发提供参考。     

薄层扫描法测定不同温度藤黄炮制品中藤黄酸及新藤黄酸的含量

薄层扫描法测定不同温度藤黄炮制品中藤黄酸及新藤黄酸的含量刘幸平，程康华，叶定江（南京中医药大学２１００２９南京林业大学２１００３７）关键词滕黄，藤黄酸，新藤黄酸，薄层扫描法藤黄为藤黄科植物（ＧａｒｃｉｎｉａｈａｎｂｕｒｙｉＨｏｏｋＦ．）分泌的干燥树脂...     

逆转胶囊对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞中P-gp和MRP表达的影响

目的:检测逆转胶囊对乳腺癌耐药相关蛋白表达的影响,探讨其逆转乳腺癌多药耐药的作用机制。方法:流式细胞术、免疫印迹技术(Western-blot)检测逆转胶囊作用前后MCF-7/ADR细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:逆转胶囊能显著抑制MCF-7/ADR细胞表面P-gp的表达,并可诱导MRP表达下降,其作用随血药浓度增加和作用时间的延长而增强。结论:逆转胶囊逆转乳腺癌多药耐药的机制与下调P-gp和MRP的表达有关。     

PI-103对多药耐药白血病细胞体外作用的研究

目的 研究P1-103对耐药白血病细胞的效果及其机制.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究PI-103对K562及K562/A02细胞增殖的影响,流式细胞术研究细胞内阿霉素浓度的改变.结果 PI-103能显著抑制两种细胞株的生长,对敏感和酎药白血病细胞株具有相同的抑制效果;PI-103能显著增加细胞内阿霉素的浓度,与阿霉素联用时,能增加阿霉素对细胞的生长抑制作用,但仅有叠加效应而无协同效应.结论 PI-103对于耐药白血病是一种有良好应用前景的药物.     

新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨新藤黄酸对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）增殖和凋亡的影响。方法 用不同浓度的新藤黄酸培养细胞24、48 h后,采用MTT法观察新藤黄酸对细胞生长的抑制作用;倒置显微镜下观察HUVECs细胞形态变化;通过DAPI染色后倒置荧光显微镜观察新藤黄酸对细胞形态学的影响;通过Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测新藤黄酸对HUVECs细胞凋亡率的影响;Western blot检测新藤黄酸对HUVECs中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达变化。结果 MTT检测结果显示新藤黄酸能够明显抑制HUVECs的增殖,并呈时效及量效关系;荧光显微镜观察结果显示,新藤黄酸作用HUVECs后出现大量凋亡细胞;流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,随着新藤黄酸浓度的增加,细胞凋亡率明显增加;Western blot检测结果表明Caspase-3蛋白表达水平显著增加。结论 新藤黄酸对HUVECs有明显的抑制作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

异博定对乳腺癌细胞多药耐药性逆转作用的研究

目的：检测异博定逆转乳腺癌耐药细胞株对阿霉素的耐药性。方法：ＭＴＴ法检测细胞的抑制率变化，流式细胞仪检查异博定对ＭＣＦ－７／Ａｄｒ细胞的药物浓度变化。结果：异博定可提高肿瘤细胞的药物浓度（Ｐ＜０．０１），并且使ＭＣＦ－７／Ａｄｒ细胞对阿霉素的敏感性增加２０倍。结论：本实验证实异博定可增加细胞内抗肿瘤药物浓度，逆转细胞的耐药性，为临床应用异博定逆转肿瘤的耐药性提供了理论基础。     

新藤黄酸通过内质网应激诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的机制。方法采用不同浓度的GNA作用细胞24h,对照组是相同浓度GNA加内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)共同作用HCT116细胞24h。采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)染色测定两组细胞增殖抑制率的差异,采用吖啶橙(acridine orange,AO)和溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色观察细胞的形态学变化,采用膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙碇(propidium iodide,PI)双重染色检测细胞凋亡率。结果内质网应激抑制剂4-PBA可以缓解GNA对HCT116细胞增殖的抑制作用;AO/EB染色后荧光显微镜观察发现GNA作用的细胞具有凋亡特征;流式细胞仪检测显示4-PBA可降低HCT116细胞的凋亡率。结论 GNA能抑制人结肠癌细胞HCT116增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的作用可能与内质网应激途径有关。     

不饱和脂肪酸逆转乳腺癌细胞株耐药性研究

目的　探讨不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸 (DHA)是否能够逆转人乳腺癌细胞的多药耐药性(MDR)。方法　采用MTT法对DHA和阿霉素合用时肿瘤细胞的半数抑制率 (IC50 )进行检测。结果　DHA(10 μg/ml)组能提高MCF 7/R细胞株对阿霉素敏感性 3.2倍 ,DHA(2 0 μg/ml)组提高 5 .1倍 ,均有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　DHA能部分逆转乳腺癌耐药细胞对阿霉素的耐药性     

Effect of Ursolic Acid on Breast Cancer Resistance Protein-mediated Transport of Rosuvastatin In Vivo and Vitro

Objective To evaluate whether ursolic acid can inhibit breast cancer resistance protein (BCRP)-mediated transport of rosuvastatinin vivo andinvitro. Methods Firstly, we explored the pharmacokinetics of 5-fluorouracil (5-FU, a substrate of BCRP) in rats in the presence or absence of ursolic acid. Secondly, we studied the pharmacokinetics of rosuvastatin in rats in the presence or absence of ursolic acid or Ko143 (inhibitor of BCRP). Finially, the concentration-dependent transport of rosuvastatin and the inhibitory effects of ursolic acid and Ko143 were examined in Madin-Darby Canine Kidney (MDCK)Ⅱ-BCRP421CC (wild type) cells and MDCKⅡ-BCRP421AA (mutant type) cells. Results As a result, significant changes in pharmacokinetics parameters of 5-FU were observed in rats following pretreatment with ursolic acid. Both ursolic acid and Ko143 could significantly affect the pharmacokinetics of rosuvastatin. The rosuvastatin transport in the BCRP overexpressing system was increased in a concentration-dependent manner. However, there was no statistical difference in BCRP-mediated transport of rosuvastatin betweent the wild type cells and mutant cells. The same as Ko143, ursolic acid inhibited BCRP-mediated transport of rosuvastatinin vitro. Conclusion Ursolic acid appears to be a potent modulator of BCRP that affects the pharmacokinetic of rosuvastatinin vivo and inhibits the transport of rosuvastatinin vitro.     

基于CYP19探讨雷公藤甲素抗ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞作用机理

目的 基于CYP19基因阐明雷公藤甲素抗ER(+)人乳腺癌细胞的作用机制。方法 雷公藤甲素组与来曲唑组相对照,采用MTT法观察雷公藤甲素对MCF-7细胞增殖的影响;采用Western blot观察其对芳香化酶的影响;采用RT-PCR观察其对CYP19基因的影响;采用瞬时转染形成高表达及低表达CYP19基因的MCF-7细胞,并用Western blot的方法观察雷公藤甲素对转染细胞CYP19以及其下游通路相关基因JNK、P38和ERK的影响。结果 雷公藤甲素能明显抑制MCF-7细胞增殖（P<0.01）,其抑制作用随着浓度增高和时间的延长而增强,能抑制芳香化酶及CYP19基因的表达,并能明显下调低表达CYP19-MCF-7细胞的CYP19表达,及抑制JNK、p-38和ERK的磷酸化。结论 雷公藤甲素抗MCF-7细胞的作用机制之一,是通过抑制芳香化酶起作用,并引起下游Ras-Raf-MAPK-ERK激酶系统通路受抑制。      

新藤黄酸对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响

目的 观察新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人表皮癌细胞A431增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的人表皮癌A431细胞株为研究对象,采用甲基噻唑基四唑检测GNA对A431细胞增殖活性的影响;倒置显微镜下观察GNA对A431细胞株细胞形态的影响;荧光显微镜下观察GNA对Hoechst 33342染色的A431细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪检测膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙碇双染的A431细胞的凋亡率.结果 随着GNA剂量的增大,GNA对A431细胞增殖活性的抑制作用增强.倒置显微镜和荧光显微镜下观察显示,GNA作用的A431细胞形态发生明显的变化并出现显著的凋亡特征.流式细胞仪检测显示A431细胞凋亡率随着GNA作用剂量的增大而升高.结论 0.75～12.0 μmol/L GNA能够剂量依赖性地抑制A431的增殖.     

化疗药物体外干预乳腺癌MCF-7细胞株的耐药基因表达

目的 体外评价蒽环类及紫杉类化疗药物与乳腺癌耐药相关基因MDR1(多药耐药基因)和BCRP(乳腺癌相关耐药基因)表达的关系.方法 利用RT-PCR技术和荧光定量PCR技术检测体外化疗药物干预后乳腺癌细胞株MCF-7的耐药相关基因表达情况.结果 蒽环类药物与MDR1基因表达量间有密切关系,随蒽环类药物浓度的增加和作用时间的延长,MDR1基因表达量也随之增加.而蒽环类药物与BCRP基因间及紫杉类药物与MDR1、BCRP间都无明显的量效关系.结论 蒽环类药物是MDR1基因编码的p-gp蛋白的特异性底物之一.临床可能通过检测MDR1的表达量较准确的预测蒽环类药物的疗效,并为个体化的选择敏感性药物提供一定的实验依据.     

降低细胞内GSH浓度对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响

目的 探讨肿瘤细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)浓度对肿瘤细胞药物敏感性及在肿瘤细胞耐药机制中的作用. 方法以马来酸二乙酯(DEM)处理人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM和敏感细胞株MCF-7/S,以消耗细胞内GSH,MTT法检测DEM处理前后两种细胞存活率的变化,并采用荧光分光光度法同步检测其细胞内GSH的消耗程度,分析细胞内GSH浓度的变化与MCF-7细胞对ADM敏感性变化间的相关关系. 结果 0.1 μmol/L DEM使MCF-7/ADM细胞内GSH浓度减少37.4%(P＜0.01),使MCF-7/S细胞内GSH浓度减少29.7%(P＜0.01);ADM亦使细胞内GSH含量呈ADM浓度依赖性的下降;DEM与ADM合用时,GSH浓度显著下降,其下降程度大于DEM和ADM单独应用之和.随着细胞内GSH数量的减少,无论是MCF-7/ADM细胞,还是MCF-7/S细胞,细胞存活率均下降,即对ADM的敏感性均增强(P＜0.01).结论 DEM耗竭细胞内GSH的作用与ADM有协同效应,耗竭细胞内GSH可增强人乳腺癌MCF-7/S细胞对ADM的敏感性,部分逆转MCF-7/ADM细胞对ADM的耐药性.