醋酸铅对PC12细胞核转录因子-кB转录活性的影响

目的 探讨醋酸铅及NF-кB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对核转录因子-kappa B(NF-κB)转录活性的影响. 方法 将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)暴露于不同浓度的醋酸铅0、12.5、25、50、100、200、400、800和1600 μmol/L,采用四唑盐比色实验(MTT)检测IC50值.用脂质体将pNF-кB-Luc报告基因质粒转染入PC12细胞,转染后的PC12细胞分别暴露于不同浓度的醋酸铅(100、200和400 μmol/L)及不同浓度醋酸铅加PDTC 100 μmol/L,24小时后采用萤光素酶检测试剂盒检测萤光素酶活性. 结果 用不同浓度的醋酸铅处理细胞24小时,其生长增殖受到不同程度的抑制,且呈现出剂量-反应关系,其IC50值为(533.966±100.830) μmol/L.用不同浓度的醋酸铅处理转染后的PC12细胞24小时,结果显示:PDTC对照组萤光素酶活性较空白对照组降低(P＜0.01);铅处理组萤光素酶活性较空白对照组高(P＜0.01),且具有剂量依赖性;铅+PDTC联合作用组与PDTC对照组相比,PC12细胞内萤光素酶活性增高(P＜0.01). 结论 醋酸铅可诱导PC12细胞的NF-кB转录活性升高.     

醋酸铅对PC12细胞核转录因子-кB转录活性的影响

目的探讨醋酸铅及NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对核转录因子-kappaB(NF-κB)转录活性的影响。方法将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)暴露于不同浓度的醋酸铅0、12.5、25、50、100、200、400、800和1600μmol/L,采用四唑盐比色实验(MTT)检测IC50值。用脂质体将pNF-κB-Luc报告基因质粒转染入PC12细胞,转染后的PC12细胞分别暴露于不同浓度的醋酸铅(100、200和400μmol/L)及不同浓度醋酸铅加PDTC100μmol/L,24小时后采用萤光素酶检测试剂盒检测萤光素酶活性。结果用不同浓度的醋酸铅处理细胞24小时,其生长增殖受到不同程度的抑制,且呈现出剂量-反应关系,其IC50值为(533.966±100.830)μmol/L。用不同浓度的醋酸铅处理转染后的PC12细胞24小时,结果显示:PDTC对照组萤光素酶活性较空白对照组降低(P<0.01);铅处理组萤光素酶活性较空白对照组高(P<0.01),且具有剂量依赖性;铅 PDTC联合作用组与PDTC对照组相比,PC12细胞内萤光素酶活性增高(P<0.01)。结论醋酸铅可诱导PC12细胞的NF-κB转录活性升高。     

铅暴露对神经元和脉络丛上皮细胞的损伤机制研究

目的研究铅暴露对神经元和脉络丛上皮细胞的损伤作用及分子机制。方法大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞和脉络丛上皮Z310细胞体外培养。采用噻唑蓝法(MTT),通过暴露于0~50μmol/L醋酸铅24 h和48 h筛选适合剂量。两种细胞分别以醋酸铅10μmol/L处理,于48 h时间点用TUNEL法检测细胞凋亡水平,于24 h和48 h时间点用Western blot法检测bcl-2、bax及caspase-3蛋白水平。结果醋酸铅浓度为10μmol/L及以上时,PC12和Z310细胞活力均受到显著抑制,故选择10μmol/L为铅暴露剂量。与正常对照组相比,铅暴露后PC12细胞凋亡(TUNEL阳性)细胞数显著增多(P0.05),Z310细胞凋亡细胞数无显著变化(P0.05)。与正常对照组相比,醋酸铅10μmol/L处理PC12细胞24 h和48 h后,PC12细胞bax/bcl-2比值显著上升,cleaved caspase-3蛋白表达水平也显著增高(P0.05),而Z310细胞bax/bcl-2比值及cleaved caspase-3蛋白水平均无显著改变(P0.05)。结论铅暴露诱导不同类型大脑细胞损伤的方式和途径存在差异,通过线粒体途径诱导细胞凋亡参与了铅损伤PC12细胞的机制,但可能并不是铅诱导Z310细胞损伤的主要方式。     

锰对人脐静脉内皮细胞及半胱天冬酶表达影响

目的探讨锰对人脐静脉内皮细胞系HUVEC-304细胞生长周期及半胱天冬酶-3（caspas-3）、半胱天冬酶-8（caspase-8）表达的影响。方法以100～800μmoml／L）的氯化锰分别处理HUVEC-304细胞24～72h后，四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测EVC-304细胞的生长活性；流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡情况；蛋白印迹法（Western blot）检捌HUVEC-304细胞在，氯化锰半数抑制浓度（IC50）400μmol／L作用24h时caspase．8、caspase-3的表达。结果氯化锰可呈时间及剂量依赖性抑制HUVEC-304细胞的增殖和诱导细胞凋亡，抑制率为22．34％～90．94％，凋亡率为10．20％～98．73％。氯化锰24hIC50约为400μmol／L，在此浓度下。HUVEC-304细胞caspase-8、caspase-3表达显著增高。（P〈0．05）。结论氯化锰能够抑制HUVEC-304细胞的增殖。星明显的时效和量效关系。caspase-8、cas-pase-3表达增高在细胞增殖和凋亡中起重要的作用，可能是其作用机制之一。     

麦芽酚铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞β-淀粉样蛋白42蛋白表达的影响及其作用机制

目的探讨铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)42表达的影响及其作用机制。方法将处于对数生长期的PC12细胞分别暴露于含麦芽酚铝终浓度为0(对照)、50、100、200和400μmol/L的完全培养基染毒12、24、48 h。采用CCK-8法测定细胞活性,采用酶联免疫吸附(ELISA)测定法测定PS1、Aβ42蛋白的含量。结果与对照组比较,200、400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及各浓度麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着麦芽酚铝染毒浓度的升高,不同染毒时间PC12细胞的存活率均呈逐渐降低的趋势。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞PS1蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h时以及100、200、400μmol/L麦芽酚铝染毒48 h时PC12细胞Aβ42蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论γ-分泌酶表达增加可能是铝致PC12细胞Aβ42蛋白含量增多的重要原因之一。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后,Hochest 33258-PI染色显示醋酸铅组细胞呈凋亡形态学改变。动脉内皮细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的caspase-3、P53和Bax阳性表达升高,而Bc l-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可促进动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与capase-3的活化有关。     

苯并(a)芘对大鼠睾丸支持细胞连接蛋白基因表达的影响

[目的]探讨苯并(a)芘(BaP)对大鼠原代培养睾丸支持细胞的连接蛋白(connexin 43、occludin、ZO-1、N-cadherin)基因mRNA表达的影响及可能机制. [方法]取出生21d SD大鼠睾丸组织,分离支持细胞,细胞分离后,均按照1.5×106个/mL浓度接种于细胞培养板中.培养48h后,以0、1、10、50、100 μmol/L浓度的BaP同时染毒于原代培养的大鼠支持细胞12h,每个剂量设置6个平行孔.检测支持细胞活力、凋亡蛋白caspase-3活性,以及连接蛋白基因的mRNA表达. [结果]在BaP 50 μmol/L时,支持细胞活力降低(和对照组相比,P＜0.01);在BaP 10 μmol/L时caspase-3活性升高,连接蛋白connexin 43、occludin、和ZO-1基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P＜0.05).在BaP 100 μmol/L时连接蛋白N-cadherin基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P＜0.05).加入caspase-3抑制剂后,BaP所诱导的连接蛋白基因表达下降,且随caspase-3活性变化而发生改变. [结论]BaP能诱导大鼠支持细胞连接蛋白mRNA表达下降,BaP诱导的caspase-3活性上升是调节连接蛋白mRNA表达下降的可能机制.     

锰致PC12细胞PARK2表达对多巴胺分泌的修饰作用

[目的]研究锰在不同剂量和不同时间下对鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12)中多巴胺含量和PARK2表达的影响.[方法]鼠PC12细胞分别以(1)0、100、300、500 μmol/L浓度的氯化锰(MnCl2)染毒24h; (2)500 μmol/L MnCl2染毒6、24、48h.采用反相高效液相-荧光法测定细胞内多巴胺含量,实时荧光定量聚合酶链反应检测PARK2 mRNA水平. [结果]随着染毒浓度的增高,多巴胺含量及PARK2 mRNA表达呈下降趋势.与对照组比较,300 μmol/L或以上浓度MnCl2染毒所致多巴胺含量降低和PARK2 mRNA表达降低(P＜0.01).500 μmol/L MnCl2分别染毒6、24、48h,多巴胺含量明显降低(P＜0.01),PARK2 mRNA表达下调(P＜0.05). [结论]锰可致PC12细胞多巴胺含量减少,可能与PARK2的表达下调有关.     

叔丁基对苯二酚对锰致神经细胞毒性的保护作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)对锰致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性的保护作用.方法 以不同终浓度(300、600、900μmol/L)的MnCl2分别处理PC12细胞24、48、72 h,用噻唑蓝(MTT)法检测PC12细胞毒性.MnCl2组予600μmol/L MnCl2处理72 h;tBHQ组予40 μmol/L tBHQ处理细胞84h;tBHQ+MnCl2组予40μmol/L tBHQ预处理12h后,600 μmol/LMnCl2处理72 h,用MTT法检测细胞毒性,MnCl2处理剂量为300 μmol/L时用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,300、600、900μmol/LMnCl2处理24、48、72h,细胞增殖相对比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);300、600、900 μmol/L MnCl2处理组各组间相互比较,有剂量一效应关系,差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,600 μmol/L MnCl2组抑制PC12细胞增殖,抑制率为40%,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组及MnCl2组比较,tBHQ组和tBHQ+MnCl2组的细胞出现增殖效应,细胞增殖相对比为1.8,差异均有统计学意义(P＜0.01).300μmol/L MnCl2处理组PC12细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),tBHQ+MnCl2组细胞凋亡率低于300μmol/L MnCl2处理组,差异有统计学意义(P＜0.01),细胞凋亡抑制率61%.结论 锰可抑制PC12细胞增殖作用,可诱导细胞凋亡;tBHQ可减弱锰抑制PC12细胞的增殖作用并可削弱锰致PC12细胞凋亡的作用.     

原花青素对宫颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响

目的 探讨原花青素对官颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响.方法 将按照不同终浓度原花青素(0,37.5μmol/L,75.0 μmol/L,150.0μmol/L,300.0μmo/L和600.0 μmol/L)处理宫颈癌HeLa细胞,分别纳入对照组(空白对照),37.5μmol/L PC组,75.0μmol/L PC组,150.0μmol/L PC组,300.0 μmol/L PC组和600.0 μmol/L PC组.继续培养24 h,收集细胞进行实验.采用RT-PCR检测Caspase-3 mRNA和Survivin mRNA表达变化.采取Western blot检测caspase-3和survivin蛋白表达的变化.采用比色法检测caspase-3相对活性.结果 随着原花青索浓度增加,Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平逐渐增加,而Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平逐渐减少;随着处理官颈癌HeLa细胞原花青素浓度升高,caspase-3相对活性逐渐增加,且差异有显著意义(P＜0.05),在原花青素为600.0/μmol/L 时,活性最大.结论 原花青素可剂量依赖性地增加Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平及caspase-3活性,并且可剂量依赖性减少Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平.     

内质网应激与细胞凋亡

死亡受体活化和线粒体损伤是两条经典的介导细胞凋亡信号传导通路 ,近来研究发现过度内质网应激可启动细胞凋亡 ,是一条新的细胞凋亡信号传导通路 ,这一信号传导通路包括非折叠蛋白反应和钙离子起始信号等机制 ,内质网应激可特异性激活Caspase_12 ,Caspase_12裂解Caspase_3等下游效应蛋白酶 ,最终导致细胞凋亡。本文对该凋亡途径的研究进展作了简要综述。     

Caspase-3在二硫化碳染毒小鼠心肌细胞中的表达

目的 探讨二硫化碳染毒对小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 将48只小鼠随机分为4组，其中低剂量组、中剂量组、高剂量组分别采用不同浓度的二硫化碳进行染毒，空白对照组不吸入二硫化碳。染毒5周后，分别取以上各组小鼠心肌组织，用免疫组织化学S-P法检测各组小鼠心肌组织中Caspase-3的表达。结果 低剂量组、中剂量组和高剂量组心肌组织中Caspase-3的表达呈阳性表达。结论 二硫化碳对小鼠心肌组织有毒性作用，可诱导小鼠心肌细胞的凋亡。     

Caspase-3与生精细胞凋亡关系的研究

[目的]探讨Caspase-3与男性原发不育患者睾丸生精细胞凋亡的关系。[方法]采用TUNEL及免疫组化技术,观察168例男性原发不育患者的睾丸组织中生殖细胞凋亡指数和Caspase-3蛋白表达的阳性率。[结果]与正常睾丸生精细胞对比,男性原发不育患者生精细胞凋亡指数明显升高(P﹤0.05)。不育组Caspase-3蛋白的阳性率为(14.13±1.94)%,正常组为(2.41±0.98)%,二者比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]生精细胞的凋亡相关基因Caspase-3过高表达与男性原发不育密切相关。     

病毒性肝炎患者外周血单个核细胞中Caspase-3与凋亡

肝炎病毒的感染及复制不仅发生在肝细胞中,而且也发生在免疫细胞中,包括骨髓及外周血单个核细胞(PBMC)。凋亡的发生与肝细胞的变化及肝脏的病理过程密切相关。Caspases家族是凋亡的重要控制基因之一,而其中Caspase-3是凋亡过程中的一个重要调节子。Caspase-3的活性与病毒性肝炎的炎症程度及病情发展有关,通过Caspase-3对凋亡的调控,可能会对病毒性肝炎的治疗和控制起重要作用,     

染锰大鼠生殖激素水平与生精细胞凋亡基因表达

目的 探讨染锰大鼠血清生殖激素水平与生精细胞凋亡基因Caspase-3表达关系.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和15,30 mg/kg氯化锰组,分别染锰4,6周,乙醚麻醉,眼眶取血,分离双侧睾丸,称重,采用免疫组织化学方法检测生精细胞caspase-3表达,放射免疫法检测血清睾酮(testosterone,T)、卵泡刺激素(follicle stimulating,FSH)、黄体生成素(luteinizine hormone,LH)水平.结果 30 mg/kg氯化锰组染锰4,6周,血清中T、FSH、LH含量分别为(2.78±0.74)和(2.76±0.81)nmoL/L,(0.44±0.03)和(0.57±0.03),(0.19±0.02)和(0.19±0.03)U/L;Caspase-3表达水平分别为(65.49±11.34)和(82.65±5.26);染锰组大鼠生精细胞Caspase-3表达与血清T含量呈负相关(r=-0.799,P<0.01),与血清中FSH、LH水平呈正相关(r=0.735,r=0.737,P<0.01).结论 染锰大鼠血清T水平降低,FSH和LH水平上升是生精细胞caspase-3表达上调的主要原因.     

热疗对宫颈癌Caski细胞Caspase-3表达的影响

目的 探讨不同温度热疗后Caspase-3在宫颈癌Caski细胞中的表达变化.方法 采用实时荧光定量PCR技术和westem Blot检测43℃、45℃、47℃实验组和37℃对照组24 h后宫颈癌Caski细胞中Caspase-3的表达.结果 Caspase-3 mRNA在37℃、43℃、45℃、47℃处理后24 h的表达倍数分别为1、(2.738±0.156)、(1.35±0.071)、(0.78±0.093).Caspase-3蛋白的灰度值在对照组、43℃、45℃、47℃分别为(0.894±0.064)、(1.237±0.182)、(1.196±0.104)、(0.401±0.051).在43℃和45℃其蛋白表达量明显增加(P<0.05),而47℃的表达明显降低(P<0.05). 结论 43℃和45℃热疗可以在mRNA的水平调节宫颈癌Caski细胞中Caspase-3表达,导致Caspase-3蛋白表达明显增加.     

铅对小鼠睾丸TGFβ1及Caspase-3表达的影响

目的 探讨不同浓度和时间醋酸铅染毒对小鼠睾丸转化生长因子β1（Transforming growth factor β1，TGFβ1）、半胱天冬酶3（Caspase-3）表达的影响，进一步阐明醋酸铅所致睾丸毒性的作用机制。方法 45只雄性小鼠分为空白对照组和0．2％，0．4％醋酸铅染毒组，每组15只。并在第2，4，6周分别处死每组小鼠各5只，取其睾丸组织，免疫组化检测TGFβ1、Caspase-3表达的差异。结果 染铅后不同周TGFβ1、Caspase-3的表达较空白对照组增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。且随着染毒时间的延长，表达越强（P〈0．05）。但在0．2％与0．4％不同周染铅组之间TGFβ1、Caspase-3的表达差异并无统计学意义（P〉0．05）。结论 醋酸铅使睾丸TGFβ1 Caspse-3的表达增强，从而促使生殖细胞发生凋亡。     

急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的相关性

目的探讨急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的关系。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型。应用原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组化法及Western-blotting蛋白印记技术分别检测Caspase-3及Caspase-10蛋白表达。结果①脑缺血大鼠海马CA1区3h出现凋亡阳性细胞,48 h达到高峰,72 h凋亡阳性细胞的数量开始下降。②脑缺血大鼠海马CA1区3 h可见Caspase-3及Caspase-10蛋白阳性细胞,48 h表达达高峰,72 h表达开始减少。③脑缺血大鼠海马CA1区Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的变化与细胞凋亡数呈正相关(r=0.976,P﹤0.01;r=0.986,P﹤0.01)。结论脑缺血大鼠海马CA1区存在细胞凋亡,且与Cas-pase-3及Caspase-10蛋白表达的变化一致,Caspase-3及Caspase-10蛋白可促进细胞凋亡发生。     

ASC与Caspase-1在结肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨ASC与Caspase-1在结肠癌组织及癌旁组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化LSAB法对30例术前无放化疗的结肠癌标本及其相应的癌旁组织进行ASC、Caspase-1检测，并结合各指标进行分析。结果癌旁组织及肿瘤组织中ASC阳性率分别为60．00％（18／30）和13．33％（4／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）；Caspase-1阳性率分别为60．00％（18／30）和30．00％（9／30），组间阳性表达率差异有显著性（P〈0．05）。ASC与Caspase-1两指标在肿瘤组织中的表达呈负相关，但无统计学意义（P〉0．05），在癌旁组织中表达高度正相关（P〈0．01）。结论结肠癌中有ASC、Caspase-1的低表达，且显著低于癌旁组织，提示ASC、Caspase-1在结肠癌的凋亡、发生及发展过程中有重要作用。     

黄连素对体外培养siha细胞增殖的影响

目的:观察黄连素(berberine,ber)对人子宫颈癌siha细胞生长的抑制作用及其对凋亡基因caspase-9、caspase-3的影响,以及caspase-3的活化形式cleaved caspase-3含量的变化。初步探讨ber抑制siha细胞增殖的机制。方法:体外培养人宫颈癌siha细胞,将其分为对照组(二甲亚砜)及ber 20、40和80μmol.L-1,实验组,分别用二甲亚砜、ber处理细胞24、48、72和96 h后,经MTT法检测ber对siha细胞增殖的影响;RT-PCR、Westem blotting、免疫细胞化学染色法观察凋亡相关基因caspase-9、caspase-3的转录、蛋白表达情况。结果:实验组MTT值高于对照组,即实验组细胞增殖受到明显抑制;与对照组相比,实验组凋亡相关基因caspase-9、caspase-3的转录水平均上调(P<0.01)、两基因蛋白表达水平明显上调(P<0.01),活化形caspase-3含量增加。结论:ber可抑制体外培养siha细胞增殖,诱导siha细胞发生凋亡。其机制可能与激活caspase家族级联反应有关。