Leptin及其受体在非酒精性脂肪性肝炎患者肝组织中的表达

目的 探讨细胞因子Leptin及其受体在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者肝组织中的表达状况及其在NASH发病机制中的意义.方法 应用免疫组织化学及原位分子杂交方法 ,对59例不同病变程度的NASH穿刺肝组织中Leptin及其受体Ob-R、Ob-Rb和Ob-Ra的表达进行检测,观察表达部位和表达量的变化,分析其与NASH病变程度之间的关系.结果 NASH肝组织内,Leptin主要表达于肝腺泡3带脂变区域及纤维化明显的汇管区及其周围的库普费细胞(KC)、单个核细胞(MNC)、肝星状细胞(HSC)内;Leptin mRNA多表达于肝腺泡3带肝细胞内;Leptin受体的定位和分布与Leptin大体一致,其中Ob-Rb表达量较Ob-Ra多;Leptin及其受体在NASH纤维化分期(S)组和脂变分级(F)组组间的表达差异性明显(均P＜0.05).结论 Leptin及其受体与NASH肝细胞脂变发生及程度密切相关,并可能作为重要的调节因子参与NASH肝纤维化过程.     

不同糖耐量个体游离脂肪酸、脂联素与胰岛β细胞功能的关系探讨

目的探讨不同糖耐量个体游离脂肪酸(FFA)、脂联素(APN)与胰岛β细胞功能的关系。方法选取35例新诊断的2型糖尿病患者(DM组),30例糖耐量降低者(IGT组),36例正常对照(NGT组),行静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT),ELISA法测定空腹APN,比色法测定空腹FFA及糖负荷后120min FFA(FFA120)。计算0～10min胰岛素曲线下面积(AUC)、急性胰岛素反应0-10(AIR0-10)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及稳态模型胰岛素分泌指数(HOMA-B),并探讨FFA与空腹血糖(FPG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、AUC、AIR0-10、APN、HOMA-B及HOMA-IR的关系。结果DM组、IGT组的APN、AUC、AIR0-10显著低于NGT组(P<0.05),且DM组显著低于IGT组(P<0.05)。DM组、IGT组空腹FFA明显高于NGT组(P<0.05)。FFA与AUC、AIR0-10、HOMA-B、APN、HDL-C呈负相关,与FFA120、TG、FPG呈正相关;APN与FFA、FFA120、TG、LDL...     

高血压病患者血浆瘦素水平和胰岛β细胞功能变化及雷米普利的影响

目的：探讨瘦素和胰岛β细胞功能障碍在高血压病发病中的意义及雷米普利对瘦素、胰岛β细胞功能和胰岛素敏感性的影响及其意义。方法：利用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测24例健康人及44例高血压病患者血浆瘦素、真胰岛素（TI）、胰岛素原（PI）的浓度;用族免法测定血浆免疫反应性胰岛素（IRI）、肾素（PAR）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及醛固酮（ALD）的水平;利用上述指标计算胰岛β细胞功能指数和胰岛素敏感性指数,观察21例高血压病患者使用雷米普利治疗后上述指标的变化。结果：高血压病患者血浆瘦素浓度、TI、IRI、PI／IRI比值与对照组比较均有显著性差异（P＜0．05－0．01）;高血压病组血浆TI与健康对照组比较无显著性差异（P＞0．05）;高血压病组血浆瘦素浓度与BMI、TI、甘油三酯（TG）浓度及PAR呈显著正相关（P均＜0．05）,而与年龄、收缩压、舒张压、AngⅡ及ALD水平无明显相关性（P均＞0．05）;21例高血压病患者服用雷米普利治疗前后血浆瘦素、PI和IRI浓度有显著性差异（P＜0．05－0．01）,PI／IRI浓度比值比胰岛素敏感性亦有显著性差异（P＜0．05）,而TI无显著性差异（P＞0．05）。结论：高血压病患者血浆瘦素、PI及IRI浓度增高,可能存在高瘦素血症、高胰岛素原血症和高免疫反应性胰岛素血症,不存在高真胰岛素血症,高血压病患者存在胰岛β细胞功能障碍;瘦素参与高血压病的发生和发展,可能与胰岛β细胞功能障碍有关;雷米普利可降低血浆瘦素、IRI及PI水平,改善胰岛β细胞功能并增加胰岛素敏感性,改善胰岛β细胞功能可能是雷米普利新的作用机制。     

游离指肪酸对大鼠瘦素体基因表达及蛋白酷氨酸磷酸化的影响

目的：观察游离脂肪酸是否会对大鼠肝脏,骨骼肌及胰腺组织瘦素（leptin) 受体的蛋白及基因表达以及酪氨酸磷酸化产生一定的影响,方法：用静脉注射法制备高游离脂肪酸大鼠模型,处死后取肝脏,骨骼2肌及胰腺组织,提取蛋白后用Western印迹法检测瘦素受体的蛋白水平,用RTPCR法检测瘦素受体RNA含量的变化,应用免疫沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度,结果：高游离脂肪酸组大鼠肝脏,骨骼肌和胰腺组织瘦素受体的蛋白水平与对照组大鼠相比无明显差异（P＞0．05）,经RT－PCR结果分析表发现,高游离脂肪酸组大鼠肝脏,骨骼肌和胰腺组织瘦素受体的RNA水平与对照组大鼠相比无明显差异（P＞0．05）,高游离脂肪酸组大鼠肝脏,骨骼肌和胰腺组织瘦素受体的酷氨酸磷酸化程度与对照组大鼠相比有显著差异（P＜0．05）,瘦素受体的酷氨酸磷酸化程度显著降低,提示游离脂肪酸抑制了大鼠肝脏,骨骼肌组织的瘦素受体的酷氨酸残基的磷酸化,崦高游离脂肪酸组大鼠胰腺组织的瘦素受体的酷氨酸磷酸化程度与对照组大鼠相比没有显著差异（P＞0．05）,结论：游离脂肪酸可显著降低大鼠肝脏及骨骼肌组织瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度,提示游离脂肪酸的抑制了大鼠肝脏,骨骼肌组织纱受体的酷氨酸残基的磷酸化,游离脂肪酸可通过对大鼠肝脏及骨骼肌瘦素受体的磷酸化程度产生一定的抑制作用,从而进一步引起胰岛素抵抗。     

胰岛淀粉样多肽对培养大鼠胰岛细胞分泌胰岛素的影响

淀粉样多肽（ＩＡＰＰ）是一种新发现的由胰岛细胞分泌的激素，在非胰岛素依赖型糖尿病的发生发展中具有重要意义。本研究旨在观察ＩＡＰＰ对培养的新生大鼠胰岛细胞单层培养物胰岛素分泌的影响。取新生大鼠胰腺，用胰蛋白酶和胶原酶（ｖ型）反复消化分散细胞，ＲＰＭＩ１６４０培养液培养，碘乙酸去除成纤维细胞。于培养后７ｄ选生长一致、形态良好的单层细胞培养物用于ＩＡＰＰ实验。结果ＩＡＰＰ与培养７ｄ的胰岛细胞单层培养物孵育１．５ｈ，与不含ＩＡＰＰ的对照组比较，ＩＡＰＰ２μｍｏｌ／Ｌ时对胰岛素分泌无明显抑制作用（Ｐ＞０．０５），ＩＡＰＰ１０μｍｏｌ／Ｌ时对胰岛素分泌有明显抑制作用（Ｐ＜０．０１）。表明ＩＡＰＰ依赖剂量抑制大鼠胰岛细胞分泌胰岛素。     

外源一氧化氮对大鼠胰岛细胞损伤机制研究

目的：研究外源NO对胰岛细胞的损伤机制和功能的影响。方法：采用DNA电泳技术以及单细胞电泳检测NO对胰岛细胞的凋亡和DNA的损伤作用；通过测定胰岛素含量检测胰岛细胞在NO作用下的合成和分泌功能。结果：外源NO能导致胰岛细胞DNA的断裂形成彗星细胞，DNA电泳显示典型梯状条带，大剂量NO形成死亡条带；同时NO能抑制胰岛细胞合成和分泌胰岛素。结论：外源NO可导致胰岛细胞凋亡、DNA断裂损伤并抑制其合成分泌胰岛素的功能。     

低氧暴露和运动对正常大鼠胰岛β细胞形态的影响

目的:动态观察低氧暴露和运动对正常大鼠胰岛β细胞形态的影响。方法:将SD大鼠分为安静对照组(C)、低氧暴露组(H)、常氧运动组(E)和高住低训组(HL)。运动方式为跑台运动,坡度5°,速度20 m/min,60 min/次,低氧组晚上在氧浓度为13.6%的低氧帐篷内暴露12h。分别于实验开始后1d、7d和28d时取材,用HE和醛复红对比染色观察胰岛β细胞形态,并用图像分析法计算β细胞面积百分比。结果:实验1d的低氧暴露和高住低训初期(1d和7d),胰腺腺泡细胞出现明显的中度脂肪变性,28d时腺泡细胞呈现轻度的脂肪变性。图像分析显示,实验7d和28d时常氧运动组胰岛β细胞占胰岛面积百分比都有增加的趋势,但均无显著性差异(P>0.05);实验7d时低氧暴露组以及高住低训组胰岛β细胞占胰岛面积百分比都有增加的趋势,但均无显著性差异(P>0.05)。实验28d时高住低训组胰岛β细胞占胰岛面积百分比显著性降低(P<0.05),低氧暴露组也有降低的趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论:①高住低训可使正常大鼠胰腺腺泡细胞发生脂肪变性,随时间延长其脂肪变性减轻。②有氧运动训练对正常大鼠胰岛β细胞的形态无显著影响,低氧暴露和高住低训可降低胰岛β细胞占胰岛面积的百分比,且高住低训组更明显,表明低氧暴露和高住低训可能对正常机体胰岛β细胞的形态产生不良影响,从而影响其内分泌功能。     

免疫抑制剂对人胰岛细胞活性的影响

目的了解免疫抑制剂对人胰岛细胞活性的影响,探讨其在胰岛移植中的作用。方法体外分离、纯化人胰岛细胞,与不同浓度、不同种类的免疫抑制剂共同培养后,通过MTT法检测细胞活性。结果低浓度的雷帕霉素对胰岛细胞活性没有影响,高浓度（≥1ng／m1）的雷帕霉素显著降低胰岛细胞活性。赛尼哌和FTY720无论是高浓度还是低浓度对胰岛细胞活性均无影响。结论雷帕霉素对胰岛细胞有毒性作川,其程度与雷帕霉素浓度有关,赛尼哌和F1、Y720对胰岛细胞无明显毒性作用。     

新生大鼠胰岛细胞的体外单层培养

胰岛细胞体外培养中成纤维细胞的过度生长是影响胰岛细胞贴壁率的主要因素，曾经采用多种方法以限制成纤维细胞的生长，有的效果不理想，有的方法较复杂。作者采用接种后两次转板的方法，使成纤维细胞明显减少，胰岛细胞贴壁成活率提高，且方法简便。１材料与方法１．１胰...     

不同种类细胞外基质材料对胰岛细胞活力和功能的影响

目的　比较在不同细胞外基质材料上培养胰岛细胞对胰岛细胞活力和功能的影响。方法　采用胶原酶Ⅴ型消化法 ,经Fi coll密度梯度离心法纯化获得的胰岛细胞 ,按 10 0 0胰岛当量单位 /ml密度分别在I型胶原、I型和Ⅳ型胶原、Matrigel3种不同细胞外基质材料包被的 2 4孔培养板上培养 ,以不包被组为对照。培养 7天时进行丫啶橙 碘化丙啶 (AO PI)染色。放免法检测培养第 2、4、6、8、10天时胰岛素基础分泌水平及培养 4天时胰岛素刺激分泌水平。结果　AO PI染色显示 :Matrigel包被组和I型与Ⅳ型胶原混合包被组胰岛细胞的活力优于I型胶原包被组和对照组 ,I型胶原包被组的胰岛细胞活力优于对照组 ,Matrigel包被组的胰岛细胞活力最好。糖敏感性和分泌特性检测表明 :Matrigel包被组胰岛细胞的糖敏感性和胰岛素分泌活性最好。Matrigel包被组和I型与Ⅳ型混合胶原包被组中培养的胰岛细胞胰岛素刺激分泌水平优于对照组 (P <0 0 5 ) ,而Ⅰ型胶原包被组和对照组比较差异无统计学意义(P >0 0 5 )。结论　将胰岛细胞在Matrigel和I型与Ⅳ型混合胶原上培养能够改善胰岛细胞的活力和功能。     

类风湿性关节炎滑膜细胞蛋白酪氨酸激酶的RNA表达水平分析

根据已知的PTKs的氨基酸序列保守区设计简并引物,采用3‘快速末端扩增法（3‘RACE）扩增了滑膜细胞中PTKs cDNAs的3‘末端,然后通过RNA点杂交方法分别观察了这些PTKs在类风湿性关节炎(RA）和骨性关节炎（OA）病人滑膜细胞中的表达水平。结果从RA FLS细胞中共克隆到6种已知PTKs cDNA片段,分别为血小板衍生生长因子受体A（PDGFRA）、胰岛素样生长因子－1受体（IGF－1R）、含盘状（discoidin）结构域的受体型酪氨酸激酶（DDR2）、Lyn、Janus激酶1（JAK1）和TYK2。RNA点杂交结果显示,在4例RA病人和2例OA病人的滑膜细胞中都表现为：PDGFRA、IGF－1R和DDR2在RA滑膜细胞中的表达水平高于OA滑膜细胞,其它几种激酶在两种细胞中的表达水平无明显差别,说明RA滑膜细胞至少表达PDGFR、IGF－1R、Lyn、DDR2、JAK1和TYK2等6种PTKs,其中PDGFRA、IGF－1R和DDR2可能与RA滑膜细胞的过度增殖和对软骨的侵蚀性相关。     

饱和游离脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A导致卵巢颗粒细胞凋亡

探讨脂肪酸对人卵巢颗粒细胞生长的影响。不同剂量的游离脂肪酸处理颗粒细胞1－3天，用台盼蓝排除法对活细胞进行计数。用染色体DNA断裂和细胞形态学改变确定细胞凋亡。检测脂肪酸代谢产物酰基辅酶A是否直接引起细胞凋亡。测定与细胞凋亡相关的Bcl－2和Bax蛋白质表达水平。结果表明，饱和脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A呈剂量依赖性的引起颗粒细胞凋亡，并导致Bcl-2水平下降和Bax水平升高。说明饱和脂肪酸对卵巢颗粒细胞有直接致凋亡作用。提示，女性肥胖和胰岛素抵抗患者出现的性功能障碍可能与饱和脂肪酸水平增高有关。     

人HUT78细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

为了检测人HUT78细胞是否存在褪黑素受体（melatonin receptor,MR)及其亚细胞分布特点，采用异硫氢酸胍－苯酚－氯仿一步法抽提总RNA，进一步通过RT－PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA，并将RT－PCR的阳性产物通过自动测序仪测序；同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在HUT78细胞内的分布特点，RT－PCR方法则得到了368bp mt1 cDNA片段，无321bp MP2 cDNA片段，同时将mt1阳性条带通过胶回收，测序，结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合，免疫组化结果显示，人HUT78细胞存在mt1受体蛋白，主要分布于细胞膜和细胞浆，呈棕褐色阳性颗粒，而细胞上未见阳性颗粒，MT2受体蛋白则未检出，提示褪黑素（melatonin,Mel)对T淋巴细胞具有直接调节作用，为研究生理及病理情况下Mel调节免疫系统的作用机制奠定了基础。     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞PAI-1 基因表达的调节作用及其机制

为探讨血管紧张素Ⅱ与系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物－1（PAI－1）基因表达的关系，从健康成人肾（肾移植配型不合）培养肾小球系膜细胞，经过10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L浓度的血管紧张素Ⅱ刺激后，分别检测系膜细胞血管紧张素ⅡAT1和AT2受体基因表达以及PAI－1基因表达，并测定培养上清中纤溶酶原激活物的活性。结果发现，在血管紧张素Ⅱ刺激下，系膜细胞AT1受体mRNA表达明显增强，而AT2受体的基因表达不论是在正常状态下，还是在血管紧张素Ⅱ刺激后均未检测到；血管紧张素Ⅱ诱导48h后，系膜细胞PAI－1的基因表达显著增强，并呈现浓度依赖性，而培养上清中纤溶酶原激活物的活性则下降。说明血管紧张素Ⅱ能显著促进系膜细胞PAI－1基因的表达，其作用可能是通过AT1受体介导的。     

亲肺军团杆菌的遗传型和细胞脂肪酸组成分析

本文报告了亲肺军团杆菌的遗传型和细胞脂肪酸分析的结果.我国分离的第一株亲肺军团杆菌血清6型的DNA Mol%是37,与同型标准株芝加哥2号的杂交率是94.6%.含量最多的脂肪酸是饱和的含支链十六碳酸(i-16∶0),其次是不饱和的直链十六碳酸(16∶1),最少的是十八烷酸(18∶0).支链酸的含量为总脂肪酸含量的62～66%.     

人IL6受体cDNA在大鼠急性早幼粒白血病细胞中的长期稳定表达

ＬＴ１２是挪威棕色大鼠急性早幼粒白血病细胞系，其生物学征类似于人的ＡＭＬ－Ｍ３型。为了探索重ＩＬ６－ＰＥ４０假单胞菌外毒素融合蛋白选择性杀伤高表达ＩＬ受体的白血病细胞的效应，先前我们已成功地将编码人ＩＬ６Ｒ的ｃＤＮＡ电转导入该细胞系，建立了高表达人ＩＬ６Ｒ的大鼠急性早幼粒细胞白血病模型ＬＴ１２－ＩＬＲ＾＋     

IL-1和IL-4对肾小球系膜细胞p27和CDK2表达的影响

探讨白细胞介素 1(IL 1)和白细胞介素 4 (IL 4 )对肾小球系膜细胞细胞周期调节蛋白 p2 7和周期素依赖性蛋白激酶CDK2表达的影响。利用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞观察IL 1促进系膜细胞增生前后p2 7和CDK2 的表达变化 ,及同时应用IL 4后对上述表达变化的影响。结果发现 ,IL 1可以明显促进系膜细胞增生 ,同时观测到p2 7表达下降而CDK2 表达增高 ;IL 4可以抑制IL 1诱导的系膜细胞增生 ,同时发现p2 7表达增加而CDK2 表达减弱。提示IL 1和IL 4对系膜细胞增生的促进和抑制作用与细胞周期调节蛋白的表达变化密切相关。     

TNF对离体孵育骨骼肌的蛋白代谢与泛素系统基因表达的影响

为研究TNF-α对离体孵育骨骼肌蛋白代谢及泛素系统基因表达的影响，采用含重组大鼠TNF－α（6000U/mL)的孵育液有氧孵育大鼠伸趾长肌（EDL），对照组孵育液除不含TNF－α外其余成分与实验组相同，高效液相色谱法测定总蛋白和肌纤维蛋白的代谢率。核糖核酸印迹法检测EDL泛素mRNA和C2 mRNA的表达变化。结果显示，实验组大鼠EDL总蛋白和肌纤维蛋白分解代谢率与对照组相比差异无统计学意义，但EDL泛素mRNA（2.4kb)和C2亚基mRNA的表达较对照组分别升高约511％和56％，差异有统计学意义。提示TNF－α能与骨骼肌细胞直接发生作用，增强细胞内泛素蛋白酶体途径的活性。但TNF－α能否直接增强骨骼肌蛋白分解代谢尚有待进一步探讨。     

脂多糖对肺微血管内皮细胞β-受体及β-受体激酶影响的研究

为探讨脂多糖 (LPS)对肺微血管内皮细胞 β 受体 (β AR)及 β AR激酶的影响 ,在体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)的基础上 ,采用放射性配基结合法检测LPS作用后RPMVECβ AR的变化 ,并用Westernblot检测了LPS作用后 β AR激酶GRK2和GRK3的改变。结果发现 ,β AR最大结合容量BmaxLPS组显著低于正常对照组(P <0 0 5 ) ,LPS+山莨菪碱组与正常对照组间无显著性差异 ;LPS组与LPS+山莨菪碱组间GRK2表达无明显差异 ,但均明显高于正常对照组 ;RPMVEC无GRK3表达。提示LPS作用后引起的RPMVECβ AR下调可能与GRK2表达增加促进了β AR内化有关 ,而与GRK3无关 ;山莨菪碱不是通过抑制GRK2表达而是通过其他机制抑制LPS引起的β AR下调