豚鼠耳蜗外毛细胞的共聚焦图像

建立了用激光扫描共聚焦显微镜豚鼠耳蜗外毛细胞生理变化及细胞形态的方法，以荧光染料Ｆｌｕｏ－３作胞内Ｃａ＾２＋指示剂，用共聚焦显微观察乙酰胆碱（Ａｃｈ），ＡＴＰ、高钾引起的外毛细胞（ＯＨＣ）胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化，三种物质均引起Ｃａ＾２＋升高，但升高的幅度，进相及所在细胞部位不同，高钾还引起ＯＨＣ短缩，偏折，利用共聚焦显微镜“光学切片”的特性，对Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ荧光素染色的活的ＯＨＣ形态及磺     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP 的影响

目的　探讨离体前庭毛细胞（ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ ｈａｉｒｃｅｌｌｓ,ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法　采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６ μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ３ 染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ,ＬＳＣＭ） 记录静息状态下、加入高Ｋ＋ 液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ２＋ ］ｉ 的荧光强度相对值的变化。结果　细胞外有Ｃａ２＋ 存在时,７５ ｍｍｏｌ／ＬＫ＋ 可引起所观察５ 个ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ均升高,细胞体和皮板区的［Ｃａ２＋］ｉ 变化一致;在细胞外无Ｃａ２＋ 的情况下,所观察的５ 个ＶＨＣ 中,高Ｋ＋ 并不能引起细胞内［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高。在细胞外存在Ｃａ２ ＋ 时,不同浓度（１ ．０ ｍｍｏｌ／Ｌ,０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ）ＡＴＰ可引起绝大多数（１８／１９）ＶＨＣ 内［Ｃａ２＋ ］ｉ 迅速升高,达高峰后下降,恢复至静息时的水平;细胞外无Ｃａ２ ＋ 时,ＡＴＰ仅引起极少数（１／１０）ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ 升高;而对照组加入与ＡＴＰ等体积的Ｈａｎｋ 液,不引起ＶＨＣ 内［Ｃａ     

应用显微荧光测钙技术研究乙酰胆碱对豚鼠耳蜗对外毛细胞内 …

介绍了应用最显微荧光测钙技术研究豚鼠耳蜗外毛细胞（ＯＨＣ）内游离钙浓度的变化的方法。该技术以钙敏感染料Ｆｕｒａ－２作为胞内Ｃａ＾２＋的指示剂，装协进入细胞后，与胞内游离Ｃａ＾２＋结合，在特定波长光的激发下可发出荧光，由此可推算「Ｃａ＾２＋」ｉ的变化。结果发现乙酰胆碱在含钙的细胞上液中可引起「Ｃａ＾２＋」ｉ升高。对显微荧光测钙技术在研究耳蜗毛细胞中的应用以及ＡＣｈ引起「Ｃａ＾２＋」ｉ升高的机制进行讨     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ－３染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下、加入高Ｋ＾＋液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ＾２＋ｉ的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ＾２＋存在时,７５ｎｍｏｌ／ＬＫ＾     

听神经瘤患者离体前庭毛细胞的分离及胞内钙离子活动

目的进一步了解离体人前庭毛细胞的胞内钙离子（Ｃａ２＋）活动。方法从３例经迷路听神经瘤切除术患者中采取半规管壶腹中的前庭毛细胞，用倒置显微镜观察分离出的离体前庭毛细胞形态，用Ｃａ２＋敏感的荧光染料Ｆｕｒａ２和数字影像显微镜监测细胞内Ｃａ２＋浓度的变化。结果分离的前庭毛细胞主要为Ⅰ型毛细胞，可在体外存活２．５ｈ。用１５０ｍｍｏｌ／ＬＫ＋液灌流单离的前庭毛细胞引起胞内Ｃａ２＋的显著升高，荧光比率从０．５４升至１．１６；这种胞内Ｃａ２＋的升高在胞外液中Ｃａ２＋缺如的情况下消失。０．２５μｍｏｌ／ＬＩｏｎｏｍｙｃｉｎ可以引起前庭毛细胞内Ｃａ２＋的不可逆性升高，荧光比率保持在０．７３。结论人前庭毛细胞膜上存在电压敏感的Ｃａ２＋通道。     

ATP对离体耳蜗外毛细胞内游离钙浓度的影响

为探讨三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对耳蜗外毛细胞内游离钙（Ｃａ２＋）浓度的影响，利用荧光染色法，以５７０型粘附式细胞仪对ＡＴＰ引起的豚鼠耳蜗外毛细胞Ｃａ２＋浓度的变化进行动态观察。加入ＡＴＰ使Ｃａ２＋浓度明显升高，升高后迅速下降，高峰处无延迟，再次加入ＡＴＰ，出现类似反应。说明ＡＴＰ是以一种神经递质的作用影响外毛细胞的生理活动     

温度变化对豚鼠离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响

目的为探讨温度改变诱发前庭眼震的机理。方法酶孵育后机械分离成功豚鼠前庭毛细胞（ＶＨＣ）３４个，Ｆｌｕｏ－３荧光染色后，改变其外环境的温度，用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下及温度改变时ＶＨＣ内钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的变化。结果将分离的ＶＨＣ分为两型，ＬＳＣＭ下钙离子分布图像与相差显微镜下所见细胞外形相似，其钙离子分布在核区略高。１８／２２的Ⅰ型与７／１２的Ⅱ型ＶＨＣ其细胞内［Ｃａ２＋］ｉ随温度的升高而增加，随温度的降低而减少，呈规律性变化，但Ｉ型ＶＨＣ的变化幅度较大；对照试验观察到变温仅对少数（２／９）耳蜗外毛细胞（ＯＨＣ）内［Ｃａ２＋］ｉ有影响。本研究结果显示变温对ＶＨＣ有直接刺激作用，表现为ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ变化。结论对冷热诱发眼震的解释，除Ｂａｒａｎｙ的热对流学说外，尚存在冷热对ＶＨＣ的直接作用。     

水杨酸钠豚鼠耳蜗单离外毛细胸游离钙浓度影？…

目的 观察水杨酸钠对豚鼠耳蜗外毛细胞（ｏｕｔｅｒ ｈａｉｒ ｃｅｌｌｓ，ＯＨＣ）内游离钙浓度「Ｃａ＾２＋」ｉ的影响，并对钙通道调控药物的拮抗作用进行观察，以深入探讨水杨酸钠耳毒性的分子生物学机制。方法 豚鼠全身麻醉后断头活杀，酶－机械法分离获得耳蜗单离ＯＨＣ。１０ｕｍｏｌ／Ｌ的Ｅｌｕｏ－３／ＡＭ负载３０ｍｉｎ后用ＡＣＡＳＵｌｔｉｍａ型激光扫描共聚焦显微镜观察不同药物灌流下ＯＨＣ「Ｃａ＾２＋」ｉ的变     

听神经瘤患者离体前庭毛细胞的分离及胞内钙离子活动

目的 进一步了解离体人前庭毛细胞的胞内钙离子（Ｃａ＾２＋）活动。方法 从３例经迷路听神经瘤切除术患者中采取半规管壶腹中的前庭毛细胞，用倒置显微镜观察分离出的离体前庭毛细胞形态，用Ｃａ＾２＋敏感的荧光染料Ｆｕｒａ－２和数字影像显微镜监测细胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化。结果 分离的前庭毛细胞主要为Ｉ型毛细胞，可在体外存活２．５ｈ。用１５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｋ＾＋液灌流单离的前庭毛细胞引起胞内Ｃａ＾２＋的显著升     

温度变化对豚鼠离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响

目的 为探讨温度改变诱发前庭眼震的机理。方法 酶孵育后机械分离成功豚鼠前庭毛细胞（ＶＨＣ）３４个，Ｆｌｕｏ－３荧光染色后，改变其外环境的温度，用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下及温度改变时ＶＨＣ内钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）的变化。结果 将分离的ＶＨＣ分为两型，ＬＳＣＭ下钙离子分布图像与相差显微镜下所见细胞外形相似，其钙离子分布在核区略高。１８／２２的Ｉ型与７／１２的Ⅱ型ＶＨＣ其细