感染性休克患者外周血T淋巴细胞凋亡和影响因素分析

目的观察感染性休克患者的外周血T淋巴细胞的凋亡情况,并对可能诱导T淋巴细胞凋亡的原因进行探讨。方法采集南京市第一医院ICU自2006年1月至2009年1月收治的32例感染性休克患者的外周血,用Annexin-V法和流式细胞仪测定其中的T淋巴细胞的凋亡情况,同时用酶联免疫法（ELISA）测定血浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素1β（IL-1β）的浓度,用化学发光法检测血浆中的游离皮质醇浓度,将上述的结果和脓毒血症病患者及健康对照（n=22）相比。结果在初始状态下,外周血T淋巴细胞CD4＋亚群在健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组分别为（4.41±1.45）%、（7.87±3.82）%及（11.01±4.52）%,感染性休克患者的外周血T淋巴细胞CD4＋亚群的凋亡比例高于脓毒血症患者（P〈0.05）,脓毒血症患者高于健康对照组（P〈0.05）;而初始状态下健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组患者外周血T淋巴细胞CD8＋亚群的凋亡为（9.62±8.32）%、（13.09±15.84）%及（11.33±19.62）%,3组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。在基础状态下TNF-α的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（16.44±9.55）ng/L、（29.58±13.6）ng/L及（47.99±25.63）ng/L,感染性休克组TNF-α的浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;IL-10的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（6.38±7.5）ng/L、（9.67±4.88）ng/L及（15.01±5.36）ng/L,感染性休克组中的IL-10的浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;游离皮质醇的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（0.45±0.42）μmol/L、（0.87±0.49）μmol/L及（1.39±0.84）μmol/L,感染性休克组中的游离皮质醇浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;IL-1β在健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组中分别为（13.12±5.07）ng/L、（25.21±14.76）ng/L及（22.94±22.01）ng/L,感染性休克组和脓毒血症组的浓度高于健康对照组（P〈0.05）,但是感染性休克组和脓毒血症组的浓度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论感染性休克患者的外周血T淋巴细胞中CD4＋亚群可发生明显的凋亡,TNF-α、IL-10及皮质醇可能参与了诱导CD4＋亚群的凋亡。     

脐血中B淋巴细胞及其亚群检测初报

目的检测脐血中B淋巴细胞及其亚群的比率,了解脐血免疫学特征。方法用流式细胞术分析新生儿脐血、其母亲外周血及健康成年女性外周血中B淋巴细胞占淋巴细胞比率以及B1(CD19+CD5+)、B2(CD19+CD5-)亚群占B淋巴细胞比率。结果新生儿脐血中B淋巴细胞比率(15.98±3.83)%显著高于母亲外周血(11.40±3.73)%和对照组外周血(9.50±2.06)%,P<0.01;母亲组与对照组间B细胞比率无统计学差异(P>0.05)。在脐血组、对照组、母亲组间,B1亚群比率依次减低,分别为(48.00±11.26)%、(16.59±2.77)%和(6.18±2.76)%,3组间差异显著(P<0.01);B2亚群比率依次增高,分别为(52.00±11.26)%、(83.53±3.32)%和(93.82±2.76)%,差异显著(P<0.01)。结论与母亲组及健康成年女性外周血比较,脐血中B淋巴细胞所占比率较高,且含有较高比率的B1亚群细胞。     

低剂量电离辐射对作业人员外周血淋巴细胞亚群的影响

目的探索低剂量电离辐射对作业人员外周血淋巴细胞亚群的影响。方法检测62例有核辐射接触史者(接触组)外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、CD56+自然杀伤细胞(NK细胞)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)在淋巴细胞中的百分率,以40例无核辐射接触史的健康男性为对照。结果接触组和对照组CD3+T淋巴细胞百分率分别为(67.6±7.01)%和(64.3±4.58)%,差异具有统计学意义(t=-2.65,P<0.05),CD3+CD8+T淋巴细胞百分率分别为(20.73±5.48)%和(22.60±4.21)%,差异具有统计学意义(t=1.83,P<0.05)。结论低剂量电离辐射能引起CD3+CD8+T淋巴细胞降低,可能对机体有一定程度的辐射损伤,应采取有效的职业防护。     

轮状病毒腹泻患儿急性期异形淋巴细胞数量和T淋巴细胞亚群的变化

目的研究轮状病毒(RV)腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞数量和T淋巴细胞亚群的变化。方法采用外周血涂片瑞特染色,显微镜计数40例RV腹泻婴幼儿急性期外周血异形淋巴细胞和20名健康对照组婴幼儿的异形淋巴细胞;同时用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群。结果 RV腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞计数为(16.18%±3.59%),较健康对照组明显升高(P<0.001);外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值分别为(50.93%±5.86%)、(22.02%±5.17%)、(27.07%±4.79%)及(0.84%±0.29%),较健康对照组明显下降(P<0.01)。结论 RV腹泻患儿急性期外周血异形淋巴细胞数量升高,淋巴细胞亚群异常;RV腹泻患儿急性期进行外周血异形淋巴细胞计数和T淋巴细胞亚群的测定可较好的反映患儿的机体免疫状态。     

类风湿关节炎患者外周血T淋巴细胞亚群CD4~+/CD8~+表达的意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的表达变化对疾病进展的关系。方法采用流式细胞术检测94例RA患者和22例健康对照者外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+。其中94例RA患者按RA疾病活动指数(DAS28)评分分为低值、中值、高值3组。结果与健康对照组比较,RA组外周血中CD3+CD4+T淋巴细胞的表达率明显升高(P0.05),其中CD3+CD4+T淋巴细胞在DAS28低值组为(41.03±9.53)%,DAS28中值组为(42.16±7.08)%,DAS28高值组为(43.72±9.63)%;CD3+CD8+T淋巴细胞表达率明显降低(P0.05),其中CD3+CD8+T淋巴细胞在DAS28低值组为(21.33±6.67)%,DAS28中值组为(21.39±7.36)%,DAS28高值组为(21.28±6.60)%。结论CD4+/CD8+比值与RA患者疾病进程相关,表明CD4+/CD8+失衡在RA的发病中发挥了重要作用。     

原发性膜性肾病患者外周血淋巴细胞亚群的变化及其与蛋白尿的关系

目的分析原发性膜性肾病(PMN)患者外周血淋巴细胞亚群的变化及其与蛋白尿的关系。方法选取新乡医学院一附院肾内科确诊的PMN患者40例,收集其详细临床资料,并留取外周血应用流式细胞仪测定淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+、CD19+),同时选取20例健康志愿者作为健康对照组,比较PMN患者外周血淋巴细胞亚群与健康对照组的差别。根据患者尿蛋白水平,将PMN患者分为大量蛋白尿组(尿蛋白定量大于或等于3.5g/d)及非大量蛋白尿组(尿蛋白定量小于3.5g/d),分析两组患者上述淋巴细胞亚群水平的差异及其可能的临床意义。结果 (1)和健康对照组相比,PMN患者外周血CD4+细胞计数有升高趋势(51.83±6.80 vs.43.5±5.65,P0.05),CD8+细胞计数有降低趋势(28.83±5.60 vs.35.33±5.00,P0.05),而CD4+/CD8+比值较健康对照组明显升高(1.86±0.43 vs.1.27±0.33,P0.01)。与健康对照组比较,PMN患者外周血CD16+56+细胞计数无明显差异,而CD19+细胞计数明显升高(8.00±2.76 vs.7.33±2.66,P0.01)。(2)和非大量蛋白尿组相比,大量蛋白尿组CD19+细胞计数明显高升高(9.80±3.19 vs.7.10±2.23,P0.01),而CD4+细胞、CD8+细胞计数、CD4+/CD8+比值两者间差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PMN患者表现出明显的B淋巴细胞异常和CD4+/CD8+细胞比值的偏移,且B淋巴细胞异常程度与蛋白尿量有关,因此,监测PMN患者淋巴细胞亚群变化有助于评估病情、指导治疗。     

持续血液净化治疗对重症感染性休克患者淋巴细胞亚群的影响

目的研究持续性血液净化对重症感染性休克肾功能不全患者的疗效及对淋巴细胞的影响。方法对2014年9月至2016年4月在该院重症监护室(ICU)住院的重症感染性休克肾功能不全患者给予连续血液净化处理。通过流式细胞术测量治疗前后外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+),观察治疗前后电解质及肾功能变化情况。结果经过连续血液透析机综合治疗后24~48h,60例患者自觉症状得到明显改善,血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、C反应蛋白(CRP)水平均较治疗前明显降低,氧合指数得到明显改善,平均动脉压升高,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后24~48h患者外周血淋巴细胞中的CD3+和CD4+较治疗前明显升高,CD8+明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论肾功能障碍并发症的感染性休克患者应用持续血液净化治疗,不仅可以维持机体水电解质平衡,还能提高机体淋巴细胞功能。     

反复呼吸道感染儿童T淋巴细胞亚群的变化

目的研究儿童反复呼吸道感染(RRTI)时T淋巴细胞亚群的变化。方法采用流式细胞术检测RRTI患儿(观察组)和健康儿童(对照组)外周血T淋巴细胞亚群的表达水平。结果观察组CD3+、CD4+与CD8+T细胞百分率分别为(61.82±7.25)%、(32.87±6.73)%及(20.39±3.72)%,均明显低于对照组(P<0.01);CD4+/CD8+比值(1.65±0.42)显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RRTI患儿存在细胞免疫功能紊乱,表现为CD3+、CD4+/CD8+T细胞比例下降和CD4+、CD8+上升。流式细胞术检测T淋巴细胞亚群可用于快速、简便、准确评估患儿的免疫功能状况。     

多聚甲醛固定对流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群的影响

摘要：目的?考察多聚甲醛(PFA)浓度和固定时间对流式细胞术检测人外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比和平均荧光强度的影响。方法?以健康人外周血为研究对象,将六色荧光抗体标记后溶血处理的细胞分别用PBS、1% PFA(10 g/L)和4% PFA(40 g/L)进行重悬或固定,用流式细胞仪在固定0、4、8、12、24、48和72 h后检测CD19-CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD3-CD19+B、CD3-CD56+NK细胞占淋巴细胞百分比,及CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56的平均荧光强度。结果?与PBS对照组相比,72 h内,PFA浓度及固定时间对外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比均没有影响(P均>0.05);固定8 h内,PBS对各淋巴细胞亚群平均荧光强度均无影响,1% PFA组CD4平均荧光强度下降,4% PFA组CD45、CD3、CD4、CD8平均荧光强度均下降;固定24 h后,各淋巴细胞亚群平均荧光强度均下降,同时4% PFA固定后平均荧光强度均低于1% PFA(P<0.05)。结论?使用流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群,细胞染色后若8 h内检测用PBS进行细胞重悬检测效果最好,PFA固定不应超过12 h,1% PFA固定效果优于4% PFA。     

稳定期慢性阻塞性肺疾病患者外周血T淋巴细胞活化标志物表达水平的研究

目的通过研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者外周血T淋巴细胞活化标志物的表达水平,探讨COPD患者的免疫功能状态。方法前瞻性研究,纳入首都医科大学附属北京友谊医院COPD稳定期患者36例(COPD组),肺功能正常的吸烟者22例(吸烟组),体检正常无吸烟史者32例(正常对照组),采用流式细胞学方法,检测三组人群外周血T淋巴细胞亚群,以及外周血CD4+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞CD69、CD38、人类白细胞抗原-DR(HLADR)的表达水平。结果 (1)COPD组外周血T淋巴细胞各亚群的细胞数量及分布比率与吸烟组、正常对照组差异无统计学意义(P0.05);(2)COPD组外周血CD4+T淋巴细胞CD38表达比率为3.60±1.86%,HLA-DR表达比率为3.80±2.88%;CD8+T淋巴细胞CD38表达比率为6.19±3.33%,HLA-DR表达比率为1.97±1.24%,均高于正常对照组及吸烟组(P0.05);(3)COPD组T淋巴细胞活化标志物的表达水平与患者吸烟指数(每日吸烟数量乘以吸烟年限)呈正相关(P0.05)。结论稳定期COPD患者外周血较正常对照组及吸烟组具有更多活化的T淋巴细胞,COPD患者较健康人群具有更活跃的细胞免疫功能状态。且这种异常的T淋巴细胞激活,可能与COPD患者长期的香烟烟雾暴露相关。     

Early circulating lymphocyte apoptosis in human septic shock is associated with poor outcome

The role of lymphocyte apoptosis in septic shock remains a controversial issue. Using Annexin V and flow cytometry analysis on freshly isolated cells, we evaluated circulating lymphocyte apoptosis in 23 septic shock, 25 sepsis without shock, 7 nonseptic critically ill, and 25 control patients. In patients with sepsis, we compared day 1 lymphocyte apoptosis (i.e., within 3 days of the onset of infection) with that observed 5-7 days after (day 6) according to shock state, mortality, and seventy factors. At day 1, patients in septic shock exhibited higher lymphocyte apoptosis than that present in controls (16.5% +/- 3.5% vs. 3% +/- 0.5%, respectively, P = 0.0001). At day 6, patients with sepsis without shock restored undamaged CD4+ T and CD8+ T lymphocyte counts, whereas patients in septic shock increased only CD4+ T cells. Similarly, survivors restored undamaged lymphocyte count at day 6 (+70%, P < 0.001), whereas nonsurvivors did not. Day 6 undamaged lymphocyte count negatively correlated with day 1 SAPS II, day 6 LOD score, mechanical ventilation, and ICU stay duration. We observed no apoptotic effect of septic shock plasma or septic shock circulating mononuclear cells on target lymphoid cell lines. We found no alteration in any death receptors Fas, TRAIL-R1, TRAIL-R2, or in their ligands on circulating blood cells. Catecholamines and interleukin 10 levels significantly increased in patients with septic shock, but did not correlate with apoptosis levels. We conclude that lymphocyte apoptosis is rapidly increased in blood of patients in septic shock and that lymphocyte apoptosis leads to a profound and persistent lymphopenia associated with poor outcome. These results suggest that lymphocyte apoptosis is one of the main components of human septic shock immune dysfunction and could be related more to microcirculatory disturbance than to circulating factors.     

脓毒症患者自然调节性T细胞及可溶性CD25水平研究

目的 通过前瞻性研究探讨脓毒症患者外周血自然调节性T细胞(Treg)百分比和血浆可溶性CD25分子(IL-2sRa)水平的变化及其临床价值.方法 将2009年2月至2010年2月上海交通大学附属瑞金医院重症医学科所收治的符合ACCP/SCCM于1997年提出的SIRS与脓毒症诊断标准的37例脓毒症患者与15例非感染SIRS患者,以及上海交通大学附属瑞金医院体检中心24例排除感染及免疫系统基础疾病患者,根据诊断标准分为脓毒症组、非感染SIRS组与正常对照组.其中脓毒症组男性26例,女性11例,年龄(61.67±11.87)岁;非感染SIRS组男性8例,女性7例,年龄(67.06±12.57)岁;正常对照组男14例,女10例,年龄(56.54±6.37)岁.脓毒症组肺部感染28例,腹腔感染6例,其他4例;非感染SIRS组为择期清洁手术后24 h内无感染征象者.所有入选对象均排除免疫系统基础疾病和(或)近期(30 d内)曾使用或正在使用强效免疫抑制剂患者.流式细胞分析术检测三组外周血Treg细胞百分比,ELISA检测血浆IL-2sRa,IL-4,IFN-γ水平.所得数据采用方差分析及非参数检验的Kruskal-Wallis H方法.结果 ①Treg细胞在脓毒症组、SIRS组和正常对照组占外周血CD4+CD25+T细胞的比例分别为:(66.82±21.79)%,(51.79±21.79)%、(56.45±10.68)%,脓毒症组Treg细胞显著高于SIRS组和正常对照组(P=0.001).②与SIRS组(381.664±189.83)和对照组(164.132±56.37)相比,脓毒症组可溶性CD25分子(IL-2sRa)水平(425.619±270.12)显著增高(P=0.000).③IL-2sRa浓度与Treg细胞占CD4+CD25+T细胞的比例相关分析示:Spearman相关系数=0.390,P=0.003(P＜0.05),两者存在正相关关系.结论 Treg细胞在脓毒症患者外周血的表达水平特征性增高.而外周血IL-2sRa水平可以反映Treg细胞表达水平,也有助于简化判断脓毒症的免疫状态的方法.

Abstract：

Objective To explore the CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cell percentage and plasma levels of soluble CD25 molecules in peripheral blood of septic patients and their clinical value through prospective study. Method A total of 37 septic patients and 15 non-infectious SIRS patients, who conformed to the criteria of SIRS and sepsis which proposed by American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine Consensus Conference ( ACCP/SCCM ) in 1997, were collected in ICU of Ruijin Hospital ( Shanghai Jiaotong University) from February 2009 to February 2010. Twenty-four health people were from Medical Center of Ruijin Hospital, who were excluded infection and (or) autoimmune diseases. There were 26 male and 11 female in sepsis group, average age ( 61.67 ± 11.87 ) years old; 8 male and 7 female in SIRS group, average age (67.06 ± 12.57)years old; 14 male and 10 female in health control, average age (56.54 ± 6.37 )years old. All selected patrents were excluded the autoimmune diseases and (or) patients within recent (30 days) had used or now used immunosuppressive agents. We therefore measured the Treg cell percentage in peripheral blood by Flow Cytometry and the plasma levels of IL-2sRa, IL-4, IFN-γ by ELISA. The data were analyzed by analysis of variance or nonparametric Kruskal-Wallis H test. Results ① The percentage of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cells among septic patients, SIRS patients, and control group was: ( 66.82 ± 21.79 ) %, ( 51.79 ± 21.79 ) %, ( 56.45 ± 10. 68 ) %, respectively. septic patients showed the highest percentages of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cell among CD4 + CD25 + T cells(P ＜ 0.05 ). ② The plasma levels of soluble CD25 in septic patients (425. 619 ± 270.12 ) were significantly higher than SIRS patients (381. 664 ± 189.83) and the control group ( 164. 1 32 ± 56.37 ) ( P ＜ 0.05 ). ③ The correlation analysis between the concentration of soluble CD25 molecules in plasma and the ratio of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cells to CD4 + CD25 + T cells showed Spearman correlation coefficient =0.390, P = 0.003 ( P ＜ 0.05 ). Conclusion: the expression of natural regulatory T cells characteristically increased in septic patients. And the levels of soluble CD25 in peripheral blood were related to the percentages of natural regulatory T cells, which simplified the assessment of the immune status in Septic patients.     

铁调素基因干扰对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的：探讨铁调素基因干扰对脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的影响。方法选择6-8周BALB/C 雄性健康小鼠10只,随机均分为实验组（铁调素基因干扰组,n=5）和对照组（对照RNA干扰腺病毒组,n=5）。采用尾静脉高动力注射的方法分别给予两组小鼠铁调素特异性shRNA腺病毒和对照RNA干扰腺病毒。13 d后,两组小鼠采用盲肠结扎穿孔（CLP）法复制脓毒症模型。CLP模型制备24 h后处死小鼠,留取全血和脾脏标本。采用流式细胞术测定脾脏T淋巴细胞亚型CD4＋和CD8＋的数量百分比、外周血和脾脏T淋巴细胞的凋亡百分比;采用Western blot法检测脾脏组织凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的活化水平。结果实验组CLP模型24 h后脾脏CD4＋T细胞、CD8＋-T细胞百分比明显低于对照组（t分别=3.28、3.21, P均＜0.05）;实验组小鼠脾脏和外周血T淋巴细胞凋亡率较对照组明显增高（t分别=4.76、5.12, P均＜0.05）;实验组小鼠脾脏组织凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9活化水平较对照组明显增强（t分别=9.86、6.16, P均＜0.05）。结论铁调素基因干扰引起脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡增加,铁调素可能在脓毒症的免疫调控中发挥重要作用。     

Sepsis is characterized by the increases in percentages of circulating CD4+CD25+ regulatory T cells and plasma levels of soluble CD25

The function of immune system is to protect hosts from invading microorganisms by destroying infected cells while minimizing damage to tissues. Among immune cells, CD4(+)CD25(+) regulatory T cells (Treg cells) control immune responses by limiting infectious processes. However, it remains unclear whether Treg cells are induced in systemic inflammatory response syndrome (SIRS) or infectious SIRS (i.e. sepsis). SIRS and sepsis are associated with stressful inflammatory conditions. We therefore measured CD25(+) T cells and circulating CD4(+) T cells, along with plasma levels of CD25, interleukin (IL)-6, and IL-10, in 20 septic patients (64 +/- 11 years), 16 SIRS patients (59 +/- 16 years), and control subjects: 13 elderly (60 +/- 16 years) and 14 young volunteers (28 +/- 3 years). Septic patients (23.3 +/- 11.8%, p < 0.01) showed significantly higher percentages of CD25(+) cells among CD4(+) T cells (i.e. Treg cells) than did either young (10.6 +/- 3.7%) or elderly volunteers (11.1 +/- 3.8%). The percentages of Treg cells in septic patients were higher than those in SIRS patients (12.4 +/- 6.9%, p < 0.01). Moreover, plasma levels of soluble CD25 were significantly higher in septic patients, compared to the levels in SIRS patients or volunteers (p < 0.01). No significant difference in plasma levels of IL-6 or IL-10 was found between septic patients and SIRS patients. Thus, sepsis is associated with the increased percentages of Treg cells and elevated plasma level of soluble CD25. The elevation of these parameters might be a useful marker of infections in SIRS.     

脓毒症及脓毒，陛休克患儿的免疫功能变化的研究

目的：探讨脓毒症及脓毒性休克患儿各免疫指标的变化以及对疾病预后的影响。方法：18例脓毒症及36例严重脓毒症患儿于发病3d、7d分别检测T淋巴细胞亚群（CD3＋,CD4＋,CD8＋,CD19＋）和IgG、IgA、IgM,同时记录生命体征的变化和预后转归,其中死亡病例5例归入死亡组。同期19名健康体检儿童为健康对照组。结果：脓毒症组发病3d内的CD4＋、CD19＋T淋巴细胞亚群计数较正常组和严重脓毒症组明显升高,两组比较有统计学意义（P〈0．05）。IgG、IgA、IgM在发病3d内各组水平比较无统计学意义。发病7d复测T淋巴细胞亚群和体液免疫功能,死亡组CD3＋、CD4＋、CD8＋、IgG、IgA均明显低于存活组,差值比较有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论：脓毒症的免疫状态在疾病的不同阶段表现不同,随着病情进展免疫抑制状态持续并恶化预示了疾病预后不良。     

脓毒症患者辅助性T细胞17和CD4+CD25+调节性T细胞表达及血必净注射液的干预作用

目的 观察脓毒症患者外周血辅助性T细胞17(Th17)及CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平,并探讨其意义及血必净注射液的干预作用.方法 ①将64例重症监护病房(ICU)脓毒症患者按疾病严重程度分为脓毒症组(26例)、严重脓毒症组(21例)、脓毒性休克组(17例),同时选取18例健康体检者作为对照组.观察不同严重程度脓毒症患者外周血Th17和CD4+CD25+Treg的表达及其与病情严重程度的关系.②按随机原则将64例患者分为常规治疗组(25例,给予常规集束化治疗)和血必净治疗组(39例,在常规治疗基础上加用血必净注射液50 ml静脉滴注,每日2次),两组均以7 d为1个疗程.入ICU当日和治疗7 d用流式细胞术检测外周血Th17及CD4+CD25+Treg表达,观察血必净注射液的干预作用.结果 ①健康对照组Th17表达率为(0.84±0.29)%,CD4+CD25+Treg表达率为(0.43±0.20)%;脓毒症患者细胞表达均较健康对照组明显升高(均P<0.05),其中Th17表达以严重脓毒症组最高[(3.18±0.84)%],CD4+CD25+Treg 表达以脓毒性休克组最高[(3.28±0.76)%].脓毒症患者CD4+CD25+Treg与急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅰ(APACHE Ⅰ)评分和血乳酸均呈正相关(r1=0.519,r2=0.451,均P=0.01).②与常规治疗组比较,血必净注射液能更有效降低脓毒症患者Th17和CD4+CD25+Treg的异常表达[Th17:(1.72±0.69)%比(2.35±0.81)%,CD4+CD25+Treg:(1.78±1.00)%比(2.30±0.85)%,均P<0.05],纠正免疫平衡紊乱,缩短住ICU时间[(4.7±2.6)d比(7.5±4.3)d,P=0.0023,使脓毒症患者28 d病死率有降低趋势(20.5%比28.0%,P>0.05).结论 脓毒症患者外周血Th17和CD4+CD25+Treg表达增加,且与病情严重程度呈正相关,提示Th17和CD4+CD25+Treg在脓毒症发生发展的免疫机制中可能起着重要作用.血必净注射液能有效降低脓毒症患者Th17和CD4+CD25+Treg的异常表达,有降低脓毒症患者病死率的趋势.

Abstract：

Objective To study the level and significance of T helper 17(Th17)and CD4+CD25+regulatory T cells(Treg)in peripheral blood of patients with sepsis and to evaluate the effects of Xuebijing of Anhui Provincial Hospital were divided into three groups:sepsis group(n=26),severe sepsis group (n=21),and septic shock group(n=17).Eighteen healthy individuals served as controls.The comparison in the expression of Th17 and CD4+CD25+Treg within groups and the correlation between their levels and group(n=25,received routine bundle treatment)and Xuebijing treatment group(n=39,received bundle treatment+Xuebijing treatment).Patients in Xuebijing treated group were given 50 ml Xuebijing injection two times per day in addition to routine bundle treatment.Seven days constituted one course of treatment.The expressions of Th17 and CD4+CD25+Treg of 64 patients on the 1 day and 7 days after treatment were detected by flow cytometry.The effects of Xuebijing injection on the patients were evaluated.Results in control group,and they were lower than that of patients with sepsis(P<0.05).The expression rate of Th17 was higher in severe sepsis group [(3.18±0.84)%]than that of other two groups(P<0.05).Moreover,The expression rate of CD4+CD25+Treg was highest [(3.28±0.76)%]in septic shock group (P<0.05),and it was positive correlated with acute physiology and chronic health evaluation Ⅰ(APACHE routine group,our study indicated that Xuebijing injection could reduce the abnormal expression of Th17[(1.72±0.69)%vs.(2.35±0.81)%,P<0.05] and CD4+CD25+Treg[(1.78±1.00)% vs.(2.30±0.85)%,P<0.05] and decrease length of stay in ICU[(4.7±2.6)days vs.(7.5±4.3)days,P=0.002].It also lowered 28-day mortality of patients with sepsis,but the difference between two groups was not significant(20.5%vs.28.0%,P>0.05).Conclusion The expression of Th17 and CD4+CD25+Treg was increased in sepsis patients and was positively correlated with severity of sepsis,suggesting that they may play an important role in pathogenesis of sepsis.Xuebijing injection could decrease the abnormal expression of Th17 and CD4+CD25+Treg and tend to decrease the fatality rate of sepsis.     

212例活动性结核病患者外周血淋巴细胞亚群特点:单中心描述性研究

  目的  基于相对较大的样本数据,探究活动性结核病(active tuberculosis, ATB)患者外周血淋巴细胞亚群特点及其意义。  方法  回顾性收集北京协和医院住院ATB患者(2012年6月—2022年1月)及年龄、性别与其相匹配的健康人群(2019年3月—2022年5月)的临床资料。以健康人群为对照,分析ATB患者外周血淋巴细胞亚群变化特点,并对不同确诊方式及受累部位ATB患者进行组间比较。  结果  共入选符合纳入与排除标准的ATB患者212例、健康人群200例。ATB患者中,临床确诊82例(38.7%)、病原学确诊130例(61.3%, 包括单纯肺结核77例、单纯肺外结核21例、肺结核并肺外结核32例)。相较于健康人群,ATB患者多种外周血淋巴细胞亚群指标计数及其百分比降低(P均＜0.05),T淋巴细胞百分比、CD8⁺T淋巴细胞百分比、记忆CD4⁺T淋巴细胞/CD4⁺T淋巴细胞比值、CD38⁺CD8⁺T淋巴细胞/CD8⁺T淋巴细胞比值等均升高(P均＜0.05)。相较于临床确诊ATB患者,病原学确诊ATB患者淋巴细胞、B细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞、T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞计数等均降低(P均＜0.05)。不同结核感染部位的患者记忆CD4⁺T淋巴细胞、纯真CD4⁺T淋巴细胞、CD28⁺T淋巴细胞及活化CD8⁺T淋巴细胞亚群计数及其百分比无显著差异(P均＞0.05)。相较于单纯肺结核患者,肺结核并肺外结核患者B细胞计数[23(10,69)个/μL比73(25,133)个/μL, P=0.003]降低,单纯肺外结核患者NK细胞百分比[16.7%(10.8%,23.6%)比10.6%(5.3%,17.4%), P=0.042]升高。  结论  ATB患者外周血淋巴细胞亚群指标整体呈减低状态,存在明显的免疫功能紊乱。     

强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞亚群分析

目的 了解强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞亚群变化规律,探讨患者体内的免疫功能状态.方法 采用三色流式细胞学检测技术分析75例患者及50例健康对照的外周血T细胞亚群、B细胞与NK细胞水平,并对其结果进行比较分析.结果 强直性脊柱炎组总T细胞、T4细胞、T8细胞的百分含量依次为(65.74±9.99)%、(35.70±6.92)%和(23.02±5.35)%;T4/T8比值1.70±0.51,总T细胞、T4细胞、T8细胞的绝对含量依次为(1.25±0.63)、(0.47±0.27)和(0.31±0.19)×109/L.B细胞和NK细胞的百分含量分别为(11.84±4.50)%和(15.43±6.28)%;B细胞和NK细胞的绝对含量分别为(0.22±0.15)和(0.27±0.15)×109/L.与健康对照组比较,患者总T细胞、B细胞和NK细胞绝对含量增加(P＜0.01或P＜0.05),但各淋巴细胞亚群的百分含量无明显改变(P>0.05).与腰背痛组、B27+无临床症状组、B27+非强直组比较,各淋巴细胞亚群的百分含量和绝对含量均略有增高,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 强直性脊柱炎患者机体免疫功能存在一定程度的紊乱,且以总T细胞、B细胞、NK细胞功能亢进为特点.临床腰背痛患者、B27+无症状者、B27+非强直患者均表现出与临床强直患者相似的免疫功能紊乱.     

流式细胞术分析神经系统疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群

目的用流式细胞术分析脑脊液中T淋巴细胞及其亚群,探讨不同类型神经系统疾病患者脑脊液中T淋巴细胞亚群百分率差异,寻找在疾病诊断和治疗监测中有意义的实验室检测指标。方法采用流式细胞术测定神经系统疾病患者脑脊液和外周血T淋巴细胞亚群。结果采用流式细胞术分析脑脊液中T淋巴细胞亚群时,运用侧向散射光(SS)vs.CD45能更准确的确定淋巴细胞群;但流式细胞术只适用于检测神经系统免疫相关疾病患者脑脊液中T淋巴细胞亚群,不适用于分析神经系统变性疾病患者。中枢神经系统炎性疾病和脊髓炎患者脑脊液中CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞和CD3+CD8+T淋巴细胞百分率最高,脱髓鞘疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群百分率最低,但各类神经系统疾病患者脑脊液中T淋巴细胞百分率无明显差异(P>0.05)。细菌性脑膜炎患者脑脊液中CD3+T淋巴细胞和CD3+CD4+T淋巴细胞百分率最高,明显高于脱髓鞘疾病患者(P=0.032),但与病毒性脑膜炎患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。各类神经系统疾病患者脑脊液中CD4/CD8比值明显高于外周血,其中细菌性脑膜炎和脊髓炎患者脑脊液中CD4/CD8比值最高,脱髓鞘疾病脑脊液中CD4/CD8比值最低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。脑脊液IgG生成指数与脑脊液中CD3+CD4+T淋巴细胞百分率有一定相关性(r=0.324,P=0.032)。结论流式细胞术分析神经系统炎性疾病较脑脊液常规检测具有优势,敏感性更高,可同时分析脑脊液免疫状况。流式细胞术分析在神经系统相关炎性疾病具有重要意义,CD3+CD4+T淋巴细胞高百分率与神经系统炎性疾病密切相关。但流式细胞术对于神经系统变性疾病的临床应用有限。