IL-33／TLR4信号通路在A549细胞上皮间质转化中的作用

［摘要］目的: 探讨IL-33／TLR4信号通路在上皮来源的A549细胞上皮间质转化中的作用。方法: 培养A549细胞,用5 ng／mL的转化生长因子β1(TGF-β1)刺激A549细胞;在不同时间点(0,12,24,48 h)MTT法检测TGF-β1对A549细胞增殖的影响;荧光定量PCR方法检测IL-33信号通路中关键因子IL-33,Toll样受体4(TLR4)基因的表达改变;蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cad)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)的动态表达。结果： TGF-β1刺激A549细胞后,细胞增殖无明显变化(P>0.05),IL-33 表达量先升高,后下降(P<0.05);E-钙黏蛋白表达量逐渐下降,α-SMA表达量逐渐升高,TLR4先升高后下降(P<0.05);p-AKT表达量逐渐升高(P<0.05)。结论： IL-33／TLR4信号通路在A549细胞的上皮间质转化中发挥了重要作用。     

血清VEGF、TLR4水平及CTCs在肺癌、乳腺癌和前列腺癌骨转移中的临床意义

目的 探讨血管调控因子血管内皮生长因子(VEGF)、Toll样受体4(TLR4)联合循环肿瘤细胞(CTCs)在肺癌、乳腺癌和前列腺癌骨转移中的临床意义.方法 回顾性分析吴川市人民医院肿瘤科2019年1～12月收治的100例初诊肺癌、乳腺癌及前列腺癌骨转移患者(骨转移组)的临床资料,观察不同骨转移灶数目、临床疗效及有无骨...     

p38 MAPK信号通路在TLR4促进胰腺癌血管生成中的作用

目的 探讨Toll样受体-4(TLR4)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在胰腺癌血管生成中的作用.方法 以脂多糖(LPS)、TLR4-siRNA及p38 MAPK信号通路阻断剂SB203580分别作用于体外培养的胰腺癌PANC-1细胞,Western blot检测TLR4、血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达.收集各种因素处理后的PANC-1细胞培养液,观察其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移和管腔形成的影响.结果 LPS组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数分别为(139.2±12.6)％、48.1±9.1和47.8±9.6,均显著高于对照组(P＜0.05).TLR4-siRNA组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数分别为(60.2±8.7)％、31.3±4.5和17.2±3.3,均显著低于对照组(P＜0.01);SB203580组的HUVECs增殖率[(79.6±8.9)％]、迁移数目(21.6±4.3)和管腔形成个数(23.5±4.3)均较对照组显著减少(P＜0.05);且TLR4-siRNA+ LPS、B203580+LPS组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数均分别显著低于LPS组(P＜0.01).与对照组相比,LPS组VEGF、p-p38蛋白表达均明显增加,TLR4-siRNA组、SB203580组TLR4、VEGF、p-p38蛋白表达明显减少;且TLR4-siRNA+ LPS组、SB203580+LPS组VEGF、p-p38表达较LPS组明显减少.结论 TLR4可促进胰腺癌的血管生成,其机制与激活p38 MAPK信号通路、促进VEGF表达有关.     

白藜芦醇调节TLR4/NF-κB信号通路影响人前列腺癌PC3细胞株凋亡的研究

目的 探讨白藜芦醇(Res)影响人前列腺癌PC3细胞株增殖和凋亡的机制.方法 将人前列腺癌PC3细胞株分为阴性对照组,Res高、中、低剂量组(40、20、10μmol/L Res),Toll样受体4(TLR4)阻断剂组,采用CCK-8法检测PC3细胞株细胞增殖情况;Hochest33342荧光染色检测PC3细胞株细胞凋...     

子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中VEGF、IL-6、IL-8的表达情况及临床意义

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素6（IL-6）、IL-8在子宫内膜异位症（endometriosis, EMT）患者中的表达及意义。方法选取2011年1月至2013年6月我科诊治的66例EMT患者（观察组）,其中Ⅱ期24例,Ⅲ、Ⅳ期42例;选取同期卵巢良性肿瘤患者60例为疾病对照组;选择健康女性42例作为正常对照组。比较各组受试者腹腔液和血清中VEGF、IL-6、IL-8水平,并对腹腔液和血清VEGF、IL-6、IL-8水平与年龄、r-AFS评分、体质指数（BMI）进行相关性分析。结果观察组腹腔液中VEGF、IL-6、IL-8含量明显高于疾病对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;观察组、疾病对照组、正常对照组血清VEGF、IL-6、IL-8水平差异有统计学意义（P<0.01）;观察组血清VEGF、IL-6、IL-8水平明显高于疾病对照组和正常对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;但疾病对照组和正常对照组之间血清VEGF、IL-6、IL-8水平差异无统计学意义（P>0.05）;观察组患者腹腔液VEGF、IL-6、IL-8水平高于血清中水平,差异有统计学意义（P<0.01）;随着EMT分期的增加,腹腔液中VEGF、IL-6、IL-8水平呈上升趋势,差异有统计学意义（P<0.01）;随着EMT分期的增加,血清VEGF、IL-6、IL-8水平呈上升趋势,差异有统计学意义（P<0.01）;腹腔液和血清VEGF、IL-6、IL-8水平与r-AFS评分呈正相关（P<0.05）,与年龄、BMI等因素无明显相关性（P>0.05）。结论 EMT患者腹腔液和血清中VEGF、IL-6、IL-8存在明显高表达,且随着EMT病情的进展,VEGF、IL-6、IL-8表达呈增强趋势。检测VEGF、IL-6、IL-8可以监测EMT发病及病情进展。     

银屑病病人外周血单核细胞TLR2基因表达及血清ASO和IL-8水平变化

目的观察寻常型银屑病病人外周血单核细胞Toll样受体2（TLR2）mRNA表达及血清抗链球菌溶血素“O”（ASO）和白细胞介素-8（IL-8）水平的变化,探讨其与银屑病发病的关系。方法采用RT—PCR方法检测银屑病病人（银屑病组）外周血单核细胞TLR2 mRNA表达,采用胶乳凝集法检测血清ASO水平,采用ELISA法检测血清IL-8水平。以我院体检健康者30例作为对照（正常对照组）。结果银屑病组TLR2 mRNA表达明显高于正常对照组（t=5．541,P〈0．01）;银屑病组点滴型与斑块型TLR2 mRNA表达比较无显著性差异（t=0．318,P〉0．05）。银屑病组血清ASO水平明显高于正常对照组（x^2=8．604,P〈0．01）;且点滴型病人明显高于斑块型病人（x^2=9．780,P〈0．01）。银屑病组血清IL-8水平显著高于正常对照组（t=28．463,P〈0．01）;点滴型与斑块型病人之间比较无显著性差异（t=0．660,P〉0．05）。点滴型病人ASO阳性者TLR2 mRNA表达水平高于ASO阴性者,差异有显著性（t=2．407,P〈0．05）;银屑病病人外周血TLR2 mRNA表达与IL-8水平呈正相关（r=0．637,P〈0．01）。结论TLR2可能通过识别链球菌等入侵病原微生物启动机体免疫应答,介导细胞因子IL-8等的产生,参与银屑病皮损的发生和发展。     

痤疮患者中Toll样受体的表达及其与IL-8和IL-12水平的相关性

目的探讨Toll样受体2(TLR2)在痤疮发病中的作用及其可能的机制。方法收集Ⅰ~Ⅳ级不同严重程度痤疮患者各35例,应用流式细胞术检测其外周血CD14+单核细胞(PBM)TLR2的表达,同时采用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-8、IL-12水平。另取35例正常人作为对照组。结果各组痤疮患者外周血单核细胞表面TLR2的表达均显著高于正常人对照组(P0.01),各组患者血清中IL-8和IL-12的水平也显著高于正常人对照组(P0.01)。各组患者TLR2的表达与IL-8呈正相关(r分别为0.452、0.583、0.735、0.648,P0.05),与IL-12水平亦呈正相关(r分别为0.365、0.493、0.526、0.461,P0.05)。痤疮严重程度与TLR2的表达呈正相关(r=0.325,P0.05),与IL-8水平成呈正相关(r=0.426,P0.05),与IL-12水平也呈正相关性(r=0.627,P0.05)。结论 TLR2的表达水平和炎症因子的分泌与痤疮严重程度相关,TLR2的表达在痤疮的发生和发展中起重要作用。     

IL-17A对前列腺癌细胞迁移的促进作用及其机制

观察白细胞介素17A信号传导及转录蛋白3-血管内皮生长因子（IL-17A- Stat3-VEGF）信号通路激活对前列腺癌细胞迁移的作用,并探讨其相关机制。     

MVD 、VEGF 在前列腺癌组织中的表达及相关性研究

【目的】探讨微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）在前列腺癌组织中表达及意义。【方法】选取本院2007～2012年收治的56例前列腺癌患者为观察组,30例良性前列腺增生患者为对照组。应用免疫组织化学法检测患者前列腺组织中VEGF及MVD的表达情况,并对MVD、VEGF表达水平与肿瘤转移关系进行分析比较。【结果】观察组组织中VEGF及MVD的表达均明显高于对照组,且二者相比较差异均有显著性（ P＜0．01）;在肿瘤不同TNM分期和有无淋巴结转移前列腺癌患者中VEGF及MVD表达相比较差异有显著性（ P ＜0．05）。【结论】VEGF参与了前列腺癌患者的血管再生过程,与前列腺癌的生长及淋巴结转移密切相关,VEGF及MVD可作为判断前列腺癌预后的重要参考指标。     

不同剂量电离辐射诱导J774A.1细胞TLR4及其相关细胞因子的表达及意义

目的: 观察不同剂量X射线照射对J774A.1细胞TLR4的表达及分泌IL-12及IL-18的影响,进一步探讨Toll信号通路的机制。方法: 将体外培养的J774A.1细胞分为低剂量（0.075 Gy）和高剂量（2.000 Gy）照射组,各组分别设假照组和照射后4、8、16、24 及48 h的不同时间组。采用流式细胞术检测J774A.1细胞表面TLR4阳性细胞数,ELISA法检测IL-12及IL-18的分泌量。结果：低剂量X射线照射后,早期IL-12（4 h）和IL-18（4 h）分泌量均上调,然后逐渐回降到假照水平。高剂量X射线照射后4～24 h IL-12分泌量与假照组比较一直保持较高水平（P<0.05或P<0.01）,至48 h时恢复正常水平;而IL-18分泌情况与低剂量组相似,与假照组比较在照后4 h时分泌增多（P<0.05）,然后逐渐回复到假照水平。结论：电离辐射使巨噬细胞TLR4表达增高,同时使其分泌的IL-12及IL-18的分泌量增加,促进了小鼠的固有免疫反应。     

IL-8/CXCR_2轴促进兔内皮祖细胞迁移、增殖及VEGF的表达

目的 观察不同浓度白介素-8(interleukin-8,IL-8)对体外培养兔外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能的影响,探讨趋化因子IL-8/CXC_2,轴对EPCs血管生成功能的作用.方法 密度梯度离心法获取兔外周血单个核细胞(mononuclear cells,MNCs),接种至纤维连接蛋白(fibronectin,FN)包被的培养板上,培养7-10 d后收集贴壁细胞鉴定EPCs,并用不同浓度IL-8的培养基继续培养24 h后采用MTT比色法、改良的Boyden小室实验,观察EPCs 的迁移和增殖能力;采用RT-PCR、Western blot方法检测CXCR_2、VEGF mRNA及蛋白表达水平.结果 IL-8显著增加兔外周血EPCs的增殖和迁移能力(P<0.05),且随着IL-8浓度升高而增强.IL-8促进CXCR_2膜受体和VEGF的表达,且随着IL-8浓度增加而增加.结论 IL-8/CXCR_2轴能显著促进EPCs的迁移、增殖及VEGF的表达.     

转染EGFRL858R的肺腺癌细胞中IL-6和VEGF表达水平及其意义

目的: 探讨肿瘤细胞癌基因表皮生长因子受体(EGFR)L858R型突变与肺腺癌恶性转移患者癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的关系及其意义。方法: 将含EGFRL858R全长基因质粒的载体转染EGFR野生型肺腺癌细胞系H460(EGFRL858R-H460组),空载体转染H460细胞作为对照组(Vec-H460组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平。将含IL-6siRNA的载体转染带有EGFRL858R型突变的细胞系H1975(IL-6siH1975组),转染空载体的H1975细胞作为对照组(Vec-H1975组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中VEGF蛋白表达水平。结果: 与Vec-H460组比较,EGFRL858R-H460组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平明显升高(P<0.01);与Vec-H1975组比较,IL-6siH1975组细胞组IL-6和VEGFmRNA表达水平明显降低(P<0.01),VEGF蛋白表达强度明显降低。结论: 肺腺癌细胞系中EGFRL858R型突变可升高肺腺癌患者癌细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,其中IL-6mRNA水平升高可能是VEGFmRNA表达水平升高的原因,这些变化可能是EGFRL858R型突变参与肺腺癌恶性转移进程的途径之一。     

胃癌组织中血管内皮生长因子-C及其受体-3的表达与意义

[目的] 探讨血管内皮生长因子 C(vascular endothelial growth factor C,VEGF C)其受体 3(vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR 3)与胃癌临床病理因素的关系. [方法] 应用免疫组织化学(SP)方法测定胃癌及胃良性病变中 VEGF C与 VEGFR 3表达,计数 (200×视野下淋巴管数密度 (number density of lymph vessel,/200× nDLV).[结果] VEGF C阳性率胃癌组:60.00%,胃良性病变组 15.00%(P =0.000);淋巴结转移组 68.97%,无淋巴结转移组 36.36%(P =0.008);低分化组 72.73%,高 中分化组 44.44%(P =0.010) ;伴有远处转移组 100%,不伴有远处转移组 53.62%(P=0.02);pTNM分期Ⅰ Ⅱ组 43.75%,Ⅲ Ⅳ组 70.83%(P=0.015). 淋巴管数密度 (显微镜下每 200×视野 ):胃癌组为(5.800± 2.318 9),胃良性病变组为(2.3800± 0.462 9) (P=0.000);淋巴结转移组为 (6.948 3± 1.583 1),无淋巴结转移组为 (2.772 7± 0.428 9)(P=0.000);低分化组为 (7.681 8± 0.982 9),高 中分化组为 (3.500± 1.028 2)(P=0.000) ;pTNM分期,Ⅰ Ⅱ组为 (4.291 7± 1.688 0),pTNM分期,Ⅲ Ⅳ组为 (8.062 5± 0.759 4)(P=0.000). VEGF C与淋巴管数密度相关 (P=0.002).[结论] VEGF C刺激淋巴管生成,有利于胃癌淋巴道与远处转移.     

VEGF165反义RNA表达对人胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的利用本室构建的反义VEGF165（血管内皮生长因子,vascular endothelial growth factor）真核表达载体,研究VEGF反义RNA表达对人胃癌细胞生物学表型的影响. 方法用阳性脂质体介导的基因转染技术,将VEGF反义RNA重组体转入人胃癌细胞系,观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学表现. 结果 VEGF反义RNA重组体转染胃癌细胞后,斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,反义RNA基因转染技术可使VEGF的表达明显减弱;与未转染的细胞相比,G2/M期细胞增加(0.39),而S期细胞减少(0.54);克隆形成率(2.2%)低于未转染细胞(4.0%);肿瘤细胞接种裸鼠后33 d时,VEGF反义RNA表达人胃癌细胞所致的移植瘤体积（345±136) mm3明显小于未转染细胞所致的移植瘤体积（1534±363) mm3. 结论 VEGF反义RNA可以通过抑制肿瘤组织血管生成而防治肿瘤的生长,另外VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关.     

β-羟基异戊酰紫草素对前列腺癌细胞株的生长抑制作用及机制研究

目的 研究β-羟基异戊酰紫草素(β-HIVS)对激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3的体外生长抑制作用及其可能机制.方法 采用MTT法检测β-HIVS对PC-3和人皮肤成纤维细胞株HSF的细胞生长抑制率;荧光素酶报告基因法检测给药后细胞中低氧诱导因子-1(HIF-1)和核因子κB(NF-κB)的转录活性;RT-PCR检测HIF-1下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blotting检测β-HIVS作用后HIF-1α蛋白的表达水平.结果 β-HIVS对PC-3的细胞生长具有显著抑制作用(P<0.05),而对HSF的细胞生长无明显影响(P>0.05).给药后PC-3细胞中NF-κB转录活性无明显变化(P>0.05);而HIF-1转录活性受抑(P<0.05),其下游靶基因VEGF表达下调,且细胞中HIF-1α蛋白累积减少.结论 β-HIVS对PC-3的细胞生长具有抑制作用,其机制可能与β-HIVS减少低氧条件下PC-3中HIF-1α蛋白水平,抑制其转录活性,使下游促细胞生长靶基因VEGF表达下调有关.     

胃癌组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白表达及其临床意义

目的 探讨胃癌原发灶、癌旁及胃周淋巴结组织中血管内皮生长因子C(VEGF-C)、血管内皮生长因子D(VEGF-D)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)蛋白表达与各临床参数的关系.方法 通过免疫组化方法对60例胃癌患者的癌、癌旁及胃周淋巴结组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白水平进行检测,并分析各临床参数包括肿瘤分化程度、Lauren分型、肿瘤浸润深度、是否有淋巴结转移、幽门螺杆菌(H.pylori)感染与否等对胃癌组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白表达水平的影响.结果 胃癌组织中VEGF-C、VEGF-D蛋白表达水平高于癌旁组织(2.82士1.66 vs 2.13±1.75,4.81±2.30 vs 3.78±1.94,n=60,P均＜0.05).VEGFR-3蛋白表达水平在胃癌组织和癌旁组织中差异无统计学意义(P＞0.05).胃癌转移的淋巴结组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的蛋白表达水平(3.77±2.43、2.86士1.95、2.55±2.11,n=44)均高于未转移淋巴结组织(2.25士2.01、1.98士1.73、0.76±1.13,n=59,P均＜0.05).关于各临床参数的分析结果显示VEGF-C、VEGF-D的蛋白表达水平在伴有淋巴结转移的胃癌组织中高于未出现淋巴结转移的胃癌组织(P＜0.05),H.pylori感染阳性的胃癌组织中VEGFR-3的蛋白表达水平高于H.pylori阴性的胃癌组织(P＜0.05).结论 VEGF-C、VEGF-D蛋白表达水平在胃癌原发灶及转移淋巴结中上调,且与胃癌的淋巴转移有关.     

外源性表达VEGF165b对顺铂诱导人膀胱癌T24细胞损伤的影响及其机制

目的:观察人膀胱癌T24细胞中外源性表达血管内皮生长因子(VEGF)变构体VEGF165b对顺铂(DDP)诱导人膀胱癌T24细胞损伤的作用,并探讨相关机制。方法:构建VEGF165b表达载体pcDNA-VEGF165b;T24细胞分为对照组、VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体)、DDP组和VEGF165b+DDP组(DDP联合转染VEGF165b表达载体)。MTT法检测各组细胞存活率;Western blotting法检测各组T24细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase3表达;TUNEL法检测细胞凋亡数。结果:MTT法检测,与对照组比较, VEGF165b组24和48 h时T24细胞存活率无明显变化(P>0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组24和48 h时细胞存活率均明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。TUNEL法检测,与对照组(5.1±2.7)和VEGF165b组(7.4±3.2)比较,DDP组的凋亡细胞数(26.3±8.2)的凋亡细胞数增加(P<0.05)。与DDP组比较,VEGF165b+DDP组的凋亡细胞数(41.3±6.9)增加(P<0.05)。结论:外源性表达VEGF165b能通过增加细胞凋亡促进DDP对T24细胞的损伤,其机制与VEGF信号通路受抑制有关联。     

氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子及CXC趋化因子受体4表达的影响

目的：探讨氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞中血管内皮生长因子（vascularendothelial growthfactor,VEGF）、CXC趋化因子受体4（CXCchemokinereceptor 4,CXCR4）mRNA及蛋白表达的影响。方法：采用甲基噻唑基四唑法观察氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;采用实时逆转录聚合酶链反应法、免疫荧光法、酶联免疫吸附法分别检测氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞中VEGF、CXCR4 mRNA及蛋白表达的影响。结果：单独使用40μg/mL氧化苦参碱注射液或小剂量（20μg/mL）紫杉醇作用于SGC-7901细胞后,与对照组比较,除了20μg/mL紫杉醇对VEGF在mRNA水平无明显影响外（P〉0.05）,两者均能抑制细胞增殖,减少VEGF、CXCR4在mRNA及蛋白水平的表达（P〈0.01）;两者联用后能明显降低SGC-7901细胞VEGF、CXCR4 mRNA及蛋白的表达,与单用小剂量紫杉醇相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇具有明显的抑制人胃癌SGC-7901细胞VEGF和CXCR4的作用,这可能是氧化苦参碱注射液抗肿瘤血管生成的机制之一。