LPS和TNF-α对血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的：研究细菌脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）对牛肺动脉内皮细胞（BPAEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C Kinase Substrate，SSeCKS）表达的影响和对细胞骨架结构的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法：应用LPS、TNF-α刺激体外培养的BPAEC，应用原位杂交、免疫印迹方法检测不同刺激条件下BPAEC中SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；免疫细胞荧光法观察LPS、TNF-α对内皮细胞中SSeCKS与纤维状肌动蛋白（F-actin）定位和结构的影响。结果：静息状态的BPAEC表达极少量的SSeCKS；经LPS刺激后，SSeCKS表达没有明显变化；而TNF-α以浓度和时间依赖的方式诱导内皮细胞SSeCKS表达增加；LPS和TNF-α刺激后，F-actin发生重构，且SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足聚集；蛋白激酶C（PKC）抑制剂Ro-31．8220抑制LPS和TNF-α对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论：TNF-α能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加，PKC参与LPS、TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构和SSeCKS重新分布。提示SSeCKS可能与LPS和TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

LPS对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的研究细菌脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate，SSeCKS）表达和细胞内定位的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法用植块培养法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞，用抗大鼠CD31抗体进行细胞鉴定。LPS刺激体外培养的RPMVEC，用定量PCR、免疫印迹方法检测LPS刺激RPMVEC不同时间SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；用0．05μmol／L蛋白激酶C（PKC）抑制剂（Calphostin C）预处理RPMVEC30min后再用LPS刺激6h，免疫荧光细胞化学法观察Calphostin C对LPS诱导SSeCKS与纤维状肌动蛋白（filamentous—actin，F-actin）细胞内定位和结构改变的影响。结果定量PCR结果显示LPS刺激RPMVEC1h后SSeCKS表达水平达到最高，Westernblot结果与定量PCR结果相一致，同时，LPS以时间依赖的方式诱导SSeCKS磷酸水平增加。免疫荧光结果显示LPS刺激后，F-actin发生重构，细胞内形成应力纤维，SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足末端聚集；Calphostin C部分抑制LPS对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论LPS能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加和细胞内定位改变，PKC参与I娲诱导内皮细胞F-ac，6n的重构和SSeCKS重新分布；提示SSeCKS可能与LPS诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

细菌脂多糖对培养星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物表达的影响

目的 研究细菌脂多糖(LPS)对培养的大鼠星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)表达的影响.方法 培养的星形胶质细胞随机分为空白对照组、LPS单一刺激组、LPS联合PKC抑制剂(RO-31-8220)刺激组.运用荧光定量PCR(Real time RT-PCR)、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位.结果 Real time RT-PCR显示,LPS可以上调SSeCKS mRNA水平,在作用浓度为100 μg/L和1 mg/L时与对照组有显著差异(P＜0.01).Western blotting表明,当LPS作用浓度为100 μg/L时,SSeCKS蛋白表达量明显上调;在此浓度作用下,SSeCKS表达于6 h达高峰并广泛磷酸化,至24 h其蛋白表达仍维持于较高水平.免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于胞质,于胞膜略有浓集.在LPS单一刺激组,SSeCKS富集于核周;当LPS联合RO-31-8220共同作用时,SSeCKS的亚细胞定位与正常组无明显差异.结论 在体外培养的星形胶质细胞中,LPS可诱导SSeCKS表达,上调其磷酸化水平,影响其细胞内定位.这些改变与PKC的功能相关.提示SSeCKS可能参与星形胶质细胞中炎症信号的转导.     

IL-1β影响大鼠星形胶质细胞中SSeCKS表达的研究

目的:研究Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在IL-1β激活的星形胶质细胞中的表达.方法:以炎性因子IL-1β刺激大鼠体外培养的星形胶质细胞,观察细胞中SSeCKS的表达及其细胞内的亚定位的改变.结果:IL-1β可上调大鼠原代培养星形胶质细胞中SSeCKS的表达,诱导其丝氨酸磷酸化.在亚细胞水平,IL-1β还能引起SSeCKS向核周、细胞星状突起聚集,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220能抑制IL-1β对细胞中SSeCKS亚细胞定位及磷酸化水平的影响.结论:在IL-1β的影响下,大鼠星形胶质细胞中SSeCKS的表达增加,磷酸化水平增强,细胞内定位发生改变,这种改变与PKC的功能相关,提示SSeCKS可能作为PKC的下游分子参与到炎性因子引起的星形胶质细胞活化的过程中.     

溶血磷脂酸通过蛋白激酶C-α/钙离子途径促进大鼠星形胶质细胞增殖

目的：了解溶血磷脂酸（LPA）对星形胶质细胞（AS）活化增殖的影响及其作用机制。方法:原代培养的新生SD大鼠前脑星形胶质细胞分为对照组、PKC-α激动剂（PMA）组、LPA组、PKC-α抑制剂（Ro31-8220）组、Ro31-8220＋PMA组和Ro31-8220＋LPA组，用二苯基四氮唑溴盐（MTT）比色法以及流式细胞仪（FCM）检测AS增殖。以Fura－2/AM标记细胞内钙离子，紫外分光光度计检测其浓度。用蛋白印迹法检测细胞内PKC-α表达。结果:LPA和PMA能明显促进AS的增殖，并增加细胞内PKC-α的表达以及细胞内钙离子（［Ca2+］i）浓度（P<0.01）；Ro31-8220预处理后，显著缓解LPA促AS增殖程度和［Ca2+］i浓度的增加（P<0.01），［Ca2+］i浓度的变化与PKC-α表达量的变化呈正相关。结论:LPA通过PKC-α/Ca2+途径促进AS的增殖活化。     

FKN对人外周血单个核细胞PKC-ERKl/2活化和TNF-α表达的影响

目的 探索FKN-CX3CR1在单个核细胞中可能存在的信号传导途径及促进动脉粥样硬化形成的机制,并探讨蛋白激酶C（PKC）在其中作用。方法 （1）用Ficoll密度梯度离心法分离抗凝人外周血单个核细胞。（2）将每份提取的单个核细胞分为4组：对照组、FKN组、Ro31-8220（PKC特异性阻断剂）和PD98059（ERK1/2特异性阻断剂）组。（3）用Western blot法检测单个核细胞中磷酸化ERK1/2表达。（4）用ELISA法检测培养液中TNF-α的表达。结果 （1）FKN组磷酸化的ERK1/2和TNF－α表达较对照组显著增多（P<0.05）。（2）Ro31-8220组磷酸化的ERK1/2和TNF－α表达较FKN组显著减少（P<0.05）。结论 FKN－CX3CR1可能通过PKC/ERK途径诱导单个核细胞TNF-α的表达,最终促进动脉粥样硬化的形成和进展。     

内毒素致伤小鼠肺组织SSeCKS表达变化的研究

目的 观察内毒素，脂多糖（LPS）致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物（SSeCKS）的表达变化和细胞定位。方法 腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型，依据注射时相和剂量不同随机分组。用Real-time PCR法和Western blot法检测各组肺组织SSeCKS的mRNA和蛋白质水平表达情况，间接免疫荧光双标法检测SSeCKS在肺组织中的细胞定位。结果 SSeCKS表达水平与LPS用量呈现剂量和时间依赖关系：1、5、10和15mg/kg组SSeCKS mRNA水平皆显著高于对照组（P〈0．05），且随注射剂量增高SSeCK SmRNA表达量亦逐渐增高；不同时相LPS（5mg/kg）注射后肺组织中SSeCKS mRNA水平表达呈动态变化过程，1h开始增高，3h达到表达高峰，12h降至正常水平；SSeCKS蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致。SSeCKS在肺组织中定位于肺泡间隔毛细血管内皮细胞。结论 SSeCKS是炎症反应蛋白，其表达量与炎症的严重程度相关。内毒素可诱导肺泡间隔毛细血管内皮细胞SSeCKS表达上调。     

大鼠脑损伤后SSeCKS的表达变化

目的:探讨大鼠脑损伤后,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠脑损伤模型。通过Western blot和RT-PCR方法检测脑损伤后SSeCKS表达的时相变化,免疫组织化学方法检测SSeCKS在脑组织中的细胞定位。结果:Western blot显示,大鼠脑损伤后,SSeCKS的表达逐步降低,伤后3d降至最低点,之后逐渐上升,7d达到高峰,14d后趋于平稳;RT-PCR的结果与Western blot一致。免疫荧光双标记结果显示SSeCKS与星形胶质细胞的标记物GFAP、神经元的标记物NeuN共定位。结论:大鼠脑损伤可以改变SSeCKS的表达,这种改变可能参与脑损伤后星型胶质细胞的活化和增殖过程,并与神经元的凋亡、轴突再生有关。     

蛋白激酶C对3T3-L1脂肪细胞抵抗素表达的影响

目的：观察蛋白激酶C转导途径对3T3-L1脂肪细胞抵抗素表达的影响。方法：3T3-L1脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞后，分别于培养瓶中加入浓度为50 nmol/L的12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）和浓度为5 μmol/L马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220)，培养24 h，用RT-PCR的方法检测3T3-L1脂肪细胞抵抗素mRNA的表达，用Western blotting检测3T3-L1脂肪细胞抵抗素表达结果：PMA组可以明显提高3T3-L1脂肪细胞抵抗素基因及蛋白的表达，明显高于对照组，两者的差异显著（P<0.01）；Ro-31-8220组其表达低于对照组，两者的差异显著（P<0.01）。结论：蛋白激酶C转导途径可以调控3T3-L1脂肪细胞抵抗素的表达。     

PKC在TNF-α诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的:研究蛋白激酶C(PKC)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法:分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),再用TNF-α刺激HUVECs,应用RT-PCR、Western blot方法检测β-1,4-GalT-Ⅰ表达变化,应用细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链的表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变。结果:几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度的抑制TNF-α刺激HU-VECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制TNF-α诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制TNF-α诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调。结论:PKC可能参与调节TNF-α诱导的HUVECsβ-1,4-GalT-Ⅰ的表达,并且可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力。     

粘着斑激酶活化对平滑肌细胞粘附和迁移的影响

目的:研究粘着斑激酶磷酸化在细胞外基质成份诱导平滑肌细胞粘附和迁移中的作用。方法:通过纤粘连蛋白(FN)诱导培养的平滑肌细胞粘附迁移,以免疫沉淀和Western blolt方法检测粘着斑激酶(FAK)及其磷酸化的表达量。将FAK反义寡核苷酸(ODNs)经脂质体转染细胞,观察对FAK磷酸化、细胞粘附铺展和迁移的影响。结果:FN在显著诱导平滑肌细胞粘附和迁移时,FAK也呈明显表达,20 mg/L FN可使其磷酸化处于较高表达量。脂质体可有效地介导ODNs转染,转染效率为(86.7±4.5)%,FAK磷酸化表达量明显减少,5-60 mg/L不同浓度FN组,细胞铺展率减少17.89%-27.67%,10、20、40和60 mg/L FN组迁移细胞数也分别显著少23.26%、21.63%、19.31%、17.88%(P＜0.05)。结论:活化的FAK是细胞外基质诱导SMCs粘附和迁移的重要信号分子,由其介导的信号转导促进了这一过程,反义FAK ODNs可有效地对此进行抑制。     

整合素β1及纤连蛋白、层粘连蛋白对胶质瘤细胞浸润性的影响

目的 探讨整合素β1和纤连蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）对人胶质瘤浸润性的影响和作用机制。方法 以U251人胶质母细胞瘤（U251MG）细胞为研究对象,通过细胞黏附实验、迁移实验和体外侵袭实验,检测整合素β1及LN、FN对人恶性胶质瘤细胞黏附、迁移和转移能力的影响。通过荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜观察和扫描电镜方法,观察细胞微丝数量、分布和细胞表面伪足情况,比较整合素β1及FN、LN对微丝骨架的影响。结果 （1）FN对U251MG细胞黏附能力无明显影响,但抗整合素β1抗体可减少U251MG细胞的黏附数量（P〈0．01）;LN增加U251MG细胞黏附能力（P〈0．01）,抗整合素β1抗体对此作用影响较小。（2）抗整合素β1抗体减弱U251MG细胞在FN的运动、迁移能力（P〈0．05）。（3）U251MG细胞内可见清晰的微丝结构,FN、LN使细胞内纤维型肌动蛋白（F-actin）形成束状纤维,粗壮而密集;抗整合素B1抗体处理的细胞内,难以见到清晰的细胞微丝骨架,并常见大量絮团状的F-actin。（4）扫描电镜观察显示,FN、LN使细胞表面的伪足数量明显增加,而抗整合素β1抗体使细胞伪足数量明显减少,甚至消失。（5）FN和抗整合素β1抗体对U251MG细胞的体外侵袭能力无明显影响;LN可促进U251MG细胞的体外侵袭能力,抗整合素β1抗体可抑制这种作用（P〈0．01）。结论 （1）U251MG细胞通过整合素β1和FN相互作用,改变细胞微丝骨架、伪足结构和数量而促进U251MG细胞的运动、迁移能力。（2）整合素β1参与了LN介导的U251MG细胞体外侵袭作用。     

TPA-induced cohort migration of well-differentiated human rectal adenocarcinoma cells: cells move in a RGD-dependent manner on fibronectin produced by cells, and phosphorylation of E-cadherin/catenin complex is induced independently of cell-extracellular matrix interactions

 We have already presented a two-dimensional cell motility assay using a highly metastatic variant (L-10) of human rectal adenocarcinoma cell line RCM-1 as a motility model of tumour cells of epithelial origin. In this model, L-10 cells showed locomotion as a coherent sheet when stimulated with 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA), and we called this type of movement ”cohort migration”. Electron and immunoelectron microscopic study of the migrating cell sheets demonstrated localized release from cell–cell adhesion only at the lower portion of the cells with loss of E-cadherin immunoreactivity, and this change was associated with increased tyrosine phosphorylation of the E-cadherin–catenin complex, including β-catenin. Cell–extracellular matrix (ECM) interactions involved in this TPA-induced cohort migration and their effect on tyrosine phosphorylation of the E-cadherin-catenin complex have now been investigated. L-10 cell cohort migration was almost completely inhibited by addition of Arg-Gly-Asp (RGD) peptide into the medium, and thus RGD dependent. Cohort migration was stimulated on type I and IV collagens, fibronectin (FN)- and laminin-coated substratum, but was inhibited by RGD only on FN-coated surface. By using immunofluorescent techniques, FN was demonstrated preferentially around migrating cells, and a protein synthesis inhibitor, cycloheximide, inhibited the migration by about 75%. FN produced by L-10 cells were found to be mostly EDA+ FN when analysed by RT-PCR. Moreover, anti-FN antibody, but not anti-vitronectin antibody, inhibited the TPA-induced cohort migration almost completely. Thus, it was likely that L-10 cells produced FN themselves and moved on the FN substrate in an RGD-dependent manner. However, stimulation of migration by type I collagen coating and inhibition by RGD treatment did not affect the tyrosine phosphorylation of the E-cadherin–catenin complex induced by TPA, indicating that cell–cell interactions were adjusted to suit cell migration, irrespective of the condition of cell–ECM adhesion, during TPA-induced cohort migration. Received: 31 December 1997 / Accepted: 2 April 1998     

阿魏酸钠抑制纤维粘连蛋白和纤维蛋白原诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移和粘附

目的：探讨阿魏酸钠（SF）对纤维粘连蛋白(FN)和纤维蛋白原(Fg)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移和粘附的影响。 方法： VSMCs源于8周龄自发性高血压大鼠(SHR)的胸主动脉，组织块外生法体外培养VSMCs，在96孔聚苯乙烯平底培养板上进行细胞粘附实验；采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验，荧光染料Fura-2/AM法测定细胞内游离钙离子(［Ca2+］i)浓度。 结果： (1) FN和Fg可诱导VSMCs的粘附，SF(10-7-10-3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞粘附，最大抑制率分别为67.12％和70.23％(P<0.01)。(2) FN和Fg可诱导VSMCs迁移，作用峰值浓度分别为40-60 mg/L和1-5 g/L。SF(10-7-10-3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移，10-3mol/L SF对FN和Fg诱导的细胞迁移的抑制率达69.79%和87.06％。(3)Fg和FN显著促进［Ca2+］i升高(P<0.05)，SF明显抑制Fg和FN诱发的［Ca2+］i升高，峰抑制率分别为74.85％和71.57％。 结论： Fg和FN可诱导VSMCs粘附、迁移和［Ca2+］i浓度升高，SF可直接抑制VSMCs的粘附、迁移和［Ca2+］i浓度升高，抑制［Ca2+］i 浓度升高可能是它抑制上述物质诱导的VSMCs迁移的机制之一。     

The role of protein kinase C in regulating equine eosinophil adherence and superoxide production

Objective: To determine if protein kinase C (PKC) regulates equine eosinophil function.Material or subjects: Blood eosinophils were obtained from healthy ponies.Methods: IL-5- and histamine-induced adherence to serum-coated plastic was measured as the eosinophil peroxidase content of adherent cells and serum treated zymosan (STZ)-and IL-5-induced superoxide production by the reduction of cytochrome C. Eosinophil PKC activity was quantitated as the rate of transfer of ³²P from ATP to substrate. The effects of Ro31-8220 (isotype non-selective PKC inhibitor), Gö6976 (conventional PKC inhibitor), and rottlerin (PKC inhibitor) were determined by ANOVA and Bonferronis or Dunnetts test.Results: Ro31-8220 and Gö6976 reduced superoxide production whereas only Gö6976 inhibited adherence. Rottlerin inhibited histamine-induced adherence and increased STZ-induced superoxide production. Ro31-8220 and Gö6976, but not rottlerin, inhibited PKC activity.Conclusions: PKC is involved in regulating equine eosinophil adherence and superoxide production. The role of PKC appears to depend upon the stimulus used and response measured.Received 13 September 2004; returned for revision 19 October 2004; accepted by N. Boughton-Smith 4 November 2004     

蛋白激酶C在脂多糖诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的 研究蛋白激酶c(PKC)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响.方法 分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)30 min,LPS刺激HUVECs 4 h后,RT-PCR、Western blot方法 检测β-1,4一GalT-Ⅰ表达变化,细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变.结果 几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度地抑制LPS刺激HUVECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调.结论 PKC可能参与调节LPS诱导的HUVECs β-1,4-GalT-Ⅰ的表达,可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力.     

川芎嗪对人外周血淋巴细胞蛋白激酶C通道的影响

目的:探讨川芎嗪(LTZ)对正常人外周血淋巴细胞(PBL)蛋白激酶C(PKC)通道在受到与哮喘有关的炎症介质刺激时所发生的功能变化是否有影响。方法:取63例健康人外周静脉血各10mL,分离PBL,分4批分别给予以下处理后,采用-ATP催化活性测定法检测细胞胞膜、胞浆及总PKC活性。(1)分3组即5g/LLTZ处理组(6例)、5μmol/LPKC阻断剂Ro31-8220处理组(6例)和对照组(6例,以下各批均以此组为阴性对照组);(2)共3组分别用100nmol/L乙酰甲胆碱(Mch,5例)、5g/LLTZ+100nmol/LMch(5例)或5μmol/LRo31-8220+100nmol/LMch(5例)处理。(3)共3组分别采用100nmol/L组胺、5g/LLTZ+100nmol/L组胺(5例)或5μmol/LRo31-8220+100nmol/L组胺(5例)处理。(4)共3组分别用100nmol/LPMA(5例)、5g/LLTZ+100nmol/LPMA(5例)或5μmol/LRo31-8220+100nmol/LPMA(5例)。结果(1)LTZ对正常人PBL胞膜、胞浆及总PKC活性均无明显影响;(2)乙酰甲胆碱及组胺均可促进正常人PBL胞膜PKC活性增加,LTZ对该作用有抑制效应(P<0.05)。(3)LTZ对PMA诱发正常人PBL胞膜PKC活性增加的效应有抑制作用(P<0.05)。结论:川芎嗪对正常人PBLPKC通道在受到与哮喘有关的炎症介质刺激时所发生的活化有一定的抑制作用,该作用可能是川芎嗪对哮喘疾病具有防治意义的机制之一。     

Functional relevance during lymphocyte migration and cellular localization of activated β1 integrins

The state of integrin activation can be assessed by monoclonal antibodies (mAb) that selectively recognize integrins in their active form. We demonstrate herein that the expression of the epitope recognized by mAb HUTS-21 is induced on T lymphoblasts upon binding of soluble vascular cell adhesion molecule (VCAM)-1 and an 80-kDa tryptic fragment of fibronectin (FN80) to the β1 integrins very late activation antigen (VLA)-4 and VLA-5, and that this effect is dependent on ligand concentration and is specific for β1 integrins. On T lymphoblasts adhering to immobilized fibronectin, the HUTS-21 epitope localized exclusively to sites of integrin binding to fibronectin. These results indicate that mAb HUTS-21 recognizes a ligand-induced binding site (LIBS) on the common β1 subunit of VLA proteins. Engagement of β1 integrins through this LIBS epitope inhibited T lym-phoblast movement on fibronectin, as determined by quantitative time-lapse video microscopy studies. Furthermore, the HUTS-21 mAb also prevented T lymphoblast-directed migration through gradients of substratum-immobilized β1 integrin ligands such as fibronectin or VCAM-1, whereas it did not affect migration on intercellular adhesion molecule (ICAM)-1. This anti-LIBS mAb stimulated cell adhesion through postreceptor events, without affecting receptor affinity for ligand, and appears to interfere with cell migration by a mechanism distinct from that of other anti-β1 activating antibodies.     

细胞外基质促血管平滑肌细胞迁移及β3整合素和粘着斑激酶表达

目的:研究细胞外基质(ECM)蛋白促血管平滑肌细胞(VSMC)迁移与β₃整合素及粘着斑激酶(FAK)表达之间的关系。方法:应用细胞迁移实验观察骨桥蛋白(OPN)和纤连蛋白(FN)对VSMC迁移活性的影响,利用RT-PCR和Western印迹探讨β₃整合素、FAK和转录因子Gax表达与细胞迁移之间的关系。结果:VSMC经10、20mg/LOPN和20mg/LFN处理后,迁移活性分别达对照组的1.36、1.57和1.26倍(P＜0.05)。用相同浓度(20mg/L)OPN和FN刺激细胞,随着作用时间延长,VSMC迁移距离逐渐增加。Western印迹和RT-PCR结果证实,两种基质蛋白促进VSMC迁移与诱导β₃整合素和FAK基因表达及抑制转录因子Gax表达有关。结论:β₃整合素-FAK是介导OPN和FN促VSMC迁移的信号途径之一。