人胎胰岛冷冻保存的实验研究

报告了一种在无速率冷冻装置条件下获得保持较高成活率和功能的胰岛冻存方法。冻存胰岛复苏后活性测定结果表明，（１）胰岛成活率为８５％～９０％；（２）保持了胰岛素的分泌功能和对葡萄糖的反应力；（３）β细胞可进行旺盛的胰岛素生物合成；（４）仍保持完整的细胞结构和分泌结构。提示人胚胎胰岛在冻存后仍有与新鲜胰岛相似的功能和活性。     

人胚胰岛冷冻保存的实验研究

移植物来源紧张的问题长期以来困扰着胰岛细胞移植的发展 ,对胰岛细胞进行冷冻保存建立细胞库不但可以解决这一问题而且易于控制移植物的质和量 ,为临床移植提供充足的资源和选择性[1] 。本实验对传统冷冻方法[2 ] 进行改良 ,通过优化的六段降温程序冻存人胚胰岛细胞 ,开创性地将玻璃化超快速降温冷冻法应用于对人胚胰岛细胞的冻存。复温后的人胚胰岛在形态及分泌功能上与冷冻前无显著性差别 ,冷冻效果优良。1　材料与方法　　胎龄 18～ 2 8周之间的中期水囊引产死胎 ,胎儿死亡时间不超过 4ｈ ;胎儿无畸形及传染病 (由哈尔滨市各大医院妇产…     

人胎胰岛组织冷冻保存研究

人胎胰岛组织冷冻保存研究白兰秀，吴淑兰附属二院外科实验室（０５００００）附属二院外科腺体组关键词胰岛组织；保存；冷冻冷冻保存胰岛组织尚属探讨中，本文实验证明人胎胰组织经一定时期冷冻保存后复温培养，仍有良好的存活性和内分泌功能。１材料与方法１．１材料：...     

人胎胰岛细胞冷冻保存的研究

探讨冷冻保存器官和组织的方法，以求移植择期进行，方法：胎儿胰岛组织经培养后用缓慢冷冻和快速复温的方法，保存３０ｄ，检查胰岛组织的形态和合成释放胰岛素的功能。结果：胰岛细胞仍保持其生物等特性。结论：胎儿胰岛细胞经冷冻后仍保持其生物学特性，为胰岛移植治疗Ｉ型糖尿病开阔了光明前景。     

人胎胰腺的胰岛分离与胰岛细胞培养质量的实验研究

取水囊引产的４例胎龄为１８～２８周的人胎胰腺，用胶原酶消化分离胰岛，分别对３，５，７，９，１１，１３ｄ培养的胰岛细胞进行形态学观察，并采用放射性核素１２５Ⅰ标记抗原作放射免疫测定（ＲＩＡ）其培养上清液中胰岛素及Ｃ－肽的含量．结果：经５～９ｄ培养的胰岛细胞，生长良好，细胞活率为９０％左右，其中大多数为β细胞．５，７，９ｄ培养液上清液中胰岛素的含量依次为６４７５，７２３及７２７０ＩＵ／Ｌ；Ｃ－肽的含量依次为６０５，６２及＞６ｍｇ／Ｌ．分别高于正常血清的两倍、一倍以上．经以同样方法培养的兔胰岛细胞用于四氧嘧啶实验性兔糖尿病模型治疗，兔糖尿病模型的血糖均值由（４７９７９±０９２３３）ｇ／Ｌ下降为（３３１９３±０４１１０）ｇ／Ｌ（Ｐ＜００１）；胰岛素由（２６５±１４）ＩＵ／Ｌ上升为（１３３８±１５）ＩＵ／Ｌ（Ｐ＜００５）．结果说明本法培养的胰岛细胞用于移植以５～９ｄ为宜     

人胎儿胰岛组织培养实验研究

用人胎儿脐带血清和接受胰岛移植者血清代替新生牛血清,对人胎儿胰岛组织进行培养,测试了培养物的功能。结果表明采用人血清培养胰岛组织,有益于培养物生长,能减低其抗原性并能提高胰岛移植治疗胰岛素依赖型糖尿病的疗效。同时对不同胎龄、培养天数进行了探讨,认为胰岛组织培养以用4～7个月胎龄的胎儿,培养5～7d为最佳。     

冷藏人胎胰岛细胞移植治疗胰岛素依赖型糖尿病的初步观察

本文采用冷冻保存人胎胰岛细胞对11例IDDM患者(男7,女4;年龄22～41岁,病程2～10年)进行移植。随机分腹腔移植5例;三角肌移植6例。平均移植胎胰数为10.45±0.93个(10～13个)。移植过程未用免疫抑制剂。于移植前和移植后1、2、6个月,分别对临床症状、血糖、HbA_1、24小时尿糖、C肽、肌酐清除率(Ccr)、OK_(T4)、OK_(T8)以及每日胰岛素需要量等进行了评价。结果显示移植后代谢指标无改善,胰岛素需要量未明显减少。未达予期效果。因此认为冷冻保存人胎胰岛细胞在体外活性与临床疗效之间存在矛盾,其原因有待进一步阐明。     

人胎黑质细胞的冷冻保存

采用台盼蓝染色法，观察了第３￣６月人胎黑质细胞冷冻保存的细胞存活率，结果：①胎龄３￣６月人胎黑质细胞冷冻保存后均可存活，但以胎龄３和４月细胞存活率较高。②液氮保存的细胞存活率不受保存时间的影响，而４℃保存的细胞存活率随保存时间的延长而逐渐降低。结果提示，液氮保存人胎黑质细胞的保存条件以胎龄３和４月为宜。     

程序化与玻璃化冷冻保存人D2和D3胚胎的临床结局比较

目的比较程序化和玻璃化冷冻保存人D2和D3胚胎的临床结局,分析探讨不同冷冻方法对人D2和D3胚胎冷冻的影响。方法回顾性分析了本中心170个D2和D3胚胎复苏周期,比较程序化和玻璃化冷冻复苏后的存活率、卵裂球存活指数、完胚率、≥1完胚移植率、种植率、临床妊娠率、流产率等指标。结果程序化解冻移植周期47个,存活率73.60%,卵裂球存活指数65.88%,完胚率31.46%,≥1完胚移植率80.85%,胚胎种植率14.17%,临床妊娠率36.17%,流产率11.76%。玻璃化解冻移植周期120个,存活率92.96%,卵裂球存活指数86.49%,完胚率68.04%,≥1完胚移植率90.83%,胚胎种植率18.84%,临床妊娠率35.83%,流产率9.30%。玻璃化冷冻比程序冷冻能显著提高胚胎存活率、卵裂球存活指数和完胚率(P<0.05),但在≥1完胚移植率、临床妊娠率、胚胎种植率和流产率上无显著性差异。无论采用哪种冷冻方法,D2和D3胚胎在所有统计指标上差异均没有显著意义。结论玻璃化冷冻是一种有效的冷冻方法,其复苏存活率、卵裂球存活指数和完胚率均明显高于程序化冷冻,可作为传统程序化冷冻的替代方法。D3胚胎冷冻没有比D2胚胎更有优势,对于工作量较大的IVF实验室可选择D2胚胎冷冻移植。     

人胎胰岛细胞的分离培养及其意义

目的 初步探索人胎胰岛细胞的分离培养方法,以期深入研究胰岛细胞的凋亡机制及开展人胰岛细胞移植。方法 采用机械分离、体外胶原酶消化,并通过组织块联合培养、转皿、时间消化差法获取人胎胰岛细胞,观察胰岛细胞生长及开展人胰岛素释放情况。结果 双硫腙（Dithizone）染色显示胰岛纯度约80％～90％,细胞培养至7～9d为其对数生长期,培养至11d可测到胰岛素释放高峰,培养至15d仍具有一定的生物活性。结论 机械分离消化、转皿、时间消化差法可获得生物活性较好的胰岛细胞,为深入探讨胰岛细胞凋亡、胰岛细胞移植提供细胞基础。     

－50℃冻存人胎肝细胞的研究

－５０℃冻存人胎肝细胞的研究姜世明，张振宇，徐朝晖，丛海燕（山东师范大学生物系；山东省人民政府门诊部）潘沛恩，华玉瑛，张琴冈，王兆红，吴克芹，朱民（济南市传染病医院）因人胎肝细胞来源困难，不能及时供应临床应用，所以我们研究在－５０℃的条件下冻存人胎肝...     

人类胚胎冷冻保存技术的研究进展与应用前景

1983年Trounson等首先将胚胎的冷冻一解冻技术用于人胚，并成功妊娠^[1]。目前，世界上已普遍开展了胚胎的冷冻和复融技术。本文就胚胎冷冻技术基本原理、研究进展与应用前景做一综述。     

HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻保存研究

目的研究OPS法对不同基因型的HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻的效果，为建立转基因小鼠胚胎库奠定基础。方法采用乙二醇作为冷冻保护剂，以野生型P21^ / 小鼠为对照，用OPS法对P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx两种HBV转基因小鼠3．5d的胚胎进行玻璃化冷冻，并比较不同基因型小鼠的超数排卵数，胚胎的复苏率及发育率。结果P21^ / 、P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx小鼠平均超排数分别为27．89、15．56、9．14枚；复苏率分别为88．7％、81．1％、80．3％；发育率分别为82．6％、79．4％、56．6％。结果表明HBV转基因小鼠的超排数明显低于野生型小鼠的超排数，解冻后三种小鼠的胚胎复苏率之间无显著差别，而解冻后发育率，P21^HBx／HBx小鼠要明显低于其它两种小鼠。结论超排数、胚胎复苏率及解冻后发育率受小鼠的基因型影响。     

人胎胰岛细胞移植对Ⅰ型糖尿病的远期治疗效果

对１０７例Ⅰ型糖尿病病人予以人胎胰岛细胞移植治疗，并对其中９８例进行４￣１０年的随访观察。结果多数病人在移植后前６年，血糖控制较稳定，Ｃ肽水平上升，每日胰钫 用量减少，其 病酮症酸中毒及肾病和视网膜病变的发生率降低，少数病人效果扫续到７￣８年，个另病人效果可维持１０年。认为人胎胰岛细胞移植对治疗Ｉ型糖尿病有一定疗效     

大鼠胰岛分离与纯化的实验研究

0　引言　目前临床胰岛移植的效果仍不理想 ,提供理想的胰岛或胰岛细胞是发展胰岛移植的基础 .长期以来收获高纯度和高活力的胰岛或胰岛细胞是人们研究的目标 .本文采用胶原酶分次消化与葡聚糖间断密度梯度离心法来探讨大鼠胰腺胰岛的分离与纯化 .1　材料和方法1.1　胰岛分离　 SD大鼠 ,共 10只 ,不分雌雄 ,体质量 16 0～2 0 0 g.颈椎脱位法处死后 ,在无菌状态下迅速取出胰腺 ,置于4℃ Hanks液中 ,去除胰腺周围的结缔组织 ,冲洗后剪成 1mm3的碎块 ,加入 3m L预温的 1g· L- 1 的胶原酶 (IV型 ,Sigma)消化液中 ,置 38℃水浴箱中 10 min,…     

玻璃化冷冻技术在人卵裂期胚胎冷冻保存中的应用结局分析

低温冷冻保存技术是人类辅助生殖技术的重要组成部分,胚胎冷冻技术的应用大大提高了临床治疗的效果、丰富了临床治疗方案[1,2].目前主要应用的是胚胎冷冻技术,包括程序冷冻和玻璃化冷冻.程序冷冻技术已相对成熟和稳定并已得到广泛应用,而玻璃化冷冻技术作为一项新技术备受关注.     

人胎胰岛组织培养及活性测定

人胎胰岛组织临床移植治疗Ⅰ型糖尿病有效,本文报告培养方法及对胰岛β细胞和外分泌细胞活性和功能的检测,发现人胎胰岛组织在体外培养过程中,培养液内胰岛素量逐渐降低,每毫克湿重组织内胰岛素含量逐渐升高。随培养时间不同,茶碱增强葡萄糖诱导胰岛素的释放量不同。胎胰组织及培养液内未测到淀粉酶。