丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞分泌功能的调节作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞分泌功能的调节作用.方法 将体外培养的猪卵巢颗粒细胞分为两组,分别加入浓度为50 μmoL/L的二甲基亚砜(DMSO)和MAPK抑制剂--PD98059(PD),作用48 h后,将加入DMSO的细胞分为两组,观察1组细胞加入浓度为20μmol/L的腺苷酸环化酶激活剂,不加腺苷酸环化酶激活剂的为对照1组;将加入PD的细胞也分为两组,观察2组细胞加入浓度为20 μmol/L的腺苷酸环化酶激活剂,不加腺苷酸环化酶激活剂的为对照2组,继续作用48 h.以化学发光法测定4组细胞中睾酮、孕酮和雌二醇的水平;用RT-PCR技术检测17α羟化酶(CYP17)和细胞色素芳香酶P450的基因表达,以扩增产物的灰度比(GSR)表示.结果 (1)生贿激素水平:对照1组睾酮、孕酮、雌二醇水平分别为(29.5±2.5)nmol/L、(80±5)nmol/L、(49±4)pmol/L,对照2组分别为(42.3±3.4)nmol/L、(170±15)nmoL/L、(75±6)pmol/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察2组睾酮、孕酮、雌二醇水平分别为(106.2±7.6)nmol/L、(210±16)nmol/L、(130±11)pmol/L,观察1组分别为(47.2±3.5)nmol/L、(130±6)nmol/L、(81±6)pmol/L,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05);(2)酶表达变化:对照2组与对照1组比较,CYP17 mRNA表达增强50%,而芳香酶P450 mRNA表达下降20%,观察2组与观察1组比较,芳香酶P450、CYP17 mRNA表达均增强,且以CYP17 mRNA表达增强更明显,达到125%.结论 MAPK信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞的分泌功能具有抑制作用.     

卵泡刺激素对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响

目的 研究卵泡刺激素(FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素(AMH)的影响.方法 选择2008年8月至2009年12月于中山大学附属第六医院生殖中心就诊的33例PCOS患者,从其直径为8～10 mm的窦卵泡中分离颗粒细胞,并分为以下3组进行培养:未经FSH刺激的颗粒细胞(未刺激组,n=12);外源性FSH刺激的颗粒细胞(体外刺激组,n=12),此组颗粒细胞来源同未刺激组;对患者行FSH促排卵治疗,采集FSH体内刺激的颗粒细胞(体内刺激组,n=21).分别采用ELISA法和实时荧光定量PCR技术检测培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,及AHM mRNA表达水平;构建AMH荧光报告载体,检测卵巢颗粒细胞中AMH启动子的活性.结果 培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,未刺激组为(11.4±4.0)μg/L,体外刺激组为(7.9±1.1)μg/L,体内刺激组为(5.6±1.7)μg/L,体内、体外刺激组分别与未刺激组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).AMH mRNA表达水平未刺激组为2.5±1.2,体外刺激组为1.5±0.5,体内刺激组为1.1±0.7,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).未刺激组颗粒细胞中AMH启动子的活性为11.5±2.3,体外刺激组为8.7±2.4,体内刺激组为6.8±2.4,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 FSH可能通过抑制PCOS患者卵巢颗粒细胞中AMH的启动子活性及其mRNA表达,抑制AHM的过度分泌,促进卵泡的生长发育.     

生长激素对卵泡黄素化颗粒细胞分泌雌、孕激素的影响

目的探讨人卵泡黄素化颗粒细胞中生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体的表达,以及GH在体外对人卵泡黄素化颗粒细胞产生雌、孕激素的影响。方法 2010年5月至7月在广州医学院第三附属医院,采用免疫细胞化学染色法,收集24例行体外受精-胚胎移植治疗患者的卵泡液,提取黄素化颗粒细胞,测定其GH和IGF-1受体的表达;并将黄素化颗粒细胞在不同浓度的GH(0、4.7、9.4、18.8nmol/L)作用下单独及与促卵泡素(FSH,75IU/L)共同培养72h,用酶联免疫吸附法测定黄素化颗粒细胞培养液中的IGF-1,用化学发光法测定培养液中雌二醇(E2)和孕酮(P)含量。结果 80%以上黄素化颗粒细胞的GH和IGF-1受体阳性;黄素化颗粒细胞在基础状态下能自分泌一定量的IGF-1(140.00±27.13)μg/L、E2(444.67±67.25)pmol/L和P(655.00±70.07)nmol/L;分别用浓度为4.7、9.4、18.8nmol/L的GH刺激黄素化颗粒细胞合成IGF-1、E2和P,测其含量分别为(140.33±18.60)、(139.08±31.81)、(154.72±32.19)μg/L,(489.00±91.27)、(658.00±219.67)、(660.83±207.95)pmol/L和(821.67±101.27)、(995.00±109.68)、(1193.31±138.80)nmol/L,与基础状态下分泌比较差异无统计学意义(P>0.05);同样浓度GH协同75IU/LFSH刺激黄素化颗粒细胞合成IGF-1、E2和P的含量分别为(149.41±50.30)、155.34±36.34)、(154.33±46.05)μg/L,(627.83±98.44)、(680.17±160.18)、(773.50±80.84)pmol/L和(1785.02±321.61)、(2096.71±344.71)、(3430.02±1538.38)nmol/L,IGF-1与GH剂量相关分析,差异无统计学意义(P>0.05),E2、P水平与GH剂量行相关分析,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢黄素化颗粒细胞存在GH及IGF-1受体;黄素化颗粒细胞能自分泌IGF-1和一定量的E2、P;GH不能直接促进黄素化颗粒细胞分泌E2、P,但能协同FSH促进黄素化颗粒细胞合成E2、P,且呈剂量依赖关系。     

自然周期冻融胚胎移植日雌二醇水平对妊娠结局的影响

目的探讨冻融胚胎移植时自然周期内膜准备中胚胎移植日雌二醇(E2)水平对妊娠结局的影响。方法选择2010年9月至2011年10月在沈阳市妇婴医院生殖中心进行冻融胚胎移植周期中,以自然周期进行内膜准备的患者110例,进行130个周期冻融胚胎移植。按移植日雌二醇水平分为4组:A组:E2≤183.5pmol/L14周期;B组:E2>183.5pmol/L,≤367.0pmol/L34周期;C组:E2>367.0pmol/L,≤734.0pmol/L74周期;D组:E2>734.0pmol/L8周期。对各组的年龄、子宫内膜厚度、移植胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率及流产率进行比较。结果各组年龄、子宫内膜厚度、移植胚胎数及流产率比较差异均无统计学意义。C组临床妊娠率和种植率分别为62.2%和30.9%,明显高于A组(42.9%,23.5%)和B组(52.9%,28.6%),P<0.05。B组临床妊娠率和种植率与A组比较有增高趋势,但差异无统计学意义,P>0.05。D组临床妊娠率为25.0%(2/8),胚胎种植率为10.0%(2/20)。D组因例数较少未进行统计学比较。结论在冻融胚胎移植周期中,以自然周期进行内膜准备时,胚胎移植日雌二醇水平过低或过高都影响临床妊娠率及胚胎种植率。     

血管紧张素(Ang)Ⅱ、Ang-(1-7)对人卵巢黄素化颗粒细胞的增殖及分泌功能的影响

目的:了解血管紧张素(Ang)Ⅱ、Ang-(1-7)对人卵巢黄素化颗粒细胞的增殖及分泌功能的影响。方法:提取行体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)患者卵泡液中的颗粒细胞,经过提纯后随机分为实验组与对照组。实验组根据添加的药物分为AngⅡ组与Ang-(1-7)组。分别向AngⅡ组/Ang-(1-7)组的颗粒细胞培养液中加入10-10~10-5 mmol/L浓度的AngⅡ/Ang-(1-7),对照组的颗粒细胞培养液中不添加药物,各组分别作用24 h、48 h、72 h,用四甲基偶氮唑蓝盐比色法(MTT法)测定颗粒细胞的吸光度(D)值;向AngⅡ组/Ang-(1-7)组的颗粒细胞培养液中分别加入10-6 mmol/L浓度的AngⅡ/Ang-(1-7),对照组的培养液中不添加药物,收集培养0~24 h、24~48 h、48~72 h的上清液,化学发光分析法(CL)测定黄素化颗粒细胞上清液中雌二醇(E2)、孕酮(P)水平。结果:不同浓度的AngⅡ、Ang-(1-7)分别作用颗粒细胞后,其D值均较对照组低,并随着浓度增加D值逐渐降低;随着时间延长,各组D值逐渐升高。10-6 mmol/L浓度的AngⅡ、Ang-(1-7)分别作用于颗粒细胞后,其上清液中E2的浓度均较对照组高,P浓度与对照组无统计学差异,随着时间延长,各组的E2和P含量逐渐增加。结论:AngⅡ及Ang-(1-7)对人卵巢黄素化颗粒细胞生长起抑制作用,其抑制作用随浓度增加逐渐增强。AngⅡ、Ang-(1-7)能够增强人卵巢黄素化颗粒细胞分泌雌激素的作用,但对孕激素的分泌没有影响。提示AngⅡ、Ang-(1-7)在人卵巢黄素化颗粒细胞的增殖及激素分泌中起一定作用,两者可能参与了人类的卵泡闭锁、优势卵泡发育、成熟以及排卵等生理过程。     

电压门控钾离子通道对卵巢黄素化颗粒细胞增殖、分泌及凋亡的影响

目的 探讨电压门控钾离子通道(Kv)对人绒毛膜促件腺激素(hCG)诱导的卵巢黄素化颗粒细胞增殖、分泌及凋亡的影响.方法 收集2007年11月至2008年2月行体外受精-胚胎移植患者的卵泡液共25份,密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,采用RT-PCR技术检测颗粒细胞中KvmRNA的表达.将培养贴壁后的颗粒细胞按干预方式分为空白组、4氨基吡啶(4-AP)组、hCG组和hCG+4-AP组共4组,hCG和4-AP的终浓度分别为1250 U/L、5 nmol/L.培养24 h后,采用化学发光法测定各组孕酮水平;采用流式细胞仪和分光光度法检测各组颗粒细胞的凋亡情况;采用四甲基偶氮唑监(MTT)比色法检测各组颗粒细胞的增殖、抑制情况.结果 (1)培养24 h后,空白组、4-AP组、hCG组和hCG+4.AP组颗粒细胞中的孕酮水平分别为(547 ±64)、(206 ±32)、(1991±172)和(763 ±79)nmol/L.4-AP组、hCG组分别与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);hCG+4-AP组与hCG组比较,差异也有统计学意义(P<0.01).(2)培养24 h后,4-AP组颗粒细胞抑制率为19.7%,与空白组(0)比较,差异有统计学意义(P<0.05);hCG+-AP组为34.6%,与hCG组(0)比较,差异也有统计学意义(P<0.01).4-AP组、hCG+4-AP组的颗粒细胞增殖率分别为80.3%、68.2%,分别与空白组(100%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.01);hCG组(100.4%)高于空白组,但差异无统计学意义(P>0.05).(3)培养24 h后颗粒细胞的凋亡率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)活性,4-AP组分别为(40±5)%和0.049 ±0.009,均高于空白组[(17±4)%和0.029±0.008],hCG+4-AP组[(25±4)%和0.039±0.008]也均高于hCG组[(15 ±3)%和0.022 ±0.007],差异均有统计学意义(P<0.01).结论 4-AP能够抑制卵巢黄素化颗粒细胞和经hCG诱导的颗粒细胞的孕酮分泌,町能与其抑制增殖、促进凋亡有关.Kv在卵巢黄素化颗粒细胞分泌、增殖及凋亡过程中起重要的作用.     

妊娠合并心脏病剖宫产患者围手术期容量管理相关研究

目的探讨妊娠合并心脏病患者围手术期不同容量管理方法对预防容量超负荷及术后并发症的影响。方法收集2014年6月至2019年6月北部战区总医院妇产科72例妊娠合并心脏病患者的临床资料,根据围手术期72h内平均每日液体负平衡量分组,A组(负平衡500mL/d),B组(500mL/d≤负平衡1000mL/d),C组(1000mL/d≤负平衡≤1500mL/d),比较各组患者血清氨基末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)、中心静脉压(CVP)、血清钾离子(K+)、红细胞压积(HCT)、术后血栓发生率的差异。结果 3组患者接受治疗前一般临床资料(年龄、BMI、孕周、纽约心脏病协会心功能分级、妊娠风险分级、产科指征剖宫产率、心脏指征剖宫产率)比较,差异无统计学意义(P0.05)。3组术后72h NT-proBNP数值和降低值,差异有统计学意义。A组术后72h NT-proBNP(158.92±114.64)ng/L,NT-proBNP降低值(67.96±32.36)ng/L;B组术后72h NT-proBNP(121.67±71.07)ng/L,NTproBNP降低值(191.08±81.22)ng/L;C组术后72h NT-proBNP(117.65±72.43)ng/L,NT-proBNP降低值(158.34±72.43)ng/L,(P0.05),C组下降最明显。术后72h CVP,A组(9.13±0.24)cm H_2O(1cm H_2O=0.098kPa),B组(9.48±1.36)cm H_2O,C组(8.57±0.82)cm H_2O,C组与A组、B组比较,差异有统计学意义(P0.05)。术后72h HCT,A组(0.3170±0.0092)%,B组(0.3573±0.0069)%,C组(0.3556±0.0072)%,C组与A组比较,差异有统计学意义(P0.05)。3组患者术后均无容量不足、低血钾和血栓发生。结论妊娠合并心脏病剖宫产患者术后72h内平均每日液体负平衡维持在1000～1500mL,可能最有助于预防容量超负荷发生,并且未增加术后容量不足、低血钾及血栓等并发症的发生风险。     

超声引导下经阴道卵巢内激光治疗多囊卵巢综合征的剂量研究

目的 评价不同激光剂量对超声引导下经阴道卵巢内激光治疗多囊卵巢综合征(PCOS)排卵障碍患者的临床及内分泌效果的影响.方法 选择2005年1月至2007年7月就诊于深圳市妇幼保健院的对枸橼酸氯米芬治疗无反应的PCOS不孕患者56例,随机分为A、B、C、D共4组,行超声引导下经阴道卵巢内激光治疗,激光治疗的剂量以卵巢内凝固点数表示,每个凝固点采用功率为3～5 W的激光持续作用1～3 min,直径约为10 mm.其中A组为1个点,B组为2个点,C组为3个点,D组为4～5个点.比较治疗后6个月内各组患者自发排卵率、妊娠率及月经周期情况,并比较治疗前后各组患者血清性激素水平的变化.结果 (1)C组和D组治疗后自发排卵率分别为71%(10/14)和79%(11/14),均高于A组(0)和B组(21%,3/14),差异均有统计学意义(P<0.05).C组和D组治疗后6个月累积临床妊娠率分别为43%(6/14)和36%(5/14),均高于A组(0),差异均有统计学意义(P<0.01、P<0.05);与B组(14%,2/14)比较,差异无统计学意义(P>0.05).C组与D组的自发排卵率及累积临床妊娠率分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)治疗前的各项性激素水平,各组患者之间分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后的黄体生成素(LH)、睾酮水平及LH/卵泡刺激素(FSH)比值,A组[分别为(11.9±3.1)U/L、(3.9±1.6)nmol/L和2.1±0.5]、B组[分别为(10.4±3.9)U/L、(3.3±1.1)nmol/L和2.0±0.6]分别与C组[分别为(6.3±2.6)U/L、(2.2±0.7)nmol/L和1.1±0.3]、D组[分别为(5.8±2.5)U/L、(2.1±0.4)nmol/L和1.0±0.4]比较,差异均有统计学意义(P<0.05);C组与D组分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).C、D组治疗后的平均LH、睾酮水平及LH/FSH比值分别较治疗前下降了42%、39%、42%和53%、40%、58%,均高于A组(分别下降了4%、9%和16%)和B组(分别下降了11%、6%和5%),差异均有统计学意义(P<0.05);C组与D组之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 每侧卵巢内选择1～2个激光凝固点的临床效果较差,3个激光凝固点是卵巢内激光治疗PCOS排卵障碍的有效剂量,在此基础上增加凝固点数不能提高治疗效果.     

子宫内膜异位症患者血脂和钙磷代谢的变化及其临床意义

目的 探讨子宫内膜异位症(内异症)患者血脂和钙磷代谢的变化及其与内异症发病的关系.方法 回顾性分析223例内异症患者(其中年龄≤35岁148例,为内异症A组;＞35岁75例,为内异症B组)和200例非内异症患者(其中年龄≤35岁129例,为对照A组;＞35岁71例,为对照B组)的临床资料.应用电化学发光免疫分析法检测两组患者血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮、雌二醇和孕酮的水平;采用光电比色法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、钙磷水平.结果 内异症A组和B组平均血清孕酮水平分别为2.0 nmol/L和1.8 nmol/L,均显著高于对照A组和B组的1.6 nmol/L和1.2 nmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01);内异症B组血清LH水平为7.2 U/L,也显著高于对照B组的6.1 U/L,差异也有统计学意义(P＜0.01);而内异症A组血清LH水平(7.0 U/L)与对照A组(6.5 U/L)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).内异症A组血清FSH、睾酮和雌二醇水平分别为6.2 U/L、1.1 nmol/L和269 pmol/L,与对照A组(6.3 U/L、1.1 nmol/L、264 pmol/L)分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);内异症B组血清FSH、睾酮和雌二醇水平分别为6.6 U/L、1.0 nmol/L和345 pmol/L,与对照B组(6.6 U/L、0.9 nmol/L和279 pmol/L)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).内异症A组和B组血清TG水平分别为0.71 mmol/L和0.72 mmol/L,均显著低于对照A组和B组的0.92 mmol/L和1.08 mmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01);内异症A组和B组血清LDL水平分别为(2.2±0.5)mmol/L和(2.4±0.7)mmol/L,也均显著低于对照A组和B组[(2.4±0.6)mmol/L和(2.6±0.6)mmol/L],差异也有统计学意义(P＜0.01);而内异症A组和B组患者血清HDL水平[(1.62±0.31)mmol/L和(1.53±0.32)mmol/L]却均显著高于对照A组和B组[(1.48±0.21)mmol/L和(1.37±0.22)mmol/L],差异也有统计学意义(P＜0.01).但内异症A组和B组血清TC水平[(4.2±0.7)mmol/L和(4.4±0.8)mmol/L]与相应年龄段的对照A组和B组[(4.3±0.7)mmol/L和(4.5±0.7)mmol/L]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).另外,内异症A组和B组血磷水平[(1.01±0.22)mmol/L和(0.89±0.18)mmol/L]均显著低于对照A组和B组[(1.23±0.24)mmol/L和(1.10±0.13)mmol/L],差异有统计学意义(P＜0.01);而内异症A组和B组血钙水平[(2.39±0.23)mmol/L和(2.40±0.28)mmol/L]与相应年龄段的对照A组和B组[(2.41±0.12)mmol/L和(2.42±0.20)mmol/L]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 内异症患者存在血脂和钙磷代谢的变化,血清高孕激素水平可能与内异症发病有关.     

白细胞介素6对雄激素活性的影响及在多囊卵巢综合征发病机制中的作用

目的探讨白细胞介素6(IL-6)对雄激素活性的影响及在多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制中的作用。方法在体外培养的猪卵泡内膜细胞和颗粒细胞培养液中分别加入IL-6(10ng/L、100ng/L、1000ng/L),观察IL-6对卵泡内膜细胞睾酮分泌及卵巢颗粒细胞雄激素受体(AR)mRNA表达的影响。结果在24h、48h、72h三个时间点分别与空白对照组(0ng/L)相比,加入IL-6后卵泡内膜细胞睾酮分泌无明显变化;在72h时通过Real-timePCR检测发现,IL-6(100ng/L、1000ng/L)对卵巢颗粒细胞AR-mRNA的表达具有上调作用。结论IL-6虽然没有直接促进卵巢睾酮分泌的作用,但却可以上调卵巢组织AR-mRNA的表达,间接增强雄激素活性,此可能与慢性亚临床炎症可引发PCOS的机制有关。     

冻融牛始基卵泡在体外三维培养的最适藻酸盐浓度

目的探讨冻融的牛始基卵泡在体外三维培养的最适藻酸钠浓度。方法玻璃化冷冻牛卵巢组织后复苏,加入Liberase DH酶消化,然后随机挑取始基卵泡,将其分别培养在二维的培养系统中(对照组,A组)和浓度分别为0.5%(B组)、1%(C组)、2%(D组)的藻酸钠三维培养系统中培养8 d,每隔1 d观察卵泡的生长情况,测量卵泡直径以及雌二醇(E_2)的分泌。结果随着培养天数增加,对照组中卵泡的完整性丧失,卵母细胞和颗粒细胞分离,而三维培养组中卵泡仍维持其完整性。体外培养8 d后,D组的卵泡平均直径为(57.7±8.5)μm,大于B组和C组(P0.05);荧光染色后,D组的未受损卵泡率为68.4%,较B组、C组高,但仅B组、D组间有统计学差异(P0.05);B组、C组、D组的E_2水平均随培养时间的延长而分泌增加,其中D组中的E_2水平(98.5±7.8)pg/mL最高,较B组、C组高,但仅B组、D组间有统计学差异(P0.05)。结论藻酸钠三维培养系统较二维培养系统更适合始基卵泡的体外培养,体积浓度为2%的藻酸钠凝胶较低浓度的藻酸钠凝胶更适合始基卵泡的生长发育。     

不同临床特征IHH女性患者相关激素含量特征的风险

目的 探究不同临床特征特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(IHH)女性相关激素含量的特征。方法 选取100例IHH女性患者为研究组,另选取同期68例健康女性为健康组。比较两组血清睾酮(T)、孕酮(P)、雌二醇(E₂)、25羟维生素D[25(OH)D]含量及研究组不同临床特征IHH女性患者T、P、E₂、25(OH)D含量的差异。结果 研究组T(1.80±0.23)nmol/L含量均高于健康组的(1.12±0.17)nmol/L,P(3.98±1.52)nmol/L、E₂(402.19±26.12)pmol/L、25(OH)D(25.64±5.80)nmol/L含量均明显低于健康组的(15.01±2.93)nmol/L、(238.11±11.06)pmol/L、(79.98±8.18)nmol/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组IHH女性患者不同典型临床表现、母亲孕期服药史、母亲孕期外伤史、母亲足月分娩、原发性闭经、身高指标中T、P、E₂、25(OH)D含量比较,差异具有统计学意义(P...     

胆红素对脐血T淋巴细胞功能的影响

目的 探讨胆红素对新生儿T淋巴细胞功能的影响.方法 收集并分离21例正常足月新生儿脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cell,CBMC),按培养液中胆红素的浓度相应分为A、B、C、D四组.A组:胆红素终浓度205.2 μmol/L(12 mg/d1);B组:胆红素终浓度153.9 μmol/L(9 mg/d1);C组:胆红素终浓度102.6 μmol/L(6 mg/d1);D组:胆红素终浓度0/μmol/L.培养后检测细胞凋亡率和CD25+细胞百分率,ELISA法检测培养上清液中可溶性Fas(soluble Fas,sFas)、可溶性Fas配体(soluble Fas ligand,sFasL)、IFN-γ及IL-4水平,并分析它们之间的相关性.结果 (1)A、B组细胞凋亡率分别为(61.49±8.93)%和(56.36±9.24)%,高于C、D组,分别为(32.44±8.72)%和(28.72±6.21)%,差异均有统计学意义(P《0.01);(2)A、B组CD25+细胞百分率分别为(19.89±6.72)%和(22.12±4.61)%,低于C、D组,分别为(61.28±4.87)%和(64.25±6.18)%,差异均有统计学意义(P《0.01);(3)A、B组sFas、sFasL水平低于C、D组,C组sFas、sFasL水平低于D组,差异均有统计学意义(P《0.01);(4)A、B组IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值低于C、D组,差异有统计学意义(P《0.01)C组IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值低于D组,差异有统计学意义(P《0.05);四组间IL-4水平差异无统计学意义(q=0.47～3.30,P》0.05);(5)CD25+细胞百分率、培养上清液sFas、sFasL、IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比值均与凋亡细胞百分率呈负相关(r=-0.79～-0.37,P《0.01),而IL-4水平与细胞凋亡率无相关性(r=-0.20,P》0.05).结论 胆红素具有明显的免疫抑制活性,在生理性黄疸状态的较高水平[血清蛋红素≥153.9 μmol/L(9 mg/d1)]即能促进T淋巴细胞凋亡,进一步加重新生儿时期辅助性T细胞亚群失衡状态,导致细胞免疫功能下降.     

瘦素调节人卵巢黄素化颗粒细胞功能的体外研究

目的　探讨瘦素、促卵泡激素 (FSH)和胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )对人卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)生成的影响及可能的作用机制。方法　培养人黄素化颗粒细胞 ,分别以瘦素 (3 0ng/ml)、FSH (1 0ng/ml)、IGF Ⅰ (30 0ng/ml)以及相同终浓度的瘦素 +FSH、瘦素 +IGF Ⅰ、FSH +IGF Ⅰ、瘦素 +FSH +IGF Ⅰ对其刺激 2 4h ,对照组不加任何药物。对药物作用后的黄素化颗粒细胞行形态学观察、细胞计数 ;用放射免疫法检测培养液中E2 和P水平 ;同时用逆转录聚合酶链反应法对黄素化颗粒细胞行瘦素受体mRNA检测。结果　瘦素、FSH和IGF Ⅰ对黄素化颗粒细胞生长无影响。瘦素对黄素化颗粒细胞E2 生成量无影响 ,对FSH刺激E2 的生成也无影响 ,E2 水平作用前分别为 (0 10 3± 0 0 36 )pmol/10 0 0细胞、(0 32 3± 0 0 4 2 )pmol/10 0 0细胞 ,作用后分别为 (0 12 0± 0 0 0 8)pmol/10 0 0细胞、(0 343± 0 0 34)pmol/10 0 0细胞 ;而对IGF Ⅰ、FSH +IGF Ⅰ刺激黄素化颗粒细胞生成E2 有显著的抑制作用 ,E2 水平作用前后分别为 (0 318± 0 0 37)pmol/10 0 0细胞与 (0 4 93± 0 0 36 )pmol/10 0 0细胞、(0 193± 0 0 2 5 )pmol/10 0 0细胞与 (0 2 5 1± 0 0 33)pmol/10 0 0细胞 (P <0 0 5 ,<0     

血清抗苗勒管激素在多囊卵巢综合征诊治中的临床应用价值

目的探讨血清抗苗勒管激素(AMH)在多囊卵巢综合征(PCOS)诊断中的价值及不同水平AMH与促排卵用药特征的相关性。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定60例PCOS患者(PCOS组)及43例非PCOS不孕症患者(对照组)的血清AMH,并进行PCOS组中48例促性腺激素(Gn)用量与其AMH值的相关分析。结果 PCOS组血清AMH[(82.33±43.41)pmol/L]与对照组[(20.23±9.51)pmol/L]比较,差异有统计学意义(P0.01);以血清AMH水平42.857 pmol/L为界值时,其诊断PCOS的灵敏度为0.900,特异度为0.977,Youden指数为0.876,阳性预测值为0.744,阴性预测值为0.993,诊断准确性最好;PCOS组中48例Gn促排卵患者的血清AMH水平与促排卵Gn用量无关(r=0.269,P=0.065),但高AMH(78.65 pmol/L)组Gn用量显著高于低AMH(≤78.65 pmol/L)组(t=2.150,P=0.036)。结论血清AMH水平可作为诊断PCOS的参考标准,并对PCOS患者的促排卵用药的剂量选择有指导意义。     

拮抗剂方案中晚卵泡期高孕酮暴露时间对临床妊娠率的影响

目的分析探讨拮抗剂方案中晚卵泡期早发孕酮升高(PPR)暴露时间与临床妊娠率的关系。方法回顾性分析2015—2017年间本中心卵巢储备功能正常患者行拮抗剂方案促排卵,比较停药日孕酮(P)≤1.5μg/L与P1.5μg/L组的妊娠率;根据促排卵晚卵泡期P达到1.5μg/L至停药日暴露时间,将促排卵停药日P1.5μg/L患者定为高P暴露0 d,纳入A组,促排卵停药日P=1.5μg/L定为高P暴露1 d,纳入B组,促排卵晚卵泡期P达到1.5μg/L至停药日暴露2 d、3 d、≥4 d分别纳入C组、D组、E组,分析5组患者的基线资料、促排卵药物使用及实验室数据及临床妊娠率。结果 hCG注射日P≤1.5μg/L与P1.5μg/L组临床妊娠率差异无统计学意义(P0.05);A组、B组、C组临床妊娠率差异无统计学意义,E组妊娠率(35.29%)显著低于A~C组(57.69%、58.92%、57.57%,P=0.007);停药日P水平在A~E组间差异均有统计学意义[(1.34±0.14)μg/L、(1.76±0.23)μg/L、(2.01±0.25)μg/L、(2.47±0.71)μg/L、(2.56±0.77)μg/L,P=0.005];停药日E2水平A~E组间比较差异均有统计学意义[(3 472.42±1 686.26)μg/L、(4 160.82±2 197.45)μg/L、(5 250.63±2 292.16)μg/L、(5 291.71±2 084.86)μg/L、(5 139.90±2 756.57)μg/L],其中A组显著低于C组、D组、E组(P=0.000)。促排卵Gn使用总量E组[(2 094.40±759.75)IU]显著高于B组、C组、D组[(1 701.45±639.15)IU、(1 527.65±424.98)IU、(1 622.34±416.30)IU,P=0.000];5组间获卵数差异有统计学意义(10.9±6.7、14.9±8.2、19.0±9.2、18.9±9.2、15.8±9.4,P=0.000),5组间MII卵数差异有统计学意义(9.3±6.8、12.6±8.0、16.6±8.7、16.1±7.6、11.8±7.8,P=0.000)。结论 PPR常伴发h CG注射日高雌激素水平和获卵数增高,卵巢储备正常的年轻患者,拮抗剂方案促排卵过程中晚卵泡期P升高可能与多卵泡发育累计效应有关。晚卵泡期血清P达到1.5 ng/mL暴露0~2 d的临床妊娠率差异无统计学意义,暴露超过4 d的临床妊娠率显著下降,建议取消移植。患者子宫内膜容受性不仅需参考h CG注射当日的P水平,而且充分考虑到高P暴露时间长短对子宫内膜容受性的影响。     

卵巢低反应患者抗苗勒管激素与干细胞生长因子表达及其相关性研究

目的:研究卵巢低反应患者抗苗勒管激素(AMH)和干细胞生长因子(SCF)的表达情况及二者的相关性。方法:选择年龄均小于35岁行体外受精-胚胎移植或卵细胞浆内单精子注射的卵巢低反应患者132例(卵巢低反应组)和正常对照组91例。采用ELISA检测两组患者血清和卵泡液中AMH蛋白和SCF蛋白的表达。分离并培养颗粒细胞,采用RT-PCR检测两组患者颗粒细胞中AMH mRNA和SCF mRNA表达相对灰度值,并对卵巢低反应患者颗粒细胞中两者表达进行相关性分析。结果:1与正常对照组比较,卵巢低反应组血清AMH蛋白表达(2.21±1.11 ng/ml vs 10.49±3.29 ng/ml)和卵泡液AMH蛋白表达(4.21±0.73 ng/ml vs 5.42±0.64 ng/ml)均显著降低,差异均有统计学意义(P0.01;P0.05)。2卵巢低反应组颗粒细胞中AMH mRNA表达相对灰度值较正常对照组显著降低(4.10±0.80 vs 6.20±1.40,P0.01),而SCF mRNA表达相对灰度值较正常对照组明显增加(4.69±1.12 vs 3.10±1.40,P0.05)。3卵巢低反应组颗粒细胞中AMH mRNA和SCF mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.56,P0.05)。结论:AMH的表达水平与卵巢反应性有关,卵巢低反应患者颗粒细胞中AMH表达显著降低,并与SCF的表达负相关,二者可能存在调控关系。     

不同腹腔镜手术方式治疗输卵管积水对卵巢储备功能及IVF-ET妊娠结局的影响

目的探讨腹腔镜处理双侧输卵管积水后对卵巢储备功能及IVF-ET结局的影响。方法回顾性分析2015年1月至2017年1月84例于中国医科大学附属盛京医院就诊的双侧输卵管积水的患者资料,A组为行腹腔镜下双侧输卵管切除术21例,B组为行腹腔镜下双侧输卵管近端结扎远端造口术63例;B1组于输卵管间质部行腹腔镜下双侧输卵管结扎术+远端造口术28例,B2组于输卵管峡部行腹腔镜下双侧输卵管结扎术+远端造口术35例。结果 A、B组抗米勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、FSH/黄体生成素(LH)比较,差异无统计学意义(P0.05),但A组LH高于B组[(5.44±2.93)U/L,(3.20±1.40)U/L],差异有统计学意义(P0.05);A、B两组妊娠结局比较,差异无统计学意义(P0.05);B1、B2两组妊娠结局比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论与输卵管结扎术相比,输卵管切除术可一定程度上降低卵巢储备功能;不同部位输卵管结扎后IVF-ET结局无明显差异。     

复方当归注射液可减轻大剂量柴油机尾气颗粒物对雌性小鼠卵和卵裂球的损伤

目的 观察雌性小鼠亚急性接触柴油机尾气颗粒物(diesel exhaust particles,DEP)致卵和卵裂球损伤以及复方当归注射液对损伤的干预效果.方法 210只21 d ICR雌鼠随机分为对照组(A组)、DEP组(B组)、DEP+小剂量组(C组)、DEP+中剂量组(D组)和DEP+大剂量组(E组)(各42只),分别向小鼠咽后壁接种12.0 μg/μl DEP混悬液(B～E组)或载液(PBS,A组)各30μl,每3 d重复接种1次,共4次.末次DEP接触后3 d处死动物.C、D、E组首次接种日至处死前1 d,每日分别经腹腔给予复方当归注射液相当于生药75、150和300 mg各1次,连续给药12次.观察指标包括小鼠一般情况、体重;卵巢重量、卵巢重量/体重比值、卵巢组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量;卵母细胞的存活率、胚泡破裂比率、第一极体释放率、受精率、线粒体DNA含量和超微结构变化.结果 (1)各组小鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05).卵巢重量、卵巢重量/体重比值、卵巢SOD活性和GSH含量B组分别为(1.5±0.6)mg、(7.2±2.5)×10-5、(192.10±23.67)nU/mg prot和(262.40±31.60)nmol/mg prot,C组分别为(1.7±0.2)mg、(8.9±0.6)×10-5、(198.92±24.27)nU/rng prot和(271.66±14.58)nmol/mg prot,D组分别为(2.1±0.2)mg、(9.8±1.1)×10-5、(214.37±27.19)nU/mg prot和(285.93±9.55)nmol/mg prot,低于A组,分别为(3.3±1.5)mg、(15.4±7.3)×10-5、(292.30±40.03)nU/mg prot和(367.98±24.59)nmol/mg prot(P＜0.05或＜0.01);E组分别为(3.7±1.1)mg、(18.7±5.4)×10-5、(279.10±12.63)nU/mg prot和(353.59±10.61)nmol/mg prot,显著高于B组(P＜0.01);MDA含量B、C、D组分别为(3.88±0.35)nmol/mg prot、(3.62±0.19)nmol/mg prot和(2.63±0.34)nmol/mg prot,显著高于A组的(2.18±0.44)nmol/mg prot(P＜0.05或＜0.01),D、E组[(2.35±0.37 nmol/mg prot]显著低于B组(P＜0.01).(2)观察时间B、C组卵母细胞存活率以及B、C、D组第一极体释放率和24 h体外受精率显著低于A组(P＜0.05或P＜0.01),E组显著高于B组(P＜0.05);各组胚泡破裂比率均为100%.(3)卵母细胞线粒体DNA的拷贝数对数值,与A组比较,C、D、E组显著降低(P＜0.01);与B组比较,C、D组显著降低而E组显著升高(P＜0.01).(4)A组卵母细胞结构无明显改变;B、C组卵母细胞许多细胞器退变明显,部分细胞坏死;D组细胞内较多线粒体肿胀、空泡化,E组这些变化范围及程度均减小.结论复方当归注射液对雌性小鼠亚急性接触DEP所致的卵和卵裂球损害有治疗及保护作用.     

十溴联苯醚-209对原代培养的胎鼠海马神经细胞中超氧化物歧化酶、丙二醛及谷胱甘肽的影响

目的 检测十溴联苯醚-209(BDE-209)对原代培养胎鼠海马神经元细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)含量的影响,探讨BDE-209对海马神经元细胞影响的作用机制.方法 将原代培养的胎鼠海马细胞分为A、B、C、D、E组,分别暴露于2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/ml BDE-209,同时设一组对照组,BDE-209暴露剂量为0.每组3个平行样,24 h后检测SOD活力、MDA及GSH含量.结果 SOD活力随染毒剂量增加而降低,实验A～E组(29.809±3.269;28.424±1.953;26.912±1.439;25.533±2.259;15.678±2.607)与对照组(38.056±4.210)比较,差异均有统计学意义(P<0.01).各实验组MDA含量随染毒剂量增加而增加,其中C组(1.421±0.531)、D组(1.997±0.499)、E组(2.233±0.865)与对照组(0.544±0.236)比较,差异有统计学意义(P<0.01).实验A～E组GSH含量随染毒剂量增加而减少(288.576±77.514;257.929±70.959;126.349±40.649;76.350±13.850;59.634±17.533),与对照组(347.228±38.162)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 BDE-209暴露原代培养胎鼠海马神经元细胞可发生氧化损伤,这可能是BDE-209神经毒性的作用机制之一.