雷帕霉素逆转骨髓瘤U266细胞黏附介导的耐药

目的：探讨雷帕霉素（ Rapamycin,RAPA）对骨髓瘤U266细胞的黏附作用的影响及因黏附介导的阿霉素耐药的影响。方法采用结晶紫染色法检测U266细胞与纤连蛋白（ Fibronectin,FN）的黏附作用;MTT实验检测RAPA对骨髓瘤细胞因黏附介导的阿霉素耐药的影响。结果U266细胞与FN黏附1、6、12h,其黏附率分别为（35.13±4.31）％、（43.65±3.86）％和（60.38±5.27）％;用160nmol· L －1 RAPA 处理1、6、12h后黏附率分别降为（22.14±6.13）％、（21.99±5.68）％和（27.76±4.91）％,组间比较差异显著（P ＜0.05）;当阿霉素作用时,FN黏附组细胞IC50值〔（3.16±0.29）mol· L －1〕显著高于BSA组〔（0.62±0.19）mol· L －1〕（P＜0.05）;FN联合RAPA组 IC50值〔（0.65±0.31）mol· L －1〕显著低于FN组（P＜0.05）,但与BSA联合RAPA组〔（0.58±0.22）mol· L－1〕相比无显著性差异（P＞0.05）,但却低于 FN组（P＜0.05）。结论 RAPA能降低U266细胞与FN的黏附率和逆转黏附介导的阿霉素耐药。     

三氧化二砷对人骨髓瘤细胞株U266作用的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）对多发性骨髓瘤细胞株U266的作用。方法应用不同浓度的As2O3处理U266,采用细胞培养、流式细胞测定、原位杂交和酶联免疫吸附测定技术检测As2O3对U266的细胞活力、细胞凋亡、癌基因bcl-2表达和血管内皮细胞生长因子（VEGF）分泌的影响。结果As2O3可抑制U266的细胞活力,诱导细胞凋亡,抑制细胞bcl-2表达和VEGF的合成,VEGF可部分阻断As2O3的作用。结论As2O3可以通过多种机制发挥抗肿瘤作用。     

丹参酮类化合物诱导白血病干细胞凋亡的体外研究

目的 探讨丹参酮类化合物对白血病干细胞(LSCs)的促凋亡作用.方法 将二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮与丹参酮ⅡA等4种丹参酮类化合物分别作用于白血病NB4细胞,以CD34+、CD38-、CD123+为标记确定NB4细胞中的LSCs,采用Annexin V/PI双标记法检测LSCs的凋亡率.结果 在20 μmol·L-二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅰ条件下作用24h后,可显著诱导LSCs凋亡,而隐丹参酮和丹参酮ⅡA不能诱导LSCs凋亡.结论 丹参酮类化合物诱导NB4中LSCs的凋亡能力与其结构有关,与课题组前期报道的其对NB4细胞的增殖抑制作用基本一致.     

二氢丹参酮对人肺癌GLC-82细胞的抑制作用及其机制研究

目的:研究二氢丹参酮(DTS)对人肺癌GLC-82细胞的抑制作用及其作用机制。方法:以质量浓度为0(空白对照)、5、10、20、40、80、100μg/ml的DTS作用细胞24、48 h后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测17.85μg/ml DTS作用12、24、48 h后细胞的凋亡情况,计算凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,DTS组细胞的增殖受到抑制,作用24、48 h后最大细胞抑制率分别为54.48%、64.95%,IC50分别为62.36、33.94μg/ml;DTS可诱导细胞的凋亡且与作用时间呈正相关,凋亡率为5.6%~29.6%;Western blot检测结果表明,DTS能下调细胞中Bcl-2蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达(P<0.01或P<0.05)。结论:DTS对人肺腺癌GLC-82细胞有较强的抑制作用,并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

丹参酮类化合物对NB4细胞的增殖抑制与构效关系探讨

目的比较丹参酮类化合物对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞的体外增殖抑制作用,并探讨其分子结构与细胞毒性之间的关系。方法采用改良MTT法测定不同浓度的丹参酮类化合物与细胞共培养一定时间后对NB4细胞的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察其细胞形态。结果供试丹参酮类化合物均能有效抑制NB4细胞的增殖,其抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性。与NB4细胞共培养24 h后,二氢丹参酮Ⅰ与丹参酮Ⅰ的IC50值分别为1.86、3.62μg·mL-1,丹参酮ⅡA和隐丹参酮的IC50值均大于10μg·mL-1;共培养48 h后二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮的IC50值分别为0.65、1.41、1.83、5.41μg·mL-1;72 h后的IC50值分别为0.28、0.33、0.45、2.59μg·mL-1。结论 4种丹参酮类化合物对NB4细胞均具有增殖抑制作用,作用强度大小依次为二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮,提示丹参酮类化合物的A环为芳环时可增强细胞毒性,C环的呋喃环结构可能影响其细胞毒性。     

胰岛素对高糖所致鼠骨髓间充质干细胞增殖抑制的改善作用

目的研究胰岛素对高糖所致小鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)增殖抑制的改善作用并对其机制做初步探讨。方法首先鉴定MSCs纯度,然后给予25mmol/L葡萄糖干预,并分别给予不同浓度胰岛素予以干预,用MTT法检测细胞的增殖,并用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的改变,以期解释增殖的差异性。结果鉴定MSCs纯度>90%。胰岛素能够纠正高糖所致的MSCs增殖抑制作用(P=0.000),并且对细胞周期S期百分比没有影响(P=0.066),但是能够明显降低高血糖所致的细胞凋亡率(P=0.001)。结论胰岛素治疗对高糖所致的MSCs增殖抑制具有改善作用,凋亡率的变化可以部分解释这种作用。     

新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤U2OS细胞增殖的抑制作用

目的研究高选择性的新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤的抗癌作用。方法CCK-8法检测不同浓度(0、20、40、80、160、240、320、400、480μmol·L^-1)和不同干预时间(0、24、48、72、96 h)的ZL-n-91对U2OS细胞的增殖抑制作用;平板克隆形成实验检测ZL-n-91对U2OS细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡的影响;Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白CDK2、结果ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的增殖,呈时间及剂量依赖性(P<0.05),其半数抑制浓度IC₅₀为174.1μmol·L^-1;ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的克隆形成能力(P<0.01);ZL-n-91影响U2OS细胞的周期进程,将U2OS细胞阻滞在G₀/G₁期,并明显促进细胞凋亡(P<0.01);Western blot结果显示ZL-n-91明显下调U2OS细胞中Bcl-2、CDK2、CDK4、CyclinD1、CyclinE1蛋白的表达(P<0.05)。结论新型选择性磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91显著抑制骨肉瘤细胞U2OS的增殖,促进细胞的周期阻滞和凋亡,可能是治疗骨肉瘤的潜在药物。     

HPLC法测定丹参片中4种丹参酮类成分的含量

目的采用HPLC法同时测定8个厂家74批次丹参片中4种丹参酮类成分二氢丹参酮、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量。方法采用HPLC法,Aglient ZORBAX C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-1mL·L~(-1)磷酸溶液(80∶20);柱温:30℃;流速:1mL·min~(-1);检测波长:270nm。结果二氢丹参酮、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的进样量分别在1.956～97.8,3.820～191.0,4.982～249.1和5.440～272.0ng范围内与色谱峰峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为99.7%,100.0%,99.9%和99.9%,RSD值分别为0.51%,0.00%,0.30%和0.21%。结论建立的HPLC法简便快捷、准确,重复性好,可作为丹参片的质量控制方法。     

全国中药材市场商品丹参中4种丹参酮成分的HPLC测定

目的:建立高效液相色谱法测定全国中药材市场商品丹参中4种丹参酮成分的含量。方法:采用色谱柱Elite—ODS(5μm,150 mm×4.6 mm),流动相甲醇-水(75:25),柱温22℃,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长270 nm。结果:丹参酮Ⅱ_A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ的加样回收率分别为100.6%,100.0%,94.5%,96.6%(RSD=0.9%,1.1%,1.8%,1.4%,n=3)。结论:商品丹参所含的4种丹参酮含量存在较大的差异。     

氯喹增敏地塞米松或辐射对多发性骨髓瘤细胞的杀伤作用

目的 研究氯喹(chloroquine, CQ),及CQ是否增敏化疗药物地塞米松(dexamethasone, DEX)或辐射对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞的杀伤作用,并探讨其可能机制。方法 用细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8, cck8)检测CQ单药,以及CQ联用DEX对U266细胞增殖的影响,运用中效原理软件评估两药相互作用;cck8及流式细胞术分别检测CQ处理条件下辐射对U266细胞增殖和凋亡作用的改变;Western blot检测CQ合用DEX,以及CQ联合辐射对U266细胞内B细胞淋巴瘤-2(B-cellymphoma-2, Bcl-2)蛋白表达变化。结果 CQ及DEX对U266细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性,且CQ(3.9 μmol/L)能够增强DEX(125 μmol/L)对U266细胞的杀伤作用,并增加DEX降低细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平;不同辐射剂量(5~25 Gy)对U266细胞的生长抑制作用并无差异;CQ(1.0 μmol/L)可以增加辐射对U266细胞的敏感性,诱导细胞凋亡。结论 CQ能够增敏DEX或辐射对U266细胞的杀伤作用,CQ增敏DEX的作用机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达相关。     

Effects of anti-inflammatory drugs on proliferation, cytotoxicity and osteogenesis in bone marrow mesenchymal stem cells

Nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) were found to suppress proliferation and induce cell death in cultured osteoblasts, and steroids were found to decrease the osteogenesis potential of mesenchymal stem cells. In this study, we further tested the effects of anti-inflammatory drugs (AIDs) on the functions of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). The BMSCs from mice (D1-cells) and humans (hBMSCs) were treated with dexamethasone (10(-7) to 10(-6) M), cyclooxygenase-2 (COX-2) selective NSAIDs (10(-6) to 10(-5) M) and non-selective NSAIDs (10(-5) to 10(-4) M). Drug effects on proliferation, cell cycle kinetics, cytotoxicity and mRNA and protein expressions of cell cycle regulators were tested. The osteogenesis potential of D1-cells were evaluated by testing mRNA expressions of type Ialpha collagen and osteocalcin 2-8 days after treatments, and testing mineralization 1-3 weeks after treatments. The results showed that all the tested drugs suppressed proliferation and arrested cell cycle of D1-cells, but no significant cytotoxic effects was found. Prostaglandin E1, E2 and F2alpha couldn't rescue the effects of AIDs on proliferation. The p27kip1 expression was up-regulated by indomethacin, celecoxib and dexamethasone in both D1-cells and hBMSCs. Higher concentrations of indomethacin and dexamethasone also up-regulated p21Cip1/Waf1 expression in hBMSCs, and so did celecoxib on D1-cells. Expressions of cyclin E1 and E2 were down-regulated by these AIDs in D-cells, while only cyclin E2 was down-regulated by dexamethasone in hBMSCs. All the tested NSAIDs revealed no obvious detrimental effects on osteogenic differentiation of D1-cells. These results suggest that the proliferation suppression of AIDs on BMSCs may act via affecting expressions of cell cycle regulators, but not prostaglandin-related mechanisms.     

C反应蛋白对多发性骨髓瘤细胞生长影响的研究

目的观察C反应蛋白(CRP)对多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡相关基因survivin、热休克蛋白90α(Hsp90α)表达的影响。方法将CRP(浓度为0、5、10、20mg/L)与多发性骨髓瘤细胞作用24h后应用细胞计数法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测凋亡相关基因survivin和Hsp90α的表达。结果CRP培养细胞24h后,MTT结果显示CRP处理组的吸光度值均高于对照组(P<0.05),20mg/L浓度CRP组作用最显著,细胞计数法获得的结果与其一致。RT-PCR结果显示survivin、Hsp90α的表达量随CRP浓度的增高而增高,实验组与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论CRP促进多发性骨髓瘤细胞增殖,其通过调节凋亡抑制蛋白survivin基因及Hsp90α的表达诱多发性骨髓瘤细胞增殖。     

β-榄香烯对多发性骨髓瘤细胞的白细胞介素-6表达的影响

目的探讨β-榄香烯对多发性骨髓瘤(MM)的白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,以期了解β-榄香烯抗MM的分子机制。方法人MM细胞系RPMI 8226与不同浓度的β-榄香烯作用,以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MM细胞培养上清中IL-6的浓度,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-6基因表达。结果不同浓度的β-榄香烯作用RPMI 8226细胞48h后,培养上清中IL-6浓度与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR检测结果表明,不同浓度的β-榄香烯作用于RPMI 8226细胞48h,RPMI 8226细胞的IL-6基因mRNA表达强度与对照相比均明显降低。结论β-榄香烯能明显减少MM细胞IL-6的自分泌,抑制RPMI 8226细胞的IL-6基因表达。提示β-榄香烯降低IL-6表达可能是其抗MM的机制之一。     

Cx43表达与多发性骨髓瘤细胞耐药的相关性

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)连接蛋白43(Cx43)表达对多发性骨髓瘤(MM)RPMI 8226细胞耐药的影响。方法体外分离、培养BMSCs,采用RT-PCR法检测BMSCs、RPMI 8226细胞Cx43的表达,流式细胞术和多重液相蛋白定量技术分别检测BMSCs与RPMI 8226细胞共培养对RPMI 8226细胞凋亡和细胞因子分泌的影响。结果 BMSCs及RPMI 8226细胞均表达Cx43。BMSCs与RPMI 8226细胞共培养后,上清液中IL-6、IL-10和TGF-β水平增加,硼替佐咪诱导的RPMI 8226细胞凋亡作用减弱;而细胞间隙连接通讯(GJIC)特异性阻断剂18α甘草次酸(18α-GA)能明显逆转上述观察指标的改变过程。结论 BMSCs与RPMI 8226细胞间可形成功能性GJIC,是BMSCs促进MM细胞生存及介导其耐药的重要原因之一。     

Effect of lead on proliferation and neural differentiation of mouse bone marrow-mesenchymal stem cells

Bone marrow-mesenchymal stem cells (MSCs) are considered to be an ideal source of stem cells for assessing the effects of environmental toxins on the proliferation, multipotency and differentiation of adult stem cells. The aim of this study was to investigate the effect of lead on the proliferation and neuronal differentiation of murine MSCs. MTT assay used in this study revealed that while the proliferation of MSCs is sensitive to higher than 10 μM lead, a 50% reduction in the rate of their proliferation can be achieved in the presence of 60 μM lead. The results of immunocytochemistry and RT–PCR showed that β-mercaptoethanol induced-neuronal differentiation is also reduced after the treatment of MSCs by 60 μM lead. Furthermore, the comet assay analysis of MSCs showed a substantial increase in DNA damage in the lead treated cells compared to the control. In conclusion our results revealed for the first time that lead is not only cytotoxic to the survival and proliferation of MSCs but also inhibits their differentiation to neurons in a dose-dependant manner. Therefore, MSCs appear to be an alternative method for assessing the cytotoxic effects of such environmental hazards.     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的观察地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响。方法利用1.073g/mLPercoll分离液以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,进行体外培养。成骨诱导组细胞用地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠处理,分别进行ALP染色和矿化结节染色。实验组细胞分别以10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L和10^-6mol/L地塞米松加以干预,MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞仪定量分析hMSCs的凋亡率。结果成骨诱导组细胞ALP染色和矿化结节染色均为阳性,对照组为阴性;低浓度（10^-9mol/L）地塞米松对细胞的体外增殖无明显影响（P〉0.05）,10^-8mol/L及以上浓度地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0.01）;hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0.01）。结论地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠可促使hMSCs成骨分化,10^-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖,地塞米松能促进体外培养的人骨髓间充质干细胞凋亡。     

补肾养骨汤诱导多发性骨髓瘤细胞株 KM3 的 凋亡及机制探讨

目的 探讨补肾养骨汤对人多发性骨髓瘤细胞株 KM3 细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 取对数生 长期 KM3 细胞,分别加入 5%、10%、20% 的补肾养骨汤含药血清培养,培养 12、24、48 和 72 h 后,采用 Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测补肾养骨汤对 KM3 细胞增殖的影响;KM3 细胞经过不同浓度含药血清培养 72 h 后,采用流式 细胞术检测补肾养骨汤对 KM3 细胞周期和凋亡作用;RT-qPCR 和 Western blot 检测 B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、 Bcl-2 相关蛋白（Bax）和核转录因子（NF）-κB 的表达水平。结果 补肾养骨汤抑制 KM3 细胞株的增殖,诱导 KM3 细胞株呈剂量依赖性凋亡,使 KM3 细胞周期停滞在 G0/G1 期,导致 KM3 细胞株 Bcl-2、NF-κB 表达下调,Bax 表达 上调。结论 补肾养骨汤抑制 KM3 细胞的增殖,影响细胞周期,诱导其凋亡,此作用机制可能与 Bcl-2、Bax 和 NF- κB 表达异常有关。     

香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖作用

目的 研究香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响.方法 肌注香丹注射液和5-溴尿嘧啶核苷(Brdu);体外培养MSC,用四甲基偶氮唑法检测香丹注射液促进大鼠MSC的增殖作用,免疫组化检测MSC细胞的Brdu标记阳性率.结果 3种高浓度的药液对MSC的增殖与对照组比较有显著性差异;停药后3-7 d,香丹组Brdu标记阳性细胞率与生理盐水组比较有显著性差异.结论 香丹注射液有促进MSC增殖的作用.