合成肽技术用于流感病毒快速免疫诊断的分析

高致病性禽流感病毒感染人类病例发现后,因其大规模危害性和病毒高度变异性决定了对流感病毒的研究必须不断加强；也决定了针对流感病毒这类高变异病毒的识别诊断技术研究必须是动态的、灵活的和快速反应型,才能符合当前新发传染病不断出现的诊断需要。合成肽技术的简便易行使之成为能够针对流感病毒变异作出快速反应,并迅速建立有效的快速检测方法的首选技术平台。为此,结合合成肽技术发展的特点,就其针对不同亚型流感病毒的病原学和血清学精确诊断优势作一综述。     

流感病毒实验室检测方法研究进展

流感是目前严重威胁人类健康的疾病之一。准确和早期诊断流感病毒感染对迅速开展抗病毒治疗至关重要,可减少季节性流行和大流行期间相关发病率和病死率。目前常见的流感病毒检测方法有病毒培养、抗原检测、核酸检测、血清学和二代测序技术等。本研究就上述方法在流感病毒中的应用进行综述。     

成人甲型流感病毒初筛阳性患者中性粒细胞/淋巴细胞比值、淋巴细胞/单核细胞比值、血小板/淋巴细胞比值测定的临床意义

目的 探讨甲型流感病毒患者的血常规相关参数变化特点,为诊断与鉴别诊断提供参考。方法 收集2018年1月-2019年2月来本院就诊的流感症状患者9 180例,分别做血常规和甲型流感病毒抗原检测。结果 甲型流感病毒患者白细胞、中性粒细胞、单核细胞、NLR、PLR、RDW/血小板比值升高,淋巴细胞、平均红细胞体积、血小板计数、MPV、LMR下降;甲型流感病毒患者白细胞、淋巴细胞较其他感染组下降,平均红细胞体积、MPV与感冒组和支气管炎组相比下降;甲型流感病毒患者NLR较支气管炎组升高; LMR降低、PLR升高,与急性上呼吸道感染、支气管炎组相比差异有统计学意义(P 0. 05); RDW/血小板比值与急性上呼吸道感染相比升高。结论 淋巴细胞计数、NLR、PLR、LMR等检测结果对甲型流感病毒患者的诊断与鉴别诊断有较大的应用价值,临床上可以根据这些指标的检测结果,结合流行病史和综合情况,对患者做出早期诊断。     

流感病毒即时检验研究进展

流行性感冒是由流感病毒引起的一种传播快、传染力强的人类呼吸道传染病，可在全球范围造成巨大的生命和财产损失。世界卫生组织已将开发针对呼吸道病毒的即时检验（POCT）列为优先事项。POCT对流感样患者进行快速、准确的诊断，对预防和控制流感病毒的传播以及减少重症病人的发生发展有重要意义。基于免疫学的流感病毒POCT快速、简便但灵敏度低，基于检测核酸的流感POCT方便快捷，弥补了免疫学POCT灵敏度低的缺点，未来通过优化成本效益可在临床POCT环境中大量应用。现对目前用于诊断流感病毒的正在应用和开发研究的POCT方法进行综述。     

优化的套式核酸体外扩增方法用于甲型流感病毒快速诊断的研究

目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生物学方法对流感病毒进行快速诊断。方法我们结合流感病毒M基因、NS基因、HA基因的结构和进化特性设计多元引物达到流感病毒的型和亚型准确与快速的鉴定。结果甲型流感病毒以M基因保守区域设计引物,PCR后电泳带为413bp;甲型流感病毒以HA基因分亚型,H1N1亚型PCR后电泳带为348bp,H3N2亚型PCR后电泳带为291bp,H5N1亚型PCR后电泳带为326bp。结论应用优化的套式核酸体外扩增方法进行流感病毒的型与亚型的诊断是比较快速的,且所需要的病毒量少(0.01～0.1TCID50),灵敏度较高。     

1例接种流感病毒裂解疫苗偶合死亡的调查诊断报告

潍坊市疾病预防控制中心接到接种门诊报告,1名幼儿在接种完流感病毒裂解疫苗后死亡,经市级预防接种异常反应调查诊断专家组诊断,认为幼儿死亡与接种流感病毒裂解疫苗无关,属于疫苗接种偶合症。     

新型冠状病毒肺炎疫情防护措施下某三甲医院流感病毒抗原阳性率分析

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染疾病, 一般暴发于春季和冬季, 其中甲型流感病毒具有很强的变异性, 是引起人类、家畜及禽类流感流行的主要病毒[1], 乙型流感病毒次之, 丙型流感病毒相对稳定。目前常用的流感快速诊断方法是胶体金免疫层析法(GICA), 相较于作为金标准的核酸检测, 有速度快、费用低、便携性好的特点。本研究使用GICA法对四川大学华西医院2018—2020年门诊、急诊及住院共23 888例有呼吸道症状患者进行甲型/乙型流感病毒抗原检测, 以了解在新型冠状病毒肺炎(以下简称"新冠肺炎")疫情下, 执行以佩戴口罩为主要防护方式的高人群覆盖率的呼吸道防护措施对普通流感流行率的影响, 现报告如下。     

一起B型流感暴发的实验结果分析

目的利用A型、B型流感病毒荧光RT-PCR快速检测法,对流感病毒作快速诊断,用细胞分离法能及时取得病毒株,掌握流感流行及毒株的变异,分析预测流感在我区流行的情况,为流感防治工作提供科学依据。方法A型、B型流感病毒荧光RT-PCR快速检测法和常规狗肾传代细胞(MDCK)法分离流感病毒并进行毒株鉴定。结果B型流感病毒荧光RT-PCR为阳性;细胞病毒分离培养也确认为B型(Victoria系)流感。结论该起疫情是由B型(Victoria系)流感病毒引的急性上呼吸道病。     

抗甲型流感病毒内部抗原单克隆抗体的稳定性观察

目的了解抗甲型流感病毒内部抗原单克隆抗体的稳定性。方法应用杂交瘤技术获得3株分泌抗甲型流感病毒内部抗原单克隆抗体细胞株1A9、1B1和1D4,通过ELISA与血凝抑制试验测定其单克隆抗体的稳定性与特异性。结果3株细胞连续传代9个月,能稳定地分泌单克隆抗体,经不同冻融时间观察其A值无明显改变并且与甲3,甲1型流感病毒呈阳性反应,与乙型流感病毒,腺病毒呈阴性反应。结论抗甲型流感病毒内部抗原单克隆抗体具有很好的稳定性与型特异性。在流感病毒的病原学诊断方面有实用价值。     

流感病毒M1单克隆抗体的制备及其生物学特征

目的 制备针对流感病毒基质蛋白M1的单克隆抗体(mAb),为研究流感病毒检测试剂盒提供实验材料.方法 以纯化的M1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗M1 mAb的杂交瘤细胞,注射小鼠腹腔获得M1 mAb,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记M1 mAb.通过Western印迹法、ELISA、细胞感染免疫染色实验检测所获M1 mAb的作用和特性.结果 获得能稳定分泌抗流感病毒基质蛋白M1的杂交瘤细胞系,纯化腹水得到M1 mAb和HRP-M1 mAb.Western印迹法结果显示,M1 mAb和HRP-M1 mAb能与M1抗原及H1N1、H3N2亚型流感病毒的M1蛋白反应,是针对M1蛋白的mAb;利用ELISA方法研究M1 mAb和HRP-M1 mAb对M1抗原及流感病毒的检测作用,结果显示它们能检测H1N1和H3N2亚型的甲型流感病毒,而HRP-M1 mAb的检测能力比M1 mAb强;细胞免疫染色实验显示,M1 mAb能结合H1N1和H3N2亚型病毒感染的细胞.结论 针对M1蛋白的M1 mAb和HRP-M1 mAb已制备成功.它们能检测H1N1和H3N2亚型甲型流感病毒,有望应用于流感病毒诊断以及鉴别诊断试剂盒的研发.     

乙型流行性感冒病毒的基因快速检测

〔目的〕建立乙型流行性感冒病毒的核酸快速诊断技术。〔方法〕采用RT -PCR方法对乙型流感病毒的HA基因进行检测 ,我们对乙型流感病毒的HA基因保守区域设计相关引物 ,进行扩增 ,并作了特异性与灵敏度比较。〔结果〕该引物只能扩增乙型流感病毒的特异性片段 ,而对其它型别的流感病毒以及麻疹、风疹、腮腺炎病毒无交叉反应。检测的灵敏度一次PCR可达 1TCID50 ,二次PCR反应可达 0 .1TCID50 。〔结论〕采用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率 ,比采用MDCK细胞分离的阳性率更高 ,可达到迅速、正确地诊断乙型流感的实用目的。     

优化的套式核酸体外扩增方法用于甲型流感病毒快速诊断的研究

目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断，这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT-PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强，nested multirplex RT-PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生物学方法对流感病毒进行快速诊断。方法我们结合流感病毒M基因、NS基因、HA基因的结构和进化特性设计多元引物达到流感病毒的型和亚型准确与快速的鉴定。结果甲型流感病毒以M基因保守区域设计引物，PCR后电泳带为413bp；甲型流感病毒以HA基因分亚型，H1N1亚型PCR后电泳带为348bp，H3N2亚型PCR后电泳带为291bp，H5N1亚型PCR后电泳带为326bp。结论应用优化的套式核酸体外扩增方法进行流感病毒的型与亚型的诊断是比较快速的，且所需要的病毒量少(0.01～0．1TCID50)，灵敏度较高。     

某医院3233例儿童流感样病例流感病毒检测结果分析

目的分析秋冬季节重庆某医院儿童流感样病例的病原学(甲型/乙型流感病毒)特征,为制定今后的流感预防方案提供依据。方法选取2019年11月—2020年1月于重庆某医院就诊的儿童流感样病例3233例作为研究对象,采集鼻腔或咽喉拭子标本,应用甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)进行检测。结果研究对象的送检标本中,共检出流感病毒阳性标本1007例(31.15%),其中甲型流感病毒阳性标本536例(16.58%),乙型流感病毒阳性标本471例(14.57%),两者均为阳性的标本6例(0.19%)。不同性别研究对象甲型/乙型流感病毒阳性检出率的差异均无统计学意义(P0.05)。不同年龄段研究对象甲型/乙型流感病毒阳性检出率的差异均有统计学意义(P0.05),其中8～10岁组研究对象甲型流感病毒阳性检出率最高,为20.93%;10～13岁组研究对象乙型流感病毒阳性检出率最高,为20.43%。不同月份发病的研究对象甲型/乙型流感病毒阳性检出率比较,差异均有统计学意义(P0.05),2020年1月发病的研究对象甲型流感病毒阳性检出率最低,为8.24%;2019年11月发病的研究对象乙型流感病毒阳性检出率最低,为8.04%。诊断为上呼吸道感染的研究对象甲型流感病毒阳性检出率为16.53%,高于诊断为下呼吸道感染研究对象的11.54%(P0.05);而诊断为上呼吸道感染的研究对象乙型流感病毒阳性检出率为14.55%,同样高于诊断为下呼吸道感染研究对象的8.97%(P0.05)。结论甲型/乙型流感病毒引起的流感在秋冬季高发,应重视儿童流行性感冒的流行特征,加强流感病毒的监测,根据流行病学特征做好防控工作。     

武汉市青山区呼吸道疾病患者病原学及流行病学研究

分析武汉市青山区不同季节甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒、合胞病毒5种病毒性感染的呼吸道疾病的分布及易感人群,为临床诊断提供参考依据。对诊断为病毒性感染的呼吸道疾病的1 746例患者病毒分布及易感人群进行回顾性分析。采用SPSS 13.0软件,计数资料比较采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果显示,2013年3月~2014年2月共752例样本,阳性样本107例,阳性率14.23%,其中包括副流感病毒24例(22.43%),合胞病毒55例(51.40%);腺病毒9例(8.41%);甲型流感病毒14例(13.08%),乙型流感病毒5例(4.68%)。2014年3月~2015年2月共994例,阳性样本172,阳性率17.30%,较2013年3月~2014年2月增长3.07个百分点,其中阳性样本包括副流感病毒44例(25.58%),合胞病毒73例(42.44%),腺病毒5例(2.91%),甲型流感病毒48例(27.91%),乙型流感病毒2例(1.16%)。同期四个季节相比,合胞病毒检出最多,以婴幼儿为主,流行于冬春季;副流感病毒主要分布在6~8月的夏季,偶有秋季,儿童和成人均易感,甲型流感病毒流行于冬春季,以儿童和老人为主。腺病毒和乙型流感病毒尚无明显季节流行性,成人及儿童均有检出;合胞病毒和腺病毒男性感染率大于女性(χ2=5.17、5.64,P0.05);副流感病毒甲型流感病毒和乙型流感病毒易感性性别差异无统计学意义(χ2=2.54、2.28、2.49,P0.05)。五种不同病毒季节流行性、易感人群、性别等因素的不同可为临床诊断提供参考依据。     

荧光定量RT-PCR技术在副流感病毒检测中的应用研究

目的:建立人副流感病毒的荧光定量RT-PCR快速检测方法。方法:根据GeneBank数据库中已有的人副流感毒株的HN基因核苷酸序列,用DNASTAR生物软件进行同源性分析比较,选出高度保守且特异的核苷酸区域,用Primer express5.0软件设计人副流感病毒的引物和TaqMan核苷酸探针。建立PCR反应体系,并优化反应条件。结果:建立了具有高度灵敏度和特异度的人副流感病毒的荧光定量PCR快速检测方法。结论:本研究建立实时荧光定量PCR检测方法可以快速的检测人副流感病毒,可以用于临床的早期诊断。     

呼和浩特地区婴幼儿急性呼吸道感染病毒病原学调查

婴幼儿急性呼吸道感染是一组发病率高并能危及生命的综合症.国内外研究证实,呼吸道合胞病毒(简称RSV)、腺病毒(Adv)、流感病毒(FLu)、和副流感病毒(plV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原,对它们开展早期快速诊断具有重要的临床意义.为了解呼和浩特地区常见呼吸道病毒所致疾病的流行情况,于1996年2月～1998年3月对临床诊断为急性呼吸道感染和肺炎的住院患儿首次进行了多种呼吸道病毒的病原检测.结果报告如下.     

儿童流行性感冒快速诊断与治疗

流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,流感病毒分为甲、乙、丙3种类型,其中甲型流感常突然发生,迅速蔓延,引起世界性的大流行,乙型流感病毒可引起局限小流行,丙型一般只引起散发,小儿多表现为上呼吸道感染.由于本病对人群尤其是儿童及老年人造成很大的伤害,因此应早期诊断,及时治疗.     

应用多重PCR技术快速检测临床标本中常见呼吸道病毒

[目的]应用多重PCR技术快速检测流感样病例和不明原因肺炎病例呼吸道标本中的常见呼吸道病毒,为急性病毒性呼吸道感染的监测和应急处理提供快速诊断手段。[方法]提取标本中病毒核酸RNA/DNA,反转录合成cDNA,多重PCR扩增目的基因,电泳检测扩增产物。[结果]从30份呼吸道标本中检出甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒3型和呼吸道合胞病毒A型。[结论]本研究初步验证了该多重PCR技术能用于快速检测流感样病例和不明原因肺炎病例呼吸道标本中的常见呼吸道病毒。     

2013年湖南省儿童医院住院患儿急性下呼吸道感染病原体分析

目的 了解湖南省儿童医院急性下呼吸道感染患儿常见非典型呼吸道病原的感染和流行情况,为临床诊断急性下呼吸道感染患儿提供病原学依据。 方法 采集该院2013年1-12月诊断为急性下呼吸道感染的1 726例住院患儿的血清标本,用间接免疫荧光法(IFA)快速检测和鉴定肺炎支原体、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒(1.2.3)、腺病毒、嗜肺军团菌、甲型流感病毒、肺炎衣原体、Q热立克次体九种非典型呼吸道病原体。采用χ²检验分析检出率的人群、季节、时间分布差异。 结果 1 726例患儿肺炎支原体检出率为56.78%,其次为乙型流感病毒19.99%、呼吸道合胞病毒12.40%、副流感病毒9.21%、腺病毒5.16%、嗜肺军团菌5.16%,甲型流感病毒2.43%,肺炎衣原体1.10%,Q热立克次体0.9%;其中肺炎支原体检出率存在性别差异(χ²=6.04, P<0.05);副流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体、腺病毒检出率存在年龄差异(P<0.05);肺炎衣原体检出率不存在季节差异,其它病原体在检出率存在季节差异(P<0.05)。副流感病毒、甲型流感病毒检出率5月达最高峰;Q热立克次体秋冬季未检出;肺炎支原体、乙型流感病毒1月是检出高峰。重复感染率22.25%,其中肺炎支原体合并其他病原体感染率高达16.3%。 结论 导致该院儿童急性下呼吸道感染的主要病原体是肺炎支原体、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒;肺炎支原体与其它病原体混合感染普遍。     

双重实时荧光PCR对流感病毒检测及分型方法的研究

目的:建立双重实时荧光PCR方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法:根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流感病毒检测和定量;针对HA基因设计引物和探针,用于病毒分型。建立和优化双重实时荧光PCR反应体系,进行敏感度和特异性评价,同时对32份已知亚型的流感病毒样本进行检测,验证所建方法的实用性。结果:基于M基因的实时荧光PCR方法定量范围为5×101到5×108个目的拷贝。经优化的双重实时荧光PCR方法对不同亚型流感病毒的检测灵敏度在50～500拷贝之间,各亚型之间没有交叉反应。建立的方法能够检测出本研究涉及的所有流感病毒标本,分型准确率达到96.9%。结论:建立的双重实时荧光PCR方法具有敏感度高,特异性好等优点,实现对流感病毒样本准确分型,适用于流感的鉴别诊断及病毒载量测定。