不同产地地榆饮片中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的含量测定及比较分析

目的测定不同地区地榆饮片中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的含量。方法采用Thermo Synoronis C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速为1.0 m L·min-1,检测波长为203 nm,柱温为35℃,流动相A为0.1%磷酸水,流动相B为乙腈,梯度洗脱。结果所选取的7个省18批地榆饮片样品中地榆皂苷Ⅰ含量在3.1%~7.7%,地榆皂苷Ⅱ含量在0.16%~0.87%,不同产地地榆饮片中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ含量存在差异。结论本方法精密度、重复性、稳定性都符合规定要求,适用于地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的含量测定;可将地榆皂苷作为地榆的质控指标之一,以填补药典无地榆皂苷含量测定的空白。     

Zeylenone抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及诱导凋亡作用研究

目的研究(4R,5S,6S)-4-苯甲酰氧基-6-[(苯甲酰氧基)甲基]-5,6-二羟基-2-环己烯-1-酮Zeylenone(Zey)对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察Zey对PC-3细胞和正常前列腺基质细胞WPMY-1的增殖抑制作用,应用平板克隆形成实验观察Zey对PC-3细胞克隆形成的作用,AO/EB荧光染色观察细胞形态、JC-1染色观察Zey对细胞内线粒体膜电位的影响,An-nexin V-FITC/PI双染检测凋亡细胞比率,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Caspase-7和PARP的激活及Bcl-2、Bax、Bid、Bcl-xL蛋白的表达。结果Zey可以明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,而对正常前列腺基质细胞WPMY-1的抑制作用显著低于PC-3细胞。Zey抑制PC-3细胞克隆形成并明显诱导其凋亡。线粒体膜电位检测结果显示Zey导致细胞内线粒体膜电位的明显降低,Western blot检测结果表明Caspase-8、Caspase-9、Caspase-7、Caspase-3被激活,PARP和Bid被剪切活化,Bcl-2、Bcl-xL表达下降,而Bax表达上调。结论 Zey可选择性抑制人非激素依赖性前列腺癌PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,作用机制与其对Bcl-2和Caspase家族蛋白的影响,从而诱导PC-3细胞发生内源性和外源性凋亡相关。Zey有望成为治疗前列腺癌的候选药物。     

人参皂苷compound K对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的探讨人参皂苷compound K（CK）对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖抑制和凋亡的影响。方法应用MTT法检测CK对K562细胞增殖的影响,用流式细胞仪分析细胞周期,DNA Ladder实验观察CK对K562细胞凋亡的影响。结果人参皂苷CK能显著抑制K562细胞的增殖,呈浓度依赖性,细胞阻滞于G2/M期;CK能诱导K562细胞的凋亡,呈浓度依赖性。结论人参皂苷CK具有抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用。     

重楼皂苷Ⅱ诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的体外研究

目的初步探讨重楼皂苷Ⅱ抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的作用及机制。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷Ⅱ作用于细胞后其存活率;DAPI染色观察细胞凋亡;AV/PI双染检测细胞凋亡率;比色法检测天冬氨酸蛋白水解酶caspase-3的活性;Western blot法检测Cyt-c的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,重楼皂苷Ⅱ可降低MGC-803细胞的存活率,且呈剂量与时间依赖性;镜下可见细胞核破碎,具有明显凋亡特征,凋亡率随着浓度的增大而增加(P <0.01);细胞内caspase-3的活性增加(P <0.01),Cyt-c蛋白的表达量明显增加(P<0.01)。结论重楼皂苷Ⅱ可明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖,并诱导细胞发生凋亡。     

凋亡抑制蛋白家族与肿瘤治疗的研究进展

1前言　　目前认为肿瘤治疗失败的主要原因是癌细胞对化疗、放疗及细胞毒T细胞和自然杀伤细胞介导的免疫疗法不敏感,事实上,这些看似不同的治疗方法是通过相同的生物学的机制即细胞凋亡的方式来消除肿瘤的.     

KTDA抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的探讨3-Keto-tirucall-8,24-dien-21-oic acid(KTDA)体外抑制肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察KTDA对肿瘤细胞的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察肿瘤细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳法检测它们对细胞DNA降解的影响。结果KTDA浓度为100、10、1μg.mL-1,作用72 h时,能抑制人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞株SMMC-7721、人慢性髓性白血病细胞系K562、人宫颈癌细胞系Hela、人舌癌细胞系Tca 8113的生长,并呈浓度依赖性。当KTDA浓度为10μg.mL-1时,处理72 h后,于荧光显微镜下观察到凋亡小体,电泳结果显示典型的DNA梯状条带。结论KTDA能抑制5种肿瘤细胞的增殖,并呈浓度依赖性,KTDA对MCF-7、SMMC-7721、K562、Hela比较敏感,Tca 8113次之,其机制可能为通过诱导5种肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤的作用。     

绞股蓝次级皂苷H诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用研究

目的 探讨绞股蓝次级皂苷H （Gypensapogenin H,GH）对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用。方法 采用5、10、20、40、60、80 μmol/L的GH处理人乳腺癌MCF-7细胞48 h后,MTT法测定GH对细胞增殖的影响;20 μmol/L的GH作用细胞24 h后,相差显微镜下观察细胞的形态学变化,DAPI染色,荧光显微镜下观察凋亡小体的形成;GH作用细胞6、12、24 h后,流式细胞仪测定细胞凋亡率;免疫印迹法检测GH对Bcl-2、Bax、Cytochrome C、Caspase 3等蛋白表达的影响。结果 GH抑制细胞增殖作用呈明显的浓度相关性,半数抑制浓度（IC₅₀）为（8.67±1.22）μmol/L;GH组细胞形态与对照组比较发生显著变化,主要表现为细胞皱缩、染色质浓缩、细胞核变形;细胞经DAPI染色后在荧光显微镜下可观察到有凋亡小体形成;随GH作用时间延长,细胞凋亡率明显上升,与对照组比较,GH作用12、24 h细胞早期凋亡率显著升高（P<0.05、0.01）;蛋白免疫印迹显示,与对照组比较,GH作用6、24 h Bax,6、12、24 h Cleaved Caspase 3和Cytochrome C蛋白水平显著增加（P<0.05、0.01）;6、12、24 h Bcl-2和12、24 h Caspase 3蛋白表达量显著减少（P<0.05、0.01）。结论 GH通过线粒体通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

促凋亡基因PUMA的研究进展及其与肿瘤的关系

PUMA(p53 upregulated modulator of apoptosis,p53上调凋亡调控因子)属于Bcl-2家族中的BH3仅有蛋白,可在包括基因毒性应激、癌基因无受控表达、毒素、氧化还原状态改变、感染及生长因子/细胞因子减少等多种应激诱发的细胞依赖p53及非依赖p53机制凋亡中起关键调节作用。PUMA主要机制是将各种凋亡信号传导给胞体内线粒体,线粒体经过各种过程间接作用于Bcl-2家族成员中的Bax和(或)Bak抑制凋亡作用,阻断抑制凋亡家族因子的抗凋亡作用。PUMA直接与所有已知的抗凋亡Bcl-2家族结合并对抗其阻断的线粒体功能障碍和caspase的激活,将细胞推向凋亡程序。PUMA基因的敲除或抑制会导致凋亡抑制,从而潜在的增加了癌症的危险性和治疗的对抗性。PUMA表达的上调可增加癌细胞对放化疗的敏感性,而抑制PUMA的表达可能会遏制组织损伤和退行性疾病细胞的过度死亡,因此PUMA是细胞死亡刺激的总体感应器,为肿瘤和组织损伤治疗提供了有重要意义的药物靶点方向。     

基于细胞凋亡机制的抗肿瘤药物研究进展

基于细胞凋亡机制的抗肿瘤药物的研究是发现新型抗肿瘤药物的重要策略。该机制中与肿瘤发生和发展相关的有死亡受体、Bcl-2家族、IAP家族、MDM2蛋白等，本文对近年来以这些蛋白和受体为靶标的抗肿瘤药物研究进展进行综述。     

细胞凋亡抑制蛋白(IAPs)与肿瘤治疗的策略

凋亡是维持机体稳定的重要过程，其功能失调与多种疾病的发生有关。IAPs家族蛋白参与凋亡的调节，与肿瘤的关系受到人们的关注。本对近年来IAPs家族蛋白和以其某些成员为靶点的抗癌策略的研究进展作一概述。     

MAPK信号通路对蟾蜍灵抑制Jurkat细胞增殖及诱导其凋亡的影响

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对蟾蜍灵(Bufalin)抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及诱导细胞凋亡的影响,初步探讨MAPK在蟾蜍灵治疗急性淋巴细胞白血病中的作用。方法WST-1法检测细胞的增殖活力,流式细胞术分析细胞凋亡。结果蟾蜍灵作用Jurkat细胞48 h,抑制细胞增殖50%的药物浓度(IC50)为44 nmol/L;5 nmol/L及以上蟾蜍灵以剂量依赖方式抑制Jurkat细胞增殖;20 nmol/L蟾蜍灵分别联合PD98059、SP600125,可显著增加对Jurkat细胞增殖的抑制,促进细胞凋亡;20 nmol/L蟾蜍灵联合SB203580作用于Jurkat细胞,可显著减少对Jurkat细胞增殖的抑制但对其凋亡无显著影响。结论 MAPK信号通路与蟾蜍灵抑制急性淋巴白血病Jurkat细胞增殖及诱导凋亡有相关性,表现为ERK和JNK促进增殖、抑制细胞凋亡;p38MAPK抑制增殖,但对凋亡无明显影响。     

凋亡抑制蛋白的研究进展

凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins．IAPs），是一类高度保守的内源性抗凋亡基因家族表达产物．广泛存在于许多物种如病毒、真核生物、哺乳动物中，起着抑制细胞凋亡的作用。目前已报道该家族成员有十多种，如NAIP、XIAP、Survivin、BRUCE和Livin等。IAPs主要有三个结构域（BIR、RING与CARD结构域），共有单位BIR域能与其它基序连接，非BIR区能使IAPs的功能多样化或调节IAP家族蛋白的表达。IAPs主要通过caspase蛋白酶激活级联反应途径及肿瘤坏死因子受体（TNFR）介导的信号转导途径抑制细胞凋亡，     

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。     

三七总皂苷通过线粒体途径抑制顺铂诱导的大鼠肾细胞凋亡

目的探讨三七总皂苷(PNS)通过线粒体途径对顺铂肾损伤大鼠肾组织细胞凋亡的影响。方法将36只♂SD大鼠随机分为空白对照组、顺铂模型组、顺铂+PNS组;在给药8 d后,检测大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和尿β-N-乙酰胺基葡萄糖苷酶(NAG)水平。采用HE染色观察病理变化,利用透射电子显微镜观察大鼠肾脏线粒体形态,采用原位末端缺口标记法(TUNEL染色)检测肾细胞凋亡情况,通过免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax、caspase-9的表达,并采用Western blot检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果与空白对照组比较,顺铂模型组大鼠血清Cr、BUN和尿NAG水平明显升高(P<0.01),肾小管上皮细胞线粒体损伤严重,肾组织的细胞凋亡率明显增加(P<0.01),肾组织Bax、caspase-9及Bcl-2表达均明显增强(P<0.01);与顺铂模型组比较,顺铂+PNS组血清Cr、BUN和尿NAG水平明显降低(P<0.01),肾小管上皮细胞线粒体损害明显改善,肾组织细胞凋亡率和Bax、caspase-9表达水平均明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达则明显增强(P<0.01)。结论 PNS可能通过增加抑凋亡蛋白Bcl-2表达,减少促凋亡蛋白Bax和凋亡相关蛋白caspase-9的表达来调节细胞凋亡,从而发挥保护顺铂肾损害的作用。     

甘露糖抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导凋亡的影响

目的 研究甘露糖抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导凋亡及其对Wnt/β-catenin通路的影响。方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分为对照组(未经任何处理)和低、中、高剂量实验组(用甘露糖浓度为5、10、25 mmol·L^-1处理细胞)。以细胞计数试剂盒8(CCK-8)和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,以蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞抑制率分别为(0.00±0.13)%、(11.25±3.42)%、(23.78±3.41)%和(35.98±4.52)%,凋亡率分别为(4.59±0.35)%、(11.45±1.32)%、(18.47±2.01)%和(25.69±2.43)%, p21蛋白相对表达水平分别为0.21±0.03、 0.34±0.04、 0.51±0.06和0.69±0.05, Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.89±0.06、 0.67±0.04、 0.52±0.05和0.35±0.06, Bax蛋白相对表达...     

安宫牛黄丸通过诱导细胞凋亡和降低线粒体膜电位抑制肿瘤细胞增殖

目的 观察安宫牛黄丸的抗肿瘤作用,并探索其可能的作用机制。方法 安宫牛黄丸9,30,90,300和900 mg·L^-1分别与人胃癌MGC-803和人肝癌BEL-7402细胞孵育24,48和72 h。采用噻唑蓝(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(3-羧基甲基苯基)-2-(4-磺酸苯基)-2H-四氮唑)细胞毒实验MTS法和克隆实验观察安宫牛黄丸对MGC-803和BEL-7402细胞增殖的影响;应用Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测线粒体膜电位。结果 安宫牛黄丸具有浓度依赖性地抑制肿瘤细胞增殖的作用。MTS法测定结果表明,安宫牛黄丸作用48和72 h对MGC-803细胞增殖具有抑制作用,浓度-效应相关系数分别为0.996(P=0.002)和0.756(P=0.024);与BEL-7402细胞作用48和72 h的浓度-效应相关系数分别为0.732(P=0.030)和0.702(P=0.037)。细胞克隆实验结果表明,安宫牛黄丸作用24 h可浓度依赖性地抑制MGC-803细胞(r=0.914,P=0.011)和BEL-7402细胞(r=0.871,P=0.024)克隆形成。Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测结果表明,安宫牛黄丸900 mg·L^-1作用24 h可诱导MGC-803和BEL-7402细胞凋亡,细胞凋亡百分率分别达27.2%和19.7%。安宫牛黄丸900 mg·L^-1作用后连续检测3 min,MGC-803和BEL-7402细胞的线粒体膜电位比对照组分别下降15.9%和15.0%。结论 安宫牛黄丸具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制与诱导细胞凋亡和降低肿瘤细胞线粒体膜电位有关。     

金喜素抑制JM细胞增殖并诱导其凋亡的流式细胞术分析

金喜素(topotecan,TPT)为喜树碱类化疗药物,可以选择性地抑制拓扑异构酶I(Topoisomerase I,Topo I)[1].以往的研究表明,该药物可以用于慢性粒单细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)和实体瘤[2～4]等的治疗.T淋巴细胞白血病在临床上多见于儿童,起病急,病情重,严重危害患儿的健康.JM为急性T淋巴母细胞白血病细胞株[5].金喜素对JM细胞株作用的研究未见文献报道.本研究旨在观察金喜素对JM细胞株增殖的抑制作用及其诱导该细胞株发生凋亡的作用.     

针对调亡抑制蛋白家族（Caspase抑制物）的肿瘤治疗新策略

恶性细胞在化疗、γ射线照射或内源性细胞毒性T细胞和NK细胞免疫监视等各种情况下都不死亡，这就是癌症发生或进展的根本原因。造成细胞不死的部分原因是凋亡过程中的Caspase活化缺陷。Caspase属于半胱氨酸蛋白酶家族，由上游的起始Caspase激活下游的效应Caspase，组成瀑式级联反应。Caspase的活化途径至少有4条：（1）线粒体活化途径，线粒体损伤导致细胞色素C的释放；（2）死亡受体途径，有死亡受体、肿瘤坏死因子家族（TNF）等的参与；（3）与内质网相关的途径；     

线粒体通路在大戟大枣汤对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及凋亡诱导中的调控作用

目的探讨大戟大枣汤(DEFSJ)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用及其相关机制。方法 SPF级SD大鼠每天2次分别ig给予溶剂(生理盐水)、DEFSJ 2.5,5.0和10.0 g·kg^-1,共3 d。末次给药1 h后,腹主动脉采血,分离制备DEFSJ含药血清(DEFSJ-CS)。乳腺癌MCF-7细胞分别用对照血清、DEFSJ-CS 2.5,5.0和10.0 g·kg^-1及紫杉醇8 mg·L^-1处理48 h。用甲基纤维素克隆形成实验检测细胞克隆能力;JC-1染色后激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Bcl-2,Bax和Bim mRNA表达水平;免疫荧光法检测Bcl-2,Bax和Bim蛋白表达水平。结果与含溶剂(生理盐水)血清对照组相比,DEFSJ-CS 2.5,5.0和10.0 g·kg^-1组及紫杉醇组人乳腺癌MCF-7细胞克隆形成率显著降低(P<0.05,P<0.01);MCF-7细胞线粒...