荧光聚合酶链式反应与酶联免疫吸附法筛查肠道病毒71型病原感染的比较研究

目的比较肠道病毒71型（EV71）核酸与EV71-IgM抗体检测两种方法对临床诊断手足口患儿的意义。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法对2011年4月20日-9月10日诊治的1 379例临床诊断为疑似手足口患儿进行肛拭子EV71核酸检测,同时用酶联免疫吸附法对血清标本进EV71-IgM抗体水平检测。结果 1 379例患儿EV71核酸的阳性为79例,阳性率为5.73%,EV71-IgM抗体阳性为82例,阳性率为5.95%,两者均阳性为32例。两检测方法一致率为95.2%,两者之间的阳性检出率差异无统计学意义（χ2=0.093,P=0.761）。结论应用EV71核酸及EV71-IgM抗体检测的两种联合监测,能更有效地提高手足口病患儿感染的诊断水平,对预防及对诊断手足口病有积极意义。     

2012年杭州地区手足口病病原体流行特征分析及临床意义

目的对2012年4月至9月手足口病（HFMD）流行期间对449例HFMD患儿的临床特点及病原学流行特征进行分析,旨在为手足口病的防治工作提供依据.方法收集449例手足口病患儿资料,用荧光定量RT-PCR法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）定量分型.结果449例HFMD临床诊断病例中,肠道病毒通用型阳性数为331例,包含203例EV71型和109例CA16型,肠道病毒总阳性率为69.5%（331/476）,其中EV71占42.6%（203/476）,CA16占22.9%（109/476）,EV71/CA16两者兼有者占3.8%（18/476）,非EV71、CA16的其他肠道病毒占4.6%（22/476）.2012年送检标本中EV71与CA16检出率的差异无统计学意义（χ^2=1.432,P=0.231）.结论2012年HFMD患儿以EV71型和CAl6型流行为主.而重症手足口病多发生于年龄〈3岁的儿童,且重症患儿基本为EV71型感染.故小年龄组HFMD患儿应成为HFMD流行期间重点监测对象,并给予积极治疗,以防止成为重症HFMD患儿,从而降低重症HFMD病死率.     

2016年湖北省部分地区手足口病肠道病毒病原谱及柯萨奇病毒A6型和A10型基因特征分析

目的 了解2016年湖北省部分地区手足口病病原谱特征,对其中的柯萨奇病毒A组6型（Cox A6）和A组10型（Cox A10）基因特征进行分析。方法 采集2016年湖北省部分地区手足口病患者阳性标本,提取病毒核酸,通过一步法反转录-PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对其中Cox A6和Cox A10的VP1全长序列进行同源性和系统进化分析。结果 病原学监测结果显示,肠道病毒71型（EV71）阳性率为29.4%（599/2 035）,柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）阳性率为25.7%（522/2 035）,其他肠道病毒阳性率为44.9%（914/2 035）。对该地区收集的83份肠道通用阳性的非EV71和非Cox A16进行病毒分型分析,Cox A6阳性检出率为56.6%（47/83）,Cox A10阳性检出率为22.9%（19/83）,还检测出其他肠道病毒如Cox A2（2株）、Cox A4（7株）、CB4（2株）、CB5（2株）、CB6（1株）、Echo5（1株）、Echo9（1株）和Echo25（1株）。对Cox A6和Cox A10的VP1基因同源性比对及系统进化分析显示,2016年湖北省22株Cox A6的VP1基因核苷酸同源性为95.1%~100.0%,11株Cox A10的VP1基因核苷酸同源性为95.2%~100.0%。我国与其他国家Cox A6和Cox A10可分别划分为8个（A~H）和7个基因谱系（A~G）。湖北省Cox A6与我国其他Cox A6位于H基因谱系上;湖北省Cox A10与我国其他Cox A10位于G基因谱系上。结论 2016年湖北省部分地区手足口病病原体除了EV71和Cox A16两种主要病毒外,还检测出Cox A6和Cox A10等手足口病的病原。其他肠道病毒中以Cox A6和Cox A10为主,仍需进一步加强对其他肠道病毒的监测和分子流行病学特征的分析。     

2010-2013年济南地区肠道病毒71型感染手足口病流行病学分析

目的 分析2010-2013年济南地区肠道病毒71型(EV71)感染手足口病的流行病学特征,为手足口病防控提供参考依据。方法 选取济南地区2010-2013年临床诊断为手足口病的病例为对象,采集患者发病1周内的粪便、咽拭子等标本,采用肠道病毒通用(PE)、EV71和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)特异性引物通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行病原学鉴定。结果 2010-2013年接受病原学检测的手足口病患儿共3351例(包括114例重症病例),2548例检测到肠道病毒(76.04%);其中EV71阳性1001例,占阳性病例的39.29%(1001/2548)。2010-2013年EV71阳性率分别为23.51% (190/808)、39.95%(334/836)、22.12%(190/859)和33.84%(287/848);重症病例EV71阳性率为80.70%(92/114),普通病例EV71阳性率为28.08%(909/3237),两者之间差异有统计学意义(2=131.9135, P0.01);重症病例中EV71阳性率显著高于其他病毒类型 (2=245.24, P0.01)。1001例感染EV71的手足口病患儿中,男女性别比为1.60:1;病例年龄主要集中于4岁以下儿童(84.42%),尤其是1~3岁年龄组(48.65%);重症病例男女比例更高(2.83:1),年龄以3岁以下幼童为主(89.13%),其中2例死亡病例均不到1岁。结论 济南地区不同年度EV71流行强度与趋势不同,EV71是重症及死亡病例的主要病原。     

西安地区儿童手足口病病原学分析

目的 对西安地区手足口病病原学进行分析调查,为手足口病防治提供科学依据.方法 采集2010年5月～6月432例临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型（EV）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CA16）.结果 EV阳性率82.87%（358/432）,EV71阳性率25.93%（112/432）,CA16阳性率21.06% （91/432）,EV71阳性率与CA16阳性率比较差异无统计学显著性意义（χ2=2.84,P〉0.05）.22例重症患者11例由EV71引起,2例由CA16引起.结论 西安地区手足口病病原以EV71和CA16多见,高发于4岁以下儿童,重症患者主要由EV71引起.     

手足口病相关肠道病毒感染血清IgM抗体交叉反应及动态变化

目的分析手足口病相关肠道病毒间IgM抗体交叉反应及动态产生过程,评价抗体捕获法检测肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CA16)感染的早期诊断价值。方法收集广州市妇女儿童医疗中心319名手足口病患者及疑似患者咽拭子319份、血标本565份。荧光定量PCR检测咽拭子标本,血清中和试验检测配对血清,结合两法结果为判断标准,将手足口病患者分为EV71、CA16及其他肠道病毒感染组;以捕获ELISA法检测不同发病时间EV71-IgM抗体及CA16-IgM抗体。结果发病第一天均能检测出EV71-IgM抗体及CA16-IgM抗体,阳性率分别为33.0%和25.0%,检出率分别在第5天和第7天达到100%,抗体可持续检出时间达数月。EV71感染血清CA16-IgM捕获ELISA法交叉反应率为25.0%,CA16感染血清EV71-IgM捕获ELISA法交叉反应率为28.0%。EV71-IgM和CA16-IgM抗体存在严重交叉反应,通过两者450 nm处吸光度(A450 nm)比值可以成功诊断97.1%EV71感染和93.0%CA16感染。同一天采集的肛拭子及血清标本检测结果表明,荧光定量PCR与ELISA法诊断EV71及CA16感染的结果差异无统计学意义。结论 EV71及CA16抗体捕获ELISA法是一种简单、有效的诊断方法,联合两种方法检测可以有效提高诊断特异性。     

天津市武清区健康人群EV71和Cox A16中和抗体阳性状况及影响因素分析

目的 调查天津市武清区健康人群肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16 型（Cox A16）中和抗体阳性状况及其影响因素,为手足口病的预防与控制提供依据。方法 采集230名天津市武清区健康人群静脉血标本进行 EV71 和 Cox A16 中和抗体测定,用问卷进行影响因素调查,采用2检验对两种中和抗体阳性影响因素进行分析。结果 以抗体滴度1∶8作为临界值,调查对象EV71中和抗体阳性率为73.91%（170/230）,Cox A16中和抗体阳性率为76.52%（176/230）,差异无统计学意义（2=0.420,P=0.517）。EV71 与Cox A16中和抗体阳性率最高的年龄组分别为0~岁组、15~岁组（均为76.09%）与0～岁组（84.78%）,较低年龄组为5~岁组（71.74%）与15～岁组（69.57%）。不同年份间的EV71中和抗体阳性率差异有统计学意义（2=29.971,P=0.001）。EV71与 Cox A16 中和抗体滴度均以1∶4~ 1∶256居多,分别占82.61%（190/230）和 88.26%（203/230）。经分析发现,EV71 与Cox A16中和抗体阳性的重要影响因素分别为年份、是否外出后洗手与是否为学龄前儿童。结论 人群对EV71和 Cox A16普遍易感,70.00%以上的健康人群感染后均可产生EV71 或 Cox A16的特异性中和抗体,隐匿感染者作为手足口病传染源的意义可能较大。     

粤东地区2011年手足口病病原学检测及临床分析

目的 了解粤东地区2011年婴幼儿手足口病的病原体分型情况及其与临床的关系.方法 采集2011年1月至12月汕头大学医学院第二附属医院儿科手足口病住院患儿的咽拭子标本,RT-PCR检测肠道病毒71型（EV71）,柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）,肠道病毒属,并对扩增产物测序鉴定.结果 301例患儿中有214例咽拭子中检测到肠道病毒,病毒阳性率为71.1%,其中EV71 60例,占28.0%,CoxA16 108例,占50.5%,除EV71、CoxA16外的其他型别肠道病毒为46例,占21.5%;91例患儿有明显神经系统损害,其中33例EV71检测阳性（33/60,55.0%）,35例CoxA16检测阳性（35/108,32.4%）,8例除EV71、CoxA16外其他型别肠道病毒检测阳性（8/46,17.4%）,15例肠道病毒检测阴性.除1例由EV71引起的的危重型手足口病死亡外其余300例均痊愈出院.结论 粤东地区2011年手足口病病原体主要为CoxA16、EV71,但CoxA16已经成为当年优势病原体,其他型肠道病毒也占有一定比率.而EV71最容易引起神经系统损害和导致重症及危重症,EV71、CoxA16及其他型肠道病毒均可引起神经系统损害.     

肠道病毒71型感染手足口病患儿的肠道排毒时间及传播机制的初步探讨

目的 探讨肠道病毒71型(EV71)感染手足口病患儿的肠道排毒时间及传播机制,为科学防控手足口病提供参考. 方法 采集咽拭子或粪便标本用实时荧光定量反转录聚合酶链反应法进行病毒核酸检测,对实验室确诊的65例EV71感染手足口病患儿进行追踪和随访,直至患儿大便病毒转阴为止.同时调查与58名EV71核酸阳性患儿有密切接触史家庭成员(每位患儿2名)116人,其中36人采集咽拭子,80人采集粪便标本.采集手足口病病区医务人员粪便标本31人,其中医生10人,护士21人. 结果 25例普通型EV71感染患儿第1~6周大便病毒核酸阳性率分别为100%、88.4%、59.4%、22.3%、22.3%、0,持续最长时间为6周.40例EV71重症组患儿第1～10周大便病毒核酸阳性率分别为100%、97.0%、79.5%、60.6%、35.3%、25.2%、16.8%、16.8%、8.4%、0,持续最长时间为10周.31名医务人员粪便未检出EV71及柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)核酸.80名有患儿密切接触史人员中,22份粪便标本EV71核酸阳性,占27.5%;36份咽拭子标本除1例EV71核酸阳性其余均阴性,阳性者均无自觉症状. 结论 EV71感染手足口病患儿恢复期肠道排毒时间长,成为隐性感染者,易造成手足口病流行和传播.建议延长手足口病患者,特别是重症手足口病患者管理时限.EV71感染手足口病患儿家庭成员易成为隐性感染者,可造成手足口病传播.     

502例手足口病患儿实验室检测结果的分析

目的观察手足口病患儿的实验室检测结果,并探讨其意义。方法收集502例(重症型104例,轻症型398例)手足口病住院患儿的咽试子标本,采用实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法对手足口病患儿肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)以及柯萨奇病毒A组16型(CA16)核酸进行检测。同时检测白细胞(WBC)、直接胆红素(DBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)并进行分析。结果 502例手足口病患儿中,EV、EV71、CA16感染阳性分别为384例(76.49%)、262例(52.19%)、39例(7.76%)。男性患儿多于女性患儿,104例重症型手足口病患儿中,EV71阳性率为92.31%;502例手足口病患儿中有402例3岁。104例重症型患儿有97例(93.27%)3岁;其中EV71阳性率92.78%(90/97)。重症型与轻症型相比,重症型手足口病患儿WBC、LDH、CK-MB、DBIL和ALT水平较高(P0.05)。结论手足口病患儿以3岁为主,感染的肠道病毒主要为EV,引起重症型的主要病原体为EV71。     

肠道病毒核酸与抗体联合检测在手足口病诊断中的应用价值研究

目的探讨肠道病毒71型(EV71)核酸与抗体联合检测在手足口病诊断中的应用价值。方法于2015年1-11月,将108例疑似手足口病患儿随机分为核酸检测组、抗体检测组和联合检测组,每组各36例。疱疹破裂渗出液病毒核酸检测采用逆转录聚合酶链反应法,血清病毒抗体检测采用酶联免疫吸附法,分析各组及不同症状患儿检测阳性率。结果核酸检测组阳性率最高(80.55%),抗体检测组阳性率最低(47.22%)。不同症状患儿中,皮疹患儿核酸、抗体及联合检测阳性率最高。结论 EV71病毒核酸及抗体联合检测可避免核酸单独检测阳性结果和抗体单独检测假阴性结果,有助于提高手足口病的诊断准确率。     

2011年广东省深圳市手足口病的病原学监测

目的 了解2011年广东省深圳市手足口病的病原构成情况,为科学防治手足口病提供实验室依据。 方法 对2011年哨点医院上送的临床诊断为手足口病病例的粪便标本,先用荧光RT-PCR进行肠道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)以及肠道病毒核酸检测,再对肠道病毒核酸检测为阳性的标本进一步用巢式RT-PCR(RT-Nested PCR)的方法扩增片段,PCR产物测序后,通过Blast软件进行分型。 结果 409例病例中,5岁以下占93.64%,主要集中在1~2岁年龄组;5-9月为发病高峰期,11月出现一个小高峰。EV71阳性142例,构成比为43.83%;Cox A16阳性53例,构成比为16.36%;非EV71、非Cox A16的其他肠道病毒阳性129例,构成比为39.81%;129例其他肠道病毒阳性标本中,95例的序列测定结果Cox A6有69例,构成比为72.63%;Cox A10有12例,构成比12.63%; Cox A12、Cox A9、Cox A2、Cox A4、Cox B2、Cox B4、ECHO2、ECHO14和ECHO18各有少部分病例。 结论 2011年深圳市手足口病最主要病原为EV71,Cox A6次之,Cox A16位居第3位,应加强对手足口病的病原学监测。     

2010年广东省深圳市首例手足口病死亡病例的病原学研究

目的 对广东省深圳市2010年首例临床诊断为手足口病死亡患儿的粪便和咽拭子标本进行病原体型别鉴定,从而追踪其病原的可能来源。 方法 先用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法检测病毒核酸,再用细胞培养方法从粪便和咽拭子标本中分离病毒,并将分离到的毒株提取核酸后,用普通RT-PCR方法分别扩增肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)的VP1区全长基因并进行序列测定,序列测定结果与不同国家和地区的肠道病毒株A、B、C基因型代表株进行同源性比较和进化树分析。 结果 该病例的2份标本均为EV71核酸阳性,Cox A16核酸阴性;毒株基因经过核苷酸和氨基酸同源性分析,确定该病例病原体为EV71 C4亚型。 结论 2010年深圳市首例手足口病死亡病例的病原体为EV71的C4亚型。     

2011-2012年杭州市手足口病的病原构成及肠道病毒71型的分子流行病学特征

目的 探讨杭州市手足口病病原谱构成及其肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)的分子特征。 方法 采集210例疑似手足口病感染者的粪便标本及其相关临床资料,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)方法进行初步检测,利用RT-PCR扩增部分EV71和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16, Cox A16)阳性样本VP1基因区并测序分析。 结果 荧光定量RT-PCR检测表明,210例疑似感染者的粪便中, EV71、Cox A16 和其他肠道病毒的阳性率分别为60.95%(128/210)、21.43%(45/210)和9.05%(19/210)。10株EV71病毒VP1区核酸序列与JX509922、JX509924、JX509926、JX509927、 JX509928和 JX509929的同源性最高为95.7%~98.0%,且均属于EV71中 C4a亚型。 结论 EV71和Cox A16是杭州市儿童手足口病的主要病原体。因此加强EV71和Cox A16的监测特别是EV71的检测,有助于更好地预防和控制手足口病。     

2011-2015年上海市长宁区手足口病聚集性疫情流行病学和病原学特征分析

目的 了解上海市长宁区2011-2015年手足口病聚集性疫情的流行特征,为开展更加科学有效的防控措施提供依据。方法 收集长宁区2011-2015年手足口病聚集性疫情数据信息,采用描述性流行病学方法进行分析。结果 2011-2015年长宁区共报告手足口病聚集性疫情227起,涉及病例839例,占总报告病例的24.47%（839/3 429）。聚集性疫情高峰集中在3-6月（51.10%,116/227）,主要发生在托幼机构70.93%（161/227）。疫情发生后1 d内报告的占16.30%（37/227）;疫情持续时间1~18 d,中位数为4 d,四分位数间距为2~6 d。疫情持续时间与措施反应时间呈正相关（r=0.318,P=0.001）。EV71引起的暴发高峰集中在5-6月,早于Cox A16和其他肠道病毒的流行高峰（6-7月）。聚集性疫情病原以EV71为主,占40.94%（70/171）;每个季度病原检出种类不同,差异有统计学意义（2 =13.799,P=0.032）。结论 及时开展手足口病聚集性疫情调查处置可有效减少疫情持续时间,长宁区手足口病不同流行期病原检出种类不同。建议5-6月应积极开展监测,重点关注EV71引起的聚集性疫情,警惕重症病例发生。     

2013-2014年浙江省奉化市手足口病患者及其密切接触者监测结果分析

目的 了解浙江省奉化市手足口病患者及其密切接触者病原分布情况,分析2013-2014年手足口病疫情和病原学监测结果,为手足口病防控提供科学依据。方法 每月采集手足口病患者5例及其15名密切接触者粪便标本检测肠道病毒,同时开展住院病例病原学监测,对2013-2014年病原学监测结果和手足口病疫情进行描述性流行病学分析。结果 2013-2014年奉化市手足口病发病率分别为225.99/10万和365.07/10万;街道发病率高于乡镇;发病率最高为1岁组。病例肠道病毒A组71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）和其他肠道病毒阳性率分别为20.94%、20.42%和38.74%;2013年优势病毒为其他肠道病毒（占61.00%）,2014年为Cox A16和EV71;EV71发病年龄大于其他肠道病毒（Z=-3.70,P=0.00）;肠道病毒阳性病例和阴性病例的密切接触者阳性率分别为48.44%和18.75%,差异有统计学意义;不同病毒阳性病例的密切接触者其他肠道病毒阳性率在44.96%～48.15%之间,差异无统计学意义;病例与密切接触者肠道病毒以同型为主（Kappa值0.53）;1～8岁密切接触者阳性率42.08%,12～66岁密切接触者阳性率31.73%,差异无统计学意义。结论 奉化市手足口病处于高流行态势,流动人口密集地区高发。多种病毒流行,优势病毒处于变化中,流行特征与病原体有关,病原监测有助于采取适当的防控措施,必要时应对其他肠道病毒开展进一步分型。密切接触者带病毒率高,应关注密切接触者管理。     

不同方法检测肠道病毒71型IgM抗体在手足口病诊断中的意义

目的：研究免疫层析法（ICA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测肠道病毒71型（EV71）IgM 抗体在手足口病诊断中的意义。方法采集135例手足口病确诊患儿和44例排除手足口病诊断的患儿血清标本,采用ICA及ELISA检测EV71 IgM 抗体。结果135例手足口病患儿,ICA、ELISA 检测 EV71 IgM 抗体阳性率分别为21．48％（29/135）和20．74％（27/135）;44例非手足口病患儿,ICA、ELISA检测EV71 IgM抗体阳性率均为0．00％（0/44）。结论ICA或ELISA检测EV71 IgM抗体阳性者均可确诊为手足口病,但检测结果为阴性者,不能排除手足口病的可能性,应结合临床表现进行诊断。