白念珠菌CDR1基因表达与氟康唑耐药的关系

目的了解在白念珠菌氟康唑耐药或敏感菌株中CDR1基因的表达情况。方法抽提氟康唑耐药／敏感菌株的RNA，采用Northern blot技术观察CDR1基因的表达。结果白念珠菌耐药菌株CDR1基因的表达量明显高于对应的敏感菌株。结论白念珠菌CDR1基因的高表达与氟康唑耐药有关。     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌。其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠茵。选择1个随机引物（引物1251），采用任意引物PCR方法基因分型。将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4．0软件转化为数值图表，利用SPSS11．5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定，多态性丰富，可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71．7％，而其中7株的耐药菌相似系数高达86．7％，远高于58株菌的平均相似系数（47.3铆。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。[结论]基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带。但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

白念珠菌对氟康唑耐药性的研究

目的:探讨白念珠菌对氟康唑耐药性的产生是否有适应性突变的因素.方法:选择对氟康唑敏感的白念珠菌野生Y0109株,将其在含8 μg/ml氟康唑的沙堡固体培养基上进行漂移试验诱导培养,计数其生长出的菌落并根据Cairns的理论进行曲线拟合.结果和结论:拟合出的曲线基本符合Poisson曲线分布特点,根据Cairns的适应性突变理论及判定方法,初步证实白念珠菌对氟康唑耐药主要是因药物本身的后天诱导作用,使该敏感白念珠菌发生了适应性突变而成为耐药菌株.     

白念珠菌CDR1基因上游调控序列与氟康唑耐药的关系初探

目的探讨白念珠菌耐药基因CDR1基因上游调控序列对氟康唑耐药的影响。方法分别抽提氟康唑耐药／敏感配对菌株DNA,通过特异性合成CDR1基因上游调控序列引物,分析该序列在氟康唑耐药／敏感配对菌株中是否存在基因突变。结果白念珠菌氟康唑耐药／敏感配对菌株中的CDR1基因上游调控序列未出现任何碱基突变和缺失。结论白念珠菌氟康唑耐药与CDR1基因上游调控序列是否突变无关。     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

 【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌,其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠菌。选择1个随机引物(引物1251),采用任意引物PCR方法基因分型,将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4.0软件转化为数值图表,利用SPSS11.5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71.7%,而其中7株的耐药菌相似系数高达86.7%,远高于58株菌的平均相似系数(47.3%)。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。【结论】基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带,但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

白念珠菌生物膜形成不同时期对氟康唑的敏感性

目的研究白念珠菌生物膜生长动力学特征，其不同时期对氟康唑敏感性的差异及经氟康唑预处理的生物材料表面对生物膜形成的影响。方法采用96孔微量培养皿进行白念珠菌生物膜的培养，用MTT法检测生物膜不同时期的活性及对氟康唑的敏感性。结果白念珠菌生物膜形成早期（8h）生长较快，当成熟生物膜形成后，生物膜活性则维持在一个较高的代谢水平，不再增加；早期（2h）的生物膜对氟康唑MIC50为2～4μg／m｜，中晚期（12～72h）生物膜MIC50均〉128μg／ml。与对照组比较，低浓度氟康唑（0．5～8μg／ml）处理的生物材料上生物膜活性差异无显著性意义（P〉0．05），高浓度氟康唑（32～64μg／ml）处理的生物材料差异有显著性意义（P〈0．05）。结论早期生物膜对氟康唑敏感性较高，中晚期则产生明显耐药。经抗菌性处理的生物材料对预防生物膜的形成有一定作用。     

Bp3抗耐氟康唑白念珠菌活性研究

目的研究五环三萜类活性单体（saikosaponines,Bp3）的抗耐氟康唑白念珠菌（fluconazole-resistant candida albicans,FRCA）作用及其与氟康唑的协同作用。方法对柴胡进行有效成分分离,并对其抗菌作用明确的成分进行结构测定,确定其分子结构,得到结构明确的单体Bp3,参照（national committee for clinical laboratory standard,NCCLS）标准,测定Bp3对20株FRCA的最低抑菌浓度值（minimal inhibitory concentration,MIC）及其与氟康唑的协同作用。结果联合用药时显著减少了每一药物的MIC值,在20株FRCA均表现为协同或相加作用方式。结论结构明确的五环三萜类单体Bp3对FRCA有一定的抑制作用,且与氟康唑有协同或相加作用。     

敏感和耐药白念珠菌磷脂酶活力与其毒力关系的研究

目的：探讨白念珠菌氟康唑耐药和敏感菌株磷脂酶活力与菌株毒力之间的关系。方法：根据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）制订的M27-A方案筛选临床分离的白念珠菌氟康唑耐药（MIC＞64μg/ml）及敏感菌株（MIC＜8μg/ml）各15株。用蛋黄平板法培养氟康唑耐药及敏感菌株,测量其产生沉淀圈的大小,计算菌落直径与沉淀圈直径的比值(PZ值),比较两组间磷脂酶活力的不同。从敏感和耐药菌株中分别选取磷脂酶活力不同的菌株,通过尾静脉注射感染小鼠,以小鼠平均存活时间比较耐药和敏感菌株毒力的不同。结果：15株耐药菌中12株产生特异沉淀圈,PZ值为0.786±0.055;敏感菌株中8株无特异沉淀圈,PZ值为0.913±0.078。耐药组和敏感组小鼠平均存活天数分别为(10.22±2.44)d和(12.83±1.51)d。耐药和敏感菌株磷脂酶活力差异有统计学意义（P＜0.01）;两组小鼠平均存活期差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：耐药菌株磷脂酶活力及毒力高于敏感菌株,白念珠菌分泌的细胞外磷脂酶活力及菌株致病性与白念珠菌耐药发生有一定关系。     

白念珠菌对山苍子油诱导性耐药反应的研究(摘要)

目的：探讨白念珠菌对山苍子油诱导耐药实验的反应情况，进一步评价山苍子油抗念珠菌的作用及临床应用价值．方法：(1)采用多步诱导法，观察在含梯度浓度(1～100MIC)山苍子油培养基上连续转种的白念珠菌BMU00270最小抑菌浓度(MIC)的变化情况，以氟康唑作为阳性对照，同时设空白对照和溶媒对照；(2)将     

白念球功对氟康唑耐药性的研究

目的 探讨白念球菌对氟康唑耐药性的产生是否有适应性突变的因素。方法 选择对氟康唑敏感的白球菌野生Ｙ０１０９株,将其估含８μｇ／ｍｌ氟康唑的沙堡固体培养基上进行漂移试验诱导培养,计数其生长出的菌落并根据Ｃａｉｒｎｓ的理论进行曲线拟合。结果和结论：拟合出的曲线基本符合Ｐｏｉｓｓｏｎ曲线分布特点,根据Ｃａｉｒｎｓ的适应性突变理论及判定方法,初步证实白念球菌对氟康唑耐药主要是因药物本身的后天诱导作用,使该     

Relationship between antifungal resistance of fluconazole resistant Candida albicans and mutations in ERG11 gene

Background The cytochrome P450 lanosterol 14a-demethylase （Ergllp） encoded by ERG11 gene is the primary target for azole antifungals. Changes in azole affinity of this enzyme caused by amino acid substitutions have been reported as a mechanism of azole antifungal resistance. This study aimed to investigate the relationship between amino acid substitutions in Erg11 p from fluconazole resistant Candida a/bicans （C. albicans） isolates and their cross-resistance to azoles. Methods Mutations in ERG11 gene were screened in 10 clinical isolates of fluconazole resistant C. albicans strains. DNA sequence of ERG11 was determined by PCR based DNA sequencing. Results In the 10 isolates, 19 types of amino acid substitutions were found, of which 10 substitutions （F72S, F103L, F1451, F198L, G206D, G227D, N349S, F416S, F422L and T482A） have not been reported previously. Mutations in ERG11 gene were detected in 9 isolates of fluconazole resistant C. albicans, but were not detected in 1 isolate. Conclusions Although no definite correlation was found between the type of amino acid substitutions in Ergllp and the phenotype of cross-resistance to azoles, the substitutions F72S, F1451 and G227D in our study may be highly associated with resistance to azoles because of their special location in Erg11p.     

微量稀释法检测四种药物对白念珠菌的敏感性分析

[目的]探讨特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑、制霉菌素体外抗口腔念珠菌的敏感性.[方法]采用NCCLS公布的M-27A方案微量液体稀释法分别测定特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑、制霉菌素对38株临床分离的口腔念珠菌的体外敏感性.[结果]38株白念珠菌对氟康唑耐药4株,敏感34株;对伊曲康唑耐药5株,敏感33株;对特比奈芬耐药15株,敏感23株;制霉菌素均敏感.[结论]4种药物中氟康唑的敏感性相对较高,但仍有耐药现象,且氟康唑与伊曲康唑存在交叉耐药.     

耐药白念珠菌主动外排泵蛋白的功能与基因表达

目的:研究耐药白念珠菌主动外排泵蛋白的功能及其基因表达情况.方法:微量稀释法测定4种抗真菌药物对20株白念珠菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);检测罗丹明分别在对氟康唑敏感和耐药的白念珠菌中的外排情况,筛选出罗丹明6G外排明显增加的耐药菌株;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测主动外排泵基因CDRI和CDR2的表达水平.结果:在加入葡萄糖提供能量后,有些对氟康唑耐药的菌株外排罗丹明6G增加,而在这些菌株中,主动外排泵基因CDR1和CDR2的表达水平均显著高于敏感株.结论:白念珠菌对氟康唑的耐药性与主动外排泵基因过度表达相关;测定白念珠菌中罗丹明6G的外排情况,是筛选主动外排泵基因过度表达的耐药菌株的一种有效方法.     

白色假丝酵母菌基因核型和药敏表型的相关性

目的:探讨临床白色假丝酵母菌基因核型和药敏表型的相关性。方法:应用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术分析14株白色假丝酵母菌DNA染色体核型;采用ATB FUNGUS2 INT检测白色假丝酵母菌最低抑菌浓度(MIC);菌种鉴定采用MicroScanWalkAway96 RY-ID快速生化鉴定板。结果:从11例患者的不同标本、不同时期分离出14株白色假丝酵母菌进行基因核型分析,共具有9种不同核型。14株白色假丝酵母菌中有2株对氟康唑耐药(MIC>128μg.mL-1),其他12株对氟康唑均敏感(MIC<8μg.mL-1)。结论:在本研究中,基因核型相同或不同的白色假丝酵母菌菌株对氟康唑敏感性不同,表明对氟康唑耐药菌株与敏感菌株基因核型没有显著差异。     

白色念珠菌在肺结核患者呼吸道中致病性的研究

目的 了解肺结核患者呼吸道标本中白色念珠菌的致病性并评价其分离的临床意义。方法 对100株临床分离的呼吸道白色念珠菌进行蛋白酶测定，并从高、中、低蛋白酶活力菌株中分别选2株作血管内皮细胞的细胞毒力和粘附性测定。结果 100株白色念珠菌全部检测出蛋白酶，其中高蛋白酶活力71株（71％）；中等活力18株（18％），低活力11株（11％）；细胞毒力试验表明蛋白酶活力越高，粘附能力越强，蛋白酶活力与毒力呈正相关（r=0．9946，P〈0．01）；细胞粘附试验表明蛋白酶活力越高，粘附能力越强，蛋白酶活力与粘附性直接正相关（r=0．9944，P〈0．01）。结论 蛋白酶是白色念珠菌的重要毒力因子，蛋白酶活力可直接反映其毒力，蛋白酶活力与其粘附性直接相关，肺结核患者呼吸道标本中白色念珠菌具有一定的致病性，临床应密切关注。     

菌丝相和酵母相白念珠菌ERG11基因部分序列差异性的研究

目的研究白念珠菌菌丝相和酵母细胞氟康唑作用的靶酶编码基因(ERG11)碱基序列上的差异,从而探讨两相细胞之间的差异性.方法分别抽提7株来自同一母体、依次对氟康唑逐渐耐药的白念珠菌菌丝和酵母相的基因组DNA,根据ERG11编码序列设计一对引物,对ERG11基因的第403位点至第701位点的298的碱基序列进行PCR扩增,经PCR产物直接测序比较两相ERG11基因碱基序列上的差异.结果7株白念珠菌的菌丝相与酵母相细胞间的ERG11基因碱基序列在该片断上无差异.结论菌丝相和在酵母相白念珠菌ERG11基因的部分碱基序列是无差异的.