蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用

目的 建立胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，鉴定差异表达蛋白，从中发现有意义的胃癌相关标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常胃组织总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或MALDI-TOF-TOF-MS鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的胃组织双向凝胶电泳图谱；发现23个差异表达蛋白质，其中15个得到鉴定，在肿瘤组织中高表达的有10个，其余5个在肿瘤组织中低表达。结论 建立了胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了15个差异表达蛋白质。     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

尿毒症患者血清蛋白质组份的双向凝胶电泳-飞行时间串联质谱分析研究

目的建立和比较尿毒症患者及正常人的血清蛋白质双向电泳图谱，寻找和鉴定尿毒症患者差异表达的血清蛋白质谱。方法以固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向和垂直十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）为第二向，分别对尿毒症患者和正常者血清蛋白质样品进行二维双向电泳，经银染显色和ImageMaster2D5、0软件分析凝胶图像，对有差异性表达的尿毒症者的蛋白质用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果成功获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了改变。将其中26个明显差异性表达的蛋白质点进行肽质指纹图谱和串联质谱分析，在International Protein Index（IPI）human数据库中检索，鉴定出其中20个蛋白。结论固相pH梯度双向凝胶电泳分离尿毒症患者血清总蛋白获得重复性较好的结果。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了明显改变，基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱分析鉴定的结果为尿毒症蛋白质毒素的研究提供了依据。     

胰腺癌血清相关蛋白质分子的差异表达

目的 利用双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)的方法建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常对照人群外周血清的差异蛋白质双向凝胶电泳图谱并分析差异蛋白质点.方法 双向差异凝胶电泳分离20例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者和20例正常对照组人群外周血清蛋白,比较不同血清中蛋白质表达的差异.结果 成功建立胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人之间的外周血清蛋白质双向差异凝胶电泳图谱,软件分析共发现了168个明显差异表达的蛋白质点,其中在胰腺癌组与正常对照组的比较中有22个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,29个蛋白质点下调;在胰腺癌组和慢性胰腺炎组的比较中有24个蛋白质点在胰腺癌血清中表达上调,54个表达下调;在慢性胰腺炎组和正常对照组的比较中有20个蛋白质点表达上调,19个蛋白质点表达下调.结论 双向差异凝胶电泳是快速有效的分离蛋白质新的方法,得到的双向差异凝胶电泳图谱以及显著表达差异的蛋白质点为质谱鉴定提供了实验基础.

Abstract：

Objective To analyze and compare the proteomes expressed by human pancreatic carcinoma, chronic pancreatitis and normal control groups. Methods Differencial expression of the proteomes in peripheral serum was analyzed by fluorescence 2-D difference gel electrophoresis (2D-DIGE). Results 2D-DIGE protein maps in 20 patients with pancreatic cancer, 10 patients with chronic pancreatitis and 20 normal controls were analyzed and 168 spots were identified by gel-analysis software. Between pancreatic cancer group and normal control group 22 protein spots were up-regulated and 29 spots down-regulated; 24 spots were up-regulated and 54 spots down-expressed between pancreatic cancer group and chronic pancreatitis group; 20 spots were up-regulated and 19 spots down-regulated between chronic pancreatitis group and normal control group. Conclusion 2D-DIGE was a rapid and efficient method to separate proteins. 2D-DIGE protein maps and different protein spots would provide an exprimental basis for the phase of mass spectrometry.     

前列腺高级别上皮内瘤和良性前列腺增生患者血清的蛋白质组学研究

目的：探讨双向凝胶电泳和质谱技术在前列腺高级别上皮内瘤（HGPIN）和良性前列腺增生（BPH）患者血清蛋白质表达研究中的应用。方法：用双向凝胶电泳分离HGPIN和BPH患者血清总蛋白；从胶上切下表达有差异的兴趣蛋白质点，经胶内原位酶解后，用质谱仪测得其肽质量指纹谱；然后通过数据库检索鉴定蛋白质。结果：成功获得了HGPIN和BPH患者血清蛋白质的二维凝胶电泳图谱；HGPIN银染胶上检测到1421-1532个蛋白质点，BPH银染胶上检测到1466-1778个蛋白质点。经过比对，选择了9个蛋白质表达量相差5倍以上的蛋白质点进行质谱分析，并发现促瘤基因Serum amyloid A的表达产物在HGPIN中表达而在BPH中表达微弱或不表达。结论：用蛋白质组学对HGPIN和BPH患者的血清进行研究是可行的。可为HGPIN的临床早期无创性诊断以及发展变化提供实验依据。亦为今后从更高的水平来寻找前列腺疾病的功能蛋白质和差异性蛋白质，阐明前列腺疾病相互发生发展的分子生物学机制等研究提供了有益的探索。     

前列腺癌骨转移血清蛋白质组学研究

目的:应用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术筛选前列腺癌骨转移血清标志物。方法:收集前列腺癌伴骨转移、不伴骨转移各5例血清样本。血清样品用除白蛋白试剂盒除去血清中的白蛋白后进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D Platinum软件分析,有意义的差异蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果:双向凝胶电泳显示,前列腺癌骨转移组血清蛋白中有15个斑点与前列腺癌无骨转移组有显著差异,前列腺癌骨转移患者血清中10个蛋白质表达水平显著增加,5个蛋白质表达水平显著下降。5个差异蛋白点进行胶内原位酶解,肽质量指纹图谱分析成功得到了3个蛋白质肽质量指纹图谱,并查询数据库初步鉴定了该3个蛋白质分别为锌α2糖蛋白、结合珠蛋白和载脂蛋白CⅢ。结论:双向凝胶电泳结合质谱鉴定是血清差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具。所鉴定出的蛋白质与前列腺癌骨转移的发生、发展有关,可能是前列腺癌骨转移潜在的血清标志物。     

胆管癌患者血清肿瘤标志物的筛查和鉴定

目的 通过双向凝胶电泳-质谱技术寻找胆管癌患者血清肿瘤标志物.方法 收集8例胆管癌和8例胆管结石患者血清,应用Albumin and IsG Removal kit去除其中的高丰度蛋白等成分,双向凝胶电泳技术分离血清蛋白样本,蛋白分离凝胶采用考马斯亮蓝染色,GPS Explorer~(TM)software凝胶图像分析软件对图像进行数据分析,通过基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术进行鉴定.结果 胆管癌和胆管结石患者血清双向凝胶电泳图谱中发现25个差异蛋白质点,20个差异蛋白质点获得成功鉴定,去除相同重复蛋白质后,有8种差异蛋白在胆管结石患者血清中高表达和7种差异蛋白在胆管癌患者血清中高表达.结论 胆管癌与胆管结石患者的血清蛋白中存在较多差异表达的蛋白质,利用双向凝胶电泳技术有望筛选出与胆管癌相关的肿瘤标志物.     

胃癌基因表达谱和蛋白质表达谱的分析研究

目的从转录组水平和蛋白质组水平寻找胃癌组织与正常胃组织间的差异表达基因和蛋白。方法应用含有14592个已知基因及表达序列标签的cDNA表达谱芯片获取基因表达谱信息．50％以上样本中Cy3／Cy5荧光强度比大于或等于2和小于或等于0．5的基因分别为在胃癌中表达上调或下调的基因。采用双向凝胶电泳（2-DE）分离32例经手术切除的胃癌患者的胃癌组织和正常胃组织总蛋白．对差异表达蛋白质点利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）进行分析．获取肽质量指纹图谱（PMF）。同时搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果与正常组织相比．胃癌组织中差异表达基因共有387个,其中表达上调的有149个基因．上调超过3倍的有29个基因：表达下调的有238个基因．其中下调超过5倍的有21个基因。在蛋白质水平鉴定了15个差异表达蛋白．在肿瘤组织中高表达的有10个．其余5个在肿瘤组织中低表达。胃癌中过表达的基凶与蛋白产物主要与细胞骨架运动、细胞增殖及信号传导有关．表达下调的则主要与细胞免疫防御、毒理代谢有关。结论从转录组水平和蛋白质组水平对胃癌基因表达谱进行分析．不仅有助于从分子水平全方位理解胃癌的发病机制及生物学特性．同时也有助于进一步发现新的胃癌相关标志物和基因治疗的靶点。     

利用二维胶内差示凝胶电泳技术检测胃癌的血清学肿瘤标记物

目的 分离胃癌、胃溃疡、正常人之间的差异蛋白质,检测胃癌的血清学肿瘤标记物.方法 从定量比较蛋白质组分析入手,利用二维胶内差示凝胶电泳技术(2D-DIGE)分离包括胃癌、胃溃疡和正常人共27例血清样本,以基质辅助激光解吸附电离串联质谱对差异蛋白点进行检测,检索Mascot数据库.结果 共检测出14个差异表达蛋白.正常人和胃溃疡比较有3种差异蛋白质,2种被鉴定出;胃溃疡和胃癌比较发现1个下调的蛋白质;胃癌与正常人中发现10个差异表达蛋白质,6个点在胃癌患者血清中上调.结论 2D-DIGE技术是一项有效的筛选胃癌患者血清中差异蛋白的技术手段,检测出的蛋白质有可能成为胃癌诊断的分子标记物.     

采用组织芯片技术分析胃癌组织中胃泌素和胃泌素释放肽的表达

目的研究胃癌组织中胃泌素(GAS)、胃泌素释放肽(GRP)的表达及其临床意义。方法采用组织芯片技术制作60例胃癌组织芯片,同时用生物素-链霉菌卵白素检测系统(SP)免疫组织化学方法检测胃癌组织芯片中GAS、GRP的表达。结果60例胃癌中GAS阳性率为30.0%;GRP阳性率为11.7%。中、低分化胃癌GAS、GRP阳性率高于高分化胃癌(P<0.05);印戒细胞癌GAS、GRP阳性率显著高于其他组织学类型胃癌(P<0.05);胃癌GAS、GRP阳性表达与淋巴结转移相关(P<0.05)。结论应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、方便、经济、准确的特点。     

Studies on antigen associated with human squamous cell carcinoma (SCC antigen) in patients with esophageal carcinoma

The authors studied on SCC antigen in patients with esophageal carcinoma. Serum SCC antigen was found in 9 (40.9%) of 22 patients with esophageal squamous cell carcinoma and 5 (55.5%) of 9 patients with lung squamous cell carcinoma, but was not found in other malignant diseases, such as gastric cancer, hepatoma, colon cancer, pancreas cancer and biliary try tract cancer. SCC antigen positive cases increased in association with progression of histological invasion, grade of nodal metastasis and clinical stage. However, in early esophageal carcinoma, SCC antigen was rarely positive. There was no positive case in patients with poorly differentiated squamous cell carcinoma regardless of clinical stage. Positive rate of SCC antigen increased in association with progression of clinical stage in patients with moderately and well differentiated squamous cell carcinoma. Immunoreactivity of SCC, which was investigated immunohistologically with TA-4 rabbit serum, was not found in cases with poorly differentiated squamous cell carcinoma, but was found in keratinized portion and cytoplasm of moderately and well differentiated carcinoma. From the above, SCC antigen is intimately related with keratinization of squamous cell carcinoma, and it was thought that it could be useful as a good marker for diagnosis of moderately and well differentiated squamous carcinoma of the esophagus.     

12岁少儿胃癌一例并文献复习

目的探讨少儿胃癌的诊断及治疗以提高诊疗水平。方法总结福建医科大学附属协和医院胃外科于2011年12月17日收治的1例经胃镜确诊的少儿胃癌患者的临床及病理资料;查阅1995年1月至2011年12月间发表的关于少儿胃癌的文献．具体检索福建医科大学图书馆网页MEDLINE、EMBBASE及The Cochrane Library等数据库．检索词为“Children／Pediatricgastriccancer／careinoma”：检索福建医科大学图书馆网页中文期刊全文数据库（CNKI）及中国生物医学期刊文献数据库（CMCC）,检索词为“少儿胃癌”;对少儿胃癌的发病情况、临床表现、治疗及预后进行分析。结果本例患儿12岁,女性。肿瘤位于胃体高位大弯侧近胃底部．予以腹腔镜辅助根治性全胃切除术（D2）,病理提示：胃体溃疡型印戒细胞癌,pT4N0M0,Ⅱb期。术后4d恢复肛门排气,术后9d出院。复习国内外文献共获取少儿胃癌病例15例,其中男7例,女8例,平均年龄12．7（2．5～17．8）岁。肿瘤位于贲门部5例．胃体部1例。胃窦或胃角部4例,胃窦及胃体部1例,未描述部位者4例。印戒细胞癌3例．低分化腺癌6例,中一低分化和中分化腺癌2例,黏液腺癌2例,不清2例。手术治疗11例,围手术期化疗8例。随访9例,半年内死亡4例,半年至1年内死亡4例;1例接受根治性手术和围手术期化疗的生存时间达102个月。结论少儿胃癌发病率极低,恶性度高、预后差,根治性手术是最重要的治疗手段,围手术期化疗可能有助于改善预后。     

早期胃癌直径、淋巴结微转移与组织MMP-7表达强度的相关性

目的:研究早期胃癌直径、淋巴结微转移与基质金属蛋白酶-7表达的相关性.方法:55例早期胃癌经黏膜颜色、术后病理证实为早期胃癌.用免疫组织化学法检测MMP-7的表达强度和淋巴结微转移.结果:直径大于20mm早期胃癌的MMP-7表达阳性率明显高于直径小于10 mm的病例(P＜0.045),亦高于直径10～20 mm病例的表达,但无统计学意义(P＞0.104).MMP-7的表达与胃癌的组织分型明显相关,低分化癌MMP-7的表达高于高分化癌(P＜0.015),亦高于中分化癌的表达,但无统计学意义.直径大于20mm早期胃癌的淋巴结转移率高于直径10～20mm的淋巴结转移率.结论:早期胃癌直径、淋巴结微转移与基质金属蛋白酶-7的表达相关,直径大于20mm患者MMP-7表达强阳性率和淋巴结转移率高.     

胆囊癌血清标志物的蛋白质组学研究

目的 分析胆囊癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,筛选胆囊癌血清分子标志物.方法 以6例健康人和6例早胆囊癌患者的血清为样本,图像分析两组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.Western blot和免疫组织化学方法检测差异蛋白质S100A10和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的表达.结果 建立了健康人和胆囊癌患者血清样品的二维凝胶电泳图谱,质谱鉴定出24种非冗余的血清蛋白质.Westernblot证实了S100A10蛋白和结合珠蛋白在胆囊癌患者和健康人血清中的差异表达.免疫组织化学证实胆囊癌组织中S100A10及结合珠蛋白高表达.结论 24种血清差异蛋白质为筛选胆囊癌的血清分子标志物提供了实验依据.