PNA与DNA探针对漏声表面波传感器特异性的影响

目的探讨以PNA作为杂交探针与普通的DNA探针相比,在漏声表面波生物传感器生物杂交反应中的优越性。方法用巯基固定法将PNA、DNA两种探针分别固定在漏声表面波生物传感器的金膜表面,分别与完全匹配、1个及2个碱基错配的靶序列进行杂交反应,观察两种不同的探针与靶序列反应所引起的相位变化及反应平衡时间。结果与DNA探针相比,PNA探针识别碱基错配的能力显著提高,且杂交平衡时间更短。结论 PNA探针可提高漏声表面波生物传感器的检测特异性。     

漏声表面波生物传感器液相检测系统的构建及检测HPV的实验研究

目的 建立漏声表面波生物传感器液相检测技术平台，并用该检测系统实时检测人乳头瘤病毒（HPV）。方法 构建检测和参比双路延迟线，并观察在液相中两路延迟线的相位变化规律；以人乳头瘤病毒为检测对象，用传感器检测系统对其进行实时检测。结果 两路延迟线的相位值在液相中发生不同的变化；检测HPV时，检测延迟线的相位值发生较大的变化，而参比通道的相位曲线变化不是很大。结论 成功构建了漏声表面波生物传感器液相检测技术平台，并实现对双链DNA病毒HPV实时检测反应。     

漏声表面波生物传感器直接快速检测病原体DNA的实验研究

目的应用漏声表面波生物传感器直接检测从临床标本中提取的HPV基因组DNA。方法选取36例临床确诊为宫颈癌的患者,提取其生殖器分泌物的基因组DNA,并经荧光定量PCR检测为HPV阳性的标本,以14例健康志愿者为阴性对照;利用漏声表面波生物传感器检测临床样本,并与荧光定量PCR法进行方法学比较。结果传感器法检测35例标本为阳性,阳性率为97.22%,而荧光定量PCR法检测36例均为阳性;14例阴性对照标本中,两种方法的检测结果均为阴性;传感器法的检测限为1.21pg/L。结论传感器法与荧光定量PCR法差异无统计学意义,一致性较好,且漏声表面波生物传感器实现了对临床标本中HPV基因组DNA的直接快速检测。     

探针浓度值对LSAW-bisPNA传感器检测系统的影响

目的探讨双体肽核酸（bisPNA）探针浓度值对漏声表面波（LSAW）-bisPNA基因传感器检测系统的影响。方法LSAW基因传感器表面分别固定终浓度为0.001、0.005、0.01、0.05、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0μmol/L的bisPNA探针后,分别观察其与相应的HPV靶序列杂交时相位变化及反应所需时间。结果与HPV靶序列杂交所引起的相位变化值是先升后降,以1.0μmol/L探针浓度为分界线;杂交平衡时间上各组间未见明显的变化趋势。结论1.0μmol/L bisPNA探针固定浓度最为适宜。     

漏声表面波生物传感器的研究现状及应用

生物传感器由于集高效、灵敏、特异、结构小巧、经济实用等优点于一身,目前已成为生命科学领域的研究热点[1]。它利用各种类型的换能器,将待测的生物信号转换为声、光、电等可检测的物理信号,从而实现对样本中靶生物分子的检测。随着声学技术的迅猛发展,近年来出现了一系列漏声表面波(LSAW)传感器,这种传感器广泛应用于测量温度、质量及液体密度等物理参数[2,3]。LSAW传感器是继陶瓷、半导体、光纤等传感器之后逐步发展起来的一种新型传感器[4,5],它综合了物理、材料、微电子、信号处理、工艺等众多学科知识,是一个技术密集的领域。1漏…     

离子强度对乙型脑炎病毒基因传感器检测系统的影响

目的 探讨磷酸盐缓冲液(PBS)中Na+浓度值对乙型脑炎病毒(JEV)基因传感器检测系统的影响.方法 漏声表面波(LSAW)基因传感器表面固定终浓度为1.0μmol/L的乙型脑炎病毒探针,然后分别在pH 7.6的10 mmol/L PBS缓冲液(含Na+浓度值0.1～0.6 mol/L)中和终浓度为1.0 μmol/L的JEV靶序列杂交,分别记录相位变化及反应所需时间.结果 杂交反应引起的相位变化是先上升后趋于缓和的趋势,以0.3 mol/L Na+浓度为分界线;杂交平衡时间同相位变化一致,当PBS中Na+浓度为0.3 mol/L,杂交反应的平衡时间为33 min.结论 随着Na+浓度的升高,杂交反应引起的相位变化呈典型的饱和曲线趋势,PBS中Na+浓度0.3 mol/L,杂交反应平衡时间33 min,是LSAW-JEV基因传感器杂交的最适反应条件.     

漏声表面波传感器检测HPV及传感器再生性研究

目的 应用漏声表面波(LSAW)生物传感器实时检测HPV,并对传感器进行再生性研究.方法 每次实验前分别用Piranha液、1 mol/L HCI和1 mol/L NaOH等溶液清洗传感器反应区域,在相同实验条件下,再生使用20次;探讨传感器的信号响应及再生性能.结果 再生使用5次时核酸杂交引起的相当于第1次的89.60%,变异系数为4.24%,再生检测10次时响应信号相当于第1次的71.56%,变异系数为10.14%;再生10次后传感器检测能力开始迅速降低.结论 LSAW生物传感器可以特异性地进行人乳头状瘤病毒(HPV)的快速检测,并具有较好的再生性.     

漏声表面波生物传感器检测系统构建时靶序列浓度的影响

目的 探讨新型的漏声表面波(LSAW)传感器检测系统构建时,人乳头状瘤病毒(HPV)靶序列浓度对其杂交效应和反应时间的影响.方法 LSAW传感器表面先固定上1.0 μmol/L的肽核酸(PNA)探针,观察终浓度为1 pg/L～1 mg/L的HPV靶序列DNA与探针进行杂交所引起的相位变化及反应所需时间,并对相位下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果 随着靶序列浓度从1 pg/L增加到1 mg/L,杂交反应引起的相位下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以100μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势;在1 pg/L～100μg/L的HPV靶序列浓度范围内,相位变化与靶序列浓度的线性回归方程为△P=2.3392 1gC+14.584,相关系数r2=0.9622.结论 随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的相位下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为:1 pg/L～100μg/L.     

利用自组装单分子层技术在传感器金膜表面构建DNA探针修饰电极的研究

目的在压电基因传感器阵列表面构建DNA探针修饰的金膜电极. 方法利用自组装单分子层(self-assembled monolayer, SAM)技术将5′端带有巯基的DNA探针共价交联到压电基因传感器的金膜表面,利用循环伏安计(circled voltammeter, CV),扫描隧道显微镜(scanning tunnel microscope, STM)分别观察探针交联前后金膜表面电化学表征及微观结构的改变. 结果 CV测量结果显示随着DNA探针在传感器金膜表面的吸附,界面电容减小;STM扫描结果更是直观地显示探针非常均匀、规整地在金膜电极表面形成一层SAM. 结论利用SAM技术可以很好地将DNA探针固定在压电基因传感器金膜表面.     

乐甫波传感器表面核酸探针修饰电极的构建

目的在乐甫波(love wave)传感器表面构建DNA探针修饰电极。方法利用共价偶联方法将3’端带有氨基的DNA探针交联到乐甫波传感器的膜表面，通过网络分析仪(network analyzer)，原子力显微镜(atomic force microscopy，AFM)观察探针交联前后传感器传输参数及微观结构的改变。结果液相条件下，乐甫波器件的传输参数S21与瑞利波器件的参数相比仍保持明显的主瓣，而随着探针在乐甫波传感器表面的吸附，相位发生变化。探针较均匀、规整地在膜电极表面形成一层敏感膜。结论乐甫波传感器可以直接用于液相检测，用共价偶联技术可以很好地将DNA探针固定在乐甫波传感器膜表面，为以后的乐甫波生物传感器的实验研究打下基础。     

纳米金标记DNA的生物传感器

目的利用纳米金标记DNA以提高传感器的检测灵敏度,为建立方便、快速、准确地检测食品中李斯特菌的方法提供依据。方法利用自组装法,将5′端巯基修饰的单链DNA固定在金电极上,然后与纳米金标记的探针进行杂交。结果传感器与标记有胶体金的探针杂交频率减少了207 Hz,与未标记有胶体金探针杂交频率(减少了52 Hz)相比提高了3倍。结论采用纳米金标记的探针可提高传感器的检测灵敏度,在食品安全检测中具有重要意义。     

基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的研究

目的在已构建的压电压电石英晶体DNA传感器检测系统中引入HRP-DAB生物信号放大系统,提高传感器的检测灵敏度,并基于该系统建立一种表皮葡萄球菌快速检测方法。方法采用自组装技术在压电石英晶体DNA传感器上固定针对表皮葡萄球菌的寡核苷酸探针,将掺入生物素(biotin)-dUTP的表皮葡萄球菌靶DNA与之进行杂交反应,加入HRP-链亲和素(streptavidin)、DAB工作液,观察反应频率变化;对35份表皮葡萄球菌感染的临床标本进行检测,并与传统培养法进行比较。结果该压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的灵敏度为95.5%,特异度为84.6%,正确诊断指数为0.801,检出限为2×102CFU/ml,与血培养法差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列,有效的提高了压电石英晶体传感器检测的灵敏度,可用于临床病原菌感染的快速检测,具有较高的临床推广价值。     

DNA生物传感器在“基因诊断”中的实验研究

为了建立石英晶体DNA传感器检测乙肝病毒基因的方法,在石英晶体金表面固定单链DNA,构成压电晶体HBV DNA生物传感器,与待测样品进行杂交反应.结果DNA传感器能准确的诊断血清中的HBV病毒基因.石英晶体HBV DNA生物传感器具有操作省时、简单,能用于临床实验、诊断、检测.     

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因型

目的 制备检测HBV基因型的DNA芯片并进行杂交验证.方法 设计多条HBV分型寡核苷酸探针,固定于醛基基片的特定位置,制备成芯片,采用酶呈色技术(BCIP/NBT显色)检测杂交信号,进行杂交验证分析.结果 106例临床样本均测出基因型,其中B型37例,C型69例;对所有样本进行测序分析,结果与芯片杂交一致,杂交的灵敏度和重复性等指标均佳.结论 DNA芯片检测HBV基因型,操作简便易行,技术要求不高,适于临床推广应用.     

基于自组装单分子层技术的压电石英晶体DNA传感器固定方法的研究

目的 探讨一种高效的压电石英晶体DNA传感器固定的方法。方法 分别采用常规自组装法（未还原探针法）与探针预先经过还原的自组装法（还原探针法），将针对铜绿假单胞菌的探针固定在DNA传感器的金膜表面，比较不同探针浓度下，探针固定和杂交反应所引起的频率的变化以及所用的时间。结果 与未还原探针法相比，还原探针法具有探针固定量大、反应速度快、频率下降明显等优点。结论 还原探针法提高了DNA探针的固定效率，优于未还原探针法。     

Distribution, gene sequence and expression in vivo of the plasmid encoded fimbrial antigen of Salmonella serotype Enteritidis.

The pefA gene which encoded the serotype associated plasmid (SAP) mediated fimbrial major subunit antigen of Salmonella enterica serotype Typhimurium shared genetic identity with 128 of 706 salmonella isolates as demonstrated by dot (colony) hybridization. Seventy-seven of 113 isolates of Typhimurium and individual isolates of serotypes Bovis-morbificans, Cholerae-suis and Enteritidis phage type 9b hybridized pefA strongly, whereas 48 isolates of Enteritidis hybridized pefA weakly and one Enteritidis isolate of phage type 14b failed to hybridize. Individual isolates of 294 serotypes and 247 individual isolates of serotype Dublin did not hybridize pefA. Southern hybridization of plasmids extracted from Enteritidis demonstrated that the pefA gene probe hybridized strongly an atypical SAP of 80 kb in size harboured by one Enteritidis isolate of phage-type 9b, whereas the typical SAP of 58 kb in size harboured by 48 Enteritidis isolates hybridized weakly. One Enteritidis isolate of phage type 14b which failed to hybridize pefA in dot (colony) hybridization experiments was demonstrated to be plasmid free. A cosmid library of Enteritidis phage type 4 expressed in Escherichia coli K12 was screened by hybridization for the presence of pef sequences. Recombinant clones which were deduced to harbour the entire pef operon elaborated a PEF-like fimbrial structure at the cell surface. The PEF-like fimbrial antigen was purified from one cosmid clone and used in western blot experiments with sera from chickens infected with Enteritidis phage-type 4. Seroconversion to the fimbrial antigen was observed which indicated that the Enteritidis PEF-like fimbrial structure was expressed at some stage during infection. Nucleotide sequence analysis demonstrated that the pefA alleles of Typhimurium and Enteritidis phage-type 4 shared 76% DNA nucleotide and 82% deduced amino acid sequence identity.     

Quantification ofCoxiella burnetii by polymerase chain reaction (PCR) and a colorimetric microtiter plate hybridization assay (CMHA)

A colorimetric microtiter plate hybridization assay (CMHA) for the quantitative determination ofCoxiella burnetii DNA after amplification by externally controlled polymerase chain reaction (PCR) is described. The quantification assay is based on an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) format. Cloned DNA, representing a sequence complementary to an internal part of the diagnostic amplicon, was noncovalently attached to the wells of a microtiter plate. Biotinylated PCR product was hybridized to the immobilized capture probe. Bound product was detected via streptavidin horseradish peroxidase. The devised nonisotopic technique allows specific, rapid, and convenient quantification ofC. burnetii DNA. Additionally, it is compatible with standard laboratory ELISA equipment, making this assay amenable to automation and permitting processing of large sample numbers.     

压电免疫球蛋白微阵列免疫传感器抗体固定方法的研究

目的构建一种新型压电免疫球蛋白微阵列免疫传感器,探索SPA法在金电极表面进行抗体固定的最佳条件。方法以AT切型、基频10MHz的金膜石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白单克隆抗体固定在石英晶体电极表面,根据SPA能通过分子间作用力与Au原子形成稳定的SPA-Au复合物的原理,对抗体进行固定,对SPA固定抗体的最佳温度及时间条件、抗体浓度、pH值等影响因素进行实验研究。结果包被SPA宜于采用低温、长时间的包被方式,进行抗体固定的抗体溶液最佳浓度5mg/ml,pH值7.2。结论采用SPA法在石英晶体表面进行抗体固定操作简单、省时,是压电免疫传感器抗体固定的有效方法。