石花菜提取物诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

研究石花菜提取物抑制宫颈癌HeLa细胞,并促进其凋亡的机制研究。方法：不同浓度石花菜乙酸乙酯提取物与HeLa细胞孵育后,MTT法检测细胞活性,Hoechst检测细胞凋亡,以及比色法检测细胞内Caspase-3活性。结果：石花菜提取物以时间及剂量依赖性的方式抑制HeLa细胞的生长增殖,降低细胞活性。Hoechst33258染色可见石花菜提取物作用后细胞核出现固缩、边集等凋亡现象。经石花菜提取物孵育,细胞内Caspase-3活性也比对照组显著升高（P<0.05）。结论：石花菜乙酸乙酯提取物可抑制宫颈癌HeLa细胞生长增殖,其机制可能是增强Caspase-3活性启动细胞凋亡,发挥其抗瘤作用。     

薯蓣皂苷对人结肠癌细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探究薯蓣皂苷（Dioscin）诱导人结肠癌HCT-116细胞、RKO细胞凋亡的作用及机制。方法:通过将体外培养的HCT-116细胞和RKO细胞分为对照组和不同浓度的药物组,采用CCK-8实验分析Dioscin对细胞增殖的抑制作用,可见分光光度法检测细胞LDH活性的变化;借助DNA含量检测法、Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测细胞凋亡情况;DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧簇（ROS）含量的变化;采用荧光探针法和可见分光光度法分别检测细胞超氧化物含量及细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化,Western 印迹法检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果: 在24 h、48 h处理时间下,与对照组相比,HCT-116细胞Dioscin组（2、4、6、8、10 μmol/L）、RKO细胞Dioscin组（5、10、15、20、25 μmol/L）都明显抑制了结肠癌细胞的增殖活性（均P＜0.05）,且HCT-116、RKO细胞经Dioscin处理后,细胞膜破坏,细胞LDH释放量较对照组增多（P<0.05,P<0.01）;与对照组相比,Dioscin作用HCT-116、RKO细胞后,DNA含量暴露增多（P＜0.05,P＜0.001）,细胞凋亡率上调（P＜0.001,P＜0.01）,ROS水平升高（P<0.05,P<0.001）,超氧化物含量增多（均P<0.001）,SOD表达降低（P＜0.05,P＜0.001）;Western 印迹结果表明,与对照组相比,Dioscin可以抑制HCT-116、RKO细胞蛋白p-Akt（P<0.01,P<0.001）、Nrf2（均P<0.001）、Bcl-2（均P<0.001）的表达,促进蛋白cleaved Caspase-9（P<0.001,P<0.01）的表达。结论:薯蓣皂苷可能通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路激活氧化应激反应,从而抑制结肠癌细胞生长,促进其凋亡。     

卵巢癌细胞诱导的CD8+T细胞凋亡与Caspase-3活性及细胞内钙的关系

目的 探讨卵巢癌细胞诱导CD8^＋T细胞发生凋亡，及Caspase-3与细胞内游离钙离子在CD8^＋T细胞凋亡过程中的作用。方法分别采用透射电镜、流式细胞术观察3株卵巢癌细胞（OVCAR3、CAOV3和SKOV3）的培养上清液诱导的CD8^＋T细胞凋亡和细胞周期变化；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和比色法检测CD8^＋T细胞Caspase-3mRNA的表达和Caspase-3活性；Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）。结果 经3株卵巢癌细胞的培养上清液分别作用后，CD8^＋T细胞被阻滞在G1／G0期，电镜下出现典型的凋亡改变，流式细胞仪检测见凋亡峰，细胞凋亡率增高；CD8^＋T细胞凋亡过程中Caspase-3mRNA的表达水平、Caspase-3的活性和[Ca^2＋]，均明显升高。结论 卵巢癌细胞能诱导CD8^＋T细胞凋亡，CasDase-3激活及细胞内钙超载在此过程中起雷要作用。     

石花菜提取物对宫颈癌细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的 探讨石花菜提取物对宫颈癌HeLa细胞凋亡及Caspase-3活性的影响.方法 不同浓度石花菜乙酸乙酯提取物与HeLa细胞孵育后,MTT法检测细胞活性,Hoechst检测细胞凋亡,以及比色法检测细胞内Caspase-3活性.结果 石花菜提取物以时间及剂量依赖性的方式抑制HeLa细胞的生长增殖,降低细胞活性.Hoechst33258染色可见石花菜提取物作用后细胞核出现固缩、边集等凋亡现象.经石花菜提取物孵育,细胞内Caspase-3活性也比对照组显著升高(P<0.05).结论 石花菜乙酸乙酯提取物可抑制宫颈癌HeLa细胞生长增殖,其机制可能是增强Caspase-3活性启动细胞凋亡,从而发挥其抗瘤作用.     

重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨

目的 探讨重组人可溶性TRAIL蛋白（rhsTRAIL）诱导细胞凋亡的机理。方法 应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡；流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局，荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。结果 100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性，但可诱导肿瘤细胞凋亡，不同的肿瘤细胞凋亡率有差异。凋亡范围在26%-57%。不同细胞表面TRAIL受体表达量不同，外周血淋巴细胞的死亡受体DR4，DR5受体表达5%，而诱骗受体DcR1表达55%，相反肿瘤细胞上的DR4，DR5表达高（40%——88%）。而DcR1表达很低（8%-17%），rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡，其细胞内Caspase-3活性增高，ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性。结论 重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡，凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关。     

Mppa介导的光动力疗法诱导人卵巢癌细胞凋亡

目的：探讨Mppa（methyl pyropheophorbide-a）介导的光动力疗法(Mppa-PDT)抑制人卵巢癌SKOV3细胞活性、触发其凋亡的机制。方法：Mppa-PDT作用于人卵巢癌SKOV3细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;DAPI染色观察细胞凋亡的核的形态学改变;DCFH-DA染色观察细胞内活性氧（ROS）的产生;单细胞凝胶电泳观察DNA损伤情况;Western blot检测P53、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达变化。结果：1.Mppa-PDT能显著抑制人卵巢癌SKOV3细胞的活性,其抑制作用具有一定的剂量依赖性（P<0.05）;2. Mppa-PDT诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡率显著高于对照组（空白对照、单药对照、单光对照）（P<0.05）,且空白、单药、单光三组对照组间凋亡率无明显差异（P>0.05）;3.LD50剂量的Mppa-PDT作用于人卵巢癌SKOV3细胞后,DAPI细胞核荧光染色可见到细胞核深染的凋亡细胞;DCFH-DA荧光染色发现Mppa-PDT组细胞内ROS水平高于三组对照组;单细胞凝胶电泳观察到Mppa-PDT组的DNA损伤情况高于三组对照组;Western blot检测发现P53、caspase-3、Bax蛋白升高,Bcl蛋白降低。结论：Mppa介导的光动力疗法能够显著抑制人卵巢癌SKOV3细胞活性并诱发其凋亡,且伴随有DNA损伤及线粒体凋亡途径的激活。     

双氢青蒿素通过调控MAPK/PI3K/Akt信号通路抗结直肠癌作用研究

目的：探讨双氢青蒿素（DHA）在体内对人结直肠癌（RKO）细胞的抗癌活性及体外机制。方法：将40只SPF级雄性裸鼠建立RKO荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组及DHA高剂量（200 mg/kg）、低剂量（100 mg/kg）组,每组10只;对比各组裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、血清肿瘤坏死因子（TNF-α）水平等;苏木素-伊红（HE）染色观察各组裸鼠肿瘤组织病理学变化;噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（25、50、100μmol/L）DHA干预0、24、48、72 h内对RKO细胞增殖的影响;流式细胞仪、Hoechst 33258检测（0、50、95、150μmol/L）DHA干预48 h后对RKO细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验观察95μmol/L DHA干预对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DHA对细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax） mRNA表达水平的影响;蛋白质印迹法（Western blot）检测DHA对细胞内Caspase-3、C...     

氧化应激在碘海醇诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的观察碘海醇诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡及氧化应激所起的作用。方法将体外培养的HK-2细胞分为4组：①对照组;②碘海醇组（100mgI/ml）;③N-乙酰半胱氨酸（NAC 10mmol/L）组;④共作用组：NAC10mmol/L预处理1h＋碘海醇100mgI/ml。各组以相应药物孵育6h。采用细胞增殖/毒性检测法（CCK-8）测定细胞存活率,核染色、流式Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光结合流式细胞法检测细胞内活性氧（ROS）的产生,IF、Western blot检测相关信号转导途径。结果碘海醇降低HK-2细胞存活率至（63±5%）（P〈0.01）,细胞凋亡率升至24.41%（对照组0.9%,P〈0.05）,细胞内活性氧升高至对照组的1.3倍（P〈0.05）。NAC预处理与碘海醇共作用后,HK-2细胞存活率比碘海醇组明显增高（118%vs.63%,P〈0.05）,凋亡率比碘海醇组明显降低（13.46%vs.24.41%,P〈0.05）,活性氧降为对照组的0.93倍,比碘海醇组（1.3倍）明显降低（P〈0.05）。碘海醇作用于HK-2细胞,引起p53磷酸化,上调凋亡相关蛋白（Bax）,下调Bcl-2的表达,促进线粒体内细胞色素C（CytC）释放到胞质,进而引起Caspase-3活化,导致细胞凋亡。NAC降低细胞内活性氧浓度,下调Bax、上调Bcl-2、减少Caspase-3活化,从而减轻细胞损伤。结论碘海醇引起的氧化应激在其诱导的HK-2细胞凋亡中起重要作用。     

白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的：探讨白藜芦醇（Res）诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,12．5,25,50,100,200,300,400和600μmol／L）Res处理24,48和72h对SiHa细胞的抑制率;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测细胞的凋亡率．荧光显微镜观测SiHa细胞的形态学改变．分光光度法检测Caspase-3活性．结果：Res在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞的生长（P〈0．05）．以0,200和300μmol／L Res处理细胞48h,SiHa细胞早期凋亡率分别为1．1％,8．9％和11．1％,晚期凋亡比例为3．1％,15．0％和14．0％．荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变．200μmol／L Res处理8h后,Caspase-3活性增加,24h达高峰,后逐渐下降,经50,100和200μmol／L Res处理24h后,Caspase-3活性与对照组相比,分别增加了1．92倍,2．51倍和4．53倍（P〈0．05）．结论：白藜芦醇通过诱导Caspase-3活性增加以时间依赖和浓度依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

失巢环境下肿瘤源性外泌体调控结肠癌细胞的增殖和凋亡相关机制研究

目的探讨失巢环境下肿瘤源性外泌体调控结肠癌细胞增殖和凋亡的相关机制。方法采用低黏附细胞培养板将结肠癌细胞系SW480培养建立结肠癌抗失巢凋亡细胞株。采用超速离心法收集抗失巢凋亡细胞和常规结肠癌细胞的外泌体,利用透射电镜观察外泌体的形态,采用Westernblot法检测外泌体标志物CD63和CD81的表达。采用CCK-8试剂盒、Edu试剂盒和AV-PI试剂盒检测在两种细胞源性外泌体的刺激下结肠癌细胞的增殖和凋亡能力。采用RT-PCR和Westernblot法检测细胞外信号调节激酶5（ERK5）、凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子（Bad）和半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的mRNA和蛋白的表达水平。结果透射电镜观察结果显示,外泌体为直径50~150nm的双层膜囊泡状结构。Westernblot结果显示,外泌体的分子标志物CD81和CD63表达阳性。失巢环境下提取的外泌体与结肠癌细胞共培养的过程中,可见结肠癌细胞可以摄取并内化PKH67标记的外泌体。抗失巢凋亡结肠癌细胞的细胞凝集能力要明显高于常规结肠癌细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8和Edu染色结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体与结肠癌细胞共培养后细胞的增殖能力要明显高于常规结肠癌细胞组（P＜0.05）。RT-PCR和Westernblot等结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞组的ERK5、Caspase-3和Bad的表达水平均明显低于常规结肠癌组（均P＜0.05）,而Bcl-2高于常规结肠癌组（P＜0.05）。AV-PI试剂盒检测结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体组细胞凋亡率明显低于常规结肠癌外泌体组（P＜0.05）。结论抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体可以通过ERK5信号通路促进细胞的增殖,抑制细胞的凋亡。     

蛇莓抗菌作用的实验研究

目的研究蛇莓的体外抗菌作用。方法测定蛇莓的体外最低抑菌浓度(MIC)。结果蛇莓对金黄色葡萄球菌等7种常见致病菌有较强的体外抑菌作用。结论蛇莓具有明显的抗菌作用。本实验结果显示蛇莓具有较高的临床应用价值。     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度〉40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

四藤方对人胃癌SGC-7901细胞抗失巢凋亡的影响

目的观察四藤方对人胃癌SGC-7901抗细胞失巢凋亡的影响。方法体外培养SGC-7901细胞,经MTT、CCK法检测不同浓度四藤方药液提取物对SGC-7901细胞增殖、失巢凋亡的影响,经流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果四藤方可显著抑制SGC-7901细胞增殖,并呈一定的时间与剂量依赖性;终浓度50、100、200μg·mL-1四藤方作用24h可抑制SGC-7901细胞悬浮生长,细胞存活率与对照组和同浓度细胞贴壁生长比较,差异均有统计学意义(P0.05);四藤方能促进SGC-7901细胞失巢凋亡,终浓度为100μg·mL-1四藤方作用24h后,悬浮细胞早期凋亡率高于同浓度贴壁细胞(P0.05)。结论四藤方可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导SGC-7901细胞失巢凋亡。     

GRP78对结直肠癌细胞RKO增殖的影响

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对结直肠癌细胞RKO增殖的影响。方法通过脂质体2000将靶向GRP78的质粒转入RKO细胞,Western—blot方法检测GRP78在RKO细胞中的表达,CCK-8方法检测细胞的增殖能力。结果转染后,与对照组相比,RKO细胞GRP78蛋白表达明显降低（F=115．17,q=5．41、15．29,P〈0．05）;同时,RKO细胞的增殖水平也明显降低（F=45．60,q=11．16、12．17,P〈0．05）。结论GRP78体外可促进结直肠癌增殖。     

醇沉金蝉花粗多糖对宫颈癌细胞的增殖抑制作用及可能机制

目的:研究醇沉金蝉花多糖对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响及可能机制.方法:采用水提醇沉法提取金蝉花多糖,Sevage法脱蛋白处理,获得50％和80％的醇沉金蝉花多糖(CP50、CP80).将人宫颈癌Hela细胞分为对照组(DMEM培养基)、CP50和CP80处理组(浓度为25、50、100、200、400、800、16...     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察姜黄素(Curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机理。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),与单纯MPP+处理组比较,20μmol/L Cur和不同浓度的MPP+同时处理PC12细胞24h后,细胞存活率显著升高(P<0.01);一定浓度的Cur对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可使MPP+处理组细胞凋亡率下降(P<0.01);20μmol/L Cur可抑制MPP+引起的PC12细胞△Ψm降低及细胞内ROS含量增多。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除ROS有关。     

重楼皂苷A直接靶向活化AMPK诱导结直肠癌细胞自噬

目的:探讨重楼皂苷A(Polyphyllin A,PPA)对结直肠癌细胞自噬的影响及其潜在机制.方法:选用结直肠癌RKO和HRT18细胞株作为细胞模型.用不同浓度PPA处理RKO细胞和HRT18细胞,MTT法检测细胞活力,筛选最佳实验浓度;集落形成实验检测细胞克隆能力;免疫印迹法检测微管相关蛋白LC3-Ⅱ表达、腺苷酸活...     

冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制

目的 研究冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对U251细胞的生长抑制作用;倒置显微镜法和荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Realtime PCR法检测冬凌草甲素作用U251细胞后的bcl 2、bax及caspase-3基因表达水平的变化。结果 冬凌草甲素对U251细胞有明显的生长抑制作用（P<0.05）,呈明显的时间和浓度效应关系。冬凌草甲素作用U251细胞24h后出现明显的细胞凋亡形态学改变。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡和坏死细胞数均增加,浓度越高,诱导细胞凋亡的作用越明显（P均 <0.05）。随着冬凌草甲素作用时间延长,U251细胞的bax和caspase-3基因的表达逐渐增强,bcl-2基因的表达逐渐减弱（P均<0.05）。结论 冬凌草甲素能诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,其凋亡机理可能与bax和caspase 3基因表达的上调,bcl-2基因表达的下调相关。     

脉络宁对MCAO 大鼠的神经保护作用及其抗氧化机制研究

目的：探讨脉络宁对大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠的抗氧化作用机制。方法：将18 只成年SD 大鼠随机分成假手术组（control）、模型组（MCAO）、脉络宁组（mailuoning）,每组6 只。采用线栓法建立大鼠MCAO 模型,缺血2 h 再灌注24 h。2% 2,3,5- 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染液测定大鼠脑梗死体积,荧光法测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）的含量,吸光度法测定脑组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量以及还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）,Western Blot 法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2 相关X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达量。结果：脉络宁能显著降低MCAO大鼠神经功能损伤,减少脑梗死体积;能够抑制脑组织中ROS含量以及MDA的生成,显著提高GSH 水平;能够抑制Bax、caspase-3 的表达,并增加Bcl-2 的表达。结论：脉络宁对MCAO 大鼠的保护作用可能与其抑制氧化应激及细胞凋亡有关。