Significance and Expression of Serum and Glucocorticoid-inducible Kinase in Kidney of Mice with Diabetic Nephropathy

To investigate the expression and the role of three isoforms of Serum and Glucocorticoidinducible Kinase (SGK) in experimental diabetic nephropathy (DN), 12 male C57BL/6 mice of 8-weeks-old were divided into two groups. Streptozotocin (STZ)-induced diabetic nephropathy and normal controls were analyzed at the end of the 4th week after the induction of diabetes. Renal hemodynamics and histological studies were performed. The expression of SGK1 mRNA, SGK2 mRNA and SGK3 mRNA of kidney cortex were measured by RT-PCR, and the cortical SGK1 protein was detected with Western blotting. Our results showed that the blood glucose, blood HbA1c, 24h urinary protein, creatinine clearance and the renal index were all increased in DN group. More extracellular matrix (ECM) accumulation was observed. The level of cortical SGK1 mRNA and protein were up-regulated in DN group in comparison with control group. SGK2 and SGK3 mRNA were elevated in DN mice. In DN, mRNA level of three SGK isoforms and SGK1 protein were increased significantly. It is concluded that SGKs may contribute to the early renal injury of DN.     

姜黄素对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制

目的： 探讨姜黄素对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏结缔组织生长因子( CTGF ) 表达和肾脏排泄功能的影响,阐明姜黄素对DN大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法：40只雄性SD大鼠分为正常对照组(n=12)和模型组(n=28),采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立DN大鼠模型,24只造模成功的大鼠随机分为模型组(n=12)和姜黄素组(n=12)。于用药8周末检测大鼠血糖水平、体质量、肾质量、肾质量/体质量、24 h尿微量蛋白清除率(UAER)和血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）水平;HE染色观察大鼠肾组织病理学变化;免疫组织化学法检测肾皮质CTGF蛋白表达强度。结果： 与模型组比较,姜黄素组大鼠一般情况明显改善,空腹血糖降低（P<0.01),体质量明显增加(P<0.01);与模型组比较,姜黄素组大鼠肾质量、肾质量／体质量、UAER、BUN和Scr明显降低（P<0.01）;与模型组比较,姜黄素组大鼠肾组织着色程度明显减轻,CTGF表达显著下降（P<0.01）;与模型组比较,姜黄素组大鼠肾小球肥大、系膜细胞增生、肾小球变形病变明显减轻。结论：姜黄素能明显改善大鼠肾脏功能,其机制可能与抑制肾脏CTGF表达有关。     

High Glucose Promotes the CTGF Expression in Human Mesangial Cells via Serum and Glucocorticoid-induced Kinase 1 Pathway

The role of serum and glucocorticoid-induced kinase 1 （SGK1） pathway in the connective tissue growth factor （CTGF） expression was investigated in cultured human mesangial cells （HMCs） under high glucose. By using RT-PCR and Western blot, the effect of SGK1 on the CTGF expression in HMCs under high glucose was examined. Overexpression of active SGK1 in HMCs transfected with PIRES2-EGFP- S422D hSGK1 （SD） could increase the expression of phosphorylated SGK1 and CTGF as compared with HMCs groups transfected with PIRES2-EGFP （FP） under high glucose or normal glucose. Overexpression of inactive SGK1 in HMCs transfected with PIRES2-EGFP- K127N hSGK1 （KN） could decrease phosphorylated SGK1 and CTGF expression as compared with HMCs groups transfected with FP under high glucose. In conclusion, these results suggest that high glucose-induced CTGF expression is mediated through the active SGK1 in HMCs.     

结缔组织生长因子在糖尿病大鼠肾脏中的表达及其意义

目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)在链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏中的表达及其与肾小球肥大的关系。方法 :将SD大鼠随机分为正常对照 (N)组与糖尿病肾病(DN)组。大鼠单侧肾切除后 ,腹腔注射STZ诱导糖尿病模型 ,观察第 4、8、12周血糖、体重、尿白蛋白排泄 (Ualb)和 2 4h尿蛋白定量 (2 4hUpro)的变化 ,同时观察 12周时肌酐清除率(Ccr)、肾小球面积及体积、肾重、肾组织总蛋白含量和肾皮质CTGF表达的改变。结果 :DN组 2 4hUpro、Ualb和Ccr较N组明显增加 (P <0 .0 1) ,肾小球面积及体积、肾重和肾组织总蛋白含量均较N组显著增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。免疫组织化学半定量检测结果显示 ,DN组肾皮质CTGF表达较N组明显增加 (P <0 .0 1) ,CTGF表达与肾小球体积及 2 4hUalb呈显著正相关关系 (均为P <0 .0 5 )。结论 :糖尿病大鼠早期肾脏CTGF表达增加可能是DN发生的重要机制     

氟伐他汀对糖尿病肾病患者血Ⅳ型胶原的影响及治疗作用观察

目的观察氟伐他汀对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者血清Ⅳ型胶原(Ⅳcollagen,CⅣ)的影响及对DN患者的保护作用.方法60例血脂正常的2型糖尿病患者根据尿微量白蛋白排泄率(urine albumium excretion rate,UAER)分为正常白蛋白尿组(A组)、微量白蛋白组(B组)、临床蛋白尿组(C组),分别检测血糖、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度酯蛋白(LDL),血肌酐(Cr),UAER和CⅣ.A、B、C组随机分为氟伐他汀治疗组和常规治疗组.结果糖尿病各组UAER、CⅣ均显著增高.相关分析表明CⅣ与Cr,UAER呈正相关.氟伐他汀治疗后UAER、CⅣ均显著降低.结论糖尿病肾病患者存在胶原代谢异常,氟伐他汀能抑制CⅣV合成,改善胶原代谢,保护肾脏功能.     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在糖尿病小鼠肾皮质中的表达变化

目的探索在糖尿病（diabetes mellitus，DM）肾脏病变进程中，血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（serum and glueoeortieoid—inducible kinase 1，SGK1）在肾皮质中的表达变化。方法采用链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）单次腹腔注射诱导小鼠DM模型，设DM组和正常对照（normal control，NC）组，在DM模型1、3、4、6和12周时，检测肾重指数、血糖和糖化血红蛋白（HbA1c），RT-PCR方法检测肾皮质SGK1 mRNA的表达，Western blot法检测肾皮质SGK1蛋白的表达，同时应用免疫组织化学技术检测肾皮质中肾小球的SGK1蛋白的表达。结果与NC组相比，从第1周末起到第12周末DM组小鼠肾重指数、血糖和HbA1c均显著增加；第1周末肾皮质SGK1mRNA和蛋白以及肾小球中SGK1蛋白的表达即开始上调，到第4周末肾皮质SGK1mRNA和蛋白表达达到顶峰，第6周至第12周仍有较高表达。结论随DM肾脏病变发展，肾皮质及肾小球中SGK1持续高表达，进一步提示它在DM肾脏病变进程中起重要作用。     

VEGF及CTGF在糖尿病大鼠肾脏中表达及作用的观察

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)及结缔组织生长因子(CGTGF)在糖尿病肾脏中的表达,探讨其在糖尿病肾病发展中的作用.方法 建立STZ糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组(CON组)、糖尿病模型组(DM组).12 w后分别检测血清中血糖、尿素及肌酐水平、尿蛋白排泄率、肾脏质量指数,免疫组化法检测肾组织(VEGF)及结(CTGF)的蛋白表达.结果 与CON组比较,DM组尿蛋白排泄率明显增加(P<0.01),血清中血糖、尿素、肌酐水平升高(P<0.05),肾脏质量指数增加(P<0.01),肾组织中VEGF及CTGF表达水平明显升高(P<0.05).结论 糖尿病大鼠肾脏损伤可能与VEGF及CTGF的过度表达有关.     

缬沙坦和氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对ICAM-1表达的影响

目的 从影响细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的角度，探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦和羟甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其可能机制。方法 通过链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型并进行分组，检测肾重、肾脏肥大指数、血糖、血脂、血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量，应用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）分别从蛋白及mRNA水平检测肾组织ICAM-1的表达，光镜及电镜下观察肾组织病理学改变，并应用计算机图像分析系统进行定量分析。结果 单药及两药联用组肾脏肥大指数、24h尿蛋白定量、血脂、血肌酐、尿素氮、肾组织ICAM-1表达均与糖尿病模型组有明显差异（P〈0．05或P〈0．01）。各治疗组肾脏病理改变有不同程度的减轻，以两药合用组减轻最明显。结论 ICAM-1参与了糖尿病肾病的发生和发展，氟伐他汀和缬沙坦均可降低糖尿病大鼠肾脏ICAM-1的表达，且两药联用对糖尿病大鼠肾脏具有协同保护作用。     

罗格列酮对糖尿病肾病大鼠肾脏结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨罗格列酮(RGZ)对糖尿病肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:大鼠随机分成治疗组、模型组、正常组(n=9)。治疗组、模型组大鼠用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病模型,均造模成功7只。治疗组大鼠于造模前24h行RGZ灌胃,模型组和正常组以等体积蒸馏水灌胃。12周后处死动物,观察肾小球病理学变化及细胞外基质(ECM)相对面积,用免疫组织化学法检测肾皮质CTGF的表达。结果:治疗组及模型组肾小球ECM相对面积及肾皮质CTGF表达水平均较正常组升高,但治疗组2指标均较模型组低(P<0.01);治疗组肾脏病理学改变较模型组减轻。结论:RGZ能改善糖尿病时肾脏的病理变化,延缓肾纤维化的发生,其作用可能与抑制肾组织中CTGF的表达有关。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏细胞因子表达的影响及意义

目的探讨氯沙坦治疗糖尿病肾病的作用及其机制。方法采用单侧肾切除的STZ诱导的糖尿病大鼠，观测其肾脏形态、功能的变化。同时，采用荧光实时定量RT-PCR方法检测TGF—β1、CTGF、PAI-1等细胞因子在糖尿病大鼠肾脏中的表达情况。结果与正常组（NC组）相比，8周时糖尿病肾病组（DN组）大鼠的肾脏肥大指数（KW／BW）、平均肾小球体积（VG）、尿白蛋白排泄率（UAER）、肌酐清除率（Ccr）均升高。DN组肾皮质CTGF、PAI—1、FN表达水平也显着增高（p〈0．05）；与DN组相比较，氯沙坦治疗组的上述指标则均明显下降（p〈0．05）。结论氯沙坦可通遏抑制TGF—β1、CTGF、PAI-1等细胞因子的表达，对糖尿病人鼠肾脏起到保护作用。     

Rg1、Rb1对糖尿病肾病大鼠肾结缔组织生长因子的影响

目的:探讨Rg1、Rb1对糖尿病肾病(DN)大鼠肾结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠75只,按体质量随机分为正常组10只,模型组65只。模型组大鼠按55 mg/kg体质量腹腔一次性注射链脲佐菌素,72 h后血糖≥16.7 mmol/L,尿糖≥4"+"者为糖尿病造模成功。将造模成功的大鼠按血糖高低随机分为模型组、厄贝沙坦组、Rg1大剂量组、Rg1小剂量组和Rb1组。用药12周,处死大鼠无菌取肾,行肾组织HE、Mallory染色,观察各生化指标和肾组织病理形态学改变,采用免疫组化方法分析肾组织CTGF蛋白的表达情况。结果:模型组肾组织表现为DN病理改变;正常组及用药组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有轻度CTGF表达,模型组CTGF则呈强阳性表达,Rg1、Rb1组CTGF表达较模型组明显减少(P<0.05)。结论:Rg1、Rb1可通过对肾组织CTGF蛋白表达下调而发挥治疗和预防糖尿病肾病的作用。     

大黄酸通过抑制 SGK1信号通路防治糖尿病大鼠肾纤维化

目的探讨大黄酸对糖尿病大鼠肾脏中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)表达及相关纤维化指标的影响。方法雄性Wistar大鼠分为3组:正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)、大黄酸组(R组)各8只,大黄酸剂量70 mg·kg-1·d-1。第8周末分别检测各组血糖、体重、肾重/体重、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率。免疫组化方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及纤维连接蛋白(FN)表达,Western Blot检测SGK1的蛋白表达,Real time RT-PCR检测SGK1 mRNA及CTGF mRNA水平。结果与DM组比较,R组血糖、肾重/体重、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率明显下降,病理检查发现R组较DM组系膜细胞及基质增生明显减轻。肾皮质SGK1 mRNA及CTGF mRNA水平在R组明显降低,免疫组化结果显示TGF-β1及FN均有不同程度下调。结论大黄酸可能通过抑制SGK1信号传导通路阻止糖尿病大鼠肾脏纤维化,延缓疾病向终末期进展。     

氟伐他汀与雷米普利联合治疗早期糖尿病肾病46例

目的观察氟伐他汀和雷米普利对糖尿病肾病(DN)患者的肾脏的保护作用。方法90例DN患者随机分为两组,治疗组46例,对照组44例,两组患者均给予糖尿病饮食、控制血糖和降血压等常规治疗,对照组给予雷米普利,观察组在对照组治疗的基础上给予氟伐他汀,两组疗程均为8周;于治疗前和治疗8周后检测两组空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、血肌酐(Scr)、尿微量白蛋白排泄率(UAER)和血浆脂蛋白(a)[Lp(a)],并进行比较。结果治疗后与治疗前比较,对照组TC、UAER显著降低(P<0.01),治疗组TC、Scr、UAER和血浆Lp(a)显著降低(P<0.05,P<0.01);两组治疗后比较,治疗组Scr、UAER和血浆Lp(a)显著低于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论氟伐他汀和雷米普利联合应用可以降低尿微量蛋白的排泄,减轻肾损害,改善肾功能。     

螺内酯联合百令胶囊对早期糖尿病肾病患者血清结缔组织生长因子和转化生长因子β_1表达的影响

目的探讨螺内酯联合百令胶囊对早期糖尿病肾病(DN)患者血清中结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平的变化及其对肾脏的保护机制。方法选择早期2型DN患者60例,随机分为观察组和对照组,每组30例。2组患者均严格控制血糖、血压、血脂,给予血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂减少蛋白尿;在此基础上,观察组患者给予螺内酯20 mg.d-1,百令胶囊每日3次,每次1 g,疗程12周。检测2组治疗前后24 h尿蛋白和血肌肝(SCr)水平的变化,酶联免疫吸附法测定2组患者治疗前后CTGF和TGF-β1水平的变化。结果治疗后观察组24 h尿蛋白、SCr、CTGF及TGF-β1水平较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),对照组24 h尿蛋白、SCr、CTGF及TGF-β1水平变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组患者24 h尿蛋白、SCr、CTGF及TGF-β1水平较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CTGF和TGF-β1水平升高可能参与了DN肾脏纤维化的发展,螺内酯联合百令胶囊可通过降低CTGF和TGF-β1水平延缓DN进展。     

2型糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及TGF-β1、HGF和CTGF表达的变化及意义

目的通过2型糖尿病肾病(T2DN)大鼠模型,探讨早期糖尿病肾病(DN)肾小管间质的病理变化及转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)和结缔组织生长因子(CTGF)表达变化及意义。方法高热量饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ),复制T2DN模型。14周和20周时用HE染色及PASM染色方法观察肾小管及间质的病理变化;用免疫组织化学的方法观察肾小管间质中TGF-β1、HGF和CTGF的表达变化,并进行半定量分析。结果模型组大鼠具有血糖异常、胰岛素抵抗及肾小球高滤过率、白蛋白尿等特点;部分肾小管上皮细胞萎缩、脱落、空泡化,基底膜增厚及小管间质纤维化。免疫组织化学方法提示TGF-β1和HGF14周及20周时在2组大鼠小管间质的表达差异有统计学意义(P<0.01);CTGF在2组大鼠肾小管间质有少量表达,差异无统计学意义。结论早期DN大鼠模型中肾小管间质已开始出现纤维化改变;TGF-β1、CTGF和HGF在早期DN的肾小管及间质中的表达发生变化,提示TGF-β1、CTGF和HGF在肾小管间质的表达失衡与DN肾小管病变的进展相关。     

通络方剂对1型糖尿病大鼠肾功能及肾脏CTGF、RAGE、p-ERK1/2表达的影响

目的观察通络方剂对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病大鼠肾组织CTGF、RAGE、p-ERK1/2表达的影响,并探讨其可能的肾脏保护机制。方法健康SD大鼠随机分为正常组(n=10)和造模组(n=50)。造模组大鼠给予单次腹腔注射STZ 60 mg/kg,造模成功后随机分为5组:糖尿病非治疗组,通络方剂低、中、高剂量组,氯沙坦组(n=10)。适应性饲养1周后,按分组不同每天分别给予不同处理因素,持续12周后处死,称体质量,测血肌酐、尿素氮,留24 h尿检测尿肌酐、尿蛋白、尿微量白蛋白,取左肾称质量,Real-time PCR法检测右肾组织中CTGF mRNA、RAGE mRNA的表达,Western印迹法检测右肾组织CTGF、RAGE、p-ERK1/2、Total-ERK1/2蛋白的表达。结果通络方剂中、高剂量组较糖尿病非治疗组能明显降低糖尿病大鼠血尿素氮、24 h尿蛋白、尿微量白蛋白、肌酐清除率,改善肾功能,降低RAGE mRNA、CTGF mRNA的表达,减少RAGE、CTGF、p-ERK1/2蛋白表达(P<0.05)。结论通络方剂可能通过抑制RAGE-ERK1/2-CTGF信号转导通路发挥对1型糖尿病大鼠的肾脏保护作用。     

糖尿病肾病大鼠CTGF异常表达及药物干预研究

目的 探讨缬沙坦和雷公藤多甙对糖尿病肾病大鼠结缔组织生长因子(CTGF)异常表达的干预作用.方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病组(DN组)、糖尿病肾病缬沙坦干预组(VAL组)和雷公藤多甙干预组(TG组).DN组、VAL组和TG组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病模型.于实验2、4、8、12周后分别处死大鼠,测定大鼠体质量、血糖、肾功能、尿白蛋白排泄率(UAER);RT-PCR检测肾脏CTGF mRNA表达.结果 与正常对照组相比,DN组大鼠血糖、血尿素氮、血清肌酐和UAER显著增高(P＜0.05或P＜0.01),肾脏CTGFmRNA表达增加(P＜0.01).VAL组和TG组除血糖外的各项检测指标均较DN组明显改善(P＜0.05或P＜0.01),而VAL组与TG组组间比较无显著性差异.结论 缬沙坦和雷公藤多甙对DN模型的干预效果相似,两者对糖尿病大鼠肾脏保护作用可能与减少肾脏CTGF表达相关.     

ALA对STZ诱导的DN大鼠肾组织中TGF-β1和CTGF表达的影响

目的探讨抗氧化剂α-硫辛酸（α-lipoic acid,ALA）对糖尿病肾病（DN）的肾保护作用及其对肾组织转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和结缔组织生长因子（connective tissue growth factorCTGF）表达的影响。方法建立STZ诱导的DN大鼠模型,给予ALA（35 mg/kg·d~（-1））腹腔注射预防性治疗,分别于第12周和第20周处死动物。检测血糖、肾功能、24 h尿蛋白定量,PAS染色观察肾组织结构改变,分光光度仪检测肾组织和血清中还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平,GSH/GSSG比值。免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1和CTGF表达。结果与对照组相比,第12周和20周DN大鼠血糖明显升高,24 h尿蛋白定量增高,肾小球滤过率增加。病理组织PAS染色显示肾小球系膜增生、肾小管上皮空泡变性等改变。肾组织匀浆及血清中GSH水平下降,GSSG水平增高,GSH/GSSG比值降低,肾组织中TGF-β1和CTGF表达明显上调。而ALA组24 h尿蛋白定量减少,病理改变减轻,GSH水平上升,GSH/GSSG比值增高,肾组织中TGF-Bl和CTGF表达较DN组明显下调。结论 ALA可通过增强谷胱甘肽活性,减少氧化应激而下调肾组织TGF-Bl和CTGF表达,进而改善DN大鼠肾组织结构和肾功能,在防治DN方面有良好的应用前景。     

苯那普利对糖尿病大鼠心肌CTGF基因表达的影响及作用机制

目的：研究苯那普利对结缔组织生长因子（CTGF）mRNA在糖尿病（DM）大鼠心肌中表达的影响及相关机制。 方法：用24只Wistar大鼠建立DM模型后,随机分为苯那普利治疗组及DM未治疗组,处理12周末检测血糖、血脂,应用放免法检测心肌血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量,应用RT-PCR检测心肌CTGF mRNA表达,并与正常组对照。 结果：DM未治疗组血糖、血脂明显增高,心肌AngⅡ含量及CTGR mRNA表达明显高于正常组和苯那普利治疗组（P<0.01）。结论：持续血糖增高能导致大鼠心肌AngⅡ含量增加和心肌CTGF mRNA表达增加,苯那普利能在一定程度上抑制大鼠心肌CTGF mRNA表达,其机制可能与其减少心肌AngⅡ含量有关。