顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用

目的建立新生昆明小鼠离体顺铂耳毒性模型,研究顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用。方法分离生后3d的昆明小鼠耳蜗基底膜,在含有1%牛血清白蛋白的DMEM/F12培养基中进行培养。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法观察不同浓度顺铂对小鼠耳蜗毛细胞的损伤,同时应用Hoechst 33258染色技术检测耳蜗毛细胞的凋亡。结果不同浓度顺铂均可使小鼠耳蜗毛细胞发生凋亡的形态学变化。顺铂浓度为4mg·L-1时,耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率明显增大,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。随着顺铂浓度的增高(8～64mg·L-1),耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率亦显著增大,呈现明显的量效关系(P<0.01)。结论应用新生昆明小鼠能建立可靠的离体顺铂耳毒性模型;顺铂可导致耳蜗毛细胞凋亡,提示凋亡可能是顺铂耳毒性机制之一。     

离体培养时bFGF对顺铂耳蜗毒性的拮抗作用

目的研究不同浓度的顺铂对耳蜗基底膜毛细胞的损伤、不同浓度的bFGF对顺铂耳蜗基底膜毛细胞损伤的保护作用以及caspase-9的表达。方法对耳蜗基底膜进行离体培养,用荧光染色方法对毛细胞数量和caspase-9的表达进行观察。结果在不同浓度中,15μg/ml顺铂对基底膜毛细胞损伤最大;bFGF浓度≥100 ng/ml时,对顺铂所致的基底膜毛细胞损伤具有良好的拮抗作用。结论顺铂对耳蜗基底膜上毛细胞的损伤具有剂量依赖性;bFGF拮抗顺铂所致的耳蜗基底膜毛细胞的损伤;caspase-9的表达与bFGF对顺铂耳蜗毒性的拮抗作用相关。     

顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞损害的形态及机理研究

目的：观察顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞的损害，并阐述一氧化氮（nitric oxide,NO）在其耳毒性机制中的作用。方法：将20只豚鼠随机分成两组，试验组腹腔注射顺铂0．5ml，对照组给予同等量的生理盐水，5天后做听性脑干反应（auditory brainstem respones,ABR)测听，此后处死动物，取出耳蜗，应用免疫组化技术、光镜及扫描电镜观察耳蜗毛细胞的损害。结果：试验组动物测试ABR听阈明显提高，光镜下见耳蜗毛细胞明显变性，诱导型一氧化氮合酶阳性染色，电镜下见毛细胞的纤毛散乱、倒伏甚至散失。结论：顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞有明显的损害作用，而O在其耳毒性机制中发挥着重要的作用。     

顺氯氨铂的内耳毒性实验研究

文献报道顺氯氨铂的耳毒性发生率为9—91％。其病理损害及临床表现与氨基甙类抗生素类似。至今对该药的内耳损伤作用部位及机制未明。本文采用豚鼠的纯音耳廓反射测定、内耳冰冻切片、铺片、扫描及透射电镜观察、耳蜗外淋巴液钾、钠离子测定,进一步认识顺铂的耳蜗及前庭毒性,并初步探讨其可能的致病机理,为防治顺铂的耳毒性提供一定的依据。     

一氧化氮在顺铂耳、肾毒性中的作用

目的:探讨一氧化氮在顺铂的耳毒性、肾毒性机制中的作用。方法:应用免疫组织化学的方法研究顺铂中毒对诱导型一氧化氮合酶活性的影响。结果:正常对照组豚鼠的耳蜗螺旋器、肾小球、肾小管的上皮细胞呈免疫组化阴性染色;而实验组的耳蜗螺旋器的内、外毛细胞,肾近曲小管、远曲小管的上皮细胞呈免疫组化阳性染色。结论:一氧化氮可能在顺铂的耳毒性、肾毒性中起重要作用。     

顺铂对豚鼠耳蜗损害作用实验研究

目的观察顺铂对耳廓反射正常的健康豚鼠耳蜗功能的损害作用，以探讨顺铂对豚鼠耳蜗毒性作用及其损伤机制，为防治顺铂耳毒性作用提供理论依据。方法将60只耳廓反射灵敏的健康豚鼠随机分成两组，顺铂组腹腔注射顺铂4mg／（k·d），1次／d，连续注射5d。正常对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水。实验前和实验5d后分别行耳廓反射和听性脑干反应测听。测定麻醉状态下豚鼠听觉脑干诱发电位，比较实验前后两组听觉诱发电位阈值及各波潜伏期、波幅变化。结果顺铂组豚鼠听性脑干反应测试听闽明显提高，各波潜伏期延长，波幅降低，甚至出现波形变异不易辨认，两组比较差异有显著性。结论顺铂可导致豚鼠耳蜗功能损害，表现为豚鼠耳蜗听性脑干反应阂值显著提高，各波潜伏期延长。波幅降低。     

顺铂肾损伤发生机制、早期诊断及防治研究进展

在肿瘤治疗中，铂类药物应用广泛，而顺铂是临床化疗最常用的药物，其疗效与剂量呈正比。但顺铂易引起肾毒性、胃肠道反应、耳毒性以及外周神经病变等多种不良反应，且随着剂量的增加，毒性作用亦增大。由于顺铂进入机体后主要经肾脏排泄，所以其肾毒性最为明显，成为其最重要的剂量限制性毒性。尽管目前诊疗手段大为改善，但单一剂量顺铂治疗后25％～30％的患者出现肾功能障碍，其主要原因是未能早期诊断和早期防治。近年来许多学者致力于顺铂肾损伤的发生机制、早期肾损伤标志物及早期防治方法的研究，其最终目的是早期诊断、     

熊果酸对顺铂所致耳蜗氧化损伤的防护及机制研究

【立论依据】 顺铂是目前公认一线抗癌药物,被广泛用于治疗肺癌、卵巢癌等恶性肿瘤。然而,顺铂能诱导耳蜗内TRPV1的高表达,进而促进ROS的过量生成并进一步引发脂质过氧化,最终使耳蜗细胞凋亡,导致听力丧失。已知熊果酸具有很强的抗氧化作用,可有效防护H₂O₂对HEI-OC1听觉细胞的破坏;并可有效抑制TRPV1的激活以发挥止咳作用。据此我们推测,熊果酸可通过抑制顺铂所致TRPV1的高表达、防止脂质过氧化,从而有效拮抗顺铂的耳毒性。 【设计思路】 应用免疫组化和免疫荧光染色、蛋白质印迹技术,结合听脑干反应(ABR)测试,研究熊果酸对顺铂所致耳蜗氧化损伤的防护作用及其机制;并选用人卵巢癌细胞株SKOV3进行体外培养,观察熊果酸对顺铂抗肿瘤作用的影响,为临床防护顺铂耳毒性提供新思路。 【实验内容】 (1)建立小鼠顺铂耳毒性模型,通过ABR测试和荧光标记,初步探明熊果酸对顺铂耳毒性的防护作用;并且选用SKOV3细胞株进行体外培养,观察熊果酸对顺铂抗肿瘤作用的影响,明确熊果酸的临床应用可行性。(2)建立小鼠顺铂耳毒性模型,应用ABR测试以评价听功能,免疫组化和免疫荧光染色、蛋白质印迹技术检测TRPV1、脂质过氧化产物4-HNE和caspase-3在耳蜗的表达,探讨熊果酸发挥防护作用的可能机制。 【材料】 成年BALB/c小鼠、人卵巢癌细胞株SKOV3、顺铂、熊果酸、抗TRPV1、4-HNE和caspase-3抗体、蛋白质印迹 检测相关试剂、细胞培养相关试剂等。 【可行性】 (1)本团队成员已熟练掌握本研究所需实验技术。(2)指导教师多年从事药物耳毒性机制与防护研究,可给予理论指导、仪器和技术支持。(3)预实验结果显示,熊果酸可有效拮抗顺铂的耳毒性,并且熊果酸不影响顺铂的抗肿瘤作用。 【创新性】 本研究首次阐明熊果酸可有效拮抗顺铂对小鼠耳蜗的氧化损伤,并进一步揭示了其发挥作用的可能机制,为临床防护顺铂耳毒性提供了实验依据。     

硒拮抗顺铂耳毒性作用的扫描电镜观察

扫描电镜观察了联合应用硒和顺铂后大白鼠耳蜗毛细胞的形态变化。发现单用顺铂组耳蜗毛细胞大片坏死脱落,联合用药组仅在3回有少量毛细胞倒伏,而与给药先后顺序无关。提示联合用药可减轻顺铂的耳毒性。     

熊果酸对顺铂所致小鼠耳毒性的防护作用研究

目的研究熊果酸对顺铂所致小鼠耳毒性的防护作用。方法 40只健康成年BALB/c小鼠随机分成对照组(腹腔注射等量生理盐水)、顺铂组(腹腔注射顺铂4.5 mg/kg)、顺铂+熊果酸组(一侧腹腔注射顺铂4.5 mg/kg,同时对侧腹腔注射熊果酸80 mg/kg)和熊果酸组(腹腔注射熊果酸80 mg/kg),每组10只。各组动物均连续注射5 d,每天1次。应用听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试,观察用药前后小鼠听功能的改变;并采用异硫氰酸四甲基罗丹明(tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC)标记的鬼笔环肽荧光染色方法,观察小鼠耳蜗毛细胞的形态变化。结果顺铂组小鼠ABR阈移较对照组明显增大(P<0.05),并且耳蜗毛细胞破坏严重;而给予熊果酸可有效降低顺铂对小鼠耳蜗的破坏(P<0.05)。结论熊果酸可有效防护顺铂的耳毒性,改善听功能。     

序贯疗法的顺铂耳毒性临床观察

序贯疗法的顺铂耳毒性临床观察丁军，张笑如河南医科大学第二附属医院耳鼻喉科郑州４５０００３关键词序贯疗法；顺铂；耳毒性顺铂（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）为临床上最常用的广谱抗肿瘤药物之一，也是目前头颈部恶性肿瘤化疗中的主要药物。但顺铂的毒副作用较多，其上要毒性...     

甲苯与顺铂联合作用对豚鼠内耳的损伤

究甲苯与顺铂对豚鼠听力的影响，发现甲苯或顺铂单独作用后可造成豚鼠一定程度的听力损失，甲苯与顺铂联合作用后，除高频区引起明显的听力损失外，中低频区听力更为明显，阈移大于甲苯和顺铂单独作用后阈移的总和，表明甲苯与顺铂联合作用后毒性效应呈协同或相加，耳蜗病理亦表明联合作用后外毛细胞总损较明显。     

碳铂对豚鼠耳蜗作用的实验研究（摘要）

碳铂对豚鼠耳蜗作用的实验研究（摘要）研究生梅建军，导师王文慧，员彭年（昆明医学院第一附属医院耳鼻喉科昆明６５００３２）为了从实验角度进一步探讨碳铂对内耳的毒性作用情况并与顺铂相比较，本实验给予豚鼠一定等毒剂量的碳铂和顺铂，在用药２０ｄ（１个疗程）后分...     

顺铂对豚鼠耳蜗外毛细胞钙激活的钾电流的作用的初步研究

目的：研究顺铂对豚鼠耳蜗外毛细胞的钙激活的钾电流的作用，方法：应用膜片钳技术从单离的逐鼠耳蚋外毛细胞获得钙激活的钾通道记录，并观察顺铂对它的作用，结果：结果表明该通道活动受到细胞外的浓度为10^-5M的顺铂的抑制，结论：豚鼠耳蜗外毛细胞的钙激活的钾通道是顺铂的作用位点之一。     

银杏叶提取物对顺铂耳毒性保护作用的实验研究

目的　研究银杏叶提取物对顺铂所致耳毒性的拮抗作用。方法　运用杂色健康豚鼠 2 7只 ,随机分为三组 ,I组为生理盐水组 (saline) ;II组为顺铂 (CDDP)组 ,造成损伤模型 ;III组为银杏叶提取物 (Egb +CD DP)组 ,通过观测 3组豚鼠不同时期脑干反应 (ABR)阈值的改变 ,耳蜗铺片外毛细胞形态学的改变及外毛细胞损伤率的比较。结果　银杏叶提取物可以减轻耳蜗外毛细胞的损伤率 (P <0 0 0 5 ) ,降低CDDP所致的听阈升高。结论　Egb对顺铂所致的耳毒性具有拮抗作用。     

顺铂对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的影响

目的 观察顺铂对豚鼠听力的影响及豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SCG)毒性作用的关系.方法 将20只耳廓反应灵敏的豚鼠随机分成两组,实验组连续5 d腹腔内注射顺铂3 mg/(kg·d),对照组连续5 d腹腔内注射生理盐水3 mg/(kg·d),给药后11 d检查耳蜗电图,然后处死动物,制作耳蜗标本,其中实验组中4只4耳做透射电镜观察、6只12耳做吖啶橙荧光染色,观察耳蜗螺旋神经节细胞的变化.结果 实验组动物耳蜗神经复合动作电位(CAP)阈值明显提高,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);实验组潜伏期延长,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).形态学检查见实验组髓鞘层变薄,结构稀疏,部分可见融合,细胞膜破裂,胞浆内线粒体结构模糊,粗面内织网脱颗粒,核内结构减少.结论 顺铂对豚鼠耳蜗螺旋神经节有明显的损害作用,是顺铂致耳毒性,引起听力下降的机制之一.     

蛋氨酸对化疗药物引起内耳损伤的保护作用

目的 研究蛋氨酸对化疗药物顺铂导致耳毒性的保护作用.方法 将30只昆明小鼠随机分为3组.顺铂组(n=10):给予顺铂3.5mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续7d;蛋氨酸+顺铂组(n=10):蛋氨酸300mg·kg-1·d-1腹腔注射,30min后给予顺铂3.5mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续7d;对照组(n=10):生理盐水3.5mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续7d.实验第8天,利用听觉脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)对3组小鼠进行听功能测试,然后迅速断头取出双侧内耳,解剖耳蜗基底膜,铺片并HE染色,普通光学显微镜下观察.结果 在ABR测试中,对照组小鼠实验前后听力无明显变化;顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比变化明显;蛋氨酸+顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比也出现变化,但变化程度较顺铂组明显减轻.光镜观察:对照组动物耳蜗基底膜外毛细胞排列整齐;顺铂组基底膜外毛细胞有不同程度的坏死、脱落,尤以底转缺失严重;蛋氨酸+顺铂组耳蜗毛细胞损伤较顺铂组明显减轻.结论 化疗药物顺铂对耳蜗毛细胞引起损害,而蛋氨酸对这种损害有较好的保护作用.     

中医药对顺铂耳毒性的防治作用研究进展

顺铂是临床上广泛应用的抗肿瘤化疗药物,耳毒性是其常见的毒副作用,患者常出现耳鸣、耳聋等症状,预防与缓解顺铂耳毒性逐渐成为亟待解决的问题.研究表明,中医药对顺铂产生的耳毒性有一定的预防和治疗作用.笔者从顺铂致耳毒性的中医认识、作用机制以及治疗策略综述了中医药对顺铂耳毒性的作用研究进展,以期为寻找缓解化疗药物毒副作用的策略...     

川芎嗪对顺铂耳毒性保护作用的实验研究

目的探讨活血化瘀中药川芎嗪是否对顺铂的耳毒性具有保护作用。方法将听力正常的30只豚鼠随机分为3组,每组10只。对照组：生理盐水3 ml/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂组：顺铂3 mg/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂加川芎嗪组：先腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）3天,从第4天起腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）后再注射顺铂3 mg/（kg.d）6天。给药前后通过听觉脑干诱发电位（ABR）检测豚鼠听功能的变化;然后在麻醉状态下断头取耳蜗,半数标本切片后用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测耳蜗内细胞凋亡情况;半数标本进行耳蜗基底膜铺片观察毛细胞形态及酶学变化。结果顺铂组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损,琥珀酸脱氢酶（SDH）活性减弱,有部分毛细胞凋亡,与对照组及川芎嗪组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。顺铂加川芎嗪组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损较轻,凋亡细胞较少,与顺铂组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论川芎嗪能降低顺铂的耳毒性。     

顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株细胞毒性的实验研究

目的：研究顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株(OS-732)细胞毒性的影响，探讨热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机理。方法：OS-732细胞株分别经不同温度的热疗、不同浓度顺铂化疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h，采用体外细胞毒性试验(MTT法)、流式细胞仪(FCM)分析及电子显微镜观察其对细胞毒性和细胞周期的影响，以及诱导细胞凋亡的情况。结果：41℃、43℃、45℃热疗对OS-732细胞株有明显的细胞毒性作用。在37℃恒温条件下，细胞株单独与不同浓度的顺铂作用1h，随着顺铂浓度的升高，其细胞毒性作用明显增加。43℃热疗 顺铂共同作用1h，其细胞毒性作用进一步增加，细胞毒性指数最高达72．37％；FCM分析显示对细胞周期有明显的影响，S期细胞比例明显增加，G2与M期细胞比例明显减少。43℃热疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h均出现凋亡细胞峰(亚G1峰)，细胞凋亡比例最高达56．47％；透射电镜观察有典型的细胞凋亡特征性变化。结论：顺铂热化疗有明显的增强OS-732细胞株的细胞毒性作用。43℃热疗、43℃热疗 顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡。43℃热疗诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。