结血蒿醇提物对小鼠脾细胞增殖和活化的抑制作用

目的:观察藏药结血蒿75%乙醇提取物对体外丝裂原刀豆蛋白 A（ConcanavalinA,ConA）刺激的小鼠脾细胞活化和增殖的抑制作用。方法:用ConA刺激小鼠脾细胞,分别用四甲基偶氮唑盐染色法（MTT法）,流式细胞术等方法观察结血蒿醇提物对细胞增殖和活化的作用。结果:结血蒿醇提物对体外ConA刺激的小鼠脾细胞的增殖和活化均有显著的抑制,作用呈剂量依赖性。结论:结血蒿醇提物可抑制ConA刺激的小鼠脾细胞的增殖和活化,提示其具有免疫抑制活性。     

四逆散药对及全方对刀豆蛋白A活化的小鼠脾细胞移动和粘附能力的影响

目的：考察四逆散药对及全方对刀豆蛋白A(Con A)活化的小鼠脾细胞移动和粘附能力的影响并就药对和全方的作用进行比较。方法：明胶酶谱分析检测基质金属蛋白酶的活性和结晶紫染色法检测细胞粘附能力。结果：四逆散药对及全方体外给药能明显抑制Con A活化的小鼠脾细胞分泌基质金属蛋白酶-2和9以及粘附Ⅰ型胶原的能力，但对正常小鼠脾细胞分泌基质金属蛋白酶-2和9无明显影响。在三个药对中，以柴胡-芍药的作用最为显著，并与四逆散全方的作用较为一致。结论：四逆散对体外过度活化的脾细胞移动和粘附能力有抑制作用，全方的这种作用主要由柴胡-芍药所担当。     

Forskolin对小鼠体外T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的：研究Forskolin对刀豆蛋白A（Con A）刺激的小鼠CD3^＋T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法：无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测CD3^＋T细胞早期活化标志CD69的表达水平;用羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色技术结合流式细胞术和CELLQuest、Mod Fit^LT软件,分析T细胞增殖情况;用碘化丙锭（PI）染色技术分析细胞周期分布。结果：加入终浓度为10^-7、10^-6、10^-5M的Forskolin,孵育8 h后,CD3^＋T细胞CD69的表达水平和平均荧光强度（MFI）与Con A组相比都有显著的降低,且呈梯度依赖性;对Con A刺激的小鼠CD3^＋T细胞的增殖指数（PI）也有梯度性抑制;对细胞周期的影响表现为：随着Forskolin浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,G2/M期的细胞也有少量减少。结论：Forskolin能有效抑制小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖,阻滞细胞从G0/G1期进入S、G2/M期。由此推断Forskolin在某种程度上是一种潜在的免疫抑制剂。     

柽柳水提物对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖反应的影响

目的 探讨中药柽柳水提物(Tamarix chinensis Lour.extract with water,TEW)的生物学活性.方法 采用MTT法检测了TEW对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖的作用.结果 无论有无ConA诱导,TEW均可刺激小鼠脾细胞增殖;高浓度的TEW对肿瘤细胞K562及TE13有一定抑制作用,而对于SK-OV3,BGC823及BxPC-3,PANC-1等基本无抑制作用.结论 TEW对小鼠脾细胞具有丝裂原样作用,但对肿瘤细胞的抑制作用甚微.     

真菌鳞齿菌醇提物的抗肿瘤活性的研究

目的：研究真菌鳞齿菌醇提物的抗肿瘤活性。方法：采用小鼠腋下接种肿瘤细胞法测定了鳞齿菌醇提物的抗肿瘤活性；采用MTT法测定了鳞齿菌醇提物对小鼠脾细胞的增殖活性。结果：鳞齿菌醇提物对移植性肿瘤（肉瘤H180和肝癌H22）具有显著的抑制作用，而对小鼠的脾细胞的增殖具有促进作用，并有较好的剂量依赖关系。结论：以上结果表明鳞齿菌有可能是通过增强机体的免疫能力来实现其抗肿瘤活性的。     

双嘧达莫对细胞免疫的抑制作用

 目的：观察双嘧达莫对小鼠免疫功能的影响。方法：采用小鼠末梢血白细胞计数，脾脏称重计算脾脏系数，测小鼠足垫厚度的差值确定小鼠迟发型超敏反应，用PHA和Con A 诱生的脾淋巴细胞増殖测定淋巴细胞转化功能，作为活化的小鼠脾细胞测定小鼠IL-2的活性。结果：双嘧达莫1,10,40 mg/kg抑制小鼠的迟发型超敏反应，降低小鼠末梢血白细胞计数和脾脏系数。双嘧达莫（Dip）1,10,100,1 000 μmol/L抑制PHA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化和Con A 诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应，Dip 1,10,100 μmol/L亦抑制小鼠脾细胞产生IL-2。结论：实验结果为Dip老药新用提供一定的理论依据，临床上Dip应用于一些免疫性疾病的治疗似有较大潜力。     

延龄草总皂苷体内外抗肿瘤作用研究

目的：研究延龄草总皂苷体内外抗肿瘤作用,并探讨可能的作用机制。方法：采用MTT法观察延龄草总皂苷对肺癌细胞（A549）的增殖抑制作用;分别以腹水型肝癌H22移植和实体瘤小鼠为模型,观察延龄草总皂苷体内抗肿瘤作用;利用流式细胞术检测延龄草总皂苷对A549细胞周期和线粒体膜电位的影响。结果：延龄草总提物和总皂苷对A549增殖有显著的抑制作用,其IC50分别为18.73、68.59μg/ml;在体内延龄草总提物和总皂苷对H22细胞的生长有明显的抑制作用,能延长小鼠的存活时间,抑制腹水生成,抑制肿瘤生长和提高荷瘤小鼠脾指数。流式细胞术表明延龄草总皂苷能够阻断A549细胞分裂于S期,同时使细胞线粒体膜电位降低。结论：延龄草总皂苷具有抗肿瘤作用,能诱导肿瘤细胞凋亡,在细胞早期能提高免疫功能。     

氧化苦参碱延长小鼠异体移植心肌存活期及其免疫机理的研究

本实验观察到肌肉注射氧化苦参碱具有明显延长小鼠异体游离移植心肌存活期的作用,并随剂量加大其作用增强。检查药物对移植和非移植小鼠的脾脏淋巴细胞转化和免疫球蛋白分泌细胞的影响。实验发现,移植术后10天小鼠体外脾脏细胞自发增殖增强,对刀豆蛋白 A(ConA)刺激的转化反应则明显减弱。氧化苦参碱显著抑制正常小鼠的脾细胞的自发增殖及对 ConA 或脂多糖(LPS)刺激的转化反应,而对手术已使之显著降低的脾细胞对 ConA 刺激的转化反应无影响。这种选择性抑制作用可能利于避免用其他常规非特异免疫抑制剂所带来的危害。     

玉屏风散对小鼠变应性接触性皮炎及脾淋巴细胞增殖的影响

目的：观察玉屏风散不同提取部位对小鼠接触性皮炎及脾淋巴细胞增殖的影响。方法：用二硝基氟苯诱导小鼠变应性接触性皮炎，观察玉屏风散不同提取部位对其的干预作用；用MTT法检测玉屏风散不同提取部位对小鼠脾脏T、B淋巴细胞活化增殖活动的影响。结果：玉屏风散水提液和醇沉液能减轻小鼠耳廓的肿胀程度但对免疫器官无显著的抑制作用；水提液能显著促进静息脾细胞增殖，醇沉液、挥发油及全方各组的高剂量亦有促进作用；水提液能抑制ConA诱导的脾细胞增殖，全方亦有抑制作用；各部份对LPS诱导的脾细胞增殖未观察到明显的影响。结论：玉屏风散对小鼠接触性皮炎有改善作用，不同提取部位对脾细胞的活化增殖的影响随细胞状态的不同而有所差异。     

中药复方益气消征方对体外小鼠脾细胞增殖作用的影响

目的观察中药复方益气消征方（YQXZF）对体外小鼠脾细胞增殖作用的影响。方法取不同浓度益气消征方体外作用于小鼠脾细胞,采用MTT比色法测定小鼠脾细胞的光密度值。结果益气消征方对小鼠脾细胞有促进增殖的作用,在益气消征方浓度为3μg/ml时促进增殖作用最明显。结论中药复方益气消征方具有体外促进小鼠脾细胞增殖的作用。     

罗红霉素对迟发型变态反应的抑制作用

目的：探讨罗红霉素对迟发型变态反应及其相关细胞的影响。方法：整体实验：以绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠迟发型变态反应（DTH）。离体实验：分离培养小鼠脾细胞和大鼠腹腔巨噬细胞，采用M3T比色法测定细胞数；以Gness法测定细胞释放的NO水平。结果：罗红霉素10和20mg／kg于效应相经口给药显著地抑制了SRBC诱导的迟发型变态反应，并使因SRBC免疫增高的淋巴细胞体外存活率恢复至正常水平；罗红霉素在体外能浓度依赖性地抑制ConA所致的脾淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞释放NO；体内给药显著地抑制了脾淋巴细胞对ConA的增殖反应能力。结论：罗红霉素对SRBC-DTH有显著的抑制作用，其抑制效应可能与降低脾淋巴细胞的存活、增殖及巨噬细胞释放NO等有关。     

Inhibition of microglial neurotoxicity by ethanol extract of Artemisia asiatica Nakai

Artemisia asiatica Nakai has been used for the treatment of infections and inflammatory disorders in traditional Oriental medicine. Previously, an ethanol extract of A. asiatica has been shown to exert antioxidative and antiinflammatory activities and to exhibit protective effects against experimentally induced damage in the gastrointestinal system, liver and pancreas. This study examined whether the ethanol extract of A. asiatica affects inflammatory activation of microglia in the central nervous system, and whether the antiinflammatory activity of A. asiatica is related to neuroprotective effects. The extract of A. asiatica inhibited inflammatory activation of mouse microglial cells as determined by the production of nitric oxide and the expression of inducible nitric oxide synthase and inflammatory cytokine. The extract also protected nerve growth factor-differentiated PC12 cells against microglial cytotoxicity, indicating that the ethanol extract of A. asiatica may be neuroprotective by inhibiting microglial neurotoxicity.     

对藏药甘青青兰4种提取物抑菌作用的研究

目的：研究藏药甘青青兰4种不同提取物对4种临床常见标准菌株的抑菌活性。方法：通过体外抑菌实验,用琼脂扩散法测定甘青青兰4种提取物有无抑菌活性。结果：甘青青兰（炒制）水提取物、生药材水提取物、生药材乙醇提取物在一定浓度（0.15 g/mL,0.2 g/mL）对金黄色葡萄球菌有抑菌或杀菌作用,甘青青兰（炒制）的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌无抑菌作用。高浓度甘青青兰（炒制）的水提取物和乙醇提取物对铜绿假单胞菌有抑菌作用,且乙醇提取物的抑菌效果更好。结论：甘青青兰提取物对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌有确切的抑菌作用,对大肠杆菌和粪肠杆菌无抑菌作用。     

Anti-inflammatory effects of an ethanolic extract from Clematis mandshurica Rupr

Clematis mandshurica Rupr (Ranunculaceae) roots are used in traditional Korean medicine to treat inflammation-related diseases. Therefore, we undertook to investigate their inhibitory effect on inflammation under non-cytotoxic conditions. The ethanolic extract of Clematis mandshurica at 100 microg/ml was found to significantly block the production of the pro-inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and prostaglandin E(2) (PGE(2)), in lipopolysaccharide (LPS)/interferon(IFN)-gamma-stimulated mouse peritoneal macrophages, by up to 77% and 59%, respectively. In addition, it significantly inhibited cell proliferation and cytokine production (interleukin (IL)-2 and IFN-gamma) in splenocytes stimulated with Con A (concanavalin A; 5 microg/ml). Furthermore, when splenocytes from extract fed mice (200 mg/kg for 2 weeks) were activated with Con A, cell proliferation and the production of IL-2 and IFN-gamma were significantly inhibited. In addition, the extract reduced in vivo inflammation in oxazolone-induced delayed type hypersensitivity (DTH) model mice. Taken together, these data suggest that Clematis mandshurica is able to ameliorate inflammatory disease by exerting an anti-inflammatory effect in cases of proinflammatory and cell-mediated inflammation.     

Anti-inflammatory and immunosuppressive effect of flavones isolated from Artemisia vestita

Aim of the study

Artemisia vestita is a common traditional Tibetan medicinal plant which has been used widely in China for treating various inflammatory diseases. Since little is known about its active components, the purpose of this study was to isolate and identify the immunosuppressive compounds from Artemisia vestita.

Materials and methods

A bioassay-guided isolation was performed with picryl chloride-induced contact hypersensitivity in mice. MTT assay and Flow cytometric analysis were used for determining Con A-induced lymphocyte proliferation and CD25 expression in T cells, respectively.

Results

The ethanol extract of the Artemisia vestita was found to possess significant inhibitory activity against the picryl chloride-induced contact hypersensitivity in mice. Then 4 fractions were isolated by macroporous adsorption resin and one of these fractions (AV3), which showed the highest activity in in vivo test, was further subjected to column chromatography. Nine known flavones were isolated and identified as pectolinarigenin (1), jaceosidin (2), cirsilineol (3), cirsimaritin (4), hispidulin (5), quercetin (6), 6-methoxytricin (7), acacetin (8), and apigenin (9). The structures of the 9 flavones were elucidated by spectral techniques. All the compounds were evaluated for their inhibitory activity on the proliferation and activation of T cells in vitro. Among the 9 flavones, cirsilineol (3), 6-methoxytricin (7) and apigenin (9) significantly inhibited T cell proliferation and activation in the bioassays.

Conclusion

The result suggests that cirsilineol, 6-methoxytricin and apigenin are the major active components in Artemisia vestita.     

通络类中药提取物对肺炎支原体感染A549细胞干预作用的研究

目的研究通络类中药虎杖、半枝莲、蝉蜕及其药对和小复方的提取物对肺炎支原体(MP)的体外抑菌作用以及对MP感染A549细胞分泌炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子kappa B(NF-κB)的影响。方法将虎杖、半枝莲、蝉蜕分别用水提法和醇提法提取,液体培养法培养MP菌液,微量稀释法测定最小抑菌浓度;MTT法检测虎杖、半枝莲、蝉蜕、虎杖+半枝莲、虎杖+蝉蜕、半枝莲+蝉蜕、小复方提取物对A549细胞的毒性作用,并计算半数抑制浓度(IC50);挑选抑菌效果较好的组,实验分为正常组,模型组,虎杖醇提低、中、高浓度组,半枝莲醇提低、中、高浓度组,虎杖+半枝莲低、中、高浓度组,小复方低、中、高浓度组,MTT法检测各组培养12 h、24 h、36 h、48 h的MP感染A549细胞活力,ELISA法检测各组MP感染A549细胞分泌IL-6、TNF-α、NF-κB的水平。结果虎杖、半枝莲、蝉蜕的水提物和醇提物均有一定的体外抑制MP生长的作用,小复方醇提物最佳,药对醇提物优于药对水提物;单味药醇提物优于单味药水提物,蝉蜕水提物和醇提物最差;单味药、药对和小复方醇提物对细胞毒性的IC50值均大于水提物。模型组在MP感染A549细胞12 h、24 h、36 h、48 h后细胞活力均明显低于正常组(P均<0.05),各药物组(除虎杖醇提低剂量组外)干预48 h细胞活力均明显高于模型组(P均<0.05);模型组TNF-α、IL-6、NF-κB水平均明显高于正常组(P均<0.05),各药物组TNF-α、IL-6、NF-κB水平均明显低于模型组(P均<0.05),且呈量效关系。结论虎杖、半枝莲、蝉蜕及其药对和小复方均具有一定体外抑制MP的作用,且醇提物的效果优于水提物,小复方的效果优于单味药和药对,推测中药的抑菌作用与中药提取方法和药物的相互配伍产生的协同作用有关;中药提取物对于MP感染后的A549细胞具有保护作用,且对MP引起的炎症反应有调节作用。     

黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3 T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

桂枝汤免疫抑制作用的实验研究

本文报告中药桂枝汤对小鼠免疫功能的抑制作用。经口服、肌肉注射和腹腔注射不同剂量的桂枝汤,均能明显抑制小鼠的 PFC、SRFC、BSA 诱导的迟发型超敏反应,以及对 ConA 和 LPS 的增殖反应。进一步的研究表明,桂枝汤有明显抑制小鼠脾细胞产生IL-2的作用,这可能是桂枝汤免疫抑制作用的主要机制。