超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的磁共振成像研究

目的明确顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)体外标记兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的适当浓度和不同标记浓度对细胞的生物学活性影响,以及经MR成像的特征和可成像的最低标记细胞量等。方法分离、纯化、培养兔MSCs,体外不同浓度SPIO标记,荧光显微镜观察铁颗粒在细胞内的位置、不同标记浓度下的最佳孵育时间、不同标记浓度细胞形态的改变、细胞内铁颗粒的分布及标记率;测量并绘制未标记细胞和标记细胞的MTT生长曲线;选取适当浓度标记量,对不同细胞量组进行标记后MR成像,测量不同扫描序列标记细胞管的信号强度改变,并进行统计学分析。结果标记后的铁颗粒均位于细胞质内;20～50μgFe/ml培养液是SPIO标记干细胞的适当浓度阈值,超过50μgFe/ml培养液浓度可使细胞的变形增殖能力受到不同程度的抑制;在此浓度阈值标记后孵育18～24h即可有效标记细胞97%～100%;细胞对铁颗粒的吸收与细胞的数量、标记浓度和孵育时间呈正相关;SPIO标记的MSCs在T2WI尤其是FFE(T2WI)序列信号明显降低;在35μgFe/ml培养液标记浓度下,MR可成像的最低细胞量为5×104;35μgFe/ml培养液浓度时,标记细胞1×105和5×104MR成像可使T2WI、FFE图像信号均降低,而且没有使靶灶扩大的磁敏感伪影。结论SPIO可以简便标记MSCs并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,MRT2WI和T2WI序列可敏感显像磁性标记的干细胞。     

蛋白质和多肽的放射性标记方法研究进展

蛋白质和多肽的放射性标记广泛用于药代动力学研究,医学影像检查[1], 抗体标记,二维电泳[2]等方面,在医学和药学领域是一种重要的技术.蛋白质和多肽的标记常用125I或131I标记[3-4]酪氨酸.标记方法一般是用氯氨T法进行碘放射性标记,用柱层析法和离心超滤法对标记物分离纯化,同时用三氯乙酸沉淀法和SDS-PAGE电泳法鉴定纯化后的标记化合物放射化学纯度,用MTT比色法测定标记物的生物学活性.例如徐贤坤等[5]改进的双相氯氨T法标记了聚乙二醇化重组人白细胞介素6标记率可达74.5%, 高于常规氯氨T 法的62.3%, 放射性比活度分别为5.151 3×109和4.161×109 BqPμg.     

Gd-DTPA标记骨髓间质干细胞在脊髓损伤模型中的磁共振示踪研究

目的 探讨用钆-二乙烯三胺五乙酸(Gd-DTPA)标记大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)用于细胞示踪的可行性.方法 用jetPEITM-FluoF结合Gd-DTPA形成顺磁性颗粒,标记MSCs,电镜观察标记情况,并用MTT法测定标记细胞的活力.对标记的细胞进行体外和大鼠脊髓内磁共振成像(MRI).结果 Gd-DTPA可高效标记MSCs,同时对MSCs生长无影响.体外及MSCs移植大鼠脊髓损伤模型MRI T1wI均显示,标记细胞呈高信号强度.结论 Gd-DTPA成功标记的MSCs在体外和大鼠脊髓组织内均可检测到明显的MRI信号强度改变.Gd-DTPA可以用于MSCs标记的MRI示踪.     

大鼠骨髓间充质干细胞的PKH26标记和示踪

背景：骨髓间充质干细胞标记是体内迁移分化研究的重要环节。目的：对大鼠骨髓间充质干细胞进行PKH26标记,探讨PKH26标记对骨髓间充质干细胞的生长特征、分化的影响及体内示踪情况。方法：培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞,第2代细胞按PKH26标记程序进行细胞标记,观察标记组和未标记组细胞的增殖、周期和凋亡情况,对标记组细胞行成骨成脂体外诱导分化。尾静脉移植PKH26标记细胞,6周后荧光显微镜观察骨髓间充质干细胞在子宫内膜的分布情况。结果与结论：PKH26标记对细胞增殖、凋亡和周期无明显影响,不影响成骨成脂诱导分化。子宫内膜组织中PKH26标记阳性的细胞分布于腺上皮和间质细胞。PKH26标记技术可用于示踪骨髓间充质迁移转归和干细胞移植方面的实验研究。     

骨髓间充质干细胞标记及示踪技术的研究与进展

背景：骨髓间充质干细胞标记及示踪技术是干细胞移植治疗的研究热点之一。虽然近几年骨髓间充质干细胞标记及示踪技术有了很大进展,但仍存在很多问题有待进一步解决。目的：对国内外骨髓间充质干细胞标记及示踪技术的研究与进展作一综述。方法：应用计算机检索CNKI和Foreign Medical Journal Service数据库中1982-01/2011-10关于骨髓间充质干细胞标记及示踪技术的文章,在标题和摘要中以＂骨髓间充质干细胞;标记方法;示踪技术＂或＂bone marrow,labeling,Tracer＂为检索词进行检索。最终选择29篇文献进行综述。结果与结论：骨髓间充质干细胞的示踪技术众多,主要有同位素示踪法、抗原标记法、荧光蛋白标记法、荧光染料标记法、核磁共振对比增强剂标记法、Lac-Z基因标记法、Y染色体标记法。每一种方法都有其优缺点,选择的标记方法应具有特异性强、灵敏度高、对细胞或机体影响小、标记和检测方法简单易行、标记时间合适等特点。种子细胞的示踪技术仍需要进一步深入研究。     

超顺磁性氧化铁和DAPI双标记骨髓间充质干细胞

背景：骨髓间充质干细胞目前已经成为重要的组织工程种子细胞,而若想深入研究其在体内外增殖、分化的规律,首先需要解决如何能高效、安全地标记骨髓间充质干细胞。目的：观察超顺磁性氧化铁及DAPI对大鼠骨髓间充质干细胞的双标记效果及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响。方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,用超顺磁性氧化铁及DAPI双标记后分别用普鲁士蓝染色法和激光共聚焦显微镜观察其铁标记率及荧光标记率。用锥虫蓝检测细胞活力;MTT法检测标记干细胞增殖力;Calcein-AM/PI以及AO/PI双染细胞,检测细胞存活率以及凋亡率。结果与结论：超顺磁性氧化铁及DAPI在体外双标记大鼠骨髓间充质干细胞效率高,可达100%;锥虫蓝染色显示标记细胞的存活率为97%;MTT法检测发现双标记干细胞组的活力以及增殖力与未标记干细胞组相比差异均无显著性意义（P〉0.05）;Calcein-AM/PI染色,未标记细胞及双标记细胞的存活率分别为96%和95%;AO/PI染色,未标记及双标记细胞的凋亡率均为1%。提示超顺磁性氧化铁和DAPI双标记大鼠骨髓间充质干细胞后,对于干细胞的存活、增殖以及凋亡无影响。     

铕螯合剂对甲胎蛋白单克隆抗体标记的研究

目的探究自合成铕螯合剂对甲胎蛋白单克隆抗体的标记方法。方法经EDC和NHS活化的铕螯合剂偶联甲胎蛋白单克隆抗体,通过透析收集标记抗体,检测荧光强度和免疫活性,计算回收率和标记率。结果标记抗体荧光强度高,免疫活性无明显变化,回收率为94%,标记率为15。结论自合成的铕螯合剂可用于甲胎蛋白单克隆抗体的标记,标记效果理想,可进一步建立均相时间分辨荧光免疫分析方法。     

超顺磁性氧化铁和DAPI双标记骨髓间充质干细胞

背景:骨髓间充质干细胞目前已经成为重要的组织工程种子细胞,而若想深入研究其在体内外增殖、分化的规律,首先需要解决如何能高效、安全地标记骨髓间充质干细胞。目的:观察超顺磁性氧化铁及DAPI对大鼠骨髓间充质干细胞的双标记效果及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响。方法:分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,用超顺磁性氧化铁及DAPI双标记后分别用普鲁士蓝染色法和激光共聚焦显微镜观察其铁标记率及荧光标记率。用锥虫蓝检测细胞活力;MTT法检测标记干细胞增殖力;Calcein-AM/PI以及AO/PI双染细胞,检测细胞存活率以及凋亡率。结果与结论:超顺磁性氧化铁及DAPI在体外双标记大鼠骨髓间充质干细胞效率高,可达100%;锥虫蓝染色显示标记细胞的存活率为97%;MTT法检测发现双标记干细胞组的活力以及增殖力与未标记干细胞组相比差异均无显著性意义(P>0.05);Calcein-AM/PI染色,未标记细胞及双标记细胞的存活率分别为96%和95%;AO/PI染色,未标记及双标记细胞的凋亡率均为1%。提示超顺磁性氧化铁和DAPI双标记大鼠骨髓间充质干细胞后,对于干细胞的存活、增殖以及凋亡无影响。     

超顺磁性氧化铁纳米粒子标记人骨髓和脐带间充质干细胞：

背景：优化人源细胞安全、有效的标记参数及细胞移植后的定位是评价其治疗效果至关重要的环节。目的：比较核磁影像对比剂超顺磁性氧化铁纳米粒子体外标记入骨髓和脐带间充质干细胞的细胞活率、标记效率及核磁共振T2＊WI成像的效果,优化标记细胞处理细节。方法：培养第3代人骨髓和脐带间充质干细胞,以5-30mg／L菲立磁（FeridexIV）结合硫酸鱼精蛋白标记细胞。结果与结论：人骨髓和脐带间充质干细胞标记前后细胞的存活率接近（P〉0．05）。以530mg／L菲立磁标记骨髓间充质干细胞的阳性标记率差异无显著性意义（P〉0．05）：而5mg／L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率与20和30mg／L菲立磁标记的差异有显著性意义（P〈0．05）：10mg／L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率低于骨髓间充质干细胞（P〈O．05）。当≥20mg／L菲立磁标记细胞时,2种来源的细胞悬液中均出现不易洗脱和过滤去除的氧化铁颗粒。标记后细胞在3.0T MR GRE T2＊WI扫描均见随菲立磁的浓度升高,信号强度减弱。提示这2种组织来源的间充质干细胞,以10mg／L的菲立磁硫酸鱼精蛋白复合物标记是安全有效的,可用临床T2＊WI的MR成像观察。     

利用菲立磁细胞内标记恒河猴骨髓基质细胞的初步实验

目的:探索利用菲立磁和转染试剂体外磁性标记恒河猴骨髓基质细胞的可行性,为临床上应用磁共振成像追踪标记细胞奠定基础。方法:实验于2004-04/2005-05在南方医科大学珠江医院全军神经医学研究所完成。纳入健康恒河猴3只,无菌条件下取骨髓,梯度密度离心法分离获取恒河猴骨髓基质细胞,使用“菲立磁-多聚赖氨酸复合物”标记骨髓基质细胞,采用普鲁士兰染色、电镜和锥虫蓝排除实验等方法鉴定菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记恒河猴骨髓基质细胞的效率和细胞的活力,并对菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记骨髓基质细胞的增殖和分化能力进行评估。结果:①菲立磁可以高效率地标记骨髓基质细胞,标记效率在99%左右。②普鲁士蓝染色显示菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒。③电镜结果显示菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记的骨髓基质细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡。④与正常未标记的细胞相比较,菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记对骨髓基质细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响。结论:菲立磁可以用来体外标记恒河猴骨髓基质细胞。     

氯化锰标记前列腺癌细胞株的体外MRI研究

目的 初步探索使用氯化锰（MnCl2）标记前列腺癌细胞株（PC-3）行体外MRI的可行性和安全性.方法 将PC-3进行复苏、培养和扩增.在细胞培养箱中,PC-3与8组含不同MnCl2浓度的F-12 HAM＇S培养基共同培养1h,收集已标记的PC-3并行MRI.另对不同细胞数量级和不同时间点的MnCl2标记的PC-3行MRI.用含维拉帕米的培养基培养MnCl2标记的PC-3 4 h,在不同时间点取标记后的PC-3行MRI.用WST-8法测定氯化锰标记的PC-3活性.结果 MnCl2标记的PC-3在T1WI显示为高信号,其信号强度与未标记的PC-3形成明显差异（P＜0.01）,以1.0 mmol /L MnCl2为标记浓度时信号强度最强.1.0mmol/L MnCl2标记的PC-3在细胞数量为0.5×106时可呈高信号.在体外培养的条件下,标记后24 h的PC-3信号强度明显下降,标记后72 h基本恢复至未标记的PC-3信号强度水平.维拉帕米可延长MnCl2标记的PC-3有效成像时间至72 h.标记后4 h,除0.1 mmol/L MnCl2对PC-3的活性没有影响（P ＞ 0.05）外,其余各浓度组（＞ 0.1mmol/L）的MnCl2对PC-3的活性均有不同程度的影响（P ＜ 0.05）;标记后24h,0.5 ～ 1.0 mmol/L MnCl2对细胞的活性影响不明显（P ＞ 0.05）.结论 MnCl2可以有效标记PC-3,并能在T1WI以高信号成像且具有一定灵敏度.在浓度低于或等于1.0 mmol/L时,标记PC-3有一定的安全性,但标记维持时间较短.钙离子通道阻滞剂（维拉帕米）可适当延长PC-3的MnCl2标记维持时间.     

SPIO标记猪脂肪干细胞的生物学特性与多向分化潜能及体外3.0T MR成像

背景：不同种类细胞的最佳化标记方案需要大量实验证明,而每种细胞对应标记策略的安全性检测至关重要。目的：应用超顺磁性氧化铁联合多聚左旋赖氨酸标记猪脂肪干细胞,探讨磁标记对细胞生物学特性和多向分化潜能的影响以及标记细胞体外3.0TMR成像特性。方法：五指山小型猪皮下脂肪分离培养脂肪干细胞;超顺磁性氧化铁-多聚左旋赖氨酸复合物标记液标记脂肪干细胞;应用3.0TMR对不同浓度标记细胞进行T1WI、T2WI及T2＊WI序列体外成像。结果与结论：普鲁士蓝染色显示标记细胞胞质内含有多少不等的蓝染铁颗粒,细胞标记率近100%;标记细胞向心肌、骨、脂肪方向诱导分化成功;不同浓度标记细胞MR扫描显示,随细胞浓度升高,3种序列信号变化率均增加;相同浓度细胞T2＊WI信号变化率最大,T1WI最小,同一浓度3种MR序列间信号变化率差异均有显著性意义（P〈0.01）;3.0TMR成像能检测到至少1×106L-1标记细胞。结果显示应用超顺磁性氧化铁联合多聚左旋赖氨酸标记方案可有效标记脂肪干细胞,不影响细胞活力、增殖及多向分化能力;T2＊WI序列检测标记细胞最敏感。     

兔骨髓间充质干细胞的Gd-DTPA标记及MRI体外示踪

目的探讨兔MSCs磁性标记及MRI体外示踪的可行性。方法培养分离兔MSCs,以PEI-FluoR为载体,体外对MSCs进行双标记。标记后行荧光镜、电镜观察及生物学性状检测。应用1.5TMRI仪,对标记细胞进行SE序列T1WI及T2WI扫描及T1-mapping测量T1时间,并观察MRI上能显示标记MSCs的最小数目及标记后正常传代后MRI监测的持久性。结果MSCs双标记后,标记效率为80%,细胞内可见荧光物质,电镜下Gd颗粒位于胞浆内。标记后24h内标记细胞与未标记细胞间台盼蓝拒染率、标记后5d内标记细胞与未标记细胞的MTT吸光度值差异无统计学意义。标记细胞凋亡指数为0.40%,未标记细胞为0.19%。未标记及标记细胞T1WI平均信号强度及T1时间分别为2166±167、(2445±21)ms,3162±350、(1404±129)ms(t=6.91、29.87,P<0.005)。体外MRI上可监测到最低1×104个标记细胞,并可持续显示第3代标记细胞。结论应用多聚胺载体对兔MSCs进行Gd-DTPA及荧光双标记安全、有效;MRI能示踪体外双标记的干细胞。     

PDCA在提高手术患儿手术标记执行率中的应用

目的 规范手术标记制度,使手术标记执行率达100%。方法 对2010年4月的手术标记执行率进行统计和调查分析,针对制度不完善等重要问题,与2010年6月开始运用PDCA持续质量改进的方法,重建手术患儿手术标记执行工作流程。对实施质量改进前后的手术标记执行率进行统计学分析。结果 改进后的执行率高于改进前,差异有统计学意义。结论 PDCA持续质量改进体系有助于实现质量的有效管理,改进后的手术标记执行环节和流程更科学、有效,为提高病人安全和医疗质量服务效率提供了有效保障。     

纳米荧光染料C—dots标记细胞的应用

目的探讨一种新型纳米荧光染料C-dots作为细胞标记物的应用。方法不同直径的C-dots和B16小鼠黑色素瘤细胞共同培养,用激光共聚焦荧光显微镜观察C-dots被摄取及在细胞内分布情况。利用MTT比色法测定C-dots标记的细胞及未标记细胞的增殖情况;用台盼蓝染色法检查标记细胞活性。结果直径10 nm和5 nm C-dots可用于标记细胞。在共聚焦显微镜下,可见C-dots标记细胞的细胞膜带有近红外荧光。利用MTT比色法测定标记及未标记细胞的A值无显著差异,C-dots标记细胞的活性与对照组相比也无显著差异。结论C-dots可作为细胞内的标记物,用于细胞示踪、增殖试验等研究。     

血小板生存时间测定及其临床意义

本文就血小板生存时间测定的研究作有关文献复习。方法测定PLS主要采用同位素标记法,近年来也有采用非同位素标记法〔丙二醛(MDA)法〕和放射免疫法〔血栓烷B_2(TXB_2)法〕测定。一、同位素标记法同位素标记法可通过巨核细胞标记或直接标记血小板,后者又分体内标记、体外标记,根据同位素种类不同而异。用于血小板动力学研究的放射性同位素: 巨核细胞标记:~(75)Se-甲硫胺硒,~(35)S-硫酸钠,~(32)P-磷酸钠直接标记血小板: 体内标记:~(32)P-DFP(二异丙基氟磷酸)。 ~3H-DFP,~(11)C-5-羟色胺     

CM-Dil标记肝纤维化大鼠骨髓源性内皮祖细胞实验研究

目的 探讨建立CM-Dil荧光标记的肝纤维化大鼠骨髓源性内皮祖细胞的方法.方法 Wistar大鼠16只,四氯化碳皮下注射建立肝纤维化大鼠模型,分离培养肝纤维化大鼠骨髓源性内皮祖细胞,分为实验组和对照组,实验组采用CM-Dil荧光进行标记内皮组细胞,对照组未进行标记.采用激光共聚焦显微镜、流式细胞分析仪检测CM-Dil荧光标记率,观察2组细胞生长状态和细胞动力学.结果 实验组CM-Dil标记的细胞呈红色荧光,标记阳性率为96.95％;实验组细胞生长状态良好,与对照组比较,生长曲线无明显改变.结论 CM-Dil可在体外成功标记肝纤维化大鼠骨髓源性内皮祖细胞.     

5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记肌源性干细胞:最佳浓度及时间

背景:肌源性干细胞移植入动物体内可以修复骨、肌肉、软骨或神经系统的损伤,但要了解其在体内的迁移、增殖及分化的情况,还需要一种有效、安全的标记方法来追踪其在体内的变化.目的:观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞的效果,探讨其最佳标记浓度和时间.方法:采用差速贴壁法体外分离SD大鼠肌源性干细胞,免疫细胞化学染色法鉴定第2代细胞并进行细胞计数.以终浓度5,10,15,20 μmol/L的5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞,检测其最佳标记浓度,免疫细胞化学染色法分析其标记率;通过MTT法、锥虫蓝排斥实验观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷对细胞增殖的影响.结果与结论:免疫细胞化学染色显示肌源性干细胞呈Desmin阳性,阳性率为(85.7±6.0)%;经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的肌源性干细胞与未进行标记细胞在活力和增殖上相比未见明显差异(P > 0.05),标记后的肌源性干细胞活细胞率可达(92.3±2.1)%.其中浓度为10,15,20 μmol/L标记组标记效果均优于5 μmol/L标记组,10 μmol/L为最佳工作浓度,最佳标记时间为3 d,标记率为(70.9±4.5)%,随时间延长无明显变化.证实应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞后,对细胞的活力及增殖情况无影响,标记率也能达到细胞移植对其示踪的要求.     

两种方法标记^99mTc抗CEA单抗及其鼠放免显像的比较研究

目的评价两种方法99mTc标记抗CEA单抗与结肠癌肿瘤细胞表现相关抗原的亲和性.方法分别采用2巯基乙醇法(2-ME)和亚氨基噻吩盐酸盐(2-IT)法,以新鲜99mTc淋洗液标记抗CEA单抗,并对荷人结肠癌裸鼠进行SPECT显像,比较两种标记方法的显像效果.结果2-ME法标记单抗在实验所得最佳标记条件免疫活性(B/T%)69.1%,标记率为88.7%,胶体含量8.1%.2-IT法标记的单抗免疫活性可达73.2%,标记率为93.7%,胶体含量4.8%.稳定性以2-IT方法为佳标记后1、2、6、12小时放化纯皆在90%以上,标记操作时间和标记方法二者各有优缺点.二者在荷瘤裸鼠的瘤体内显像清晰,2-IT法标记抗体的瘤本比值(T/NT)为5.33±1.11,2ME法为4.11±1.53,血池和肝肾的放射性以2-ME法为高.结论表明以2-IT法和2-MT法预处理抗CEA单抗皆具有达到外接巯基的目的,可有效进行99mTc标记,较少损伤蛋白活性,标记方法简单,放射性核素标记的抗CEA单抗对瘤体具有较高的亲和力,适用于SPECT显像.其中以2-IT法标记率高,胶体含量少,稳定性强,T/NT值大等优点,更适用于放射免疫显像     

兔骨髓间充质干细胞体外BrdU标记最佳时间和标记浓度的筛选

背景:骨髓间充质干细胞是目前极具潜力的细胞和基因治疗的宿主细胞.体外标记是追踪其存活、"归巢"、生长、分化等一系列过程的前提.目的:探索5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记兔骨髓间充质千细胞的最佳时间和最佳浓度.方法:兔骨髓间充质干细胞取自纯种健康新西兰大耳白兔,通过形态学及流式细胞术鉴定分离培养的细胞为骨髓间充质干细胞.观察不同5-溴脱氧尿嘧啶核苷浓度标记及不同5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记时间对兔骨髓间充质干细胞的标记阳性率.结果与结论:流式细胞术检测培养的细胞为较纯的骨髓间充质干细胞,生长曲线呈S形.5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的阳性细胞率随标记时间延长以及标记物浓度增加而逐渐增高,40 μmol/L及72 h标记阳性率达85%～95%.结果提示,应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记骨髓间充质干细胞是安全可靠的,体外标记最佳时间和最佳浓度分别为72 h和40 μmol/L.